Attività a Scelta CL Magistrale
(3CFU)
Oncologia
Sperimentale di
Laboratorio
INTRODUZIONE
1° S. BENINATI
Introduzione
• Il corso si prefigge di introdurre
gli studenti alla conoscenza
delle tecniche utilizzate nel
laboratorio di oncologia
sperimentale al fine di ottenere
dati utili per ridurre la crescita
tumorale e l’invasione
metastatica
Farmaci citotossici
• Il controllo della crescita
neoplastica si attua
influenzando i processi di
proliferazione cellulare,
inducendo il differenziamento e
la morte cellulare
• Un farmaco si definisce
citotossico quando uccide la
cellula neoplastica.
• La chemioterapia attuale
utilizza farmaci citotossici
Farmaci differenzianti
• Un’alternatica alla terapia
citotossica è la terapia
differenziativa.
• In questo caso il farmaco
induce il differenziamento della
cellula neoplastica e blocca la
proliferazione.
Test di laboratorio
• Per dimostrare che un farmaco
possieda attività differenziante
è necessario effettuare una
serie di prove di laboratorio.
• Misure della proliferazione
cellulare
• 1. curve di crescita
• 2. conta cellulare
• 3. vitalità cellulare
Metaboliti
• Anche la ricerca di metaboliti
legati alla crescita tumorale
può essere utile
• Tali molecole vengono
denominate “Markers”
• I markers studiati nel nostro
laboratorio sono:
• Poliammine come fattori di
crescita
• Enzima transglutaminasi come
marker di differenziamento
Linee cellulari
• Si usano come modello di
crescita cellulare neoplastica
• Noi useremo come campione il
melanoma sia umano che
murino
• Una delle caratteristiche del
melanoma è che durante il
differenziamento producono
melanina
• Un pigmento nero
Il melanoma
Il melanoma è un tumore cutaneo maligno che origina dai
melanociti, cellule dello strato basale dell’epidermide
responsabili della produzione di melanina.
Sebbene la neoplasia insorga principalmente nella pelle,
esistono altri siti possibili, tra cui la mucosa nasale ed anogenitale, l’esofago, le meningi e l’occhio
Melanoma Superficiale
Melanoma Nodulare
Lentigo Maligna
Melanoma Acro-lentiginoso
Melanoma Muco-lentigginoso
Melanoma Amelanotico
L’aspetto di ogni melanoma può variare ma, generalmente,
mostrano tutti le caratteristiche definite ABCD
Asimmetria: le due metà del neo non hanno stessa forma.
Bordo: i bordi sono spesso sfumati e dal contorno irregolare.
Colore: il colore è irregolare. Il neo presenta sfumature di
colore nero e marrone, si osservano inoltre zone bianco,
rosso, rosa o blu.
Diametro: le dimensioni del neo cambiano.
Asimmetria
Bordo
Colore
Diametro
Vengono adottati vari sistemi di classificazione per descrivere la
profondità di invasione: il più utilizzato è il Metodo di Clark e
quello di Breslow (BW)
In particolare:
- lesione di Clark di 1° livello, è un melanoma in situ confinato
all’epidermide;BW 1
- lesione di Clark di 2° livello, caratterizzata da piccoli nidi e
cellule singole nel derma papillare; BW 2
- lesione di Clark di 3° livello, il tumore invade il derma papillare;
BW 3
- lesione di Clark di 4° livello, la lesione invade il derma in
profondità (strato reticolare);BW 4
- lesione di Clark di 5° livello, il melanoma invade il tessuto
sottocutaneo. BW 5
ESAME MORFOLOGICO
Control
Linea cellulare di
melanoma murino (B16F10)
Cellule non trattate
AE
Cellule trattate con
molecola differenziante
(bassa conc)
Morfologia stellata
AE
Cellule trattate con
molecola differenziante
(alta conc)
Presentazione di un lavoro di
oncologia sperimentale
• Trattamento di melanomi
umani e murini con molecole
differenzianti
• Vari test di proliferazione e di
invasione
• Ipotesi di metabolismo
coinvolto nel controllo della
crescita tumorale
• Poliammine e transglutaminasi
polyamines
- Theophylline
- other activators
protein cross-linking
motility
TGase activity
Polyamination of BM proteins
adhesion
BM digestionBM
Controllo B16-F10
B16-F10 differenziate
ADHESION E.C.
ADHESION B.M.
PROTEOLYSIS
INVASION
Capillary lumen
Tumor cell
LN
LN-R
Target tissue
Integrins
BASEMENT MEMBRANE
COMPONENTS
Laminin
Collagen IV
Entactin
Growth factors
Invasion
(Boyden Chamber assay)
medium
Matrigel
filter
chemoattractant
Control
48h
72hr
120
100
% invasion
80
60
40
20
0
Control
48h
72h
I PARAMETRI CHE VENGONO CONTROLLATI PER
AVERE LA CERTEZZA CHE UNA DATA MOLECOLA
POSSA ESERCITARE POTERE
ANTIPROLIFERATIVO E/O ANTIMETASTATICO SU
DI UNA LINEA CELLULARE O SULL’ORGANO
BERSAGLIO DI UN ANIMALE
1. VITALITA’ CELLULARE
2. PROLIFERAZIONE CELLULARE
3. ANALISI AL MO MORFOLOGICA
4. SEGNI DI DIFFERENZIAMENTO
5. POTERE METASTATICO
6. POTERE INVASIVO
7. METALLOPROTEASI
8. TRANSGLUTAMINASI
9. POLIAMMINE
10. MELANINA
11. APOPTOSI
12. ANGIOGENESI