Enzimologia clinica
1
Scopo
valutare la concentrazione degli enzimi
nei fluidi corporei a fini diagnostici
 Enzimi: catalizzatori biologici 
aumentano la velocità di una reazione
senza essere consumati

2
Cinetica Enzimatica
E+S

EP
E+P
Enzimi a substrato singolo


ES
Es. Amilasi, lipasi
Enzimi a substrati multipli
3
Cinetica Enzimatica
uncatalyzed
DG*
Free Energy
Free Energy
Free energy
of activation
reactants
DGo
reactants
catalyzed
products
products
Free energy
change
Reaction Progress
4
Velocità di reazione

Influenzata da








concentrazione di
substrato
concentrazione di
enzima
temperatura
pH
cofattori
coenzimi
attivatori
inibitori
5
Legge di Michaelis-Menten

Basse concentrazioni 
Reazione di primo
ordine

Alte concentrazioni 
Reazione di ordine 0

Costante di MichaelisMenten
 è la concentrazione di
substrato che
corrisponde ad una
velocità di reazione pari
al 50% del massimo
6
Enzimi: specificità di substrato
7
Localizzazione Enzimatica

Liberi nelle cellule di
diversi tessuti ed
organi
 Confinati in particolari
strutture all’interno
delle cellule stesse
 In un determinato
tessuto od organo
specifico  enzimi
organo specifici
8
Gli enzimi nel sangue


spesso non hanno un ruolo fisiologico
presenti anche in situazioni normali
 invecchiamento fisiologico
 turnover cellulare
 eliminati da
 sistema reticolo endoteliale
 Rene (es. amilasi)
 livello di attività normale nel siero è funzione di
 velocità di rilascio
 clearance

emivita
 2 ore (CK-BB)
 170 ore (ALP placentare)
9
Aumento degli enzimi nel plasma:
1.
necrosi o danno cellulare 3. Induzione enzimatica
 citolisi  fuoriuscita
 Farmaci (es.
enzimi
Fenobarbital, alcool)


2.
Fattori tossici
Ischemia
aumentato turnover
cellulare




Accrescimento
Rigenerazione cellulare
Neoplasie
Gravidanza

4.
Patologie (es. colestasi)
Ostruzione dei dotti
escretori  enzimi
presenti nelle secrezioni
esocrine si trovano nel
plasma
10
Liberazione enzimi nel circolo

la velocità di comparsa
nel sangue dipende da

passaggio nel
sangue



diretto
attraverso il circolo
linfatico
localizzazione
intracellulare


citoplasmatica
mitocondriale
11
Fluidi utilizzati
siero
 sangue
 plasma
 orine
 liquor cefalorachidiano
 versamenti
 fluidi extracellulari

12
usi
patologie epatiche
 patologie cardiache
 patologie muscolari
 patologie pancreatiche
 patologie ossee
 patologie autoimmuni
 patologie gastroenteriche
 neoplasie

13
Metodiche di analisi

controllo di ed ottimizzazione di
pH
 temperatura

concentrazione di substrato che
permetta di ottenere una cinetica di
grado 0
 metodiche immunologiche

14
Metodiche di analisi

Metodiche enzimatiche

controllo di ed ottimizzazione di
pH
 temperatura



concentrazione di substrato che permetta di
ottenere una cinetica di grado 0
metodiche immunologiche
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