PRINCIPALI TIPI DI ELETTROFORESI
Vengono classificati in base al tipo di supporto:
• su carta
• su gel di Agarosio
• su gel di Acrylamide
• capillare
Elettroforesi su carta
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La striscia di carta viene saturata con la soluzione tampone quindi si
introduce il campione su un punto nella zona centrale della carta.
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Si applica una ddp di 100-1000 V (la corrente è nel range dei mA).
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Gli ioni migreranno agli elettrodi per effetto del campo elettrico.
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Dopo che è trascorso l’opportuno periodo di tempo, la carta è rimossa e
lasciata asciugare ed eventualmente spruzzata con opportuni coloranti per
osservare le macchie degli analiti.
Elettroforesi su gel es. Agarosio
Elettroforesi Capillare (CE)
L’elettroforesi capillare è una separazione elettroforetica che avviene in un
capillare di diametro variabile tra 25 e 100 μm.
Strumento
• capillare di silice fusa
• serbatoi separati contenenti due elettrodi
• generatore di voltaggio
• sistema di rivelazione
• sistema di acquisizione dei dati (computer)
Modi di iniezione del campione
• elettromigrazione
• iniezione idrostatica
Sistemi di rivelazione
• detector UV-vis
• detector a fluorescenza
• detector a conducibilità
• detector elettrochimico
• spettrometri di massa
• detector radioattivo
L’elettroforesi capillare permette di limitare i
problemi legati allo sviluppo di calore
Il calore viene facilmente disperso essendo molto alto il
rapporto tra la superficie e il volume.
Tipi di molecole separabili con CE
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amminoacidi
peptidi
proteine
acidi nucleici
ioni inorganici
acidi e basi organiche
intere cellule
Vantaggi dell’elettroforesi capillare
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alta efficienza di separazione (circa 100 piatti teorici)
piccola quantità di campione (1-10 µl)
separazione rapida (da 1 a 45 min)
selettività
automazione
possibilità di quantificazione
riproducibilità
possibilità di accoppiamento con spettrometro di massa