Elettroforesi
(segue)
SDS-PAGE
Pozzetti
Stacking gel
Running gel
Elettroforesi di proteine in condizioni native
(A) Analysis of binding of the
b subunit cytoplasmic domain
(bsol) to ECF1 and ECF1 (-).
Mixtures of polypeptides were
first analyzed by native agarose
gel electrophoresis (A) through a
1% agarose gel.
Lanes from left to right:
I, ECF1 (-)
II, bsol ; III, 
IV, bsol +  ;
V, bsol + ( 1-134);
VI, bsol + ECF1 (-);
VII,  + ECF1 (-);
VIII, bsol +  + ECF1 (-);
IX, ECF1 (-) + ( 1-134);
X, bsol + ECF1 (-) + ( 1-134).
Rodgers et al (1997) J. Biol. Chem. 272: 31058
(B) Bands were excised from
the agarose gel and
separated on a 10-18%
gradient of polyacrylamide in
SDS.
Visualizzazione delle proteine separate
•
•
•
•
•
Coomassie brilliant blue R-250
Coomassie brilliant blue G-250
Silver stain
Coloranti fluorescenti
Trasferimento su membrana (blotting)
Coomassie
R-250
G-250
Silver stain
• Reazione con
formaldeide
• Riduzione di Ag+
Sensibilità a confronto
Comparison of the sensitivity achieved with SYPRO, silver and Coomassie
brilliant blue stains. Identical SDS-polyacrylamide gels were stained with A)
SYPRO Orange protein gel stain, B) SYPRO Red protein gel stain; C) silver
stain and D) Coomassie brilliant blue stain, according to standard protocols.
Western blot
Tank
Semi-dry
ECL (Enhanced chemiluminescence)
Luminol
Risultato
1
Lane 1: standard pei
molecolari
Lane 2-6: campioni
2
3
4
5
6
Isoelettrofocalizzazione (IEF)
Elettroforesi bidimensionale (2-DE)
Esempio di separazione IEF 3-10 lineare,
SDS-PAGE 12.5%
Elettroforesi capillare
+
-
Effetto elettroendoosmotico
Si
O
Elettroforesi capillare
Elettroforesi capillare (CE)
CE - Esempio
Sequenziamento DNA