Alcuni citometri a flusso utilizzano laser a semiconduttori (633 nm) e coloranti fluorescenti per acidi nucleici che separano i leucociti utilizzando i segnali di: Forward Scatter (FSc) Side Fluorescence (SFl) Side Scatter (SSc); Leucocytes • Lymphocytes • Monocytes/Macrophages • Granulocytes: Neutrophils Eosinophils Basophils I leucociti vengono anche differenziati sulla base della maggiore o minore quantità di mieloperosidasi (MPO) contenuta nei granuli citoplasmatici. Il sangue viene diluito, le emazie lisate e i leucociti colorati per la (MPO). Granulociti ed eosinofili = massima quantità di MPO Monociti = quantità medio -piccola di MPO Linfociti e Blasti = piccola quantità di MPO I GB: entrano in una cella di flusso in cui per ciascuna cellula vengono determinate le proprietà bi-dimensionali di dispersione e di assorbimento della luce. Le cellule colorate assorbono più luce e la disperdono con un angolo diverso rispetto alle cellule non colorate. Il risultato finale e' un citogramma leucocitario bi-dimensionale. LINEE GUIDA F. LEUCOCITARIA La refertazione delle popolazioni leucocitarie deve essere espressa in numero assoluto. La quantificazione percentuale, che da sola può fornire informazioni equivoche, può talvolta integrare efficacemente il numero assoluto; pertanto, la doppia refertazione mantiene un valore informativo. Lymphocytes • 1.5 - 3.5 x 109/l • Count varies with age • Adaptive immune response • T cells – cell mediated immunity • B cells – antibody mediated immunity NK cells Linfocitosi • Linfociti ≥4500 cellule/l negli adulti • Linfociti ≥9000 cellule/l nei bambini fino ai 10 anni • Infezioni virali, tubercolosi ,brucellosi e tifo • Infezione da Bordetella pertussis • Linfomi Linfocitopenia • Linfociti1500 cellule/l negli adulti • Linfociti 3000 cellule/l nei bambini • • • • • Immunodeficit congeniti ed acquisiti Stress da aumentata increzione di glucocorticoidi Aplasia midollare Alcune forme di LLA Immunosoppressione da farmaci Monocytes 0.2 – 0.8 x 109/l • Antigen presentation • Cytokine production • Phagocytosis Monocitosi • Monociti ≥ 800 cellule/l • • • • • • • • Tubercolosi Endocarditi batteriche acute Brucellosi Malaria Morbo di Chron Sarcoidosi LES ed artrite reumatoide Linfoma di Hodgkin Monocitopenia • Monociti 150 cel/l • • • • Stress da glucocorticoidi Aplasia midollare Leucemia a cellule capellute Farmaci immunosoppressivi Neutrophils • 2.5 - 7.5 x 109/l • Large reserve pool • • • • • 3-5 lobes Granular cytoplasm Transient in blood Major phagocytic role Bacterial killing Neutrofilia • Neutrofilia ≥7500cellule/L • Infezioni batteriche – germi piogeni (ma anche fungine, parassitarie ed alcune virali) • Flogosi immuni e non immuni (ustioni ,emorragie,tumori metastatici, infarto,embolia polmonare) • Stress, Adrenalina e Glucocorticoidi • Sindromi mieloproliferative ( Leucemia mieloide cronica,mielodisplasia e policitemia vera) • Farmaci (glucocorticoidi) Neutropenia • Neutropenia grave:neutrofili500 cellule/l • Neutropenia moderata: 500-1000 cellule/ l • Neutropenia lieve:1000-2000 cellule/ l • Neutropenia da farmaci (immunosoppressori e antiblastici) • Aplasia midollare, leucemie e linfomi • Neutropenia isoimmune neonatale (aumentata distruzione da IgG materne verso Antigeni paterni) • Neutropenia autoimmune (LES) • Neutropenia da aumentata marginazione (setticemia da Gram -, malaria, tifo, rickettiosi) • Neutropenia da sequestro splenico (cirrosi) Hypersegmentation • Shift to the right • More mature cells kept on • Infective and inflammatory sites • Severe burns • TB, post chemo, pregnancy “Shift to the left” Eosinophils • 0.2 - 0.8 x 109/l • Bilobed nucleus Red granules Weakly phagocytic • Anti-parasitic action • Modulation of hypersensitivity and allergic reactions Eosinofilia • Eosinofili ≥800 cellule/l • • • • • • Allergie Infestazioni da metazoi Farmaci Malattie autoimmuni sistemiche Neoplasie Sindromi ipereosinofile Eosinopenia • Eosinofili 70 cellule/l • Aumentata increzione di glucocorticoidi • Infezioni batteriche acute Basophils • 0.1 - 0.2 x 109/l • Bilobed nucleus • Large black granules • Inflammatory response • Hypersensitivity /allergy Basofilia • Basofili ≥ 20 cellule/ l • • • • Ipersensibilità immediata Colite ulcerosa Leucemia mieloide cronica (basofila) Policitemia vera Basopenia • Stress • Infection • Steroids • Cushing’s syndrome Platelets • Fragments of cytoplasm from BM megakaryocyte • Major role in coagulation Platelets 2 • Lifespan in peripheral blood 7-10 days • Range 150-400x 109/l METODI USATI PER IL CONTEGGIO AUTOMATICO DELLE PIASTRINE CITOFLUORIMETRICO IMPEDENZOMETRICO – ELETTRO OTTICO Conta piastrinica Conta Ottica PLTo Conta ad impedenza PLTi Metodo impedenziometrico Piastrine : Istogramma volumetrico PL = soglia inferiore, PU = soglia superiore, PDW = platelet distribution width (larghezza della curva tagliata al 20%), P-LCR = platelet –large cell ratio (percentuale di grandi piastrine). MPC = Mean PLT Contenent (misura della concentrazione complessiva dei componenti interni delle piastrine) MPV • Più alto negli uomini • Correlazione inversa non lineare fra MPV e N.ro PLT • Aumenta in corso di: corso di: Diminuisce in Diabete mellito IMA Megaloblastica Arteriopatie Periferiche Malattie mieloproliferative Pre-eclampsia Splenectomia Leucemia Acuta An. PDW • Indica l'anisocitosi piastrinica. Aumenta in corso di: • An. Megaloblastica • An. Aplastica • AREB • LMC • In presenza di crioglobuline paraproteine e MPC E' misura della concentrazione complessiva dei componenti interni delle piastrine, fornisce indicazioni su: • Morfologia, Attivazione, Screening. Di conseguenza utile per: • monitoraggio terapie antiaggreganti • monitoraggio terapie antinfiammatorie Quantitative Abnormalities 1 • Thrombocytopenia - Decreased count • <100 x 109/l - Increasing risk of bleeding in major surgery • <50 x 109/l - Increasing risk of bleeding for CID and surgery • <10-20 x 109/l - Increasing risk of spontaneous bleeding • • • • Causes Immune BM infiltration, chemotherapy etc Inherited defects Quantitative abnormalities 2 • Thrombocytosis - Increased count • > 450 x 109/l • Reactive eg infection inflammation • Chronic bleeding • Haematological malignancy INTERFERENZA NELLA CONTA PIASTRINICA •Frammenti eritrocitari •Frammenti di globuli bianchi •Parassiti, batteri •Ombre eritrocitarie •Piastrine giganti •Aggregati piastrinici •Effetto da anticoagulante Cause più comuni di conta piastrinica erronea nel paziente ematologico AGGREGATI PIASTRINICI CAUSA FREQUENTE DI CONTA SOTTOSTIMATA Sono epressione dell’agglutinazione piastrinica in vitro da parte di autoanticorpi •IgG EDTA- e temperatura – dipendenti •Crioagglutinine EDTA – dipendenti •IgG EDTA- dipendenti e temperatura – indipendenti Gli AUTOANTICORPI EDTA – DIPENDENTI interagiscono con antigeni criptici della glicoproteina II b, smascherati dalla chelazione del calcio da parte dell’EDTA Qualitative defects • Count may be normal/low/high • May be no apparent abnormality on film • May show changes eg size, appearance etc • Functionality is variably affected • May be inherited or acquired
Scarica
