Esame del liquido seminale,
procedure standard di esecuzione
Conta, Motilità e Vitalità spermatica
Enza A Costantino
Centro Interdipartimentale di Ricerca per la Tutela della Salute Sessuale
Università di Bologna
c/o Policlinico S. Orsola-Malpighi
Bologna, 29 Gennaio 2011
Il Manuale WHO 2010 per l’esame del liquido
seminale: luci e ombre
sono numerosi i fattori variabili che sono
incontrollabili
che
spiegano
le
differenze
intraindividuali nella composizione del liquido
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• Passaggi principali entro i primi 60 minuti dall’eiaculazione:
‫ ٭‬porre il contenitore in incubatore a 37°
‫ ٭‬valutare la fluidificazione e l’aspetto del seme
‫ ٭‬misurare il Volume
‫ ٭‬misurare il pH
‫ ٭‬valutare a fresco il campione per motilità e per la scelta della diluizione
‫ ٭‬valutare la vitalità nemaspermica
‫ ٭‬allestire vetrini per valutare la morfologia nemaspermica
‫ ٭‬diluire il campione per valutare la concentrazione nemaspermica
‫ ٭‬valutare il numero di spermatozoi
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• Raccolta
del campione
‫ ٭‬Il campione DOVREBBE essere raccolto in laboratorio,
dopo minimo 2 max 7 gg di Astinenza sessuale
‫٭‬Il campione va raccolto per masturbazione in un
contenitore certificato come non tossico per gli
spermatozoi
‫ ٭‬Al paziente devono essere comunicate le istruzioni per
la raccolta sia per iscritto che a voce
Va sottolineata l’importanza di una raccolta completa del campione
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• Valutazione
macroscopica
‫ ٭‬Fluidificazione
‫ ٭‬Viscosità
< 2.0 cm
‫ ٭‬Aspetto
grigioopalescente
‫ ٭‬Volume
> 1.5 mL
‫ ٭‬pH
7.2
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• Valutazione
microscopica
Con un microscopio a contrasto di fase si esegue una
valutazione generale per rilevare la presenza di:
‫ ٭‬Filamenti di muco
‫ ٭‬Zone di spermioagglutinazione
‫ ٭‬Altre cellule non nemaspermiche
Si aumenta poi l’ingrandimento 200x o 400x allo scopo di:
‫ ٭‬Valutare la motilità
‫ ٭‬Definire la diluizione necessaria per la valutazione del
numero degli spermatozoi
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Allestimento del preparato a fresco
‫ ٭‬Miscelare il campione
‫ ٭‬Prelevare una aliquota
‫ ٭‬Porre un volume standard di liquido
seminale (10uL)
‫ ٭‬Coprire la goccia con un vetrino
coprioggetto (22x22 mm)
‫ ٭‬Valutare il preparato rapidamente
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Aggregazioni non specifiche di spermatozoi
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Agglutinazioni specifiche di
spermatozoi
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MOTILITA’
La motilità degli spermatozoi deve essere valutata dopo 30 minuti e
entro un’ora dall’eiaculazione, a 37° su almeno 200 spermatozoi
La Classificazione è:
‫ ٭‬Motilità Progressiva (PR)
> 32%
‫ ٭‬Motilità non-progressiva (NP)
‫ ٭‬Immobilità (IM)
(PR + NP) > 40 %
Il dato biologicamente importante e’ il numero totale di spermatozoi
con motilità progressiva nell’eiaculato
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VITALITA’ NEMASPERMICA > 58%
Valutata mediante l’integrità della membrana cellulare è molto
importante in quei campioni con motilità progressiva < 40%
Va valutata entro 30 minuti dall’eiaculazione
TEST DI VITALITA’ MEDANTE EOSINA-NIGROSINA
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TEST DI VITALITA’ MEDIANTE EOSINA
TEST DI VITALITA’ MEDIANTE L’USO DEL
RIGONFIAMENTO IPOSMOTICO
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NUMERO TOTALE E CONCENTRAZIONE NEMASPERMICA
Il numero di spermatozoi totale per
eiaculato
e
la
concentrazione
di
spermatozoi sono correlati sia al tempo di
attesa per la gravidanza che alla
percentuale di gravidanza e sono predittivi
del concepimento.
NUMERO TOTALE DI SPERMATOZOI
CONCENTRAZIONE DI SPERMATOZOI
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Determinare il numero di spermatozoi
‫ ٭‬valutare una aliquota di liquido
‫ ٭‬preparare diluizione con fissativo
‫ ٭‬caricare la camera scelta
‫ ٭‬valutare i campioni entro 10-15 minuti
‫ ٭‬contare almeno 200 spermatozoi
‫ ٭‬calcolare la concentrazione di spermatozoi per mL
‫ ٭‬calcolare il numero totale di spermatozoi per eiaculato
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Diluizioni del liquido seminale richieste, modalità di preparazione,
camera da utilizzare e potenziali aree da valutare
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Tipologie di camere emocitometriche
Emocitometro di Neubauer modificato
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Quali spermatozoi contare?
N = numero di spermatozoi contati
C= N
x fattore di diluizione
n x 20
20 = nl per le griglie 4, 5 e 6
n = numero di righe
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