L’ ANTAGONISTA PERIFERICO DEL
RECETTORE CB1, L’ AM6545, FA
REGREDIRE LA NEFROPATIA DIABETICA
SPERIMENTALE
Grimaldi S, Barutta F, Gruden G.
Dipartimento di Scienze Mediche, Università di Torino
Nefropatia Diabetica
• Aumento della permeabilità
glomerulare alle proteine
• Accumulo di matrice
extracellulare nell’area
mesangiale
• Anomalie a carico dei podociti,
inclusa la perdita di nefrina e
podocina
Recettore degli endocannabinoidi di tipo I
nella ND
• CBR1 è iper-espresso dai
podociti nei topi diabetici.
• Nel diabete sperimentale il
blocco del CB1 sia con
antagonista globale (AM251)
che a selettività periferica
(AM6545) è efficace nella
prevenzione primaria di
albuminuria.
Scopo
 Studiare se il trattamento con AM6545, un
antagonista periferico del CB1, fosse in
grado di far regredire le anomalie
caratteristiche della ND in topi diabetici
proteinurici
 Valutare se il trattamento combinato di
AM6545 con un ACE-inibitore si
traducesse in un ulteriore beneficio.
Materiali e Metodi
STZ 55 mg/kg
Induzione
di DM
8w-DM
• raccolta delle urine 18h: albuminuria:
ELISA (Bethyl): AER
14w-DM
• Peso corporeo, pressione sanguigna
• Campioni ematici: glicemia,
emoglobina glicata
• Veicolo
• AM6545 (10 mg/kg i.p)
Topi maschi C57BL6
(8 settimane)
• Perindopril (2 mg/kg gavage)
SACRIFICIO
• AM6545 + Perindopril
•
•
•
•
•
Nefrina/Podocina: IF
Danno istologico: PAS
Fibronectina: IF, real-time PCR
Infiltrazione di monociti: IHC
Marker di infiammazione: real-time PCR
Parametri Metabolici e Fisiologici
Peso
corporeo
(g)
Glicemia (mg/dl)
Hb
Glicata
(%)
Pressione
(mmHg)
Rapporto
KW/BW
Cr.Clearance
(ml/min)
Non-diabetici
28.9 ± 0.17
136.8 ± 2.78
4.3 ± 0.19
121 ± 3.77
5.99 ± 0.33
0.43 ± 0.06
Veicolo
23.8 ± 0.74*
386.0 ± 7.53*
12.1 ± 0.49*
119 ± 1.29
7.59 ± 0.64
0.39 ± 0.04
AM6545 (A)
21.9 ± 0.92*
407.8 ± 36.40*
12.8 ± 0.78*
120 ± 2.88
7.92 ± 0.27
0.34 ± 0.05
Perindopril (P)
21.0 ± 2.89*
372.3 ± 14.21*
12.5 ± 1.02*
93 ± 9.63#
7.56 ± 0.76
0.32 ± 0.04
AM6545+Perindopril
(AP)
23.1 ± 1.78*
370.8 ± 44.15*
12.0 ± 1.62*
87 ± 5.77#
7.46 ± 0.53
0.37 ± 0.05
Veicolo
Diabetici
p<0.05
# p<0.05
DM vs ND
DM-P e DM AP vs altri
Escrezione Renale di Albumina
AER (mg/18h)
ND
DM
DM-A
DM-P
DM-AP
* p<0.05, ** p<0.01, *** p<0.001 DM gruppi vs. ND
118.38
(110.7-124.6)
429.89 ***
(382.8-513.7)
242.60 **
(213.2-298.0)
235.15 **
(217.4-268.0)
144.82
(112.2-204.5)
Nefrina e Podocina
35
Nefrina
30
Area Positiva (%)
25
ND
DM
DM-A
DM-P
DM-AP
***
##
**
##
DM-A
DM-P
20
***
15
10
5
0
ND
DM
45
Podocina
40
35
***
#
DM
DM-A
DM-P
DM-AP
Positive Area (%)
30
ND
DM AP
25
***
###
***
20
15
10
5
0
DM gruppi vs. ND: ** p<0.01, *** p<0.001
DM-A e DM-P vs DM: # p<0.05, ## p<0.01, ### p<0.001
ND
DM
DM-A
DM-P
DM AP
PAS ed Espressione Glomerulare di Fibronectina
Fibronectina
PAS
ND
DM
DM-P
DM-AP
DM-A
ND
DM-P
DM-A
DM-AP
30
***
***
20
25
Area Positiva (%)
% Area Mesangiale
25
15
10
5
0
DM
20
15
10
5
0
ND
DM
DM-A
DM-P
DM AP
ND
*** p<0.001 DM gruppi vs. controlli
DM
DM-A
DM-P
DM AP
Effetti dei Trattamenti sull’ Infiammazione
ICAM-1
F4/80+
***
Numero di cellule
glomerulari positive F4/80
Espressione ICAM-1 mRNA
6
2.5
***
2.0
###
***
1.5
###
***
1.0
0.5
0.0
ND
DM
DM-P
DM-A
##
**
4
2
1
ND
MCP-1
**
9
**
8
**
7
6
5
4
3
2
1
0
DM gruppi vs. ND: * p<0.05, ** p<0.01, *** p<0.001
DM -A e DM-P vs DM: ## p<0.01 ### p<0.001
ND
DM
DM-A
##
*
3
0
DM AP
10
Espressione MCP-1 mRNA
5
DM-P
DM AP
DM
DM-A
DM-P
DM AP
Conclusioni
L’efficacia dell’AM6545 in combinazione con un
ACE-inibitore nel far regredire le anomalie
indotte dal diabete suggerisce che questo
composto possa avere un futuro ruolo
terapeutico