Cannabinoidi e infiammazione intestinale Federico Massa Max Planck Institute Monaco di Baviera – Germania Bologna, 12-09-2004 Tratto gastrointestinale •una superficie di 200-300 metri quadri •10.000 miliardi di batteri e altri microrganismi Rete di sorveglianza e difesa • Neuroni sensitivi • Sistema immunitario • Cellule endocrine Infiammazione MALATTIE INFIAMMATORIE CRONICHE INTESTINALI • Morbo di Crohn • Colite ulcerosa • Coliti „inderteminate“ Cause: • Predisposizione genetica • Fattori immunologici • Infezioni (batteriche, virali) • Alimentazione • Fumo • Stress Terapie: • anti-infiammatori • immunomodulatori/immunosoppressori • antibiotici • chirurgia Oppiodi / Cannabinoidi / Vanilloidi - Recettori CB1 e endocannabinoidi sono presenti nel tratto gastrointestinale -La marijuana e´ stata usata per secoli per curare disturbi gastrointestinali -Il sistema endocannabinoide partecipa alla regolazione di diverse funzioni dellíntestino Modelli sperimentali utilizzati Induzione dell’infiammazione nel colon di topo 1. DNBS (Dinitrobenzene sulfonic acid) intrarettale 2. DSS (Destrano sodio solfato ) nell’acqua da bere per 7 giorni normale 3 giorni dopo DNBS Quantificazione del livello di infiammazione 1. Esame macroscopico score 0: nessun danno score 1: moderata iperemia + edema, NO erosione NO ulcera score 2: moderata iperemia + edema + erosione score 3: un sito ulcerazione, iperemia, edema, necrosi; score 4: due o più siti di ulcerazione, iperemia, edema, necrosi < 1cm. score 5: due o più siti di ulcerazione, infiammazione, necrosi > 1cm score 6-10: danno >1.5 cm, score innalzato di un punto ogni 0.5 cm. +1, presenze di diarrea. Quantificazione del livello di infiammazione 2. Saggio dell’enzima mieloperossidasi (MPO) L’enzima mieloperossidasi è presente nel citoplasma dei neutrofili. Quantificazione MPO nei tessuti infiammati ► Indice del livello di infiammazione Infiammazione da DNBS e DSS in topi CB1 knockout Score Infiammazione 5 4 Topi normali Topi senza CB1 * 700 * 3 Livelli MPO 2 500 300 1 * 100 0 DNBS day 3 Topi normali DSS Day 7 DNBS Day 3 DSS Day 7 Topi senza CB1 Infiammazione da DNBS: time-course Score Infiammazione 7.5 * Livelli MPO * 5.0 500 400 300 200 100 0 * 2.5 0 Day 1 Day 2 * Day 1 Day 3 Day 2 * Day 3 Peso corporeo 100 topi normali 90 topi senza CB1 % 80 * * Day 2 Day 3 70 60 Day 0 Day 1 Blocco farmacologico del recettore CB1 antagonista SR141716A Score Infiammazione 5 * 4 Livelli MPO 500 400 3 300 2 200 1 100 0 0 3 giorni dopo DNBS Placebo * Placebo SR141716A 3 giorni dopo DNBS SR141716A Stimolazione del recettore CB1 HU210 Score Infiammazione 5 4 3 2 1 0 Livelli MPO 150 * 100 50 0 DNBS: day 3 Placebo HU210 * DNBS: day 3 Aumento del tono endocannabinoide Score Infiammazione 5 4 3 2 1 0 Livelli MPO 150 * 3 giorni dopo DNBS topi normali 100 50 * 0 3 Giorni dopo DNBS topi senza FAAH CB1 RIMOZIONE BLOCCO FARMACOLOGICO STIMOLAZIONE FARMACOLOGICA AUMENTO ENDOCANABINOIDI INFIAMMAZIONE Espressione del recettore CB1 durante l’infiammazione Numero di cellule che esprimono CB1 300 S % * 200 100 0 non trattati DNBS: day 3 ATTIVITA’ ELETTRICA DEL COLON Topi normali NO INFIAMMAZIONE 8 ore dopo DNBS 24 ore dopoDNBS Topi senza CB1 Conclusioni Il nostro studio dimostra come il sistema endocannabinoide sia coinvolto nella modulazione dell’infiammazione intestinale: • attivandosi già nelle prime fasi dell’infiammazione • aumentando la propria espressione durante l’infiammazione • se stimolato, riducendo i livelli di infiammazione se bloccato, aumentandoli Direzioni future • Meccanismo d´azione? • Centrale o periferico? • Interazioni con vanilloidi e oppiodi Thanks to….. Beat Lutz Maria Brenz Verca, Astrid Cannich, Barbara Fackelmeier, Nadine Franke, Heike Hermann, Thomas Koegelsperger, Giovanni Marsicano, Krisztina Monory, Peter Weber, Jan Hendrik Sitz, Michel Steiner, Barbara Wölfel Martin Storr e Andrei Sibaev (LMU, Munich)