EPATITI VIRALI Virus Famiglia Genoma Trasmissione HAV Picornaviridae RNAss + orofecale HBV Hepadnaviridae DNA ds parenterale HCV Flaviviridae RNA ss + parenterale HDV Flaviviridae RNA ss + parenterale HEV Caliciviridae RNA ss + orofecale HGV Flaviviridae RNA ss + parenterale VIRUS DELL’EPATITE B (Scoperte scientifiche) 1) 1963 Blumberg Antigene Australia (HBsAg) 2) 1973 Dane particelle virali 3) Kaplan polimerasi virale 2) 1979 Rutter et al. clonaggio e sequenziamento del genoma virale HEPADNAVIRIDAE Caratteristiche comuni 1- DNA a doppio filamento circolare incompleto 2- Genoma “compatto” con regioni di overlapping 3- Proteina virale P con attività di Polimerasi/Trascrittasi inversa legata covalentemente al filamento negativo di DNA 4- Produzione di un RNA pregenomico intermedio nella replicazione del genoma virale 5- Produzione eccedente di particelle subvirali non infettanti 6- Ristretto spettro d’ospite 7- Pronunciato tropismo per gli epatociti 8- Infezioni persistenti FAMIGLIA HEPADNAVIRIDAE Avihepadnavirus HEPADNAVIRIDAE Virus Ospite DHBV Anatra HHBV Airone GHBV Oca CHBV Gru WHV Marmotta GSHV Scoiattolo gigante AHV Scimmia antropomorfa HBV Uomo Orthohepadnavirus HBV FAMIGLIA Hepadnaviridae (epatite dello scoiattolo, dell’anatra e del woodchuck) IDENTIFICAZIONE Blumberg OSPITE Uomo – scimmia (tropismo = fegato – pancreas) non nel babbuino STRUTTURA Sferica (42nm = particella di Dane) INVOLUCRO PERICAPSIDICO GENOMA + DNA, parzialmente ds circolare, 3,200 Kbp (+strand = 50-80% -strand)* COLTIVAZIONE IN VITRO STABILITA’ A: Congelamento: + Calore = + Etere = + pH acido = + limitata Caratteristiche chimico-fisiche dei virioni 1- Resistenza agli acidi: pH 2,4 per 6 ore 2- Resistenza al calore: 30°C per 6 mesi 60°C per 10 ore 98°C per 1 minuto 3- Inattivazione parziale quando la carica virale è alta Caratteristiche biologiche dei virioni 1- HBV cresce su colture primarie e fetali di epatocita 2- Coltivazione in vitro è difficoltosa perché questo virus non cresce su colture continue Genotipi 1- Genotipo A e D Europa 2- Genotipo D ed E Africa 3- Genotipo B, C, D Asia 4- Genotipo C Australia 5- Genotipo B Alaska 6- Genotipo F, G, H America Centrale e Sud Serotipi Epitopo 1: a (determinanti di gruppo tipo-specifici) HBsAg Epitopo 2: d ; y Epitopo 3: w ; r Serotipi: adw adr ayw ayr Sottotipi (ayw 1, ayw2, ayw3, ayw4, ayr,adw 2, adw4, adr1) Organizzazione delle ORFs 0 precore 1000 2000 core preS1 preS2 3000 3220 Kbp S Polymerase X X start Esperimento di Summers & Mason (1982) HBV si comporta come un retrovirus al contrario La sintesi del filamento negativo è resistente all’actinomicina D La sintesi del filamento positivo è sensibile all’actinomicina D Identificazione di ibridi DNA/RNA Trascritti virali mRNA subgenomici mRNA 2.1 Kb ORF S/ pre S2 mRNA 2.4 Kb ORF pre S1 mRNA 0.7 Kb ORF X mRNA genomici mRNA 3.5 Kb ORF pre C/ C ORF C/P mRNA 3.2 Kb mRNA pg Proteine dell’envelope ORFs: Pre-S1/Pre-S2/S Pre-S1 RNA (2.4kb) Pre-S2/S RNA (2.1kb) LHBs PreS1 MHBs PreS2 S PreS2 SS SHBs S Proteine del capside e polimerasi ORFs: Pre-C/C/C-P/ ORF PreCore mRNA Pregenomic RNA Monocistronic C P25 Pre C Cytosol Arg Golgi protease Bicistronic 1 or 2 copies Core P21 HBcAg 180 copies P16, P18, P20 Secreted as HBeAg (3.5kb) Polymerase 90kD POLIMERASI VIRALE Terminal Protein 1 Spacer 183 POL/RT 349 RNaseH 692 845 a.a. Funzione della polimerasi : 1) Terminal Protein: dominio NH2 terminale che lega 5’ filamento – 2) Spacer 3) Pol/RT: Polimerasi e Retrotrascrittasi 4) RNAase H: degradazione RNA nell’ibrido DNA/RNA Incapsidamento RNA pregenomico Sequenza e PATOGENESI Infezione primaria Infezione acuta Risoluzione della malattia (90%) Infezione Cronica (9%) Epatite fulminante (1%) Risoluzione Persistente Riattivazione della malattia (50%) Asintomatica AZIONE DI FARMACI ANTIVIRALI A LIVELLO DELLA POLIMERASI HBV 1. VACCINO INATTIVATO Plasma umano Ultracentrifugazione cromatografia Isolamento particelle incomplete sferiche 22nm Inattivazione chimica e al calore 2. VACCINO SINTETICO Plasmide con gene HBsAg in Saccharomyces cerensiae lisato cromatografia HBsAg Sterilizzazione per filtrazione inattivazione IMMUNOGLOBULINE ANTI HBV (H BIG) PROTEINA HBV X Domino Regolatorio Dominio di Transattivazione X NH2 CO2H