normast news epitech group SRL fax +39 049 8986575 e-mail: [email protected] 12 project n° 1 Le basi razionali di utilizzo farmacologico della Palmitoiletanolamide (PEA) nelle malattie a componente algico-iperalgica e infiammatoria Introduzione MB 8220 tel +39 049 8987246 approfondimento a tema documento riservato all’informazione sanitaria neuroscience R Ibrahim MM, Deng H, Zvonok A, Cockayne DA, Kwan J, Mata HP, Vanderah TW, Lai J, Porreca F, Makriyannis A, Malan TP Jr. Activation of CB2 cannabinoid receptors by AM1241 inhibits experimental neuropathic pain: pain inhibition by receptors not present in the CNS. Proc Natl Acad Sci U S A. 2003; 100(18):10529-33 Jack DB.Aliamides: a new approach to the treatment of inflammation. DN&P. 1996; 9(2):93-98 Jaggar SI, Hasnie FS, Sellaturay S, Rice AS. The anti-hyperalgesic actions of the cannabinoid anandamide and the putative CB2 receptor agonist palmitoylethanolamide in visceral and somatic inflammatory pain. 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Inizialmente considerata in grado di svolgere un ruolo prevalentemente antiflogistico (Schmid et al., 1990), attraverso la down-modulazione del rilascio di mediatori infiammatori (Berdyshev, 2000) da parte di mastociti (Aloe et al., 1993; Facci et al, 1995; Mazzari et al., 1996; Scarampella et al., 2001), monociti (Berdyshev et al, 1997) e macrofagi (Ross et al., 2000), la PEA è oggi considerata elemento chiave nella regolazione di vie ben più complesse, che toccano non solo l'infiammazione (Di Marzo et al., 2000), ma anche i processi alla base del prurito e del dolore, sia neurogenico che neuropatico. PEA - Palmitoiletanolamide Nel complesso, dunque, la PEA risulta implicata in quelli che vengono universalmente riconosciuti come i meccanismi endogeni di protezione, messi in atto dall'organismo in risposta ai più svariati tipi di danno: attivazione della reattività infiammatoria tissutale e delle vie nocicettive. Il significato dell'acronimo ALIA, con cui un gruppo di ricercatori italiani, guidati dal Premio Nobel per la Medicina Rita Levi Montalcini, denominava il meccanismo d'azione di questa molecola, è in breve tempo passato da Autacoid Local Inflammation Antagonism (Aloe et al., 1993) Fig. 1 ad Autacoid Local Injury Antagonism (Levi Montalcini et al., Struttura chimica della Palmitoiletanolamide (Jack, 1996) 1996), a significare il suo coinvolgimento più in generale nei sistemi di protezione, non limitatamente di natura infiammatoria. La storia segnata dalle straordinarie ricerche condotte su questa molecola e su altri composti analoghi, tutti appartenenti alla classe delle fatty acid amides, e, a seconda del meccanismo d'azione classificati come endocannabinoidi o cannabimimetici, sta fornendo prove sempre più pregnanti in favore di questo “allargamento” dell'effetto farmacologico. Questa rassegna, sulla base delle evidenze finora pubblicate nella letteratura internazionale, si prefigge di tracciare un quadro aggiornato dello scenario antiflogistico ed antinocicettivo della PEA. epitech 1 neuroscience project a. Infiammazione La PEA si è dimostrata attiva in numerosi modelli sperimentali di infiammazione, sia di natura immunogenica (es. anafilassi passiva cutanea) che neurogenica (es. iniezioni sottocutanee di sostanza P), tutti caratterizzati da un elevato coinvolgimento mastocitario. In particolare, la sua somministrazione orale a dosaggi compresi tra 0.1 e 10 mg/kg, si è dimostrata inibire, in modo dosedipendente: - l'extravasazione plasmatica, indotta sia da sostanza P che da anafilassi cutanea passiva (Mazzari et al., 1996); - l'edema della zampa conseguente all'applicazione di sostanze come la carragenina (Mazzari et al., 1996; Conti et al., 2002), il destrano, e la formalina (Mazzari et al., 1996). Tali effetti, inizialmente dimostrati in condizioni di pretrattamento (per somministrazioni di PEA effettuate un'ora prima dello stimolo flogogeno), sono stati recentemente della PEA confermati anche nel post-trattamento, cioè somministrando la sostanza successivamente allo stimolo (Costa et al., 2002). I risultati di quest'ultimo studio vengono così commentati dagli Autori: “Our findings show, for the first time, that palmitoylethanolamide has a curative effect in a model of acute inflammation” (Costa et al., 2002). Un recente studio pilota condotto su gatti affetti da placca e granuloma eosinofilico ha dimostrato come la somministrazione per 30 giorni della PEA (Palmidrol), alla dose di 10 mg/kg/die, migliora in modo significativo i sintomi (eritema compreso) in quasi il 65% degli animali trattati (Scarampella et al., 2001). b. Dolore Secondo i dettami dell'International Association for the I tre campi di azione della Palmitoiletanolamide (G. Re et al, 2005 Palmitoylethanolamide, endocannabinoids Study of Pain, il dolore viene definito come “an unpleasant and related cannabimimetic compounds in protections against sensory and emotional experience associated with actual or tissue inflammation and pain: potential use in companions animals. The Veterenary Journal - in press) potential tissue damage, or described in terms of such damage” (Lamont et al., 2000). Uno dei primi studi sull’effetto antalgico dei cannabinoidi è stato condotto nel cane. Nel lontano 1899, il dottor Dixon - da molti ritenuto il padre della moderna farmacologia - osservò che gli animali “trattati” non reagivano al test della puntura di spillo (in Walker et al., 2002). Da allora molte cose sono state chiarite, sia in merito alla fisiopatologia del dolore (Lamont et al., 2000), sia in rapporto all'esistenza degli endocannabinoidi e di analoghi composti cannabimimetici, sostanze endogene che direttamente o indirettamente agiscono sui recettori CB dei cannabinoidi (vedi paragrafo “meccanismo d'azione”). Altra conoscenza acquisita è che tali recettori sono implicati nella modulazione del dolore (Hohmann, 2002). Dolore neurogenico 1. dolore somatico Venendo agli studi sull'effetto antalgico della PEA, i dati fin qui raccolti consentono di affermare, innanzitutto, che la sostanza è attiva sul dolore acuto ed in particolare sul dolore infiammatorio somatico persistente (Hohmann, 2002). Il pretrattamento (1 ora prima dello stimolo) con PEA 2 protezione dal danno, base dell'injury antagonism. Di enorme respiro è, dunque, il potenziale target clinico di approcci basati sull'utilizzo della PEA. In particolare, è ipotizzabile che la PEA ed i suoi analoghi possano trovare utile applicazione in settori che spaziano dalla neurologia all'ortopedia, dalla dermatologia all'odontostomatologia, dalla nefrologia alla cardiologia. In tutti questi settori, infatti, numerose sono le patologie a componente primariamente infiammatoria e/o nocicettiva, a forte coinvolgimento mastocitario, alcune delle quali hanno già ottenuto importanti conferme cliniche sull'efficacia e sulla sicurezza della PEA. BIBLIOGRAFIA Abramo F, Salluzzi D, Leotta R, Noli C, Auxilia S, Mantis P, Lloyd D. Mast cell morphometry of cutaneous wounds treated with an autacoid gel: a placebo controlled study. Proceedings of the 5th World Congress of Veterinary Dermatology. 2004a;August 25 28. Vienna Abramo F, Leotta R, Ropars J, Noli C, Auxilia S, Mantis P, Lloyd D. Valutazione morfometrica del processo di cicatrizzazione in ferite aperte nel cane. Atti 48° congresso nazionale multisala SCIVAC. 2004b; 27-30 maggio. 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Secondo gli Autori, ciò starebbe a significare che la tonica attivazione del recettore CB1 spinale, attraverso il tonico rilascio locale di endocannabinoidi, altro non sarebbe che un meccanismo omeostatico, deputato a mantenere nella norma la soglia nocicettiva basale. Come logica conseguenza ne deriva che l'ipoattività del sistema degli endocannabinoidi potrebbe essere direttamente coinvolta nell'eziologia di determinati stati di dolore cronico (Richardson et al., 1998b). Interessante è la conclusione che ne traggono gli Autori: “Because opioids are not thought to be involved in modulation of basal nociceptive theresholds, these findings provide a major difference between these two endogenous analgesic systems.” (Richardson et al., 1998b). Conclusioni La straordinaria mole di ricerche scientifiche sugli effetti della palmitoiletanolamide (Lambert et al., 2002) va aprendo la strada ad opportunità terapeutiche senza precedenti. Mai prima d'ora una singola classe di molecole naturali si era dimostrata possedere tali e tante potenzialità in medicina. Oggi, che nella maggior parte della branche mediche l'orientamento più attuale è quello di utilizzare approcci “disease-oriented”, che vadano, cioè, ad incidere sui meccanismi alla base della patologia, poter disporre di sostanze preposte per natura al controllo dei meccanismi di difesa endogeni assume una straordinaria importanza. In questo senso l'acronimo ALIA, inteso come Autacoid Local Injury Antagonism, è quello che meglio descrive l'effetto della PEA. La sua natura autacoide (“Autacoid" deriva dalle parole greche “autos” [auto] e “akos” [rimedio]), la capacità di agire localmente, e l'attività di protezione rispetto al danno attuale o potenziale rappresentano i tre presupposti alla base di altrettanti vantaggi terapeutici. In primo luogo, l'assenza di effetti collaterali, insita nella natura endogena (“autos”) del composto. In secondo luogo, la duplicità dell'effetto, sia di tipo antinfiammatorio che di tipo antinocicettivo (inteso, quest'ultimo, nella doppia valenza antalgica ed antipruritogena), legata al concetto di “akos”. Infine, la capacità di down-modulare i mastociti, proprietà indissolubilmente legata alla caratteristica locale dell'effetto, e, in funzione del sempre più chiaro coinvolgimento del mastocita nei sistemi endogeni di 10 inibisce infatti, in modo dose-dipendente, l'iperalgesia meccanica (Mazzari et al., 1996) e termica (Conti et al., 2002) conseguente ad iniezione subplantare di carragenina. L'effetto anti-nocicettivo è inoltre confermato dal fatto che la PEA riduce il comportamento algico indotto da iniezione sottocutanea di formalina (Calignano et al., 1998; Jaggar et al., 1998; Calignano et al, 2001) e da somministrazione intraperitoneale di acido acetico, caolino e solfato di magnesio (Calignano et al., 2001). Infine, è recente la dimostrazione che la PEA, somministrata per via intraperitoneale immediatamente dopo iniezione intraplantare di NGF, inibisce l'iperalgesia termica (Farquhar-Smith e Rice, 2003) indotta da questa importante neurotrofina (Rice, 2000). 2. dolore viscerale Gli effetti anti-iperalgici della PEA, fin qui descritti in modelli di dolore somatico, sono altresì confermati anche nel dolore viscerale. L'iperriflessia vescicale (modello di iperalgesia viscerale) indotta da applicazioni di NGF o di turpentina risulta sensibilmente attenuata dal trattamento sistemico con PEA, rispettivamente alle dosi di 2,5 mg/Kg (Farquhar-Smith et al., 2002) e 10-30 mg/Kg (Jaggar et al., 1998). Dolore neuropatico Il dolore neuropatico - il dolore dovuto a danni del nervo - (per recenti review si vedano Jensen et al., 2001 e Zimmermann, 2001) rappresenta un'entità clinica ancor oggi caratterizzata da una certa inappropriatezza degli strumenti farmacologici disponibili e da una notevole difficoltà di gestione terapeutica. Il dolore neuropatico risulta infatti resistente al trattamento con gli oppioidi (Dellemijn, 1999) mentre risulta nettamente sensibile ai cannabinoidi (Richardson et al., 1998b). In particolare, recente è la dimostrazione che la PEA, alla dose di 100 microg/Kg i.p., è in grado di ridurre di quasi l'80 % l'iperalgesia tipica del dolore neuropatico, in un classico modello di legatura parziale del nervo sciatico (Helyes et al., 2003). Sugli effetti della PEA sui diversi tipi di dolore ci sembra particolarmente significativo riportare le conclusioni prospettate da Malan e collaboratori: “Although all three pain mechanisms [nociceptive, inflammatory and neuropathic pain, NdR] may be active in some patients (for example in cancer pain) there are presently no therapy that are consistently effective against all three entities. A single medication possessing activity against these three distinct types of pain could provide an extremely valuable and effective therapeutic option” (Malan et al., 2002). c. Prurito Poiché il prurito rappresenta il sintomo di uno stimolo nocicettivo (Gingold e Bergasa, 2003) che transita attraverso vie anatomicamente indistinguibili (sebbene funzionalmente diverse) da quelle del dolore (Andrew e Craig, 2001; Schmeltz, 2001; Twycross et al., 2003; Yosipovitch e Fleischer, 2003), le evidenze a favore di un effetto anti-nocicettivo della PEA fin qui rassegnate costituiscono forti indizi della potenziale attività antipruritogena del composto. Come recentemente affermato in letteratura, infatti, “Pruritus is a nociceptive stimulus; accordingly, drugs that increase thereshold to nociception ... may be a novel approach to the treatment of this symptom ...” (Gingold e Bergasa, 2003). L'ipotesi è suffragata dai risultati di uno studio condotto con la PEA in gatti affetti da placca e granuloma eosinofilico. Somministrato per 30 giorni al dosaggio di 10 mg/kg/die, il composto si è mostrato indurre netto miglioramento dei sintomi (prurito compreso) in quasi il 65% degli animali trattati (Scarampella et al., 2001). 3 project neuroscience Ma i dati che più fortemente depongono a favore dell'ipotesi di un sistema endogeno di controllo della soglia basale del dolore mediato dagli endocannabinoidi / cannabimimetici sono quelli che emergono da esperimenti incentrati sulla riduzione numerica o funzionale dei recettori CB. Si è visto, ad esempio, che il trattamento con antagonisti del CB1 e del CB2 si traduce in un aumento della durata e dell'intensità del comportamento algico in risposta ad un danno tissutale (Calignano et al., 1998). Sulla base di ciò, si è ipotizzato che i recettori CB1 e CB2-like periferici partecipino ad un controllo intrinseco del dolore, in virtù della loro attivazione da parte di AEA e PEA generate localmente in risposta al danno (Calignano et al., 1998). epitech neuroscience project Numerose sono, dunque, le dimostrazioni di un netto effetto antinfiammatorio ed antinocicettivo della PEA. Ma come agisce esattamente questo composto endogeno? Quali vie ne mediano gli effetti sull'infiammazione, sul dolore e sul prurito? Cerchiamo di rispondere a queste domande riportando le ipotesi maggiormente accreditate in merito al meccanismo d'azione della PEA. Si tratta di tre ipotesi, tra loro apparentemente diverse, ma in realtà complementari e sinergiche, come vedremo in seguito. Ma come si spiega l'effetto antalgico dell'attivazione del CB2 in condizioni di dolore non infiammatorio (es. nocicezione termica), lì dove manca una vera e propria reazione infiammatoria? Secondo gli Autori anche in questo caso, il meccanismo sarebbe “indiretto”, via recettori CB2 mastocitari; ciò che verrebbe ad essere down-modulato sarebbe il rilascio basale di sostanze sensitizzanti nei tessuti non infiammati. Un ruolo molto importante viene attribuito al controllo del rilascio basale di NGF da parte dei mastociti: un rilascio che, a detta degli Autori, esiste ed è necessario a mantenere il fenotipo nei neuroni primari afferenti (Malan et al., 2002). Le evidenze finora note, in sostanza, fanno sì che l'ipotesi ALIA e l'ipotesi recettoriale non si escludano affatto tra loro ma, al contrario si completino costituendo un unicum che, tra l'altro, ben si concilia con l'ipotesi di un “secondo messaggero” endogeno stimolato dalla PEA (effetto “entourage”). Ipotesi ALIA Una prima ipotesi risale a più di 10 anni fa, quando venne coniato l'acronimo ALIA (Aloe et al., 1993), a significare che alcune N-acil-etanolamine endogene, PEA in primis, erano in grado di esercitare un'azione antagonista di natura locale nei confronti dell'infiammazione (Autacoid Local Inflammation Antagonism). Tale azione, in particolare, veniva attribuita al controllo della reattività mastocitaria (per una review si veda Jack, 1996). Era stato infatti dimostrato che gli effetti antinfiammatori esercitati in vivo dalla PEA, come ad esempio l'inibizione dell'extravasazione plasmatic e dell'edema della zampa (si veda paragrafo “infiammazione”), si manifestavano come conseguenza della down-modulazione della degranulazione mastocitaria (Mazzari et al., 1996). Analoghi i risultati ottenuti in studi più recenti condotti nel cane e nel gatto. L'analisi PEA sulla degranulazione densitometrica effettuata su biopsie cutanee mastocitaria di gatti con dermatopatie eosinofiliche trattati per os con 10mg/Kg di PEA dimostra infatti un aumento della densità granulare dei mastociti, indice di diminuita degranulazione (Scarampella et al., 2001) dei mastociti cutanei, localizzati ai margini di ferite sperimental-mente indotte nel cane (Abramo et al., 2004a). Il mastocita Mastociti cutanei in sezioni colorate con blu di toluidina. Lesioni cutanee in modello animale di dermopatia da ipersensibilità prima (a) e dopo (b) trattamento orale con PEA. Le frecce indicano i mastociti. Il significativo aumento dell’intensità di colorazione (1b) conferma la riduzione della degranulazione mastocitaria in seguito a trattamento. (Da: G. Re et al, 2005 Palmitoylethanolamide, endocannabinoids and related cannabimimetic compounds in protections against tissue inflammation and pain: potential use in companions animals. The Veterenary Journal - in press) Il valore farmacologico del meccanismo ALIA si fonda sul ruolo del mastocita nell'infiammazione, e, più in generale, nei processi protettivi messi in atto dall'organismo in condizioni di pericolo o danno. Infatti questa cellula, localizzata nei tessuti in stretta connessione anatomofunzionale con i vasi e le locali terminazioni nervose (Maurer et al., 2003), gioca ruoli di primissimo piano nella fisiopatologia del tessuto, funzionando, a seconda delle condizioni, da sofisticato gatekeeper dell'omeostasi distrettuale (Maurer et al., 2003; Galli et al., 2002), ovvero da iniziatore, sostenitore e “perpetuatore” di danno (Boyce, 2003; Theoharides e Cochrane 2004). In condizioni di sovrastimolazione, la capacità del mastocita di rispondere a stimoli agonisti della più svariata natura, liberando con straordinaria prontezza il contenuto dei suoi granuli citoplasmatici, a forte potenzialità proinfiammatoria 4 PEA e soglia basale dei sistemi protettivi endogeni: ruoli omeostatici La sorprendente capacità dalla PEA di modulare le risposte protettive messe in atto dall'organismo in condizioni di danno attuale o potenziale (infiammazione e attivazione delle vie nocicettive), ha portato a sviluppare l'ipotesi secondo cui la PEA endogena farebbe parte di un complesso sistema omeostatico, preposto al controllo della soglia basale sia dell'infiammazione che del dolore/prurito (Calignano et al., 2001; Malan et al., 2002; Hohmann, 2002). L'ipotesi è supportata anche dalla strategica localizzazione della PEA rispetto all'avvio dei meccanismi dell'infiammazione e del dolore e dal suo aumento locale in situazioni di pericolo o danno (vedi box a lato). Una conferma indiretta a favore del ruolo della PEA nei sistemi preposti al controllo della soglia basale di reattività infiammatoria viene dalla riduzione dell'extravasazione plasmatica operata in tessuti noninfiammati da un agonista selettivo del CB2 (Malan et al., 2002). Sono gli stessi Autori ad interpretare il risultato come indizio del ruolo omeostatico (”omeodinamico”?) sulla permeabilità vasale basale giocato dal sistema degli endocannabinoidi. Sempre in assenza di infiammazione, inoltre, il medesimo agonista recettoriale selettivo allunga il tempo di latenza in risposta a stimolazione termica cutanea, provocando un innalzamento della soglia nocicettiva basale (Malan et al., 2001). project neuroscience Effetti della Meccanismi d’azione della PEA Palmitoiletanolamide:una molecola endogena a significato omeostatico ( “omedinamico” ?) Come ormai più volte confermato in diversi sistemi cellulari, la PEA viene sintetizzata e rilasciata in seguito a danni attuali o potenziali. Lo si è dimostrato nei leucociti (Bisogno et al., 1997) e nei macrofagi stimolati (Di Marzo et al., 1996), nelle cellule epidermiche di topo in seguito a vari tipi di stress (Berdyshev et al., 2000), nella cute infiammata (Calignano et al., 1998; Hohmann, 2002) o interessata da dolore neuropatico (Darmani et al, submitted), in neuroni corticali come risposta all'aumento sperimentale della concentrazione intracellulare di calcio (Cadas et al., 1996) e, molto recentemente, nella corteccia cerebrale di topo sottoposta ad ischemia focale (Franklin et al., 2003). Aumenti di PEA sono stati inoltre riscontrati nel plasma di soggetti affetti da Low Back Pain in seguito a manipolazioni osteopatiche e nelle biopsie di pazienti con colite ulcerosa (Darmani et al, submitted). Sulla base di questi risultati, si è ipotizzato che la produzione cellulare di PEA in risposta a un danno possieda un importante significato protettivo (Berdyshev et al., 2000; Hansen et al., 2000). epitech 9 neuroscience project D'altro canto è anche noto che l'attivazione del recettore VR1 riduce la sensazione di prurito, sia nell'uomo (Lysy et al., 2003; Weisshaar et al., 2003) sia nel cane (Marsella et al., 2002). In questo caso, la capacità della PEA di potenziare l'effetto via VR1 dell'AEA, attraverso l'aumento dell'affinità di questo composto per il recettore (De Petrocellis et al., 2001) assumerebbe una valenza molto importante nel trattamento del prurito. In conclusione, l'ipotesi dell'effetto entourage comporta che gli effetti antinfiammatori ed antinocicettivi della PEA transitino attraverso il potenziamento degli effetti endocannabinoidi e/o endovanilloidi dell'AEA o di composti analoghi. “In medio stat virtus” “La verità sta nel mezzo” ... Forse la chiave di lettura per comprendere il meccanismo d'azione della PEA sta proprio in questo detto latino. Ipotesi ALIA, ipotesi recettoriale, ipotesi entourage: perché leggerle come ipotesi diverse? Potrebbero essere semplicemente l'una il completamento e l'approfondimento molecolare dell'altra; ognuna di esse rappresentare, in sostanza, una parte di quella complessità biologica che caratterizza i sofisticati sistemi endogeni di regolazione del nostro organismo. In effetti i vari filoni di ricerca in merito al meccanismo d'azione della PEA tendono in più punti a confluire. Il mastocita, ad esempio, target ideale del meccanismo ALIA, si è dimostrato in grado di esprimere il recettore CB2 (Facci et al, 1995), target ideale dell'ipotesi recettoriale. Questo risultato, più volte messo in discussione (Maccarrone et al., 2000; Lau e Chow, 2003), ha ottenuto recentemente un'importante conferma nelle cellule RBL2H3 (una linea cellulare con caratteristiche simili ai mastociti), dove sono stati identificati sia l'mRNA che la proteina di entrambi i recettori per i cannabinoidi, CB1 e CB2 (Samson, 2003). Secondo i ricercatori, entrambi sono funzionali, non ridondanti e capaci di concorrere alla modulazione della degranulazione mastocitaria (Samson, 2003). Una “confluenza funzionale” viene dagli esperimenti condotti sull'iperalgesia conseguente ad iniezioni di NGF (Farquhar-Smith e Rice, 2003). A detta degli Autori, l'effetto anti-iperalgico esercitato in questo modello dalla PEA sarebbe mediato dall'inibizione dell'accumulo di neutrofili, a sua volta conseguenza della down-modulazione della degranulazione mastocitaria (Farquhar-Smith e Rice, 2003; Rice et al., 2002). Per vie diverse, e partendo dagli effetti antalgici di un agonista selettivo sintetico del recettore CB2, alcuni Autori arrivano a conclusioni molto simili. Secondo questo gruppo (Malan et al., 2002) l'effetto antalgico sarebbe la conseguenza dell'attivazione del recettore CB2: non tanto di quello espresso sulle terminazioni dei neuroni afferenti primari, quanto di quello espresso sui mastociti. In tal modo - affermano - verrebbe a diminuire il rilascio mastocitario di sostanze capaci di sensitizzare i nocicettori periferici (es. NGF, prostanoidi, citochine, ATP, serotonina, istamina). 8 (es. citochine, ammine vasoattive), iperalgica (es. enzimi proteolitici, bradichinina, neuropeptidi) e pruritogena (es. triptasi, istamina, serotonina), ne fa una potenziale “santabarbara”, pronta a trasformarsi da sistema di difesa in sistema di attacco. Il pericolo insito in questa trasformazione trova nella modulazione mediata dalla PEA un valido sistema per arginare in modo naturale l'eccesso di esuberanza mastocitaria. Un eccesso di esuberanza chiamato in causa non solo nei processi infiammatori, ma anche nell'iperalgesia infiammatoria (Levi-Montalcini et al., 1995) e neuropatica (Theodosiou et al., 1999; Zuo et al., 2003). project neuroscience neuropeptidi strettamente connessi all'infiammazione neurogenica, come la SP ed il CGRP, ed esercitando, conseguentemente, effetto proinfiammatorio (Ahluwalia et al., 2003b; Di Marzo et al., 2002; Maccarrone et al., 2002; Morisset et al., 2001; Ralevic, 2003). Struttura del recettore per i vanilloidi di tipi 1 (TRPV1) Ipotesi recettoriale Un filone di ricerca apparentemente diverso, ma, come vedremo, assolutamente compatibile con il meccanismo ALIA (se non addirittura sinergico), coltiva l'ipotesi di un meccanismo d'azione della PEA di natura recettoriale. Oggetto delle ricerche: i recettori CB, così detti recettori dei cannabinoidi, G protein-coupled receptors, di cui finora sono stati scoperti due tipi. Il recettore CB1, identificato per la prima volta nel 1998 (Devane et al., 1988) viene espresso in varie aree del cervello (Walker et al., 2002), nei neuroni dei gangli delle radici dorsali del midollo spinale (Ahluwalia et al, 2002; Ralevic, 2003) e nei tessuti periferici (Malan et al., 2002). Il recettore CB2, di più recente scoperta (Munro et al., 1993), è anche detto recettore periferico dei cannabinoidi, perché non si rinviene nel CNS in condizioni normali (né come proteina né come mRNA), mentre nelle cellule immuno-infiammatorie il suo mRNA è presente in ragione da 10 a 100 volte superiore rispetto all'mRNA del CB1 (Malan et al., 2002) L'ipotesi recettoriale prevede che gli effetti farmacologici della PEA derivino dall'attivazione diretta o indiretta del recettore CB2 (o meglio, di un recettore CB2-like non ancora identificato) ed è suffragata da una serie di dati in vivo, brevemente di seguito rassegnati: Il recettore canale TRPV1 consiste di: - un dominio N-terminale, - sei segmenti trans-membrana (cilindri rosa), inframmezati, tra S5 e S6, da un corto frammento anfipatico (segmento ricurvo giallo), - un dominio citosolico C-terminale, dove sono localizzati i siti di legame per la calmodulina (CaM) e per il fosfatidilinositolo-4,5-difosfato (PIP 2). (Da: G. Re et al, 2005 Palmitoylethanolamide, endocannabinoids and related cannabimimetic compounds in protections against tissue inflammation and pain: potential use in companions animals. The Veterenary Journal - in press) - L'effetto della PEA sull'edema da carragenina è totalmente eliminato dalla somministrazione di un antagonista del recettore periferico per i cannabinoidi (Conti et al., 2002), cioè di una sostanza in grado di legarsi al CB2 senza attivarne la conseguente risposta. - Vari agonisti recettoriali sintetici, selettivi per il CB2, manifestano importanti effetti antiedemigeni (Hanus et al., 1999; Malan et al., 2002; Quartilho et al., 2003). - La somministrazione di antagonisti recettoriali specifici del CB2 annullano gli effetti antidolorifici della PEA (Calignano et al., 1998; Calignano et al., 2001; Conti et al., 2002; Farquhar-Smith e Rice, 2003). 5 epitech neuroscience project - Anche per via topica, il pre-trattamento con un agonista sintetico dei recettori cannabinoidi l'HU210 che si lega al CB1 e al CB2 - riduce significativamente il dolore urente conseguente ad applicazione cutanea di capsaicina ed inibisce completamente la conseguente iperalgesia termica primaria (Rukwied et al., 2003). - In modelli di dolore viscerale l'effetto antinocicettivo della PEA scompare in presenza di antagonisti selettivi del recettore CB2 (Farquhar-Smith et al., 2002). - Nell'allodinia neuropatica (dove è noto che gli oppioidi sono attivi solo a dosaggi di molto superiori rispetto a quelli necessari ad inibire la nocicezione termica), l'agonista selettivo del recettore CB2 (AM1241) funziona al medesimo dosaggio di quello attivo nell'abrogare l'iperalgesia (Malan et al., 2002). L'effetto è dose-dipendente e si manifesta anche in assenza del recettore CB1. - Il pre-trattamento per via topica con un agonista sintetico del recettore per i cannabinoidi (HU210, che si lega al CB1 e Farmacodinamica della PEA: al CB2) inibisce la sensazione di prurito una visione unificata indotta dall'applicazione cutanea di istamina (Dvorak et al., 2003). Gli Autori dello studio così commentano il risultato: “...The findings presented in this investigation might lead to a new strategy of the peripheral treatment of sensitive, itchy and/or inflamed skin resistant to the common treatment, for instance with antihistaminergic drugs.” (Dvorak et al., 2003). (Richardson et al., 1998b). E’ verosimile infatti, che sostanze attive come agonisti selettivi del recettore CB2 siano prive di effetti collaterali sul sistema nervoso centrale che limitano l’efficacia dei farmaci attualmente disponibili. (Ibrahim et al., 2003). Del medesimo avviso è la conclusione di un recente lavoro effettuato con la PEA: i ligandi dei recettori dei cannabinoidi - in particolare gli agonisti selettivi del recettore periferico CB2 privi di effetti collaterali sul sistema nervoso centrale - possono aprire nuovi orizzonti nella terapia del dolore neuropatico. (Helyes et al., 2003). Ipotesi dell' “effetto entourage” Per far fronte alla discrepanza dei risultati ottenuti in vitro e in vivo in merito al meccanismo CB2-mediato della PEA, ha preso recentemente corpo una nuova ipotesi sul meccanismo d'azione di questo composto: l'effetto entourage. A dispetto della “pochezza” che a prima vista può evocare il termine “entourage” (letteralmente “di contorno”), in realtà secondo questa ipotesi alla PEA vengono attribuite proprietà di raffinatissima modulazione biologica. In sostanza si prospetta che la PEA funzioni da amplificatore dell'attività antiinfiammatoria ed anti-nocicettiva di altri composti endogeni, attraverso l'aumento della loro affinità per il target o l'inibizione dei loro pathway degradativi (Mechoulam et al., 1998; Ben-Shabat et al, 1998; Calignano et al., 1998; Lambert e Di Marzo, 1999, Hohmann, 2002; Smart et al., 2002; Walker et al., 2002). L'ipotesi è estremamente interessante in funzione del fatto che tra questi composti endogeni, la cui attività verrebbe amplificata dalla PEA, se ne annovera uno in particolare, l'anandamide (AEA), dalle spiccate proprietà antinocicettive ed antinfiammatorie. Si tratta di un endocannabinoide che rappresenta il ligando endogeno del recettore CB1 (Devane et al., 1992). Se utilizzata a dosaggi molto bassi (0.01 ng) e per trattamenti locali (non sistemici), inibisce l'edema da carragenina (Richardson et al., 1998c). Concludendo, l'ipotesi recettoriale si basa su una corposa serie di dati che depongono a favore dell'esistenza di un meccanismo d'azione della PEA di natura prettamente periferica (Malan et al., 2001; Nackley et al., 2003; Quartilho et al., 2003), che prevede il legame ai recettori CB2 (o CB2-like) espressi dalle cellule immunitarie (Sokal et al., 2003; Malan et al., 2002) e/o dai neuroni sensoriali primari delle corna dorsali del midollo spinale (Hohmann, 2002; Nackley et al., 2003). L'AEA inibisce anche il comportamento algico indotto da formalina e l'iperalgesia termica da carragenina, attraverso un meccanismo che secondo alcuni Autori prevede l'attivazione del recettore CB1 (Calignano et al., 1998; Richardson et al., 1998; Richardson et al., 1998c) e secondo altri viene mediato dal recettore CB2 dei neuroni spinali (Sokal et al., 2003). In seguito all'attivazione del CB2 (o CB2-like) verrebbe ad essere inibito il rilascio di quelle sostanze implicate nell'infiammazione e nell'abbassamento della soglia di attivazione delle fibre nervose afferenti (Sokal et al., 2003). Alla natura endocannabinoide l'AEA accorpa in sé caratteristiche di tipo endovanilloide. Il composto, infatti, si è di recente dimostrato attivo anche sul recettore per la capsaicina, o recettore per i vanilloidi di tipo 1, VR1 (Ross, 2003; per una review si veda anche van der Stelt e Di Marzo, 2004). Il dualismo di effetti che deriva da questa duplice “appartenenza” (famiglia degli endocannabinoidi e famiglia degli endovanilloidi) certo non facilita il suo inquadramento farmacologico. Ad alti dosaggi, ad esempio, l'AEA si è dimostrata attivare il recettore VR1, provocando il rilascio antidromico di La PEA può agire down-regolando la degranulazione mastocitaria (ipotesi ALIA, freccia grigia), probabilmente attraverso l’attivazione di recettori CB2-like (qui definiti CB2) espressi dai mastociti e dai neuroni sensoriali. Questi ultimi esprimono anche recettori CB1 e TRPV1. Il risultato corrisponde all’inibizione del rilascio di sostanze infiammatorie e nocicettive (ipotesi recettoriale, frecce blu). La PEA può inoltre agire indirettamente, aumentando l’affinità per i recettori (es: CB1 o TRPV1) o inibendo la degradazione di altri composti endogeni provvisti di attività antinfiammatoria ed antinocicettiva, come l’anandamide (ipotesi entourage, frecce rosa). (Da: G. Re et al, 2005 Palmitoylethanolamide, endocannabinoids and related cannabimimetic compounds in protections against tissue inflammation and pain: potential use in companions animals. The Veterenary Journal - in press) La natura locale di questo tipo di meccanismo d'azione comporta enormi vantaggi applicativi, non solo nel settore dell'infiammazione e del prurito, ma in particolare nel trattamento del dolore cronico, ad esempio di tipo neuropatico 6 L'AEA risulta attiva anche nei medesimi modelli di dolore viscerale dove si è dimostrato l'effetto antinocicettivo della PEA (vedi precedenti paragrafi), ma solo a dosaggi dalle 3 alle 10 volte più elevati rispetto a quelli della PEA (Jaggar et al., 1998; Farquhar-Smith et al., 2002); il suo effetto sarebbe mediato anche in questo caso dal recettore CB1 (Farquhar-Smith et al., 2002). 7 project neuroscience - In modelli di dolore nocicettivo, la somministrazione locale o sistemica dell'agonista selettivo sintetico del recettore CB2 (AM1241) riduce l'iperalgesia termica da carragenina (Malan et al., 2002; Nackley et al., 2003; Quartilho et al., 2003) e da capsaicina (Quartilho et al., 2003), nonché l'allodinia da carragenina (Nackley et al., 2003). epitech neuroscience project - Anche per via topica, il pre-trattamento con un agonista sintetico dei recettori cannabinoidi l'HU210 che si lega al CB1 e al CB2 - riduce significativamente il dolore urente conseguente ad applicazione cutanea di capsaicina ed inibisce completamente la conseguente iperalgesia termica primaria (Rukwied et al., 2003). - In modelli di dolore viscerale l'effetto antinocicettivo della PEA scompare in presenza di antagonisti selettivi del recettore CB2 (Farquhar-Smith et al., 2002). - Nell'allodinia neuropatica (dove è noto che gli oppioidi sono attivi solo a dosaggi di molto superiori rispetto a quelli necessari ad inibire la nocicezione termica), l'agonista selettivo del recettore CB2 (AM1241) funziona al medesimo dosaggio di quello attivo nell'abrogare l'iperalgesia (Malan et al., 2002). L'effetto è dose-dipendente e si manifesta anche in assenza del recettore CB1. - Il pre-trattamento per via topica con un agonista sintetico del recettore per i cannabinoidi (HU210, che si lega al CB1 e Farmacodinamica della PEA: al CB2) inibisce la sensazione di prurito una visione unificata indotta dall'applicazione cutanea di istamina (Dvorak et al., 2003). Gli Autori dello studio così commentano il risultato: “...The findings presented in this investigation might lead to a new strategy of the peripheral treatment of sensitive, itchy and/or inflamed skin resistant to the common treatment, for instance with antihistaminergic drugs.” (Dvorak et al., 2003). (Richardson et al., 1998b). E’ verosimile infatti, che sostanze attive come agonisti selettivi del recettore CB2 siano prive di effetti collaterali sul sistema nervoso centrale che limitano l’efficacia dei farmaci attualmente disponibili. (Ibrahim et al., 2003). Del medesimo avviso è la conclusione di un recente lavoro effettuato con la PEA: i ligandi dei recettori dei cannabinoidi - in particolare gli agonisti selettivi del recettore periferico CB2 privi di effetti collaterali sul sistema nervoso centrale - possono aprire nuovi orizzonti nella terapia del dolore neuropatico. (Helyes et al., 2003). Ipotesi dell' “effetto entourage” Per far fronte alla discrepanza dei risultati ottenuti in vitro e in vivo in merito al meccanismo CB2-mediato della PEA, ha preso recentemente corpo una nuova ipotesi sul meccanismo d'azione di questo composto: l'effetto entourage. A dispetto della “pochezza” che a prima vista può evocare il termine “entourage” (letteralmente “di contorno”), in realtà secondo questa ipotesi alla PEA vengono attribuite proprietà di raffinatissima modulazione biologica. In sostanza si prospetta che la PEA funzioni da amplificatore dell'attività antiinfiammatoria ed anti-nocicettiva di altri composti endogeni, attraverso l'aumento della loro affinità per il target o l'inibizione dei loro pathway degradativi (Mechoulam et al., 1998; Ben-Shabat et al, 1998; Calignano et al., 1998; Lambert e Di Marzo, 1999, Hohmann, 2002; Smart et al., 2002; Walker et al., 2002). L'ipotesi è estremamente interessante in funzione del fatto che tra questi composti endogeni, la cui attività verrebbe amplificata dalla PEA, se ne annovera uno in particolare, l'anandamide (AEA), dalle spiccate proprietà antinocicettive ed antinfiammatorie. Si tratta di un endocannabinoide che rappresenta il ligando endogeno del recettore CB1 (Devane et al., 1992). Se utilizzata a dosaggi molto bassi (0.01 ng) e per trattamenti locali (non sistemici), inibisce l'edema da carragenina (Richardson et al., 1998c). Concludendo, l'ipotesi recettoriale si basa su una corposa serie di dati che depongono a favore dell'esistenza di un meccanismo d'azione della PEA di natura prettamente periferica (Malan et al., 2001; Nackley et al., 2003; Quartilho et al., 2003), che prevede il legame ai recettori CB2 (o CB2-like) espressi dalle cellule immunitarie (Sokal et al., 2003; Malan et al., 2002) e/o dai neuroni sensoriali primari delle corna dorsali del midollo spinale (Hohmann, 2002; Nackley et al., 2003). L'AEA inibisce anche il comportamento algico indotto da formalina e l'iperalgesia termica da carragenina, attraverso un meccanismo che secondo alcuni Autori prevede l'attivazione del recettore CB1 (Calignano et al., 1998; Richardson et al., 1998; Richardson et al., 1998c) e secondo altri viene mediato dal recettore CB2 dei neuroni spinali (Sokal et al., 2003). In seguito all'attivazione del CB2 (o CB2-like) verrebbe ad essere inibito il rilascio di quelle sostanze implicate nell'infiammazione e nell'abbassamento della soglia di attivazione delle fibre nervose afferenti (Sokal et al., 2003). Alla natura endocannabinoide l'AEA accorpa in sé caratteristiche di tipo endovanilloide. Il composto, infatti, si è di recente dimostrato attivo anche sul recettore per la capsaicina, o recettore per i vanilloidi di tipo 1, VR1 (Ross, 2003; per una review si veda anche van der Stelt e Di Marzo, 2004). Il dualismo di effetti che deriva da questa duplice “appartenenza” (famiglia degli endocannabinoidi e famiglia degli endovanilloidi) certo non facilita il suo inquadramento farmacologico. Ad alti dosaggi, ad esempio, l'AEA si è dimostrata attivare il recettore VR1, provocando il rilascio antidromico di La PEA può agire down-regolando la degranulazione mastocitaria (ipotesi ALIA, freccia grigia), probabilmente attraverso l’attivazione di recettori CB2-like (qui definiti CB2) espressi dai mastociti e dai neuroni sensoriali. Questi ultimi esprimono anche recettori CB1 e TRPV1. Il risultato corrisponde all’inibizione del rilascio di sostanze infiammatorie e nocicettive (ipotesi recettoriale, frecce blu). La PEA può inoltre agire indirettamente, aumentando l’affinità per i recettori (es: CB1 o TRPV1) o inibendo la degradazione di altri composti endogeni provvisti di attività antinfiammatoria ed antinocicettiva, come l’anandamide (ipotesi entourage, frecce rosa). (Da: G. Re et al, 2005 Palmitoylethanolamide, endocannabinoids and related cannabimimetic compounds in protections against tissue inflammation and pain: potential use in companions animals. The Veterenary Journal - in press) La natura locale di questo tipo di meccanismo d'azione comporta enormi vantaggi applicativi, non solo nel settore dell'infiammazione e del prurito, ma in particolare nel trattamento del dolore cronico, ad esempio di tipo neuropatico 6 L'AEA risulta attiva anche nei medesimi modelli di dolore viscerale dove si è dimostrato l'effetto antinocicettivo della PEA (vedi precedenti paragrafi), ma solo a dosaggi dalle 3 alle 10 volte più elevati rispetto a quelli della PEA (Jaggar et al., 1998; Farquhar-Smith et al., 2002); il suo effetto sarebbe mediato anche in questo caso dal recettore CB1 (Farquhar-Smith et al., 2002). 7 project neuroscience - In modelli di dolore nocicettivo, la somministrazione locale o sistemica dell'agonista selettivo sintetico del recettore CB2 (AM1241) riduce l'iperalgesia termica da carragenina (Malan et al., 2002; Nackley et al., 2003; Quartilho et al., 2003) e da capsaicina (Quartilho et al., 2003), nonché l'allodinia da carragenina (Nackley et al., 2003). epitech neuroscience project D'altro canto è anche noto che l'attivazione del recettore VR1 riduce la sensazione di prurito, sia nell'uomo (Lysy et al., 2003; Weisshaar et al., 2003) sia nel cane (Marsella et al., 2002). In questo caso, la capacità della PEA di potenziare l'effetto via VR1 dell'AEA, attraverso l'aumento dell'affinità di questo composto per il recettore (De Petrocellis et al., 2001) assumerebbe una valenza molto importante nel trattamento del prurito. In conclusione, l'ipotesi dell'effetto entourage comporta che gli effetti antinfiammatori ed antinocicettivi della PEA transitino attraverso il potenziamento degli effetti endocannabinoidi e/o endovanilloidi dell'AEA o di composti analoghi. “In medio stat virtus” “La verità sta nel mezzo” ... Forse la chiave di lettura per comprendere il meccanismo d'azione della PEA sta proprio in questo detto latino. Ipotesi ALIA, ipotesi recettoriale, ipotesi entourage: perché leggerle come ipotesi diverse? Potrebbero essere semplicemente l'una il completamento e l'approfondimento molecolare dell'altra; ognuna di esse rappresentare, in sostanza, una parte di quella complessità biologica che caratterizza i sofisticati sistemi endogeni di regolazione del nostro organismo. In effetti i vari filoni di ricerca in merito al meccanismo d'azione della PEA tendono in più punti a confluire. Il mastocita, ad esempio, target ideale del meccanismo ALIA, si è dimostrato in grado di esprimere il recettore CB2 (Facci et al, 1995), target ideale dell'ipotesi recettoriale. Questo risultato, più volte messo in discussione (Maccarrone et al., 2000; Lau e Chow, 2003), ha ottenuto recentemente un'importante conferma nelle cellule RBL2H3 (una linea cellulare con caratteristiche simili ai mastociti), dove sono stati identificati sia l'mRNA che la proteina di entrambi i recettori per i cannabinoidi, CB1 e CB2 (Samson, 2003). Secondo i ricercatori, entrambi sono funzionali, non ridondanti e capaci di concorrere alla modulazione della degranulazione mastocitaria (Samson, 2003). Una “confluenza funzionale” viene dagli esperimenti condotti sull'iperalgesia conseguente ad iniezioni di NGF (Farquhar-Smith e Rice, 2003). A detta degli Autori, l'effetto anti-iperalgico esercitato in questo modello dalla PEA sarebbe mediato dall'inibizione dell'accumulo di neutrofili, a sua volta conseguenza della down-modulazione della degranulazione mastocitaria (Farquhar-Smith e Rice, 2003; Rice et al., 2002). Per vie diverse, e partendo dagli effetti antalgici di un agonista selettivo sintetico del recettore CB2, alcuni Autori arrivano a conclusioni molto simili. Secondo questo gruppo (Malan et al., 2002) l'effetto antalgico sarebbe la conseguenza dell'attivazione del recettore CB2: non tanto di quello espresso sulle terminazioni dei neuroni afferenti primari, quanto di quello espresso sui mastociti. In tal modo - affermano - verrebbe a diminuire il rilascio mastocitario di sostanze capaci di sensitizzare i nocicettori periferici (es. NGF, prostanoidi, citochine, ATP, serotonina, istamina). 8 (es. citochine, ammine vasoattive), iperalgica (es. enzimi proteolitici, bradichinina, neuropeptidi) e pruritogena (es. triptasi, istamina, serotonina), ne fa una potenziale “santabarbara”, pronta a trasformarsi da sistema di difesa in sistema di attacco. Il pericolo insito in questa trasformazione trova nella modulazione mediata dalla PEA un valido sistema per arginare in modo naturale l'eccesso di esuberanza mastocitaria. Un eccesso di esuberanza chiamato in causa non solo nei processi infiammatori, ma anche nell'iperalgesia infiammatoria (Levi-Montalcini et al., 1995) e neuropatica (Theodosiou et al., 1999; Zuo et al., 2003). project neuroscience neuropeptidi strettamente connessi all'infiammazione neurogenica, come la SP ed il CGRP, ed esercitando, conseguentemente, effetto proinfiammatorio (Ahluwalia et al., 2003b; Di Marzo et al., 2002; Maccarrone et al., 2002; Morisset et al., 2001; Ralevic, 2003). Struttura del recettore per i vanilloidi di tipi 1 (TRPV1) Ipotesi recettoriale Un filone di ricerca apparentemente diverso, ma, come vedremo, assolutamente compatibile con il meccanismo ALIA (se non addirittura sinergico), coltiva l'ipotesi di un meccanismo d'azione della PEA di natura recettoriale. Oggetto delle ricerche: i recettori CB, così detti recettori dei cannabinoidi, G protein-coupled receptors, di cui finora sono stati scoperti due tipi. Il recettore CB1, identificato per la prima volta nel 1998 (Devane et al., 1988) viene espresso in varie aree del cervello (Walker et al., 2002), nei neuroni dei gangli delle radici dorsali del midollo spinale (Ahluwalia et al, 2002; Ralevic, 2003) e nei tessuti periferici (Malan et al., 2002). Il recettore CB2, di più recente scoperta (Munro et al., 1993), è anche detto recettore periferico dei cannabinoidi, perché non si rinviene nel CNS in condizioni normali (né come proteina né come mRNA), mentre nelle cellule immuno-infiammatorie il suo mRNA è presente in ragione da 10 a 100 volte superiore rispetto all'mRNA del CB1 (Malan et al., 2002) L'ipotesi recettoriale prevede che gli effetti farmacologici della PEA derivino dall'attivazione diretta o indiretta del recettore CB2 (o meglio, di un recettore CB2-like non ancora identificato) ed è suffragata da una serie di dati in vivo, brevemente di seguito rassegnati: Il recettore canale TRPV1 consiste di: - un dominio N-terminale, - sei segmenti trans-membrana (cilindri rosa), inframmezati, tra S5 e S6, da un corto frammento anfipatico (segmento ricurvo giallo), - un dominio citosolico C-terminale, dove sono localizzati i siti di legame per la calmodulina (CaM) e per il fosfatidilinositolo-4,5-difosfato (PIP 2). (Da: G. Re et al, 2005 Palmitoylethanolamide, endocannabinoids and related cannabimimetic compounds in protections against tissue inflammation and pain: potential use in companions animals. The Veterenary Journal - in press) - L'effetto della PEA sull'edema da carragenina è totalmente eliminato dalla somministrazione di un antagonista del recettore periferico per i cannabinoidi (Conti et al., 2002), cioè di una sostanza in grado di legarsi al CB2 senza attivarne la conseguente risposta. - Vari agonisti recettoriali sintetici, selettivi per il CB2, manifestano importanti effetti antiedemigeni (Hanus et al., 1999; Malan et al., 2002; Quartilho et al., 2003). - La somministrazione di antagonisti recettoriali specifici del CB2 annullano gli effetti antidolorifici della PEA (Calignano et al., 1998; Calignano et al., 2001; Conti et al., 2002; Farquhar-Smith e Rice, 2003). 5 epitech neuroscience project Numerose sono, dunque, le dimostrazioni di un netto effetto antinfiammatorio ed antinocicettivo della PEA. Ma come agisce esattamente questo composto endogeno? Quali vie ne mediano gli effetti sull'infiammazione, sul dolore e sul prurito? Cerchiamo di rispondere a queste domande riportando le ipotesi maggiormente accreditate in merito al meccanismo d'azione della PEA. Si tratta di tre ipotesi, tra loro apparentemente diverse, ma in realtà complementari e sinergiche, come vedremo in seguito. Ma come si spiega l'effetto antalgico dell'attivazione del CB2 in condizioni di dolore non infiammatorio (es. nocicezione termica), lì dove manca una vera e propria reazione infiammatoria? Secondo gli Autori anche in questo caso, il meccanismo sarebbe “indiretto”, via recettori CB2 mastocitari; ciò che verrebbe ad essere down-modulato sarebbe il rilascio basale di sostanze sensitizzanti nei tessuti non infiammati. Un ruolo molto importante viene attribuito al controllo del rilascio basale di NGF da parte dei mastociti: un rilascio che, a detta degli Autori, esiste ed è necessario a mantenere il fenotipo nei neuroni primari afferenti (Malan et al., 2002). Le evidenze finora note, in sostanza, fanno sì che l'ipotesi ALIA e l'ipotesi recettoriale non si escludano affatto tra loro ma, al contrario si completino costituendo un unicum che, tra l'altro, ben si concilia con l'ipotesi di un “secondo messaggero” endogeno stimolato dalla PEA (effetto “entourage”). Ipotesi ALIA Una prima ipotesi risale a più di 10 anni fa, quando venne coniato l'acronimo ALIA (Aloe et al., 1993), a significare che alcune N-acil-etanolamine endogene, PEA in primis, erano in grado di esercitare un'azione antagonista di natura locale nei confronti dell'infiammazione (Autacoid Local Inflammation Antagonism). Tale azione, in particolare, veniva attribuita al controllo della reattività mastocitaria (per una review si veda Jack, 1996). Era stato infatti dimostrato che gli effetti antinfiammatori esercitati in vivo dalla PEA, come ad esempio l'inibizione dell'extravasazione plasmatic e dell'edema della zampa (si veda paragrafo “infiammazione”), si manifestavano come conseguenza della down-modulazione della degranulazione mastocitaria (Mazzari et al., 1996). Analoghi i risultati ottenuti in studi più recenti condotti nel cane e nel gatto. L'analisi PEA sulla degranulazione densitometrica effettuata su biopsie cutanee mastocitaria di gatti con dermatopatie eosinofiliche trattati per os con 10mg/Kg di PEA dimostra infatti un aumento della densità granulare dei mastociti, indice di diminuita degranulazione (Scarampella et al., 2001) dei mastociti cutanei, localizzati ai margini di ferite sperimental-mente indotte nel cane (Abramo et al., 2004a). Il mastocita Mastociti cutanei in sezioni colorate con blu di toluidina. Lesioni cutanee in modello animale di dermopatia da ipersensibilità prima (a) e dopo (b) trattamento orale con PEA. Le frecce indicano i mastociti. Il significativo aumento dell’intensità di colorazione (1b) conferma la riduzione della degranulazione mastocitaria in seguito a trattamento. (Da: G. Re et al, 2005 Palmitoylethanolamide, endocannabinoids and related cannabimimetic compounds in protections against tissue inflammation and pain: potential use in companions animals. The Veterenary Journal - in press) Il valore farmacologico del meccanismo ALIA si fonda sul ruolo del mastocita nell'infiammazione, e, più in generale, nei processi protettivi messi in atto dall'organismo in condizioni di pericolo o danno. Infatti questa cellula, localizzata nei tessuti in stretta connessione anatomofunzionale con i vasi e le locali terminazioni nervose (Maurer et al., 2003), gioca ruoli di primissimo piano nella fisiopatologia del tessuto, funzionando, a seconda delle condizioni, da sofisticato gatekeeper dell'omeostasi distrettuale (Maurer et al., 2003; Galli et al., 2002), ovvero da iniziatore, sostenitore e “perpetuatore” di danno (Boyce, 2003; Theoharides e Cochrane 2004). In condizioni di sovrastimolazione, la capacità del mastocita di rispondere a stimoli agonisti della più svariata natura, liberando con straordinaria prontezza il contenuto dei suoi granuli citoplasmatici, a forte potenzialità proinfiammatoria 4 PEA e soglia basale dei sistemi protettivi endogeni: ruoli omeostatici La sorprendente capacità dalla PEA di modulare le risposte protettive messe in atto dall'organismo in condizioni di danno attuale o potenziale (infiammazione e attivazione delle vie nocicettive), ha portato a sviluppare l'ipotesi secondo cui la PEA endogena farebbe parte di un complesso sistema omeostatico, preposto al controllo della soglia basale sia dell'infiammazione che del dolore/prurito (Calignano et al., 2001; Malan et al., 2002; Hohmann, 2002). L'ipotesi è supportata anche dalla strategica localizzazione della PEA rispetto all'avvio dei meccanismi dell'infiammazione e del dolore e dal suo aumento locale in situazioni di pericolo o danno (vedi box a lato). Una conferma indiretta a favore del ruolo della PEA nei sistemi preposti al controllo della soglia basale di reattività infiammatoria viene dalla riduzione dell'extravasazione plasmatica operata in tessuti noninfiammati da un agonista selettivo del CB2 (Malan et al., 2002). Sono gli stessi Autori ad interpretare il risultato come indizio del ruolo omeostatico (”omeodinamico”?) sulla permeabilità vasale basale giocato dal sistema degli endocannabinoidi. Sempre in assenza di infiammazione, inoltre, il medesimo agonista recettoriale selettivo allunga il tempo di latenza in risposta a stimolazione termica cutanea, provocando un innalzamento della soglia nocicettiva basale (Malan et al., 2001). project neuroscience Effetti della Meccanismi d’azione della PEA Palmitoiletanolamide:una molecola endogena a significato omeostatico ( “omedinamico” ?) Come ormai più volte confermato in diversi sistemi cellulari, la PEA viene sintetizzata e rilasciata in seguito a danni attuali o potenziali. Lo si è dimostrato nei leucociti (Bisogno et al., 1997) e nei macrofagi stimolati (Di Marzo et al., 1996), nelle cellule epidermiche di topo in seguito a vari tipi di stress (Berdyshev et al., 2000), nella cute infiammata (Calignano et al., 1998; Hohmann, 2002) o interessata da dolore neuropatico (Darmani et al, submitted), in neuroni corticali come risposta all'aumento sperimentale della concentrazione intracellulare di calcio (Cadas et al., 1996) e, molto recentemente, nella corteccia cerebrale di topo sottoposta ad ischemia focale (Franklin et al., 2003). Aumenti di PEA sono stati inoltre riscontrati nel plasma di soggetti affetti da Low Back Pain in seguito a manipolazioni osteopatiche e nelle biopsie di pazienti con colite ulcerosa (Darmani et al, submitted). Sulla base di questi risultati, si è ipotizzato che la produzione cellulare di PEA in risposta a un danno possieda un importante significato protettivo (Berdyshev et al., 2000; Hansen et al., 2000). epitech 9 neuroscience project È stato altresì dimostrato che l'iniezione intratecale di un antagonista specifico del CB1 produce iperalgesia (Richardson et al., 1997), di tipo NMDAdipendente (Richardson et al., 1998b). Inoltre, l'inibizione della sintesi del CB1 provoca una significativa iperalgesia termica modello hot plate (piastra calda). Secondo gli Autori, ciò starebbe a significare che la tonica attivazione del recettore CB1 spinale, attraverso il tonico rilascio locale di endocannabinoidi, altro non sarebbe che un meccanismo omeostatico, deputato a mantenere nella norma la soglia nocicettiva basale. Come logica conseguenza ne deriva che l'ipoattività del sistema degli endocannabinoidi potrebbe essere direttamente coinvolta nell'eziologia di determinati stati di dolore cronico (Richardson et al., 1998b). Interessante è la conclusione che ne traggono gli Autori: “Because opioids are not thought to be involved in modulation of basal nociceptive theresholds, these findings provide a major difference between these two endogenous analgesic systems.” (Richardson et al., 1998b). Conclusioni La straordinaria mole di ricerche scientifiche sugli effetti della palmitoiletanolamide (Lambert et al., 2002) va aprendo la strada ad opportunità terapeutiche senza precedenti. Mai prima d'ora una singola classe di molecole naturali si era dimostrata possedere tali e tante potenzialità in medicina. Oggi, che nella maggior parte della branche mediche l'orientamento più attuale è quello di utilizzare approcci “disease-oriented”, che vadano, cioè, ad incidere sui meccanismi alla base della patologia, poter disporre di sostanze preposte per natura al controllo dei meccanismi di difesa endogeni assume una straordinaria importanza. In questo senso l'acronimo ALIA, inteso come Autacoid Local Injury Antagonism, è quello che meglio descrive l'effetto della PEA. La sua natura autacoide (“Autacoid" deriva dalle parole greche “autos” [auto] e “akos” [rimedio]), la capacità di agire localmente, e l'attività di protezione rispetto al danno attuale o potenziale rappresentano i tre presupposti alla base di altrettanti vantaggi terapeutici. In primo luogo, l'assenza di effetti collaterali, insita nella natura endogena (“autos”) del composto. In secondo luogo, la duplicità dell'effetto, sia di tipo antinfiammatorio che di tipo antinocicettivo (inteso, quest'ultimo, nella doppia valenza antalgica ed antipruritogena), legata al concetto di “akos”. Infine, la capacità di down-modulare i mastociti, proprietà indissolubilmente legata alla caratteristica locale dell'effetto, e, in funzione del sempre più chiaro coinvolgimento del mastocita nei sistemi endogeni di 10 inibisce infatti, in modo dose-dipendente, l'iperalgesia meccanica (Mazzari et al., 1996) e termica (Conti et al., 2002) conseguente ad iniezione subplantare di carragenina. L'effetto anti-nocicettivo è inoltre confermato dal fatto che la PEA riduce il comportamento algico indotto da iniezione sottocutanea di formalina (Calignano et al., 1998; Jaggar et al., 1998; Calignano et al, 2001) e da somministrazione intraperitoneale di acido acetico, caolino e solfato di magnesio (Calignano et al., 2001). Infine, è recente la dimostrazione che la PEA, somministrata per via intraperitoneale immediatamente dopo iniezione intraplantare di NGF, inibisce l'iperalgesia termica (Farquhar-Smith e Rice, 2003) indotta da questa importante neurotrofina (Rice, 2000). 2. dolore viscerale Gli effetti anti-iperalgici della PEA, fin qui descritti in modelli di dolore somatico, sono altresì confermati anche nel dolore viscerale. L'iperriflessia vescicale (modello di iperalgesia viscerale) indotta da applicazioni di NGF o di turpentina risulta sensibilmente attenuata dal trattamento sistemico con PEA, rispettivamente alle dosi di 2,5 mg/Kg (Farquhar-Smith et al., 2002) e 10-30 mg/Kg (Jaggar et al., 1998). Dolore neuropatico Il dolore neuropatico - il dolore dovuto a danni del nervo - (per recenti review si vedano Jensen et al., 2001 e Zimmermann, 2001) rappresenta un'entità clinica ancor oggi caratterizzata da una certa inappropriatezza degli strumenti farmacologici disponibili e da una notevole difficoltà di gestione terapeutica. Il dolore neuropatico risulta infatti resistente al trattamento con gli oppioidi (Dellemijn, 1999) mentre risulta nettamente sensibile ai cannabinoidi (Richardson et al., 1998b). In particolare, recente è la dimostrazione che la PEA, alla dose di 100 microg/Kg i.p., è in grado di ridurre di quasi l'80 % l'iperalgesia tipica del dolore neuropatico, in un classico modello di legatura parziale del nervo sciatico (Helyes et al., 2003). Sugli effetti della PEA sui diversi tipi di dolore ci sembra particolarmente significativo riportare le conclusioni prospettate da Malan e collaboratori: “Although all three pain mechanisms [nociceptive, inflammatory and neuropathic pain, NdR] may be active in some patients (for example in cancer pain) there are presently no therapy that are consistently effective against all three entities. A single medication possessing activity against these three distinct types of pain could provide an extremely valuable and effective therapeutic option” (Malan et al., 2002). c. Prurito Poiché il prurito rappresenta il sintomo di uno stimolo nocicettivo (Gingold e Bergasa, 2003) che transita attraverso vie anatomicamente indistinguibili (sebbene funzionalmente diverse) da quelle del dolore (Andrew e Craig, 2001; Schmeltz, 2001; Twycross et al., 2003; Yosipovitch e Fleischer, 2003), le evidenze a favore di un effetto anti-nocicettivo della PEA fin qui rassegnate costituiscono forti indizi della potenziale attività antipruritogena del composto. Come recentemente affermato in letteratura, infatti, “Pruritus is a nociceptive stimulus; accordingly, drugs that increase thereshold to nociception ... may be a novel approach to the treatment of this symptom ...” (Gingold e Bergasa, 2003). L'ipotesi è suffragata dai risultati di uno studio condotto con la PEA in gatti affetti da placca e granuloma eosinofilico. Somministrato per 30 giorni al dosaggio di 10 mg/kg/die, il composto si è mostrato indurre netto miglioramento dei sintomi (prurito compreso) in quasi il 65% degli animali trattati (Scarampella et al., 2001). 3 project neuroscience Ma i dati che più fortemente depongono a favore dell'ipotesi di un sistema endogeno di controllo della soglia basale del dolore mediato dagli endocannabinoidi / cannabimimetici sono quelli che emergono da esperimenti incentrati sulla riduzione numerica o funzionale dei recettori CB. Si è visto, ad esempio, che il trattamento con antagonisti del CB1 e del CB2 si traduce in un aumento della durata e dell'intensità del comportamento algico in risposta ad un danno tissutale (Calignano et al., 1998). Sulla base di ciò, si è ipotizzato che i recettori CB1 e CB2-like periferici partecipino ad un controllo intrinseco del dolore, in virtù della loro attivazione da parte di AEA e PEA generate localmente in risposta al danno (Calignano et al., 1998). epitech neuroscience project a. Infiammazione La PEA si è dimostrata attiva in numerosi modelli sperimentali di infiammazione, sia di natura immunogenica (es. anafilassi passiva cutanea) che neurogenica (es. iniezioni sottocutanee di sostanza P), tutti caratterizzati da un elevato coinvolgimento mastocitario. In particolare, la sua somministrazione orale a dosaggi compresi tra 0.1 e 10 mg/kg, si è dimostrata inibire, in modo dosedipendente: - l'extravasazione plasmatica, indotta sia da sostanza P che da anafilassi cutanea passiva (Mazzari et al., 1996); - l'edema della zampa conseguente all'applicazione di sostanze come la carragenina (Mazzari et al., 1996; Conti et al., 2002), il destrano, e la formalina (Mazzari et al., 1996). Tali effetti, inizialmente dimostrati in condizioni di pretrattamento (per somministrazioni di PEA effettuate un'ora prima dello stimolo flogogeno), sono stati recentemente della PEA confermati anche nel post-trattamento, cioè somministrando la sostanza successivamente allo stimolo (Costa et al., 2002). I risultati di quest'ultimo studio vengono così commentati dagli Autori: “Our findings show, for the first time, that palmitoylethanolamide has a curative effect in a model of acute inflammation” (Costa et al., 2002). Un recente studio pilota condotto su gatti affetti da placca e granuloma eosinofilico ha dimostrato come la somministrazione per 30 giorni della PEA (Palmidrol), alla dose di 10 mg/kg/die, migliora in modo significativo i sintomi (eritema compreso) in quasi il 65% degli animali trattati (Scarampella et al., 2001). b. Dolore Secondo i dettami dell'International Association for the I tre campi di azione della Palmitoiletanolamide Study of Pain, il dolore viene definito come “an unpleasant (G. Re et al, 2005 Palmitoylethanolamide, endocannabinoids and related cannabimimetic compounds in protections against sensory and emotional experience associated with actual or tissue inflammation and pain: potential use in companions animals. The Veterenary Journal - in press) potential tissue damage, or described in terms of such damage” (Lamont et al., 2000). Uno dei primi studi sull’effetto antalgico dei cannabinoidi è stato condotto nel cane. Nel lontano 1899, il dottor Dixon - da molti ritenuto il padre della moderna farmacologia - osservò che gli animali “trattati” non reagivano al test della puntura di spillo (in Walker et al., 2002). Da allora molte cose sono state chiarite, sia in merito alla fisiopatologia del dolore (Lamont et al., 2000), sia in rapporto all'esistenza degli endocannabinoidi e di analoghi composti cannabimimetici, sostanze endogene che direttamente o indirettamente agiscono sui recettori CB dei cannabinoidi (vedi paragrafo “meccanismo d'azione”). Altra conoscenza acquisita è che tali recettori sono implicati nella modulazione del dolore (Hohmann, 2002). Dolore neurogenico 1. dolore somatico Venendo agli studi sull'effetto antalgico della PEA, i dati fin qui raccolti consentono di affermare, innanzitutto, che la sostanza è attiva sul dolore acuto ed in particolare sul dolore infiammatorio somatico persistente (Hohmann, 2002). Il pretrattamento (1 ora prima dello stimolo) con PEA 2 protezione dal danno, base dell'injury antagonism. Di enorme respiro è, dunque, il potenziale target clinico di approcci basati sull'utilizzo della PEA. In particolare, è ipotizzabile che la PEA ed i suoi analoghi possano trovare utile applicazione in settori che spaziano dalla neurologia all'ortopedia, dalla dermatologia all'odontostomatologia, dalla nefrologia alla cardiologia. In tutti questi settori, infatti, numerose sono le patologie a componente primariamente infiammatoria e/o nocicettiva, a forte coinvolgimento mastocitario, alcune delle quali hanno già ottenuto importanti conferme cliniche sull'efficacia e sulla sicurezza della PEA. BIBLIOGRAFIA Abramo F, Salluzzi D, Leotta R, Noli C, Auxilia S, Mantis P, Lloyd D. Mast cell morphometry of cutaneous wounds treated with an autacoid gel: a placebo controlled study. Proceedings of the 5th World Congress of Veterinary Dermatology. 2004a;August 25 28. Vienna Abramo F, Leotta R, Ropars J, Noli C, Auxilia S, Mantis P, Lloyd D. Valutazione morfometrica del processo di cicatrizzazione in ferite aperte nel cane. Atti 48° congresso nazionale multisala SCIVAC. 2004b; 27-30 maggio. 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PEA - Palmitoiletanolamide Nel complesso, dunque, la PEA risulta implicata in quelli che vengono universalmente riconosciuti come i meccanismi endogeni di protezione, messi in atto dall'organismo in risposta ai più svariati tipi di danno: attivazione della reattività infiammatoria tissutale e delle vie nocicettive. Il significato dell'acronimo ALIA, con cui un gruppo di ricercatori italiani, guidati dal Premio Nobel per la Medicina Rita Levi Montalcini, denominava il meccanismo d'azione di questa molecola, è in breve tempo passato da Autacoid Local Inflammation Antagonism (Aloe et al., 1993) Fig. 1 ad Autacoid Local Injury Antagonism (Levi Montalcini et al., Struttura chimica della Palmitoiletanolamide (Jack, 1996) 1996), a significare il suo coinvolgimento più in generale nei sistemi di protezione, non limitatamente di natura infiammatoria. La storia segnata dalle straordinarie ricerche condotte su questa molecola e su altri composti analoghi, tutti appartenenti alla classe delle fatty acid amides, e, a seconda del meccanismo d'azione classificati come endocannabinoidi o cannabimimetici, sta fornendo prove sempre più pregnanti in favore di questo “allargamento” dell'effetto farmacologico. Questa rassegna, sulla base delle evidenze finora pubblicate nella letteratura internazionale, si prefigge di tracciare un quadro aggiornato dello scenario antiflogistico ed antinocicettivo della PEA. epitech 1 neuroscience project