HEMOFIBRIN
Determinación de concentración de
Fibrinógeno
Fabricante: RAL TECNICA PARA EL LABORATORIO, S.A.
Av. Mare de Déu de Montserrat 51
08970 Sant Joan Despí (Barcelona) - España
IVD
PARA USO DIAGNÓSTICO IN VITRO
Esquema de trabajo:
Añadir en cubiletes con agitador:
Plasma calibrador o control diluido (1:10) en tampón:
0.2 mL
Termostatar a 37ºC durante 4-6 minutos
CONSERVAR A 2 - 8º C
Reactivo trombina atemperado a temperatura ambiente:
LEER LAS INSTRUCCIONES ANTES DEL USO
0.1 mL
Leer el tiempo de coagulación y calcular la concentración de fibrinógeno.
Debe calibrarse cada vez que se cambie el lote de reactivo o cuando los controles se
encuentren fuera de los rangos establecidos.
REF
Referencia:
GN 1045
Cont.
Presentación:
5 x 2 mL trombina
5 x 15 mL tampón imidazol
1 mL calibrador
PRINCIPIO DEL METODO:
El kit Hemofibrin de Gernon sirve para la determinación cuantitativa del Fibrinógeno en
plasma.
El método es una modificación del método de Clauss, basado en la cinética de la
transformación del fibrinógeno en fibrina. En presencia de un exceso de trombina, el
tiempo de coagulación es directamente proporcional a la concentración de fibrinógeno.
REACTIVOS:
Reactivo de trombina humana liofilizada purificada en tampón con estabilizantes.
Tampón imidazol con conservante.
Calibrador de fibrinógeno: Plasma humano liofilizado.
CONSERVACIÓN:
Antes de abrir, los reactivos son estables hasta fecha de caducidad si se conservan a 28ºC.
Une vez abierto, el reactivo de trombina es estable durante una semana si se conserva a
2-8ºC. No congelar.
Una vez abierto, el tampón es estable hasta fecha de caducidad si se conserva a 2-8ºC.
El plasma calibrador reconstituido es estable 8 horas a 2-8ºC.
PRECAUCIONES EN EL MANEJO:
El tampón contiene azida sódica. En medio ácido produce un compuesto tóxico. Diluir en
agua antes de desechar el tampón y luego aclarar.
El plasma calibrador ha sido analizado mediante métodos autorizados para descartar la
presencia de HBsAg y de anticuerpos contra HCV y HIV. Dado que ningún método
analítico puede descartar por completo la transmisión de enfermedades infecciosas, los
materiales de origen humano siempre deben manipularse como potencialmente
infecciosos.
Deben tomarse las precauciones necesarias en el uso de reactivos de laboratorio clínico.
MUESTRA:
Plasma citratado, pobre en plaquetas, de punción venosa con mínima estasis.
Emplear citrato trisódico (3.2%) como anticoagulante, no usar ni EDTA ni heparina. Evitar
la hemólisis y contaminación por tejidos tisulares. Rechazar las muestras con volumen de
llenado inferior al 90% del volumen esperado. Centrifugar la sangre durante 15 minutos a
1500 x g. Realizar las pruebas antes de 2 horas si las muestras han sido conservadas a
22-24ºC. No congelar.
CÁLCULO DE RESULTADOS:
Representar los tiempos de coagulación obtenidos para las diluciones c y c/2 del plasma
calibrador en un papel log-log.
Interpolar el tiempo de las muestras en la recta de calibración para obtener la
concentración de fibrinógeno.
Para tiempos de coagulación que se encuentren fuera del rango lineal; diluir a 1:5 y dividir
por 2 el resultado interpolado si el tiempo obtenido es excesivamente largo, o diluir 1:20 y
multiplicar el resultado interpolado por 2 si el tiempo obtenido es excesivamente corto.
VALORES ESPERADOS:
Valores normales: 150 - 350 mg/dL.
Cada laboratorio debe establecer sus propios rangos de normalidad.
CARACTERISTICAS TÉCNICAS:
Precisión interensayo (n=10 repeticiones):
Nivel 1 (s): media: 292; DS: 0.07; CV: 2.36%
Nivel 2 (s): media: 142; DS: 0.04; CV: 2.54%
Precisión intraensayo (n=10 repeticiones):
Nivel 1 (s): media: 311; DS: 0.09; CV: 2.73%
Nivel 2 (s): media: 155; DS: 0.08; CV: 5.05%
Correlación:
El estudio de correlación para 40 muestras en dos instrumentos de distintos fabricantes dio
coeficientes de correlación de 0.99 y 0.97.
LIMITACIONES:
La sangre debe añadirse inmediatamente (proporción 9:1) al anticoagulante de citrato de
trisodio. La concentración de citrato debe ajustarse en pacientes con hematocrito superior
al 55% como anticoagulante.
Las reacciones inflamatorias agudas, pueden aumentar el factor I circulante (fibrinógeno).
Los productos de degradación de fibrinógeno alto (FDP) pueden prolongar los tiempos de
coagulación, especialmente cuando el nivel de fibrinógeno es inferior a 150 mg/dL.
En pacientes con anormalidades cualitativas de fibrinógeno, el tiempo de trombina puede
indicar un fibrinógeno bajo. Los resultados cuantitativos de fibrinógeno pueden ser
normales en estas mismas muestras, si éstas se someten a pruebas con otros métodos.
La heparina no interfiere a niveles terapéuticos. Sin embargo, los niveles de heparina muy
altos pueden causar resultados de fibrinógeno bajo.
Los niveles altos de paraproteína, anticuerpos de trombina y fármacos que activan el
sistema fibrinolítico pueden interferir con ensayos de fibrinógeno.
BIBLIOGRAFÍA:
Kessler C. Hemorrhagic disorders: Coagulation factors deficiencies. In: Goldman L, Ausiello
D, eds. Cecil medicine. 23rd ed. Philadelphia, Pa: Saunders Elsever; 2007: chap 180.
PROCEDIMIENTO:
El kit Hemofibrin de Gernon es adecuado para métodos manuales, mecánicos o
fotoópticos de detección del punto final de formación del coágulo. En el caso de
instrumentos automáticos y semiautomáticos, deben seguirse las instrucciones del
fabricante.
En métodos manuales, preparar 2 diluciones de un plasma calibrador en tampón imidazol
(1:10 y 1:20). Procesar dos replicados por cada calibrador.
Las concentraciones correspondientes serán de c y c/2, siendo c la concentración de
fibrinógeno del plasma calibrador.
Diluir el control de calidad y las muestras de pacientes 1:10 en tampón imidazol y
termostatar a 37º durante 4-6 minutos.
Tomar 0.100 mL de trombina, que debe estar a temperatura ambiente, añadirla a la
muestra (diluida 1:10) y cronometrar la formación del coágulo.
Tel: (+34) 93 480 80 47
Fax: (+34) 93 373 00 92
IU/GN/1045/R0/0214
e-mail: [email protected]
web: www.ral-sa.com
HEMOFIBRIN
Fibrinogen concentration determination
Manufacturer: RAL TECNICA PARA EL LABORATORIO, S.A.
Av. Mare de Déu de Montserrat 51
08970 Sant Joan Despí (Barcelona) - SPAIN
IVD
STORE AT 2 - 8º C
Cont.
Package:
5 x 2 mL human thrombin
5 x 15 mL imidazole buffer
1 mL calibrator
0.1 mL
RESULTS:
Write down the coagulation time. Calculate the mean value of the replicate calibrators.
Write the clotting times obtained for the c and c/2 dilutions calibrator plasma in a log-log
paper.
Interpolate the sample times in the calibration curve to obtain the fibrinogen concentration.
For coagulation times out from the lineal range, dilute at 1:5 and divide the interpolate
result by 2 if the obtained time is too long; or dilute at 1:20 and multiply the interpolate
result by 2 if the obtained time is too short.
PRINCIPLE:
The Gernon Hemofibrin kit is used for the quantitative determination of Fibrinogen in
plasma.
The method is a modification from the Clauss method that measures the rate of fibrinogen
fibrin conversion in the presence of excess thrombin. The coagulation time is directly
proportional to the fibrinogen concentration.
REAGENTS:
Purified human lyophilized thrombin in buffer with preservatives.
Imidazole Buffer with preservative.
Fibrinogen calibrator: Lyophilised human plasma.
REFERENCE RANGE:
Normal values: 150 - 350 mg/dL.
Each laboratory should establish its own reference range.
PERFORMANCE CHARACTERISTICS:
Interassay precision (n=10 repetitions):
Level 1 (s): mean: 292; DS: 0.07; CV: 2.36%
Level 2 (s): mean: 142; DS: 0.04; CV: 2.54%
Intrassay precision (n=10 repetitions):
Level 1 (s): mean: 311; DS: 0.09; CV: 2.73%
Level 2 (s): mean: 155; DS: 0.08; CV: 5.05%
STORAGE:
Before opening the vials, the reagents are stable till the expiry date if stored at 2-8ºC.
Once opened, the thrombin reagent is stable for one week if stored at 2-8ºC. Do not
freeze.
Once opened, the buffer is stable till the expiry date if stored at 2-8ºC.
The reconstituted calibrator plasma is stable 8 hours at 2-8ºC.
WARNINGS AND PRECAUTIONS:
The buffer contains sodium azide. In acid environment produces a toxic compound. Dilute
with water prior to throw it away and then rinse.
The calibrator plasma has been tested by means of authorised methods to discard the
presence of HBsAg and antibodies against HCV and HIV. Due to the fact that no analytical
method can discard completely the transmission of infectious diseases, the materials with
human origin must be only handled as potentially infectious.
Take the necessary precautions for the clinical laboratory reagents use.
SPECIMEN:
Citrated plasma, poor in platelets, from venous punction with minimum stasis.
As anticoagulant it must be used the trisodium citrate at 3.2% for coagulation essays.
Avoid hemolysis and contamination of the tissular tissues. Discard specimens with less
than 90% of expected volume. Centrifuge for 15 minutes at 1500 x g. Perform the test
within 2 hours if specimen is stored at 22-24ºC.
PROCEDURE:
The Gernon Hemofibrin kit is appropriate for methods: manual, mechanical or
photooptical of clotting formation end point detection. In the case of automatic and semiautomatic instruments, follow the manufacturer instructions.
In manual methods, prepare two dilutions of calibrator plasma in imidazole buffer (for
example, 1:10 and 1:20). The corresponding concentrations will be c and c/2; being c the
fibrinogen concentration of the calibrator plasma. Two replicates must be prepared for
each calibrator.
Note: in some coagulometers, calibrators with concentrations lower than 150 mg/dL might
not be suitable for use.
Dilute the quality control and the patient sample at 1:10 with imidazole and thermostate
them at 37ºC for 4-6 minutes.
Take 0.1 mL thrombin, which must be at room temperature, add it to the sample dilution
and time the clotting formation.
Tel: (+34) 93 480 80 47
0.2 mL
Read the coagulation time and calculate fibrinogen concentration.
Calibration must be done every time the reagent lot changes or when the controls do not
match with the expected range.
READ INSTRUCTIONS
REF
Add into cuvettes with mixing:
Calibrator plasma, control, or sample, (1:10) diluted in buffer
Thermostat at 37ºC for 4-6 minutes
Hemofibrin reagent (at room temperature)
FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE
Reference:
GN 1045
Working scheme:
Fax: (+34) 93 373 00 92
Correlation:
Correlation studies were run for 40 samples in two in an optical instrument, and a
regression coefficient of 0.92 was obtained.
LIMITATION:
The blood must be added immediately (9:1 ratio) to the trisodium citrate anticoagulant.
The citrate concentration must be adapted in patients with hematocrit higher than 55%. Do
not use EDTA or heparin as anticoagulant.
The hemolised samples can give interferences.
The freezing and thawing of plasma with residual cellules can damage the cellules
membrane, affecting the results.
The acute inflammatory reactions can increase the factor I circulating (fibrinogen).
The high fibrinogen degradation products (FDP) can make long the clotting times,
especially when the fibrinogen level is lower than 150 mg/dL.
In patients with fibrinogen qualitative abnormalities, the thrombin time can indicate low
fibrinogen. The quantitative fibrinogen results can be normal in these same samples, if
performed with other methods.
The heparin does not interfere at the therapeutic levels. Nevertheless, the too high heparin
levels can cause low fibrinogen results.
The high levels of paraprotein, thrombin antibodies or drugs that affect the fibrinolytic
system can interfere on the fibrinogen essays.
LITERATURE:
Kessler C. Hemorrhagic disorders: Coagulation factors deficiencies. In: Goldman L, Ausiello
D, eds. Cecil medicine. 23rd ed. Philadelphia, Pa: Saunders Elsever; 2007: chap 180.
IU/GN/1045/R0/0214/EA
e-mail: [email protected]
web: www.ral-sa.com
HEMOFIBRIN
Determinazione quantitativa della
concentrazione del Fibrinogeno
Fabbricante: RAL TECNICA PARA EL LABORATORIO, S.A.
Av. Mare de Déu de Montserrat 51
08970 Sant Joan Despí (Barcelona) - SPAIN
IVD
DISPOSITIVO MEDICO DIAGNOSTICO IN VITRO
CONSERVARE A 2 - 8º C
CONSULTARE LE ISTRUZIONE PER L’USO
REF
Codice:
GN 1045
Cont.
PROCEDURA:
Questa procedura è adattabile a sistemi strumentali di coagulazione manuali e
semi-automatici. Fare riferimento al manuale del vostro strumento per le specifiche
istruzioni d’ uso.
In metodi manuali, preparare le diluizioni 1/10 (concentrazione c) e 1/20 del
plasma calibratore (concentrazione c/2) in tampone imidazolo. Preparare due
replicati di ogni diluizione.
Diluire i controlli ed i campioni 1:10 in tampone imidazolo.
Pipettare in cuvetta 200 μL di ciascuna diluizione del plasma e incubare a 37º per
4-6 minuti.
Aggiungere rapidamente 100 μL di reagente a temperatura ambiente e
simultaneamente fare partire il timer.
Registrare il tempo di coagulazione in secondi.
Schema di lavoro:
Taglio:
5 x 2 mL reagente trombina
5 x 15 mL tampone imidazolo
1 mL calibratore
Calibratore, controllo o campione (1:10) diluiti in tampone
Incubare a 37ºC per 4-6 minuti
Reagente Hemofibrin (temperatura ambiente)
PRINCIPIO:
Il reagente HEMOFIBRIN è un test diagnostico per la determinazione quantitativa del
fibrinogeno nel plasma.
Il test HEMOFIBRIN si basa sul metodo di Clauss di quantificazione del fibrinogeno nel
plasma. Il metodo di Clauss misura il rapporto di conversione del fibrinogeno in fibrina in
eccesso di trombina e si è dimostrato essere rapido, sensibile e preciso. Quando il plasma
diluito viene fatto coagulare in eccesso di trombina, il livello di fibrinogeno risulta essere
inversamente proporzionale al tempo di coagulazione. Per determinare la concentrazione
di fibrinogeno nel campione di plasma in esame è pertanto necessario allestire una curva
di calibrazione mediante l’ utilizzo di uno standard di riferimento.
REATTIVI:
Il reagente HEMOFIBRIN è una preparazione liofilizzata di circa 100 NIH U/mL di trombina
bovina.
Il tampone è imidazolo con conservanti.
Il calibratore è plasma umano liofilo.
CONSERVAZIONE:
Ricostituire il contenuto di ciascun flacone di trombina con 2 mL di acqua distillata. Lasciar
riposare il ricostituito a temperatura ambiente per 30 minuti prima dell’ uso e fino a
completa dissoluzione. Stabilità dopo ricostituzione: 7 giorni a 2-8 °C. Non congelare.
Riequilibrare a temperatura ambiente il reagente prima di ciascun riutilizzo.
Il plasma normale di controllo è un plasma umano citratato e liofilizzato con tampone e
conservante. Il valore di fibrinogeno assegnato si trova sull’etichetta del flacone.
Ricostituire ciascun flacone con 1 mL di acqua distillata. Lasciar riposare il plasma a
temperatura ambiente per 30 minuti prima dell’ uso e fino a completa dissoluzione,
agitando di tanto in tanto il flacone. Dopo la ricostituzione il plasma è stabile per 8 ore a
2-8 °C.
Il tampone imidazolo è pronto all’ uso. Conservare a 2-8 °C. Utilizzare entro la data di
scadenza riportata sull’ etichetta del flacone. Evitare la contaminazione.
PRECAUZIONI: non ingerire. Evitare il contatto con pelle, occhi o indumenti. Il plasma
calibratore è un materiale biologico potenzialmente pericoloso. Le materie prime da cui
questo prodotto viene derivato sono risultate negative per l’ HbsAg e per gli anticorpi HCV,
HIV-1 e HIV-2 mediante analisi con metodi di consenso; tuttavia, nessun metodo può
garantire in modo assoluto l’ assenza di agenti infettivi. Come per tutto il materiale di
origine umana, manipolare questo prodotto con le stesse precauzioni di utilizzo di un
qualsiasi materiale potenzialmente infetto.
RACCOLTA E PREPARAZIONE DEL CAMPIONE: il plasma da testare si ottiene da
sangue intero usando sodio citrato come anticoagulante, in assenza di eparina, EDTA od
ossalato.
1. Raccolta sangue mediante siringa: aspirare il sangue venoso con siringa di
plastica o siliconata. Trasferire subito 9.0 mL di sangue in una provetta contenente 1.0
mL di sodio citrato 3.2 %.
2. Raccolta del sangue mediante tubo sottovuoto: aspirare il sangue venoso in un
tubo sottovuoto del commercio contenente sodio citrato 3.2%. Data la criticità del
rapporto di 9+1 di sangue/anticoagulante, assicurarsi che il tubo sia riempito come
indicato. Per i test di coagulazione si raccomanda di utilizzare il sangue prelevato nella
seconda o terza provetta.
3. Preparazione del plasma: mescolare bene per inversione e centrifugare a 2.500 x g
per 15 minuti subito dopo il prelievo. Se non si sottopongono a test i plasmi entro le 2 ore,
trasferirli in provette di plastica. Si ricorda che i plasmi che appaiono visibilmente
emolizzati o che contengono > 10.000 piastrine per mm3 oppure le emazie non sono
adatti per l’esecuzione del test di coagulazione.
4. Conservazione dei plasmi: trasferire i campioni di plasma in tubi di plastica quanto
più rapidamente possibile dopo il prelievo e conservarli a 2-8 °C. Si raccomanda di
analizzare i plasmi entro le 4 ore dal prelievo e non incubarli per più di 5 minuti a 37 °C al
fine di evitare la perdita dei fattori V e VII.
Tel: (+34) 93 480 80 47
Fax: (+34) 93 373 00 92
0.2 mL
0.1 mL
Leggere il tempo de coagulazione e calcolare la concentrazione del fibrinogeno.
Si deve calibrare ogni volta che si usa un nuovo lotto di reagente.
CALCOLO DEI RISULTATI:
Costruire la curva standard su un grafico log-log, interpolando i tempi di
coagulazione medi contro le corrispondenti concentrazioni di fibrinogeno. Ottenere i
valori di fibrinogeno delle diluizioni sulla base del valore assegnato al plasma
calibratore.
Calcolare il tempo di coagulazione medio ottenuto dal plasma del paziente ed
estrapolare il valore di fibrinogeno dalla curva standard.
Moltiplicare questo valore per 10 per ottenere il valore di fibrinogeno del plasma del
paziente non diluito.
INTERVALLO DI RIFERIMENTO: L’intervallo di riferimento per il fibrinogeno
usualmente ritenuto valido per il plasma umano è di 150-350 mg/dl. Tuttavia, a
causa della variabilità analitica, ogni laboratorio dovrebbe stabilire un proprio valore
medio ed un proprio intervallo di riferimento.
CARATTERISTICHE DEL METODO:
Precisione:
La precisione entro le serie è stata ottenuta attraverso 10 misurazioni di plasma
controllo a due livelli.
Livello 1: valore medio: 292 s; DS: 0.07; CV: 2.36%
Livello 2: valore medio: 142 s; DS: 0.04; CV: 2.54%
La precisione tra le serie è stata ottenuta attraverso 10 misurazioni di plasma
controllo a due livelli.
Livello 1: valore medio: 311 s; DS: 0.09; CV: 2.73%
Livello 2: valore medio: 155 s; DS: 0.08; CV: 5.05%
Correlazione:
Gli studi di correlazione sono stati eseguiti in 40 campioni contro un reagente
fibrinogeno del commercio. I coefficienti di correlazione ottenuti sono stati 0.99 e
0.97.
LIMITI DEL METODO:
Il sangue deve aggiungersi (ratio 9:1) al anticoagulante citarto trisodico in modo
immediato. La concentrazione di citrato deve aggiustarsi in quelli pazienti con
ematocrito superiore a 55%.
I prodotti di degradazione della fibrina (FDP) sono in grado di inibire l’azione della
trombina sul fibrinogeno e la successiva polimerizzazione della fibrina. Gli FDP
hanno un effetto trascurabile sui risultati di campioni con livelli normali di
fibrinogeno; tuttavia in caso di concentrazione di fibrinogeno inferiore a 150 mg/dl
e di FDP superiore a 100 μg/ml, il test può essere inibito in maniera crescente. Al
fine di ridurre tali interferenze si può procedere a diluire ulteriormente il plasma.
I risultati non risentono invece in modo significativo di livelli di eparina fino a 3.0
U/ml, normalmente adottati nel corso della terapia anticoagulante.
Livelli alti di paraproteina, anticorpi di trombina e diversi farmaci che attivano il
sistema fibrinolitico possono interferire nella determninazione del fibrinogeno.
BIBLIOGRAFIA:
Kessler C. Hemorrhagic disorders: Coagulation factors deficiencies. In: Goldman L, Ausiello
D, eds. Cecil medicine. 23rd ed. Philadelphia, Pa: Saunders Elsever; 2007: chap 180.
IU/GN/1045/R0/0214/IA
e-mail: [email protected]
web: www.ral-sa.com