Card per test monofase
Helicobacter Pylori Ag (Feci)
Metodica
C-45
Italiano
Test rapido monofase per la determinazione immunocromatografica
dell’antigene batterico Helicobacter pylori nelle feci..
Solo per uso diagnostico professionale in vitro.
SOMMARIO
H. Pylori Card è un test immunocromatografico di screening per la rilevazione
dell’antigene batterico di Helicobacter pylori nelle feci.
Helicobacter pylori (noto anche come Campylobacter pylori) è un batterio con
morfologia a spirale, flagellato, Gram negativo, che infetta la mucosa gastrica e
causa varie malattie gastrointestinali, coma la dispepsia non ulcerosa, ulcere
duodenali e gastriche, gastriti attive e può aumentare il rischio di
adenocarcinoma allo stomaco, tanto da essere classificato come agente
carcinogeno di tipo I.
PRINCIPIO
H. Pylori Card è un metodo immunocromatografico assolutamente non
invasivo, semplice da eseguire, rapido e molto preciso nel risultato.
Il metodo prevede l’utilizzo di un anticorpo monoclonale fissato ad una
membrana cromatografica specifico per l’antigene di H. pylori e di un secondo
anticorpo coniugato con particelle di oro colloidale marcato a un colorante.
Se è presente nel campione di feci l’antigene di H. Pylori, si forma un
complesso con l’anticorpo marcato con il colorante. Quando il liquido passa
attraverso la membrana il complesso sarà catturato dall’anticorpo fissato sulla
• Durante l’analisi dei campioni indossare abbigliamento protettivo: camice
da laboratorio, guanti monouso e protezione per gli occhi.
• Umidità e temperatura possono influire negativamente sui risultati.
• Tutti i reattivi ed i materiali venuti a contatto con campioni potenzialmente
infetti devono essere disinfettati o autoclavati a 121°C per almeno 1 ora.
CONSERVAZIONE E STABILITÀ
Conservare nel sacchetto sigillato a temperatura ambiente o in frigorifero
(2-8°C) oppure a temperatura ambiente fino a 30 °C . La card è stabile sino
alla data di scadenza indicata sul sacchetto sigillato. Conservare la card nel
sacchetto sigillato sino al momento dell’utilizzo. NON CONGELARE. Non
utilizzare dopo la data di scadenza.
PRELIEVO E PREPARAZIONE DEI CAMPIONI
5. Leggere i risultati del test in 10 minuti. E 'importante che, prima che il
risultato sia letto, lo sfondo sia chiaro.Leggere i risultati dopo 10 minuti.
Non leggere il risultato dopo 10 minuti. Per evitare confusione, gettare il
dispositivo dopo l'interpretazione del risultato.
Raccogliere
il campione
di feci
Posizionare l’applicatore
nel tampone e
mescolare bene
rompere
qui
lasciare riposare 2 minuti
INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI
Raccogliere una sufficiente quantità di feci (1-2 ml o 1-2 g), in un
contenitore di raccolta campione.
I migliori risultati si ottengono se il test viene eseguito entro 6 ore dalla
raccolta.
Il campione raccolto può essere conservato per 3 giorni a 2-8 C° se non
analizzato entro 6 ore. Per la conservazione a lungo termine, i campioni
devono essere tenuti sotto -20 C°.
Per elaborare campioni fecali:
Per i campioni solidi:
Svitare il tappo del tubo di raccolta del campione, poi casualmente infilzare
del campione fecale in almeno 3 punti diversi per raccogliere circa 50 mg di
feci (pari a 1/4 di un pisello).
Per i campioni liquidi:
Tenere il contagocce verticalmente, aspirare campioni fecali, e quindi
trasferire 2 gocce (circa 80 μl) nella provetta di raccolta del campione
contenente il tampone di diluizione. Avvitare e serrare il tappo sul tubo di
raccolta del campione, quindi agitare la provetta di raccolta del campione
energicamente per mescolare il campione e il tampone di diluizione.
Lasciare il tubo a riposo per 2 minuti.
Risultato positivo del test
Appaiono due bande nella finestra del risultato. In aggiunta alla banda nella
zona di controllo C appare una banda nella zona del test T. L’intensità delle
bande potrebbe variare. Il risultato mostra che è presente nel campione di
feci l’antigene di H. pylori .
COMPOSIZIONE DELLA CONFEZIONE
Risultato del test non valido
Se non appare la banda nella regione di controllo C il test è da considerarsi
non valido. L’assenza della banda di controllo C indica che la procedura di
dosaggio è stata eseguita in maniera non corretta, oppure che i reagenti di
dosaggio hanno subito un deterioramento. Ripetere il dosaggio con una
nuova card facendo attenzione alla metodica.
Risultato negativo del test
Appare una singola banda nella finestra del risultato.
Non è visibile una banda nella regione del test T. Il risultato mostra che non
è presente nel campione di feci l’antigene di H. pylori .
membrana. La comparsa di una banda colorata nella zona T, indica che il
risultato del test è positivo. Inoltre il test prevede una procedura di controllo
Materiale Fornito
interna rappresentata dalla comparsa di una banda nella zona di controllo C che
•
Card
• Metodica
si forma indipendentemente dalla presenza dell’antigene di H. Pylori. La
Materiale Necessario Ma Non Fornito
formazione della banda nella zona di controllo C indica che il dosaggio è
avvenuto in maniera corretta.
PRECAUZIONI
• Solo per uso diagnostico professionale in vitro. Non utilizzare dopo la
data di scadenza.
• Non mangiare, bere o fumare nell’area in cui vengono manipolati i
campioni o i kit.
• Non utilizzare il test se il sacchetto è danneggiato.
• Manipolare tutti i campioni come potenzialmente infettivi. Osservare le
adeguate precauzioni contro i rischi microbiologici in tutte le fasi d’analisi e
seguire le procedure standard per il corretto smaltimento dei campioni.
• Carta assorbente per prevenire schizzi di soluzione
• Contenitori per la raccolta dei campioni di feci
• Timer
PROCEDURA
1.Rimuovere la card dalla busta di alluminio tirando lungo la tacca e
utilizzarla il prima possibile.
2. Raccolta dei campioni. Vedi anche la raccolta dei campioni.
3. Tenendo il dispositivo di raccolta del campione in posizione verticale,
rompere con attenzione la punta del dispositivo di raccolta.
4. Dispensare 2 gocce (~ 80μL) della soluzione campione nel pozzetto del
campione della card, come in figura.
LIMITAZIONI
VALORI ATTESI
1) La card per il test monofase dell’antigene di H. pylori nelle feci è un test
rapido immunocromatografico per un uso professionale in vitro e deve
essere utilizzato solo per una rilevazione qualitativa dell’antigene di H.
pylori.
2) La card per il test monofase dell’antigene di H. pylori nelle feci non deve
essere usata come unico criterio di diagnosi dell’infezione da H. pylori .
3) Come per tutti i test diagnostici, i risultati devono essere interpretati alla
luce del quadro clinico complessivo del paziente.
4) Se il test risulta negativo e i sintomi clinici persistono, si raccomanda di
eseguire altri test clinici. Un risultato negativo non esclude comunque la
possibilità di infezione da H. pylori .
5) Gli antibiotici, gli inibitori della pompa protonica e i preparati a base di
bismuto, inibiscono H. pylori. Risultati falsamente negativi si hanno durante
e subito dopo la terapia, in questo caso si consiglia di ripetere il dosaggio
dopo due settimane dalla terapia.
Helicobacter pylori infetta più della metà delle persone nel mondo5.
La prevalenza dell'infezione varia tra i paesi e tra gruppi diversi all'interno
della stessa nazione6. Il tasso di prevalenza negli Stato Uniti suggerisce un
incidenza di infezione del 2%. La prevalenza una tantum di ulcera peptica è
di circa il 12% negli uomini e del 9% nelle donne7. Gli studi hanno trovato
che oltre il 90% dei pazienti con ulcera duodenale e il 80% dei pazienti con
ulcera gastrica sono infettati con H. pylori8,9 La card H. pylori rileva la
presenza di antigeni di H. pylori in campioni di feci. I valori attesi per ogni
data popolazione deve essere determinata per ogni laboratorio. Il tasso di
positività da parte dei laboratori può variare a seconda della posizione
geografica, gruppo etnico e ambiente di vita.
PERFORMANCE
E’ stato condotto uno studio con campioni di feci di 165 pazienti tra cui
entrambi con disturbi gastrointestinali sintomatici e di campioni di pazienti
non sintomatici e 100 campioni di feci normali.
Confronto per tutti i soggetti con la card per il test monofase dell’antigene di
H. pylori e i kit ELISA di riferimento hanno dato i seguenti risultati mostrati
seguente tabella:
Metodo
H.P. card
Risultati
Positivo
Negativo
Risultati totali
EIA
Positivo
163
2
165
Negativo
0
100
100
Risultati
totali
163
102
265
Sensibilità: 98.8%, Specifcità: 100%, Accuratezza:98.9%
Riproducibilità
La riproducibilità del test H. pylori Ag è stata determinata utilizzando,
campioni positivi deboli, positivi forti e negativi con controlli negativi e
positivi. Questi campioni sono stati testati in duplicati di 8 in uno studio da
parte di cinque operatori che lavorano in modo indipendente nello stesso
laboratorio. L'accordo del risultato atteso è stata del 100%.
Specificità
I seguenti ceppi batterici e virali sono stati usati per testare la specificità del
test H. pylori Ag. Feci positive e negative sono state diluite con > 1x108
organismo / ml e testati dalla card H. pylori Ag. Campioni di feci, positive a
H. pylori, rimangono positive dopo l’aggiunta dei microorganismi, quelle
negative rimangono negative.
BIBLIOGRAFIA
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Indice dei simboli
Attenzione, consultare le
N°determinazioni
istruzioni per l’uso
per kit
Fabbricante
Solo per uso
Usare entro
Conservare a 2-30°C
Microorganismi e virus testati:
Adenovirus type II
Campylobacter jejuni
Clostridium difficile
Enterobacter cloacae
Escherichia hermanii
Klebsiella pneumonia
Nocardia asteroids
Pseudomonas fluorescens
Salmonella (Group B)
Salmonella typhimurium
Shigella dysenteriae
Staphylococcus aureus
Staphylococcus galactiae
Campylobacter coli
Campylobacter fetus
Campylobacter lari
Candida albicans
Clostridium perfringens
Enterococcus feacalis
Escherichia coli
Escherichia fergusonii
Helicobacter cinaedi
Helicobacter mustelae
Mycobacterium smegmatis Prvidencia stuartii
Proteus vulgaris
Pseudom. aeruginosa
Rotavirus
Citrobacter freundii
Salmonella Dublin
Salm. Hilversum (Group N)
Salmonella Minnesota
Shigella boydii
Shigella flexneri
Shigella sonnei Serratia liquefaciens
S. aureus (Cowan)
Staphylococcus faecalis
Staphylococcus epidermidis Yersinia enterocolitica
Non riutilizzare
diagnostico in vitro
Fabbricante
INTERMEDICAL s.r.l.
Via A.Genovesi,13
80010 Villaricca(Na)-ITALY
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