CARIO TYPE
Test genetici per la diagnosi delle
aneuploidie cromosomiche
13, 18, 21 X & Y
Introduzione
Le anomalie numeriche dei cromosomi, denominate anche aneuploidie, sono caratterizzate da un numero maggiore o inferiore di
cromosomi rispetto al numero standard. A questo gruppo di alterazioni cromosomiche appartengono rispettivamente patologie note
come la Sindrome di Down (Trisomia 21), la Sindrome di Patau
(Trisomia 13), la Sindrome di Edwards (Trisomia 18) e le aberrazioni dei cromosomi sessuali X e Y. Nell’insieme tali alterazioni comprendono circa l’80 - 95% delle possibili anomalie cromosomiche
identificabili e sono quelle maggiormente responsabili delle malformazioni fetali.
Il dispositivo si basa sulla tecnica QF-PCR multiplex (Quantitative
Fluorescence-Polymerase Chain Reaction) che consiste nell’amplificazione di 27 markers cromosomici, Short Tandem Repeats
(STRs): brevi sequenze nucleotidiche caratteristiche per ciascun
cromosoma e ripetute in numero variabile nei diversi soggetti.
I frammenti vengono separati, in funzione della loro dimensione,
mediante elettroforesi capillare con sequenziatore automatico
(modelli ABI, Life Technologies). Il segnale fluorescente emesso da
ciascun amplificato viene elaborato e visualizzato sotto forma di un
picco caratterizzato da una specifica posizione ed area, che dipendono rispettivamente dalla lunghezza del DNA target e dal numero di cromosomi presenti nel campione.
Cod. NLM
Descrizione
Quantità
Cromosoma
indagato
N° di marcatori
cromosomici
AA1302/25
Cario 5 Type
25
13, 18, 21,
XeY
27
AA1327/25
Cario Type Single 13
25
13
9
AA1328/25
Cario Type Single 18
25
18
10
AA1329/25
Cario Type Single 21
25
21
10
AA1330/25
Cario Type X & Y
25
X&Y
13
NUCLEAR LASER MEDICINE S.r.l.
CARIO TYPE
Test genetici per la diagnosi delle aneuploidie cromosomiche 13, 18, 21 X & Y
PROCEDURA
• Estrazione del DNA : da prelievi di liquido amniotico, da biopsie di villi coriali, da materiale abortivo per diagnosi prenatale e da sangue intero da campioni patologici in ambito post-natale.
• QF- PCR: amplificazione in multiplex di markers cromosomici con l’utilizzo di primers fluorocromati, marcati con quattro dei cinque fluorofori disponibili, poiché il quinto (Gene Scan 600 LIZ) viene utilizzato come Size Standard.
• Analisi di frammento: separati mediante elettroforesi capillare con sequenziatore automatico (modelli ABI, Life Technologies) e successiva elaborazione del profilo elettroforetico ottenuto con il software “GeneMapper v4.1”.
RISULTATI
I frammenti di DNA marcati con molecole fluorescenti, separati in funzione della loro dimensione mediante elettroforesi capillare con sequenziatore automatico, consentono di ottenere un profilo elettroforetico con un andamento a picchi che viene elaborato con il sofware “GeneMapper v4.1”:
6 per cromosoma 13
QF-PCR
27 MARKERS CROMOSOMICI
MIX SINGOLA
6 per cromosoma 18
6 per cromosoma 21
9 per cromosomi X e Y
La quantificazione di ogni marcatore cromosomico
viene effettuata calcolando i rapporti delle altezze (o
delle aree) tra i picchi identificati:
Bibliografia
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Hulthén, M et al. Reproduction (2003) 126, 279-297. ”Rapid and simple prenatal diagnosis of common chromosome disorder: Advantages and disadvantagesof the molecular methods FISH and QF-PCR.
2.
Nicolini, U et al. Human Reproduction Update. Vol 10, no.6 pp. 5, 2004. ”The introduction of QF-PCR in prenatal diagnosis of fetal aneuploidies:
Time for reconsideration.
3.
Rahil, H et al. Eur J Hum Genet. 2002 Aug;10(8):462-6. Rapid detection of common autosomal aneuploidies by quantitative fluorescent PCR on
uncultured amniocytes.
4.
Schmidt, W et al. Mol Hum Reprod. 2000 Sep;6(9):855-60.Detection of aneuploidy in chromosomes X, Y, 13, 18 and 21 by QF-PCR in 662 selected
pregnancies at risk.
NUCLEAR LASER MEDICINE S.r.l.
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