VIROLOGIA Infezione virale delle piante Infezione virale delle piante (mosaico del tabacco) Malattie virali delle piante: foglia di orchidea Malattie virali delle piante: foglia di Nicotiana tabacum Malattie virali delle piante: foglia di Nicotiana glutinosa Malattie virali delle piante: foglia di Nicotiana tabacum Malattie virali delle piante: fiore di Cattleya Struttura dei virus Nell'infezione virale si distinguono due fasi: Fase intracellulare: replicazione dei componenti virali per formare particelle virali complete. Fase extracellulare: particella virale completa, libera e infettante (detta virione). Il virione è formato da una parte centrale (core) e da un rivestimento (capsìde); il loro insieme si dice nucleocapsìde. Alcuni virus presentano un ulteriore involucro membranoso più esterno (envelope o peplos o pericapsìde). Il core Il core è costituito dal genoma virale (acido nucleico: RNA o DNA) associato con proteine o poliamine. Il DNA virale è generalmente a doppio filamento; raramente (Parvovirus) è a singolo filamento. L'RNA virale è quasi sempre a singolo filamento; in un solo caso (Reovirus) è a doppio filamento segmentato. Il capsìde Il capsìde: – è costituito da subunità proteiche (capsomeri) – conferisce una forma caratteristica al virione – racchiude e protegge il genoma – presenta, sulla superficie, proteine con funzioni di aggancio a specifici recettori cellulari. L'envelope L'envelope è costituito da lipidi e glicoproteine. Queste ultime, quasi sempre, formano proiezioni sporgenti dalla superficie (spicole), che permettono al virione di aderire ai recettori della cellula ospite. Tra l'envelope e il capsìde sono presenti proteine di matrice (proteina M) con funzione di rinforzo e connessione; esse costituiscono gli antigeni maggiori dei virioni. Virus con pericapside Esempi di simmetria virale Morfologia Ac. nucleico Famiglia Virus Capside icosaedrico nudo DNA Parvovirus Papovavirus Adenovirus Picornavirus Reovirus Adenoassociati Papilloma/Polyoma Capside icosaedrico rivestito DNA Herpesvirus Hepadnavirus Herpes simplex Epatite B (HBV) Capside elicoidale nudo RNA Virus di piante Mosaico del tabacco Capside elicoidale rivestito RNA Orthomyxovirus Paramyxovirus Rhabdovirus Influenza Parotite Stomatite vescicolare Capside a simmetria binaria DNA Grandi batteriofagi Colifagi serie T pari Virioni complessi DNA Poxvirus Vaiolo / Vaccino RNA Polio Virus a simmetria icosaedrica (Adenovirus) Virus a simmetria icosaedrica Virus a simmetria icosaedrica (Adenovirus) Virus a simmetria elicoidale (Mosaico del tabacco) Virus a simmetria elicoidale (Mosaico del tabacco) Virus di Marburg Moltiplicazione virale - 1 Adsorbimento: attacco del virione alla superficie della cellula ospite in conseguenza del legame tra recettori specifici sulla membrana cellulare e siti di combinazione specifici sulla superficie del virione. Adenovirus animali adesi su emazia di pollo Moltiplicazione virale - 2 Penetrazione: ingresso del virione nella cellula ospite. La penetrazione avviene generalmente per endocitosi (formazione di un vacuolo intracitoplasmatico) o per fusione (cioè fusione diretta dell’envelope alla membrana cellulare). Penetrazione per endocitosi di un virus nudo Penetrazione per fusione di un virus rivestito Penetrazione per endocitosi di un virus rivestito Moltiplicazione virale - 3 Spoliazione: rimozione del capside e liberazione citoplasmatica del genoma virale. Le proteine del capside vengono disgregate dagli enzimi idrolitici (proteasi) contenuti nei lisosomi o localizzati alla superficie della cellula. Da questa tappa inizia la fase di eclissi: dalla scomparsa del virione alla comparsa nel citoplasma di nuove particelle virali (per osservazione al M.E.). In questa fase il genoma virale acquisisce il controllo del metabolismo cellulare finalizzandolo alla sintesi macromolecolare dei componenti virali. Moltiplicazione virale - 4 Replicazione: le varie parti del virus sono costruite separatamente in siti cellulari spesso diversi: a) duplicazione dell’acido nucleico b) (trascrizione e) traduzione del messaggio virale per formare proteine virali. Moltiplicazione virale - 5 Montaggio: le varie parti del virus vengono assemblate per formare il virione. Moltiplicazione virale - 6 Liberazione: il virione fuoriesce dalla cellula. I virus nudi vengono eliminati per rottura della membrana citoplasmatica e quindi lisi della cellula. I virus con envelope gemmano attraverso la membrana citoplasmatica, i cui componenti formano quest’ultimo rivestimento. Liberazione virale per lisi cellulare Fasi della gemmazione virale - 1 Fasi della gemmazione virale - 2 Fasi della gemmazione virale - 3 Rilascio del virus per gemmazione Virioni di HIV gemmanti da un linfocita T Batteriofagi Batteriofago e suo DNA Batteriofago - struttura schematica Batteriofago - schema di funzionamento Coda contrattile del batteriofago Fasi dell’infezione da parte di un batteriofago Fasi dell’infezione da parte di un batteriofago Fasi dell’infezione da parte di un batteriofago Batteriofagi adesi a un batterio Escherichia coli infettato da batteriofagi T4 Escherichia coli infettato da batteriofagi T4 - liberazione - Replicazione virale Virus a RNA a singolo filamento con polarità positiva* (Picornavirus, Togavirus) (+) RNA parentale (come mRNA cellulare) Interamente tradotto in una poliproteina da cui originano le varie proteine funzionali trascrittasi (codificata dal virus) (-) RNA trascrittasi (codificata dal virus) (+) RNA copia Progenie virale *stessa sequenza dell'mRNA cellulare Proteine strutturali Trascrittasi: RNA-polimerasi RNA-dipendente Replicazione virale Virus a RNA a singolo filamento (Orthomyxovirus, Paramyxovirus, Arenavirus) o a doppio filamento (Reovirus) con polarità negativa (-) RNA parentale trascrittasi (presente nel virione) (+) RNA messaggero Traduzione nelle varie proteine funzionali trascrittasi (codificata dal virus) (+) RNA trascrittasi (codificata dal virus) (-) RNA copia Progenie virale Trascrittasi: RNA-polimerasi RNA-dipendente Proteine strutturali Replicazione virale Virus a DNA a doppio filamento (Herpesvirus, Papovavirus, Adenovirus) RNA-polimerasi DNA parentale cellulare RNA-polimerasi cellulare mRNA () Proteine (proteine funzionali e strutturali) mRNA () Proteine DNA-polimerasi virale DNA copia Progenie virale RNA-polimerasi cellulare mRNA () Proteine (proteine strutturali) Replicazione virale Virus a RNA con trascrittasi inversa (Retrovirus) RNA parentale trascrittasi inversa (presente nel virione) DNA bicatenario DNA integrato nel genoma cellulare RNA-polimerasi cellulare mRNA Poliproteine Trascrittasi inversa: DNA-polimerasi RNA-dipendente RNA copia Proteine strutturali Progenie virale Coltivazione dei virus Animali da esperimento: si riproducono manifestazioni cliniche e lesioni specifiche. Uova embrionate: si formano lesioni specifiche nei diversi siti di inoculazione. Colture cellulari: si producono effetti citopatici (lisi, vacuolizzazione, cellule giganti multinucleate [sincizi]). Coltivazione dei virus nell’uovo embrionato di pollo Colture cellulari