Osservazione dei nuclei apoptotici di cellule HCT116
trattate con 5-FU
Ø staccare le cellule
Ø contare le cellule
Ø centrifugare a 1300 rpm per 5’
Ø risospendere le cellule in Hoechst (5 mg/ml in PBS) alla
concentrazione di 100 ml/ 106 cells
Ø incubare 15’ a 37°C
Ø centrifugare a 1900 rpm per 5’
Ø risospendere in PI (50 mg/ml in PBS) alla
concentrazione di 50 ml/ 106 cells
Ø deporre su vetrino e osservare al microscopio a fluorescenza
Colorazione con Ioduro di propidio e Hoecst
staccare e contare le cellule
centrifugare a 1300 rpm per 5’
risospendere le cellule in Arancio di Acridina (1 mg/ml)
incubare per 15’ a T° ambiente
deporre su vetrino e osservare al microscopio a fluorescenza
Colorazione con
Arancio di acridina