Metodi di osservazione dei
microrganismi
Le dimensioni dei microrganismi
1mm = 0,001mm
1nm = 0,000001mm
1A = 0,0000001 mm
Limite di risoluzione dell’occhio umano (a 25 cm): 0,2 mm
Microscopio ottico
Microscopio elettronico
I microscopi ottici
• microscopi semplici: un solo
sistema di lenti (lenti di
ingrandimento, i primi
microscopi…);
• microscopi composti: due
sistemi di lenti (i microscopi
moderni con obiettivi e
oculari)
Anatomia di un microscopio
fotocamera o
telecamera
oculari
stativo
fonte di
illuminazione
vite macrometrica e
micrometrica
revolver con
obiettivi
tavolino
traslatore
condensatore
diaframma di
campo
Ingrandimento
La luce visibile
Risoluzione e ingrandimento
POTERE DI RISOLUZIONE vs INGRANDIMENTO
Il limite di risoluzione dei microscopi
0,5
d
Nsen
= ~0,25mm
: lunghezza d’onda della luce
N: indice di rifrazione del mezzo
interposto fra lente e preparato
: semiangolo della lente dell’obiettivo
: è 400-700 nm per la luce visibile
N: è 1 quando il mezzo interposto fra lente e preparato è
l’aria
: nelle lenti migliori si avvicina ad 1
Il limite di risoluzione dei microscopi
Il limite di risoluzione può essere migliorato (diminuito):
• diminuendo  (200-400 nm per la luce UV)
• aumentando il prodotto Nsen (apertura numerica,
NA) per esempio interponendo fra obiettivo e
campione un olio con un indice di rifrazione simile a
quello del vetro (1,518)
0,5
d
Nsen
= ~0,16mm
Microscopio ottico in campo oscuro
Campo chiaro
Campo oscuro
Treponema pallidum
Microscopio ottico a fluorescenza
Microscopio elettronico
Gli elettroni si comportano come onde
La lunghezza d’onda degli elettroni è di 0,1-0,04 nm
Fonte di elettroni
Fonte di elettroni
Condensatore
Condensatore
Fascio di
elettroni
Fascio di
elettroni
Campione
Deviazione degli
elettroni
Obiettivo
Lente del
proiettore
Detector
Lente del
proiettore
Campione
Immagine
sullo
Immagine sullo
schermo
schermo fluorescente
televisivo
Microscopio elettronico
a trasmissione
Microscopio elettronico
a scansione
Microscopio elettronico
a trasmissione
Microscopio elettronico
a scansione
Microscopio elettronico