SESSIONE PLENARIA
28 novembre 2008
Sessione 4 PRESENTAZIONE
DEI LAVORI DI GRUPPO
Moderatori: G. Botti, S. Cinieri
09.00-10.00
Gruppo 1: FISH, CISH, SISH
- aggiornamenti sulle
metodiche per la
determinazione dello stato
di HER2
A. Gloghini, M. Mottolese
Discussant: C. Doglioni, E. Maiorano
Statement 1.
FISH/CISH/SISH
 Lo studio dell’amplificazione genica di HER2
nel carcinoma della mammella mediante
tecniche di ibridazione in situ fluorescente
o in campo chiaro è utilizzato come indagine
di secondo livello successivo alla valutazione
con immunoistochimica
Risposta
28 novembre 2008
1. D’accordo
2. Parzialmente
d’accordo
3. In disaccordo
Valori in percentuale %
Statement 2.
FISH/CISH/SISH
 La FISH/CISH/SISH va eseguita su tutti i
casi 2+ (o “equivoci” secondo le linee guida
ASCO/CAP) all’analisi immunoistochimica o
su richiesta del medico curante
Risposta
28 novembre 2008
1. D’accordo
2. Parzialmente
d’accordo
3. In disaccordo
Valori in percentuale %
Statement 3.
FISH/CISH/SISH
La CISH è una metodica ampiamente validata che
presenta un’elevata concordanza con la FISH
Anche se gli studi di validazione per la SISH sono
ancora limitati è riconosciuto che I risultati ottenuti
con questa metodica sono sovrapponibili a quelli
della CISH
La SISH può essere quindi utilizzata nella
determinazione dell’amplificazione di HER2
Risposta
28 novembre 2008
1. D’accordo
2. Parzialmente
d’accordo
3. In disaccordo
Valori in percentuale %
Statement 4.
FISH/CISH/SISH
Quando e su quali campioni effettuare il test
 FISH/CISH/SISH possono essere efficacemente
impiegati su preparati istologici fissati in
formalina neutra tamponata
 FISH/CISH rappresentano la metodica
di elezione per preparati citologici (convenzionali
o in monostrato) di lesioni metastatiche
 Non vi sono ancora procedure standardizzate
per la SISH su preparati citologici
Risposta
28 novembre 2008
1. D’accordo
2. Parzialmente
d’accordo
3. In disaccordo
Valori in percentuale %
Statement 5.
FISH/CISH/SISH
 L’impiego di fissativi diversi dalla formalina
neutra tamponata richiede sempre adeguata
validazione dei risultati
 I tessuti fissati in Bouin o decalcificati
non sono adeguati per la valutazione
dell’amplificazione di HER2
Risposta
28 novembre 2008
1. D’accordo
2. Parzialmente
d’accordo
3. In disaccordo
Valori in percentuale %
Statement 6.
FISH/CISH/SISH
Come si effettua la metodica
 E’ necessario acquisire competenze
che consentano di adattare alle variabili
pre-analitiche i reattivi e i protocolli dei kit
commerciali per FISH/CISH/SISH
 Eventuali modifiche delle metodiche devono
essere accuratamente validate su casi
con stato di HER2 noto
Risposta
28 novembre 2008
1. D’accordo
2. Parzialmente
d’accordo
3. In disaccordo
Valori in percentuale %
Statement 7.
FISH/CISH/SISH
Per la FISH è raccomandabile l’uso di kit
che includano una sonda centromerica
(dual color)
Per CISH/SISH, è raccomandabile
(vedi statement 15) la valutazione del
cromosoma17 con sonda centromerica
su sezioni consecutive
Risposta
28 novembre 2008
1. D’accordo
2. Parzialmente
d’accordo
3. In disaccordo
Valori in percentuale %
Statement 8.
CISH
 Le nuove metodiche di dual color CISH,
pur promettenti, necessitano di ampia
validazione
Risposta
28 novembre 2008
1. D’accordo
2. Parzialmente
d’accordo
3. In disaccordo
Valori in percentuale %
Statement 9.
FISH
L’interpretazione dei risultati
 Si raccomanda di valutare non meno
di 20 cellule/campo in almeno 2 campi
della componente invasiva identificata
sulla sezione in E/E
 I preparati citologici vanno esaminati
interamente
Risposta
28 novembre 2008
1. D’accordo
2. Parzialmente
d’accordo
3. In disaccordo
Valori in percentuale %
Statement 10.
FISH
 E’ opportuno esaminare il preparato allestito
con la FISH sulla base della reattività dell’IIC
 In caso di popolazione neoplastica
eterogenea è opportuno riportare la
percentuale di cellule in cui il gene risulta
amplificato
Risposta
28 novembre 2008
1. D’accordo
2. Parzialmente
d’accordo
3. In disaccordo
Valori in percentuale %
Statement 11.
FISH
L’interpretazione dei risultati
 Lo stato del gene si valuta tramite il rapporto
tra le copie di geni HER2 e i segnali
centromerici del cromosoma 17
 Un rapporto >2,2 dimostra amplificazione
del gene
 E’ necessario anche riportare la media
dei segnali CEP17 per fornire indicazioni
sulla polisomia
Risposta
28 novembre 2008
1. D’accordo
2. Parzialmente
d’accordo
3. In disaccordo
Valori in percentuale %
Statement 12.
FISH
 Nel referto finale si deve indicare se il
tumore è amplificato o non amplificato.
Non è necessario riportare la ratio
Risposta
28 novembre 2008
1. D’accordo
2. Parzialmente
d’accordo
3. In disaccordo
Valori in percentuale %
Statement 13.
FISH
L’interpretazione dei risultati
 Nei casi con rapporto gene/cromosoma 17
compreso tra 1,8-2,2, la conta dovrebbe essere
ripetuta dallo stesso o da un secondo
osservatore
 In alternativa la reazione dovrebbe essere
effettuata su altre sezioni o, se disponibile,
su una diversa inclusione della neoplasia
Risposta
28 novembre 2008
1. D’accordo
2. Parzialmente
d’accordo
3. In disaccordo
Valori in percentuale %
Statement 14.
FISH
L’interpretazione dei risultati
 E’ auspicabile documentare il risultato
delle indagini con una immagine fotografica
digitale
Risposta
28 novembre 2008
1. D’accordo
2. Parzialmente
d’accordo
3. In disaccordo
Valori in percentuale %
Statement 15.
CISH/SISH
L’interpretazione dei risultati
 Si deve esaminare tutta la sezione a 20X
 Nel caso in cui si rilevi omogeneità di segnale,
selezionare almeno 2 campi della neoplasia
infiltrante e valutarli ad alto ingrandimento
evitando le aree periferiche della sezione
 I preparati citologici vanno esaminati
interamente
Risposta
28 novembre 2008
1. D’accordo
2. Parzialmente
d’accordo
3. In disaccordo
Valori in percentuale %
Statement 16.
CISH/SISH
L’interpretazione dei risultati
 In caso di sicura amplificazione (>10 segnali
o clusters) o non amplificazione (1-4 segnali),
l’analisi può essere effettuata a 40x
 In presenza di un numero di segnali compreso
tra 5 e 10 è opportuno proseguire l’analisi
a maggior ingrandimento (63x o 100x) contando
almeno 40 cellule
Risposta
28 novembre 2008
1. D’accordo
2. Parzialmente
d’accordo
3. In disaccordo
Valori in percentuale %
Statement 17.
CISH/SISH
L’interpretazione dei risultati
 È opportuno determinare la media dei segnali
CEP17 e la media dei segnali HER2 osservate
nelle due sezioni consecutive
 E’ opportuno esaminare il preparato allestito con
la CISH sulla base della reattività dell’IIC
 Nei casi eterogenei esprimere il risultato anche
come percentuale di cellule amplificate
Risposta
28 novembre 2008
1. D’accordo
2. Parzialmente
d’accordo
3. In disaccordo
Valori in percentuale %
Statement 18.
FISH/CISH/SISH
 Il tumore è considerato polisomico quando
la media delle copie del centromero 17 è ≥3
 L’eventuale presenza di polisomia va
segnalata in assenza di amplificazione
genica
Risposta
28 novembre 2008
1. D’accordo
2. Parzialmente
d’accordo
3. In disaccordo
Valori in percentuale %
Statement 19.
FISH/CISH/SISH
Chi valuta il risultato
 L’interpretazione dei risultati relativi allo stato di
HER2 deve essere effettuata da personale con
consolidata esperienza in patologia mammaria
e nelle procedure utilizzate
 I dati devono essere integrati nel referto
istopatologico e la loro congruità garantita
dal Patologo
Risposta
28 novembre 2008
1. D’accordo
2. Parzialmente
d’accordo
3. In disaccordo
Valori in percentuale %
Statement 20 FISH/CISH/SISH
Controllo di qualità
 E’ opportuno utilizzare controlli positivi
esterni di reazione periodicamente e,
comunque, a ogni cambio di lotto del kit
Risposta
28 novembre 2008
1. D’accordo
2. Parzialmente
d’accordo
3. In disaccordo
Valori in percentuale %
Statement 21.
FISH/CISH/SISH
 E’ opportuna l’implementazione di
programmi di VEQ per FISH/CISH/SISH su
base regionale, nazionale o sovra-nazionale
Risposta
28 novembre 2008
1. D’accordo
2. Parzialmente
d’accordo
3. In disaccordo
Valori in percentuale %
Statement 22.
FISH/CISH/SISH
Centri di riferimento
 La limitata esperienza nelle procedure
e/o la valutazione di un esiguo numero
di casi/anno deve indurre a considerare
la centralizzazione dei test presso un
laboratorio di riferimento
Risposta
28 novembre 2008
1. D’accordo
2. Parzialmente
d’accordo
3. In disaccordo
Valori in percentuale %
Statement 22.
FISH/CISH/SISH
Centri di riferimento
 La limitata esperienza nelle procedure
e/o la valutazione di un esiguo numero
di casi/anno deve indurre a considerare
la centralizzazione dei test presso
un laboratorio di riferimento
Risposta
28 novembre 2008
1. D’accordo
2. Parzialmente
d’accordo
3. In disaccordo
Valori in percentuale %