Laboratorio di biologia
cellulare
Colture cellulari
Linea cellulare NIH3T3
• Cellule di fibroblasti embrionali di topo
Foto 1° giorno (4 Aprile) della piastra di partenza dalla
quale sono state ottenute le varie subcolture
Nucleo con
addensamenti
di cromatina
Probabile
Vacuoli
cellula in
divisione
Si può notare che la piastra è molto confluente (oltre il 90%)
Foto 3° giorno (8 Aprile) di una delle 4 piastre di subcoltura
allestite il 6 Aprile
Si può notare che la piastra è ancora molto confluente (oltre il 90%)
Foto 4° giorno (11 Aprile)
Foto di una delle 2 piastre contate
per allestire il 2° punto della curva
Si notano le cellule allungate che
sono quelle adese alla superficie
Foto della piastra linea
Piastra molto confluente (90%)
foto 5° giorno 13 Aprile
Foto di una delle 2 piastre
contate per allestire il 3° punto
della curva
La confluenza è diminuita
rispetto alla piastra del
giorno precedente
Foto della piastra linea
Piastra confluente all’80% (piastra
linea); si notano bene i nuclei con gli
addensamenti di cromatina
vitalità
• la vitalità è risultata dell’89%; come valore va
bene, tenendo conto che dopo il congelamento
è normale una certa percentuale di mortalità
delle cellule.
CURVA DI CRESCITA
Curva Di Crescita - Coltura di NIH 3T3
FASE DI
SENESCENZA
FASE DI
CRESCITA
ESPONENZIALE
Fase di senescenza
Fase di crescita esponenziale
775,000
525,000
275,000
25,000
Num.Cellule
8 Aprile 2011
25,000
11 Aprile 2011
630,000
13 Aprile 2011
822,000
15Aprile 2011
888,000
18 Aprile 2011
675,000
20 Aprile 2011
576,000
Num.Cellule
giorni
08-apr
11-apr
13-apr
15-apr
18-apr
20-apr
N° cellule/mL
25.000
630.000
822.000
888.000
675.000
576.000
log N° cellule
4,4
5,8
5,91
5,95
5,83
5,76
La curva di crescita riflette l’andamento standard di una coltura
cellulare con la differenza che manca la fase di latenza perché siamo
partiti da 25.000 cellule (tempo 0).
La fase di “senescenza” (solitamente visibile dopo diverse settimane)
può essere dovuta all’esaurimento di alcuni componenti del terreno di
coltura (ad es. glutammina) e alla parziale acidificazione del mezzo
stesso (visibile colorazione tendente al giallo);
da considerare anche che le cellule non adese e quelle morte a seguito
dei lavaggi vengono eliminate.
08-apr
11-apr
13-apr
15-apr
18-apr
20-apr
55
26
18
31
23
25
51
28
13
22
22
16
47
36
16
29
33
46
43
15
37
22
20
17
16
23
52
22
11
16
28
45
14
17
12
49
33
24
9
21
31
20
22
12
27
49
15
10
49
21,2
27,4
31,75
22,5
18,44444
MEDIA
5,163978
7,728734
14,08861
11,48602
5,237229
11,33701
DEVIAZIONE STD
13
Riportiamo di seguito il grafico della curva di crescita con
l’aggiunta della deviazione standard
50
45
40
35
30
Serie1
25
20
15
10
5
0
1
2
3
4
5
Fluorescenza
Sintox green
• Colora il nucleo
Le formazioni rotondeggianti verdi
sono i nuclei, l’alone che si nota
intorno ad esse è il citoplasma
Falloidina
• Colora l’actina
Si nota l’actina citoscheletrica
colorata in rosso
Foto di una delle 2 piastre contate per allestire l’ultimo
punto della curva (20 Aprile).
Ci sono segni di evidente sofferenza delle cellule (molti
vacuoli), probabile contaminazione da micoplasmi.
Corpi apoptotici
In conclusione, come opinione soggettiva del gruppo,
possiamo dire che questo laboratorio è stato di grande
interesse perchè ci ha permesso di avere una visione
generale su quello che accade in un laboratorio di colture
cellulari e di avere un’esperienza pratica che non è mai
stata fatta in passato.