METODO NAZIONALE STANDARD
CONTEGGIO DI
PSEUDOMONAS AERUGINOSA
CON MEMBRANA DI FILTRAZIONE
W6
Emesso da Standards Unit, Evaluations and Standards Laboratory
Centre for Infections
CONTEGGIO DI PSEUDOMONAS AERUGINOSA CON MEMBRANA DI FILTRAZIONE
Revisione no: 3 Data di revisione: 21.12.07 Emesso da Standards Unit, Evaluations and Standards Laboratory, in collaborazione con
Regional Food, Water and Environmental Coordinators Forum.
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STATO DEI METODI NAZIONALI STANDARD
I Metodi Nazionali Standard, che includono le procedure operative standard (POS) algoritmi e linee guida,
promuovono l’adozione di elevati livelli di qualità, contribuendo ad assicurare la possibilità di confronto delle
informazioni diagnostiche ottenute in laboratori diversi. Ciò consente la standardizzazione della sorveglianza
sostenuta dalla ricerca, sviluppo e verifica, promovendo nello stesso tempo la salute pubblica e la fiducia del
paziente nelle proprie strutture sanitarie. I metodi sono ben referenziati e rappresentano un buon standard
minimo per la microbiologia clinica e per la salute pubblica. Comunque, utilizzando i Metodi Nazionali
Standard, i laboratori dovranno tenere in considerazione le esigenze locali e potranno intraprendere ricerche
addizionali. I metodi forniscono inoltre un punto di riferimento per un loro ulteriore sviluppo.
I Metodi Nazionali Standard sono stati sviluppati, revisionati ed aggiornati con una procedura aperta di
consenso ove le opinioni di tutti i partecipanti sono state tenute in adeguata considerazione ed i documenti
elaborati riflettono il consenso della maggior parte degli stessi.
I rappresentanti di alcune organizzazioni professionali, incluse quelle il cui logo appare sulla prima pagina,
sono membri dei gruppi di lavoro che sviluppano i Metodi Nazionali Standard. L’inclusione del logo di una
organizzazione nella prima pagina implica sostegno agli obiettivi ed al processo di preparazione dei metodi
standard. I componenti di queste organizzazioni scientifiche hanno partecipato allo sviluppo dei Metodi
Nazionali Standard ma le loro opinioni personali non rispecchiano necessariamente quelle
dell’organizzazione di cui sono membri. L’elenco attuale delle organizzazioni professionali partecipanti può
essere ottenuto tramite e-mail all’indirizzo [email protected].
Le prestazioni dei metodi standard sono condizionate dalla qualità di reagenti, strumentazione, procedure
commerciali o prove messe a punto in loco. I laboratori dovrebbero assicurare che queste siano state
validate e dimostrate idonee allo scopo prefissato. Devono essere adottate procedure di controllo di qualità
interno ed esterno.
Nonostante siano state osservate le più scrupolose attenzioni nella preparazione di questa pubblicazione, la
Health Protection Agency o qualsiasi organizzazione di sostegno non può essere ritenuta responsabile
dell’accuratezza o dell’utilizzo o di qualsiasi conseguenza derivante dall’uso o da modifiche delle
informazioni contenute in questo documento. Queste procedure sono intese solamente come una risorsa
generale per i professionisti che esercitano in questo settore, operanti nel Regno Unito, pertanto si dovrà
ricorrere ad altri consulenti quando ritenuto necessario. Se si apportano modifiche a questa pubblicazione, si
deve porre in evidenza dove sono state apportate modifiche al documento originale. La Health Protection
Agency (HPA) dovrà essere informata in ogni circostanza.
La HPA è una organizzazione indipendente che ha lo scopo di proteggere la salute della popolazione. Ad
essa confluiscono esperienze professionali già appartenenti ad organizzazioni ufficiali. Maggiori informazioni
riferibili alla HPA possono essere ottenute al sito www.hpa.org.uk
La HPA è un’organizzazione che mira ad essere completamente in accordo con le direttive Caldicott. Ciò
significa prendere ogni possibile precauzione per prevenire la diffusione non autorizzata di informazioni sui
pazienti e di garantire che le informazioni relative agli stessi siano mantenute in condizioni di sicurezza1.
Maggiori dettagli possono essere ottenuti dal sito web www.evaluations-standards.org.uk. Contributi allo
sviluppo dei documenti possono essere forniti contattando l’indirizzo [email protected].
Per cortesia prendere nota che la bibliografia è attualmente formattata con il software Reference Manager. Se
si modifica o si cancella il testo senza avere installato nel computer il Reference Manager; la bibliografia non
sarà aggiornata automaticamente.
Riferimento suggerito per questo documento:
Health Protection Agency (2007). Enumeration of Pseudomonas aeruginosa by membrane filtration. National
Standard Method W 6 Emissione 3 . http://www.hpa-standardmethods.org.uk/pdf_sops.asp.
CONTEGGIO DI PSEUDOMONAS AERUGINOSA CON MEMBRANA DI FILTRAZIONE
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INDICE
STATO DEI METODI NAZIONALI STANDARD ..........................................................................................
2
INDICE .........................................................................................................................................................
3
PROCEDURA DI MODIFICA .......................................................................................................................
4
SCOPO DEL DOCUMENTO ........................................................................................................................
5
INTRODUZIONE ..........................................................................................................................................
5
GENERALITA’ ……………………………………………………………………………………………………………………………….
5
1
DEFINIZIONI ......................................................................................................................................
6
2
PRINCIPIO .........................................................................................................................................
6
3
CONSIDERAZIONI SULLA SICUREZZA ........................................................................................
6
3.1 TRASPOTO E CONSERVAZIONE DEL CAMPIONE ....................................................................................
3.2 PROCEDURA SUL CAMPIONE ..............................................................................................................
6
6
4
ATTREZZATURA...............................................................................................................................
6
5
TERRENI DI COLTURA E REAGENTI .............................................................................................
7
6
PROCEDURA SUL CAMPIONE ......................................................................................................
7
6.1
6.2
6.3
6.4
PREPARAZIONE DEL CAMPIONE .........................................................................................................
FILTRAZIONE ED INCUBAZIONE............................................................................................................
CONTEGGIO COLONIE .......................................................................................................................
PROVE DI CONFERMA .......................................................................................................................
7
8
8
8
7
CALCOLO DEI RISULTATI .........................................................................................................
9
8
REFERTAZIONE ...........................................................................................................................
9
9
CONTROLLO DI QUALITA’ ..........................................................................................................
9
10
STRUTTURE DI RIFERIMENTO .................................................................................................... 10
11
RINGRAZIAMENTI E CONTATTI .................................................................................................. 10
DIAGRAMMA DI FLUSSO CHE ILLUSTRA LA PROCEDURA PER CONTEGGIO COLONIE DI 11
PSEUDOMONAS AERUGINOSA CON MEMBRANA DI FILTRAZIONE ...............................................
BIBLIOGRAFIA ........................................................................................................................................... 12
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PROCEDURA DI MODIFICA
Documento di riferimento
W6
controllato
Titolo del documento controllato Procedura Operativa Standard per Conta di Pseudomonas
aeruginosa con membrana di filtrazione
Ciascun Metodo Nazionale Standard possiede una registrazione separata con le modifiche. Le modifiche di
questa revisione sono riportate in questa pagina. Le precedenti modifiche sono disponibili presso la
[email protected].
Qualora vi sia una revisione di pagine o vengano emesse pagine nuove il proprietario di ciascun documento
controllato dovrebbe aggiornare la copia in laboratorio.
Modifica
Numero/
Data
6/
21.12.07
Emissione no.
Scartata
2.3
Inserita
Emissione
no.
3
Pagina
Sessione(i)
interessate
Modifica
6
Definizioni
Modificate per includere la
denominazione chimica
della cetrimide e la
capacità di idrolizzare la
caseina nella sottocoltura in
agar latte cetrimide
Attrezzatura
Aggiornata per includere
lampade UV da 360 ± 20nm
ed imbuti con filtro graduati
superiori a 250 mL
7
Terreni di coltura Rimossa soluzione ringer a
un quarto di concentrazione
e reagenti
7
Procedura sul
campione
10
Aggiunte nuove sezioni
Strutture di
Riferimento
Ringraziamenti e
Contatti
11
Diagramma di
flusso
Aggiornato
12
Bibliografia
Aggiornata
Aggiornata
Modificata la tabella delle
prove di conferma
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CONTEGGIO DI PSEUDOMONAS AERUGINOSA
CON MEMBRANA DI FILTRAZIONE
SCOPO DEL DOCUMENTO
Il presente metodo per la ricerca o conteggio di Pseudomonas aeruginosa in tutti i tipi di campioni di acqua
fornisce linee guida per la tecnica di filtrazione con membrana. E’ generalmente applicabile ad acqua con
ridotto contenuto di flora di sottofondo, come l’acqua destinata al consumo umano e le acque di pozza.
INTRODUZIONE
Generalità
La presenza di Ps aeruginosa nell’acqua potabile è indesiderabile, perché la loro crescita è associata
spesso a deterioramento della qualità di colore, torbidità, gusto ed odore. In ogni caso, il conteggio di P.
aeruginosa non è raccomandato nelle procedure di routine, sebbene possa essere importante nelle ricerche
per la soddisfazione del consumatore2 ed anche quando si eseguono prove sulle acque per verifiche di
conformità alle Natural Mineral Waters Regulations3.
Quando è richiestala un’eccezionale purezza dell’acqua, come nel caso di prodotti farmaceutici, è utile
esaminare i campioni per P. aeruginosa. E’ inoltre opportuno controllare per questo agente microbico i
dispositivi per idromassaggi, acque termali, acque idroterapiche e piscine per due motivi: le infezioni
follicolari e dell’orecchio causate dalle Ps. aeruginosa sono spesso associate a queste sorgenti di
ricreazione; la presenza di Ps. aeruginosa è spesso un segnale precoce di caduta di qualità nella procedura
di disinfezione dovuta alla loro aumentata resistenza rispetto ad altri microrganismi indicatori. Il loro riscontro
non può essere utilizzato come indicatore di contaminazione fecale. In alcune circostanze possono causare
infezioni opportunistiche nell’uomo, specialmente in pazienti defedati. E’ pertanto considerata indesiderabile
la loro presenza nell’acqua potabile, acqua imbottigliata, di piscine ed acqua di forniture ospedaliere.
Gli standard e le linee guida per P. aeruginosa sono disponibili per acque minerali naturali campionate entro
12 ore dell’imbottigliamento3, acque di piscine idroterapiche4 ed acque da sorgenti termali5. Il metodo si basa
su quello descritto nel documento della Microbiology of Drinking Water 20022 e della BS EN 12780:20026.
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1
DEFINIZIONI
Nel contesto di questo metodo si applicano le seguenti definizioni:
Pseudomonas aeruginosa
Microrganismi che crescono su terreni selettivi contenenti cetrimide (bromuro di cetil trimetammonio)
e che producono piocianina, oppure microrganismi che crescono su terreni selettivi contenenti
cetrimide, sono ossidasi positivi e sviluppano fluorescenza sotto luce UV 360r20nm ed idrolizzano
la caseina in sottocoltura in agar contenete latte e cetrimide.
2
PRINCIPIO
Filtrare un determinato volume di campione o una diluizione con membrana in grado di trattenere P.
aeruginosa. La membrana è incubata su agar selettivo/differenziale e si contano le caratteristiche
colonie. Eseguire le prove di conferma e calcolare i risultati come conteggi di colonie in 250 mL per
acque minerali ed imbottigliate e in 100 mL per altre acque.
CONSIDERAZIONI SULLA SICUREZZA7-17
3
Adottare le normali precauzioni del laboratorio di microbiologia.
3.1
TRASPORTO E CONSERVAZIONE DEL CAMPIONE
E’ essenziale l’adeguamento alle attuali regolamentazioni della posta e del trasporto.
3.2
PROCEDURA SUL CAMPIONE
x
Quando si utilizza una lampada UV con sorgente ad emissione a 360 ± 20 nm è strettamente
raccomandato di calzare guanti e occhiali o le protezioni del viso disponibili.
Le seguenti indicazioni devono essere supplementate con le indicazioni del COSHH locale e
con la valutazione del rischio
4
ATTREZZATURA
Normale attrezzatura di laboratorio ed aggiungere:
x
Membrane di filtrazione di tipo diverso
x
Imbuti da filtro graduati da 50 e 100 mL
x
Recipienti di pirex per il vuoto con rivestimento protettivo: ampia capacità, 5L o equivalenti
x
Pompa a vuoto, con raccoglitore di umidità o filtro protettivo, o sorgente alternativa di vuoto
x
Forbici di acciaio inossidabile a punta piatta
x
Bagno per bollitura (strumento di sterilizzazione)
x
Termostato: 37°C r1.0°C 41,5°C ± 1°C°
x
Lampada per raggi ultravioletti (lunghezza d’onda UV 360 r 20nm)
x
Piastre di Petri
x
Filtri di estere di cellulosa con pori da 0.45 Pm con griglia
x
Pipettatori automatici e relativi puntali sterili in grado di erogare volumi fino a 10mL e 1mL
(opzionale)
x
Pipette (sterili a distribuzione totale) da 10 mL ed 1 mL graduate per volumi da 0.1 mL (opzionale)
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5
TERRENI DI COLTURA E REAGENTI
Si possono utilizzare terreni equivalenti disidratati pronti: seguire le indicazioni della ditta produttrice.
Diluente peptone salino (diluente di maggior isolamento)
Peptone
Cloruro di sodio
Acqua
pH 7.0 ± 0.2 a 25°C
1.0 g
8.5 g
1L
Agar Pseudomonas + supplemento CN
Idrolisato acido di peptone
o idrolisato di caseina
Gelatina peptone
Solfato di potassio (anidro)
Cloruro di magnesio (anidro)
Glicerolo
Cetrimide
Acido nalidixico, sale sodico
Agar
Acqua
pH 7.1 ± 0.2 a 25°C
10.0 g
16.0 g
10.0 g
1.4 g
10.0 mL
200 mg
15 mg
11.0 g
1L
Agar latte cetrimide (ALC)
Estratto di lievito
Peptone
Cloruro di sodio
Latte scremato in polvere
Cetrimide
Agar
Acqua
pH 7.2 ± 0.2 a 25°C
0.075 g
2.5 g
1.25 g
100.0 g
0.3 g
15.0 g
1L
Reagente ossidasi (Preparazione recente come richiesto o usare un prodotto commerciale
equivalente)
Tetrametil-p-fenilendiamina
cloridrato
Acqua
6
PROCEDURA SUL CAMPIONE
6.1
PREPARAZIONE DEI CAMPIONI
0.1 g
10.0 mL
I campioni idrici devono essere ricevuti e manipolati come descritto nella SOP: W 1 - General
technique for the detection and enumeration of bacteria by negative pressure membrane filtration. I
campioni devono essere analizzati il più presto possibile, nel giorno del prelievo. In circostanze
eccezionali, se si verifica un ritardo, la conservazione non deve prolungarsi oltre le 24 ore prima
dell’inizio delle analisi nelle condizioni indicate in precedenza.
Seguire le procedure descritte nella SOP: W 1 - General technique for the detection and
enumeration of bacteria by negative pressure membrane filtration selezionare volumi idonei per le
analisi e approntare le necessarie diluizioni.
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6.2
FILTRAZIONE ED INCUBAZIONE
Seguire le procedure descritte nei MNS W1 Sezione 5; filtrare con membrana un determinato
volume di campione.
Utilizzare 250 mL per le acque minerali naturali, volumi di 100 mL per le acque con qualità potabile e
acque di pozza.
Trasferire la membrana su agar Pseudomonas contenente cetrimide ed acido nalidixico ed inserire in
termostato a 37°C ± 1°C.
6.3
CONTEGGIO COLONIE
Controllare le piastre dopo 22 ± 2 ore ed a 44 ± 4 ore.
Contare tutte le colonie che producono pigmento verde o blu (produzione di piocianina) o rosso
bruno e fluorescenti alla luce UV. L’esposizione delle colonie per 2-4 ore all’aria favorisce la
produzione di pigmento.
Controllare le piastre dopo incubazione a 22 ± 2 ore ed a 44 ± 4 ore.
Nota: Quando sulla membrana si manifesta una crescita moderatamente rigogliosa di P. aeruginosa
e di altri microrganismi, le colonie che si sviluppano in prossimità delle P. aeruginosa che producono
piocianina possono loro stesse assumere colorazione verde dopo 44 ± 4 ore di incubazione,
rendendo difficile la definizione del conteggio. In questo caso, l’osservazione delle piastre a 22 ± 2
ore facilita l’interpretazione. Eseguire prove di conferma su tutte le colonie con colorazione verde.
6.4
PROVE DI CONFERMA
Le colonie che sulla membrana producono piocianina in modo evidente (pigmentate in verde/blu)
sono considerate P. aeruginosa e non richiedono successivi accertamenti. Gli altri tipi di colone
richiedono prove di conferma. Se si è proceduto alla filtrazione di più di un volume o diluizione,
procedere, quando possibile, con la membrana che sviluppa crescita compresa fra 20 ed 80 colonie.
Per confermare altri tipi di colonie, selezionare secondo le indicazioni descritte nel MNS: W1
Sezione 5. Eseguire sottocolture in agar latte cetrimide (ALC) ed incubare le piastre a 37 ± 1°C per
22 ± 2 ore. Esaminare le piastre per crescita, produzione di pigmento, fluorescenza, idrolisi della
caseina (chiarificazione del terreno attorno alle colonie). Se la produzione di pigmento è scarsa,
esporre per 2-4 ore l’ALC alla luce del sole, a temperatura ambiente, in modo da incrementare la
produzione di pigmento e ricontrollare.
Eseguire la prova dell’ossidasi sulle colonie sviluppate sull’ACL. Inumidire un pezzo di carta da filtro
con reagente ossidasi di recente preparazione o con uno equivalente. Con bastoncino di legno, di
vetro, o ansa di platino/plastica (non di nichelcromo) trasferire una colonia del microrganismo
ricercato sulla carta da filtro e strofinarla sull’area inumidita. La reazione positiva è rilevata dalla
comparsa di colore porpora scuro entro 10 secondi. Sono considerati negativi l’assenza di colore o
lo sviluppo tardivo di color porpora.
Ps. aeruginosa è ossidasi positiva, idrolizza la caseina e produce piocianina e/o fluorescenza.
Occasionalmente si riscontrano varianti atipiche di P. aeruginosa non pigmentate. Una coltura
piocianina negativa, idrolisi della caseina positiva, fluorescenza positiva deve essere considerata di
P. aeruginosa.
Interpretare i risultati nel modo seguente:
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Colonie su agar
CN
Prova
dell’ossidasi
Fluorescenza su Lisi della
ALC
caseina su ALC
Ps aeruginosa
confermate
Colonie blu o
verdi
Fluorescenza ed
assenza di
pigmentazione
Rosso brune non
fluorescenti
NS*
NS
NS
Si
+
+
+
Si
+
+
+
Si
* NS – non saggiato
7
CALCOLO DEI RISULTATI
Calcolare il numero delle colonie sospette nel modo seguente:
Numero colonie sospette / 100 mL =
Numero di colonie conteggiate
Volume analizzato
x 100
Seguire le procedure descritte nel MNS: W 1 Sezione 7; calcolare il numero di P. aeruginosa
confermate presenti nel campione originale.
Per campioni di acque minerali naturali ed acque imbottigliate calcolare il numero per 250 mL.
8
REFERTO
Refertare i risultati secondo le procedure descritte nel MNS: W 1 Sezione 9.
Se non sono riscontrate Ps aeruginosa refertare:
‘Non riscontrate in 250 mL’ o ‘Non riscontrate in 100 mL’ come appropriato
Se il microrganismo ricercato e presente refertare:
‘a in 250 mL’ o ‘a in 100 mL’ come appropriato
Ove a è il numero di conteggio confermato.
Per le acque naturali minerali il risultato è espresso come numero in 250 mL.
9
CONTROLLO DI QUALITA’
Membrana di filtrazione
Quando si utilizza la tecnica di filtrazione con membrana, devono essere eseguite le procedure per il
controllo di qualità interno almeno una volta al giorno in funzione del carico di lavoro del laboratorio.
Se in una sessione analitica si utilizza più di un lotto di terreno, è necessario ripetere il controllo di
qualità per ciascun lotto.
I controlli di qualità interni qualitativi sono eseguiti utilizzando sospensioni di microrganismi di
controllo positivi e negativi noti per contenere meno di 100 unità formanti colonia nel volume filtrato.
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Controllo positivo
Ps. aeruginosa
NCTC 10662
Controllo negativo
Escherichia coli NCTCT 9001
Bianco del controllo
Filtrare 100 mL di acqua distillata sterile, acqua peptonata salina con lo stesso imbuto utilizzato per il
controllo positivo dopo la sua disinfezione.
Incubare tutte le prove contemporaneamente alle prove di routine.
Prova di conferma
Inoculare ogni serie di terreni utilizzati nel giorno della prova con microrganismi di controllo ed
incubare contemporaneamente le prove di routine.
Agar cetrimide latte
Ps. aeruginosa NCTC 10662: Sviluppo +, idrolisi della caseina +, piocianina + e fluorescenza +
E. coli NCTC 9001: Sviluppo +, idrolisi della caseina -, piocianina - e fluorescenza Incubare contemporaneamente tutte le prove.
10 STRUTTURE DI RIFERIMENTO
N/D
11 RINGRAZIAMENTI E CONTATTI
Questi Metodi Nazionali Standard sono stati sviluppati revisionati e controllati dal Water Working
Group for Standard Methods (http://www.hpastandardmethods.org.uk/wg_water.asp). Si ringraziano
per il contributo le numerose persone appartenenti ai laboratori clinici e alle organizzazioni
specialistiche che hanno fornito informazioni e commenti nel corso della preparazione di questo
documento, ed infine il Redattore Medico.
I Metodi Nazionali Standard sono emessi dalla Standards Unit, Evaluations and Standards
Laboratory, Centre for Infections, Health Protection Agency London.
Per ulteriori informazioni contattateci a:
Standards Unit
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Colindale, London
NW9 5EQ
e-mail [email protected]
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DIAGRAMMA DI FLUSSO CHE ILLUSTRA LA PROCEDURA
DI CONTEGGIO PER PSEUDOMONAS AERUGINOSA CON
MEMBRANA DI FILTRAZIONE
Trasporto in laboratorio a 2° -10°C senza esporre alla luce solare
Ø
Conservare a 2° -10°C al buio ed esaminare il più presto possibile, nel giorno del prelievo,
altrimenti, entro 24 ore dal prelievo
Ø
Miscelare il campione in modo adeguato e preparare le diluizioni necessarie
Ø
Filtrare
Ø
ҏ
Trasferire la membrana su agar Pseudomonas contenente cetrimide ed acido nalidixico
Ø
Incubare a 37°C r 1°C per 22 ore r 2 ore. Contare le colonie versi o blu e reincubare per altre
22 ore r 2 ore
Ø
Contare le colonie che producono pigmento verde. blu o rosso scuro
e quelle che manifestano fluorescenza sotto la lampada a luce ultravioletta
Ø
Eseguire sottocolture delle colonie (blu/verdi) che non producono piocianna su ALC. Incubare a 37°C r 1°C per 22 r 2
ore. Controllare per crescita, idrolisi della caseina e produzione di pigmento e/or fluorescenza sotto luce UV.
Eseguire la prova dell'ossidasi sulle colonie che non producono piocianina
Ø
Calculare il numero confermato di P. aeruginosa
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BIBLIOGRAFIA
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2. Standing Committee of Analysts. Environment Agency. The Microbiology of Drinking Water (2002).
Methods for the Examination of Waters and Associated Materials - Part 8: Methods for the
isolation and enumeration of Aeromonas and Pseudomonas aeruginosa by membrane filtration.
London. http://www.environmentagency.gov.uk/commondata/acrobat/mdwpart8.pdf#search='the%20microbiology%20of%20drinkin
g%20water%20%20part%208'.
3. The Natural Mineral Water, Spring Water and Bottled Drinking Water (England) Regulations 2007
(Statutory Instrument No.2785). London: HMSO; 2007.
4. PHLS. Hygiene for Hydrotherapy Pools. 2nd ed. London: PHLS; 1999.
5. Health Protection Agency/Health and Safety Executive. Management of Spa Pools - Controlling
the Risks of Infection. http://www.hpa.org.uk/publications/2006/spa_pools/spa_pools.pdf.
6. BS EN 12780: 2002. Water quality - Detection and enumeration of pseudomonas aeruginosa by
membrane filtration. British Standards Institution (BSI); 2002.
7. Advisory Committee on Dangerous Pathogens. 2004 Approved List of Biological Agents.
http://www.hse.gov.uk/pubns/misc208.pdf. p. 1-17.
8.
Health and Safety Executive, editor. Biological Agents: Managing the risks in laboratories and
healthcare premises. 5 A.D.
9. Public Health Laboratory Service Standing Advisory Committee on Laboratory Safety. Safety
Precautions: Notes for Guidance. 4th ed. London: Public Health Laboratory Service (PHLS); 1993.
10. Control of Substances Hazardous to Health Regulations 2002. General COSHH. Approved Code
of Practice and Guidance, L5. Suffolk: HSE Books; 2002.
11. Health and Safety Executive. 5 steps to risk assessment: a step by step guide to a safer and
healthier workplace, IND (G) 163 (REVL). Suffolk: HSE Books; 2002.
12. Health and Safety Executive. A guide to risk assessment requirements: common provisions in
health and safety law, IND (G) 218 (L). Suffolk: HSE Books; 2002.
13. NHS Estates. Health Building Note 15. Facilities for pathology services. 2nd ed. London: The
Stationary Office; 2005.
14. BS EN 12469: 2000. Biotechnology - performance criteria for microbiological safety cabinets.
London: British Standards Institution (BSI); 2000.
15. BS 5726: 1992. Microbiological safety cabinets. Part 2. Recommendations for information to be
exchanged between purchaser, vendor and installer and recommendations for installation.
London: British Standards Institution (BSI); 1992.
16. BS 5726: 1992. Microbiological safety cabinets. Part 4. Recommendations for selection, use and
maintenance. London: British Standards Institution (BSI); 1992.
CONTEGGIO DI PSEUDOMONAS AERUGINOSA CON MEMBRANA DI FILTRAZIONE
Revisione no: 3 Data di revisione: 21.12.07 Emesso da Standards Unit, Evaluations and Standards Laboratory, in collaborazione con
Regional Food, Water and Environmental Coordinators Forum.
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Riferimento No: W 6i3
Questa POS deve essere usata congiuntamente con le altre POS emesse dalla Health Protection Agency
www.evaluations-standards.org.uk
Email: [email protected]
17. Advisory Committee on Dangerous Pathogens. The management, design and operation of
microbiological containment laboratories. Suffolk: HSE Books; 2001.
CONTEGGIO DI PSEUDOMONAS AERUGINOSA CON MEMBRANA DI FILTRAZIONE
Revisione no: 3 Data di revisione: 21.12.07 Emesso da Standards Unit, Evaluations and Standards Laboratory, in collaborazione con
Regional Food, Water and Environmental Coordinators Forum.
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Riferimento No: W 6i3
Questa POS deve essere usata congiuntamente con le altre POS emesse dalla Health Protection Agency
www.evaluations-standards.org.uk
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