Corso di Biochimica Clinica
Modulo di Biochimica Clinica (6 CFU)
DOCENTE
Prof. Vitaliano Borromeo
E-mail: [email protected]
RICEVIMENTO STUDENTI
Via Celoria 10, piano terra palazzina di Fisiologia e Biochimica, tutti i giorni previo appuntamento
via email.
TESTI CONSIGLIATI
- Appunti dalle lezioni e materiale distribuito e pubblicato sul sito ARIEL di Ateneo.
- Biochimica clinica, 2° edizione (2000), Luigi Spandrio, Edizioni Sorbona.
- Clinical biochemistry of domestic animals, 6° edizione (2008), Kaneko JJ, Academic press
ALTRO MATERIALE DIDATTICO
- Ariel: SI http://vborromeobcv.ariel.ctu.unimi.it/v3/home/Default.aspx
- Biblioteca: NO
- Sala computer: NO
- Altro: NO
ARTICOLAZIONE DEL MODULO
Il corso, articolato in 6 CFU, comprende:
- una parte di didattica frontale (5 CFU - 40 ore) costituita da lezioni in aula nelle quali vengono
discussi principi e applicazioni delle principali metodologie biochimiche impiegate nel laboratorio
biomedico veterinario;
- esercitazioni (1 CFU - 16 ore) svolte in aula, laboratorio e sala computer, finalizzate
all’esecuzione di metodiche di misura di analiti di interesse biochimico clinico veterinario ed
all’elaborazione di risultati numerici strumentali per risalirne alla concentrazione.
PROGRAMMA DEL MODULO
1. Didattica frontale
Argomento
Contenuti specifici
 Unità di misura in
biochimica clinica
./ Unità SI e convenzionali nell’espressione delle concentrazioni:
peso/volume, molarità, ppm e ppb, percentuale.
Ore
2
 Fondamenti delle principali metodologie biochimiche impiegate nel laboratorio biomedico
veterinario:
 Metodi basati
sull'energia radiante
./ Concetti di assorbanza e trasmittanza, spettrofotometria,
spettrofluorimetria, luminometria, torbidimetria e nefelometria,
spettroscopia di riflettanza e di assorbimento atomico.
4
 Metodi immunochimici
./ Concetti di antigene, epitopo e di affinità tra anticorpo e
antigene. Principi ed applicazioni di metodi per il dosaggio di
anticorpi e antigeni: test diretti e test con reagenti marcati (ex.
ELISA) competitivi e non competitivi. Descrizione dei
componenti e funzionamento di kits lataral-flow.
5
5
 Metodi enzimatici
./ Dosaggi dei metaboliti mediante metodi enzimatici. Metodi di
dosaggio dell'attività degli enzimi nei liquidi biologici. Metodi di
studio degli isoenzimi.
 Metodi elettroforetici
./ Principi generali, elettroforesi a carica netta, SDS-elettroforesi,
IEF, Western blotting. Interpretazione dell’elettroferogramma.
 Metodi di separazione
./ Principi generali, gel cromatografia, cromatografia a scambio
ionico, di affinità, a fase inversa. Interpretazione del
cromatogramma.
 Metodi elettrochimici
./ Misure in potenziometria con elettrodi ionoselettivi e misure in
amperometria.
 Tecniche di biologia
molecolare
 Elaborazione, analisi e
valutazione critica dei
risultati di dosaggi
./ PCR, analisi dei prodotti di PCR, RFLP, sequenziamento.
./ Il concetto di standard, trasformazione ed elaborazione grafica
del dato strumentale numerico per risalire alla concentrazione
dell’analita, utilizzo di curve e rette di calibrazione.
5
 Fattori che influenzano
il dato di laboratorio
./ Variabilità pre-analitica. Variabilità analitica: precisione,
specificità e cross-reatività, accuratezza e sensibilità. Il
principio della specie-specificità nella produzione e
interpretazione del risultato in biochimica clinica veterinaria.
5

./ Variabilità biologica. Valori ed intervalli di riferimento. Test
patognomico e non patognomico. Concetti di sensibilità e
specificità diagnostica, di prevalenza, calcolo dei valori
predittivi negativi e predittivi positivi dei test diagnostici.
4
Interpretazione
dell’analisi di
laboratorio ai fini
diagnostici
4
2
2
2
2. Esercitazioni
Argomento e sede
Esercizi di trasformazione tra grandezze e unità di
misura in biochimica clinica e calcoli per la
preparazione di soluzioni a specifiche concentrazioni
Sede: Aula di lezione
Applicazione di metodiche di laboratorio per la
l'identificazione di biomolecole in campioni biologici
Sede: Laboratorio di biochimica
Elaborazione matematica e analisi critica dei risultati
di analisi di laboratorio
Sede: Aula informatica
Contenuti specifici
Ore
./
./
./
./
./
./
11
peso/volume
molarità
percentuale
ppm e ppb
soluzioni tampone
diluizioni
./ Dosaggio delle proteine totali
in campioni di plasma bovino
con metodo di Lowry
2
./ Costruzione e compilazione di
fogli di calcolo Excel con dati
numerici strumentali ottenuti
da dosaggi ELISA sandwich e
competitivi per risalire alla
concentrazione dell’analita
misurato.
3