HPLC
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Cromatogramma di
eluizione LSC
HPLC
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HPLC
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Possibili gruppi funzionali
sulla superficie della silice
Reazioni di silanizzazione
per la produzione di fasi
legate
HPLC
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Effetto della lunghezza di catena
sulle prestazioni di una colonna di
silossano in fase inversa riempita
con particelle di 5 m.
MeOH: H2O = 50%, 1ml/min
HPLC
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HPLC
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Forza del solvente (su silice) di alcune miscele di solventi.
HPLC
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Forza del solvente (0) come funzione della
composizione. Il solvente A è eptano
Confronto dei cromatogrammi dell’acrilamide
ottenuti con quattro fasi
mobili, ognuna con
polarità 0.53
HPLC
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Effetti della variazione della composizione della miscela eluente
Eluente:
MeOH : H2O (H3PO4 0.5 %)
1 ml/min
Effetti della variazione della composizione sul fattore di capacità k’ (a,b) e sul fattore di
selettività  (c,d,e). Composti: 1) prednisone, 2) cortisone, 3) idrocortisone, 4) dexametasone,
5) corticosterone, 6) cortoexolone
HPLC
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Effetti della variazione del pH su di una
separazione in fase inversa
1)
2)
3)
4)
Acido solfanilico
Solfamerazina
Solfisossazolo
Solfopiridina
Colonna C18 5 m, 150 x 4.6 mm
Eluente: KH2PO4 20 mM: CH3CN = 95 : 5
1 ml/min, 40°C, UV 270 nm
HPLC
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Tipiche applicazioni della cromatografia in fase legata
a)
Additivi per bibite analcoliche
Colonna 250 x 4.6mm, 1 ml/min, AcOH : H O = 6 :
2
94
b)
HPLC
Insetticidi organofosforati
Colonna C 250 x 4.5 mm, 5 m, 2 ml/min, gradiente
MeOH :8H O da 67 : 33 a 80 : 20
2
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HPLC
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Cromatogramma di 30 amminoacidi derivatizzati con o-ftalaldeide.
Colonna RP-C , 5 m
18
Solvente A: MeOH : THF : H O (Na HPO 0.05 M, pH 7.4) = 96 : 2 : 2
2
2
4
Solvente B: MeOH : H O = 65 : 35
2
HPLC
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Cu(II)
Mix enantiomeri
Scambiatore di legame (D) – penicillamina, accettore di elettroni
per la separazione di:
• - aminoacidi e derivati
•  - idrossiacidi, alcoli amminici
HPLC
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HPLC
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Proprietà degli eluenti, modificabili
per ottenere l’eluizione a gradiente:
• Forza ionica
• pH
• Capacità di formare ponti idrogeno
• Forza della serie eluotropica
• Costante dielettrica
• Concentrazione dei reagenti in
competizione sui siti della fase
stazionaria
Differenze di separazione in funzione del tipo di gradiente applicato: a) gradiente lineare, b) a gradini
HPLC
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Variazioni nella separazione indotte dal
cambiamento della pendenza del gradiente,
ottenuta variando la forza ionica del NaCl
Colonna: DEAE-Sephadex A-50
Eluente: TRIS-HCl 0.1 M, pH 8.3 / NaCl
8 ml/cm2h
HPLC
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Variazioni nella separazione indotte dal
cambiamento del gradiente da lineare a non
lineare
Colonna: DEAE-Sephadex A-50
Eluente: TRIS-HCl 0.1 M, pH 8.3 / NaCl
8 ml/cm2h
HPLC
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HPLC
metilparaben
butirofenone
ottanofenone
esanofenone
propiofenone
propilparaben
triptofano
eptanofenone
etilPABA
Ac. benzoico
caffeina
teofillina
uracile
Effetto della temperatura in HPLC
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