UNIVERSITÀ DEGLI STUDI “G. D’ANNUNZIO”. CHIETI
Facoltà di Medicina e Chirurgia
Scuola di Specializzazione in Genetica Medica
Direttore Prof G. Palka
Analisi cromosomica su villi
coriali: diecimila casi. Affidabilità
e problematiche della diagnosi
cromosomica prenatale nel primo
trimestre di gravidanza
Relatore:
Chiar.mo Prof. G. Palka
Tesi di Specializzazione di:
D.ssa Monia Rinaldini
ANNO ACCADEMICO 2002 - 2003
Villi coriali (CVS)
I tessuti placentari possono
mostrare aberrazioni CVS
cromosomiche non
specificatamente fetali, ma
citotrofoblasto
confinate alla placenta
metodo
semidiretto
mesoderma
Le linee guida protocollari
della Società
diaGenetica
metodo
coltura
consigliano l’utilizzo sia
della metodica semidiretta
che colturale nella attività
tessuti placentari diagnostica
Scopo

Presentare una casistica di 10.000 analisi
cromosomiche consecutive su campioni di villi
coriali (CVS) eseguite con entrambi i metodi.

Evidenziare affidabilità e problematiche della
diagnosi cromosomica prenatale mediante
prelievo di villi coriali nel primo trimestre di
gravidanza.
Materiali e metodi (1)
Età materna
Indicazioni per
l’indagine
citogenetica
Familiarità per
anomalie
cromosomiche
Segni ecografici
alterati
Genitori portatori
di anomalie
cromosomiche
Marcatori
sierici ad
aumentato
rischio
Materiali e metodi (2)
Analisi
cromosomica su
villi coriali
Metodo semidiretto
Bandeggi:
•QFQ di routine
•GTG occasionale
•DA-DAPI occasionale
Metodo a coltura
Metafasi analizzate in totale
su entrambi i preparati:
•20 per cariotipo omogeneo
•Numero più esteso nei casi
di mosaicismo
Materiali e metodi (3)
Analisi
cromosomiche
su colture di
liquido
amniotico
Analisi di verifica e
controllo di
aberrazioni
cromosomiche di
dubbia interpretazione
Analisi
cromosomiche su
colture di sangue
periferico postnatale
Esclusione di
Disomia
Uniparentale
(UPD)
Identificazione
di piccoli
marcatori
cromosomici
(FISH)
Risultati. Tab 1. 10000 CVS. Analisi del trofoblasto e mesoderma.
Aberrazioni numeriche autosomiche. (1)
formula
trofoblasto
casi
mesoderma
liquido amniotico (LA)
follow up
47
+21
70
confermato coltura
TAB
47
+18
16
confermato coltura
TAB
46
XX
2
47,XX,+18
47,XX,+18 LA
47
+13
2
conferm coltura mos
conferm LA mos post TAB
47
+13
5
confermato coltura
47
+13
1
non conferm coltura
non confermato LA
47
+10
1
confermato coltura
confermato cute post TAB
47
+10
1
confermato coltura
non confermato LA
ongoing
47
+15
2
non conferm coltura
non confermato LA
1/UPD-/fenotipo normale
47
+15
1
47
+16
1
confermato coltura
non confermato LA
FU fenotipo normale
47
+16
1
non conferm coltura
non confermato LA
FU fenotipo normale
47
+20
2
conferm coltura mos
non confermato LA
FU fenotipo normale
47
+20
1
non conferm coltura
47
+ESAC
1
failed coltura
confermato LA (DN)
FU fenotipo normale
47
+ESAC
2
confermato coltura
confermato LA (DN)
FU fenotipo normale
markersUS
TAB
FU fenotipo normale
confermato LA post SAB
FU fenotipo normale
Risultati. Tab 1. 10000 CVS. Analisi del trofoblasto e mesoderma.
Aberrazioni numeriche autosomiche. (2)
formula
46/47
trofoblasto
+21
casi
mesoderma
liquido amniotico (LA)
follow up
6
non conferm coltura
non confermato LA
FU fenotipo normale
3
conferm coltura mos
conferm LA mos
TAB
1
confermato coltura (47, +21)
1
non conferm coltura
confermato LA
TAB
perso al follow up
46
XX
1
46/47,+21 coltura
46/47,+21 LA
TAB/segni clinici
46
XY
1
46/47,+21 coltura
46,XY LA
FU fenotipo normale
46/47
+18
6
non conferm coltura
non confermato LA
FU fenotipo normale
46/47
+18
1
conferm coltura
confermato LA
igroma cistico
46/47
+13
7
non conferm coltura
non confermato LA
FU fenotipo normale
46/47
+3
2
non conferm coltura
FU fenotipo normale
46/47
+8
1
non conferm coltura
FU fenotipo normale
46/47
+22
2
non conferm coltura
non confermato LA
FU fenotipo normale
46/47
+7
1
confermato coltura
non confermato LA
no UPD; FU normale
46/47
+9
1
failed coltura
non confermato LA
FU fenotipo normale
46/47
+12
1
non conferm coltura
non confermato LA
FU fenotipo normale
46/47
+ESAC
1
confermato coltura
1
confermato coltura
non confermato LA
FU fenotipo normale
1
failed coltura
non confermato LA
FU fenotipo normale
1
non conferm coltura
46/47,+18
perso al follow up
1
non conferm coltura
non confermato LA
FU fenotipo normale
1
confermato coltura
confermato LA
perso al follow up
46/47
46/47
ish18+invdup15
materno
Risultati. Tab 2. 10000 CVS. Analisi del trofoblasto e mesoderma.
Aberrazioni gonosomiche.
citotrofoblasto
casi
coltura mesoderma
follow up
45,X /46,XY
5
46,XY
maschio normale
45,X /46,XX
2
46,XX
LA 46,XX
45,X /46,XX /47,XX,+21
1 (2/27/1)
45,X
1
45,X / 46,XX
perso al follow up
45,X
6
45,X
3/6 NT > 4 - TAB
45,X
1
46,X,dic(Y)(q11.2)
LA 45,X / 46,X,dic(Y)(q11.2)
46,XY
trofoblastoFISH 14/300Y+;TAB
LA 46,XX
45,X
1
47,XXY
2
confermato
47,XYY
3
confermato
47, XXX
1
confermato
Risultati. Tab 3. 10000 CVS. Analisi del trofoblasto e mesoderma.
Riarrangiamenti strutturali.
formula cromosomica (trofoblasto e coltura)
familiarità
controllo citogenetica
su LA o tessuto
follow up
46,XX
t
(13;19)
(p11;p11)
dn
confermato
fenotipo normale
46,XX
t
(1;18)
(p32;q11.2)
dn
confermato
fenotipo normale
46,XX
t
(4;10)
(q33;q22)
dn
confermato
fenotipo normale
46,XX/46,XX
-11 + der (11) t
(11p;?)
dn
confermato
malformazioni TAB 20w
46,XY
- 18 + der (18) t
(3;18)
pat
confermato
malformazioni TAB 14w
46,XY/46,XY
- 15 + der (15) t
(15p;?)
dn
46, XY
fenotipo normale
46,XY
- 14 + der (18) t
(14;18)
(q21;q12)
pat
confermato
malformazioni TAB 20w
46,XY
- 20 + der (20) dup
(p11.1p11.2)
dn
confermato
no malformaz TAB 11w
46,XY
ring
(15q)
dn
confermato
malformazioni TAB 20w
46,XX
del
5
dn
46, XX
fenotipo normale
dn
46, XX, del (5)(p12) SP
cri du chat/morte perinatale
20
(p21.3;p11.3)
(p13)
46,XX
45,XX o XY
der
(13;14)
(q10;q10)
mat
6 casi
4/UPD negativa/ fenotipo normale
45,XX o XY
der
(13;14)
(q10;q10)
pat
3 casi
1/UPD negativa/fenotipo normale
45, XY
ish der
(15;21)
(q10;q10)
dn
ishder (15;22)(q10;q10)
ishder (15;22)(q10;q10)UPDneg
fenotipo normale
Risultati (Tab.1)
Trisomia 21
formula trofoblasto casi
mesoderma
liquido amniotico (LA)
47
+21
70 confermato coltura
46/47
+21
6 non conferm coltura
non confermato LA
conferm LA mos
46
XX
3 conferm coltura mos
1 confermato coltura
(47,+21)
1 non conferm coltura
1 46/47,+21 coltura
46
XY
1
46/47,+21 coltura
follow up
TAB
confermato LA
46/47,+21 LA
46,XY LA
FUfenotipo
normale
TAB
perso al
follow up
TAB
TAB/
segniclinici
FU fenotipo
normale
Risultati (Tab.1)
Trisomia 21
formula trofoblasto casi
mesoderma
liquido amniotico (LA)
47
+21
70 confermato coltura
46/47
+21
6 non conferm coltura
non confermato LA
conferm LA mos
46
XX
3 conferm coltura mos
1 confermato coltura
(47,+21)
1 non conferm coltura
1 46/47,+21 coltura
46
XY
1
46/47,+21 coltura
follow up
TAB
confermato LA
46/47,+21 LA
46,XY LA
FUfenotipo
normale
TAB
perso al
follow up
TAB
TAB/
segniclinici
FU fenotipo
normale
Risultati (Tab.1)
Trisomia 21
formula trofoblasto casi
mesoderma
liquido amniotico (LA)
47
+21
70 confermato coltura
46/47
+21
6 non conferm coltura
non confermato LA
conferm LA mos
46
XX
3 conferm coltura mos
1 confermato coltura
(47,+21)
1 non conferm coltura
1 46/47,+21 coltura
46
XY
1
46/47,+21 coltura
follow up
TAB
confermato LA
46/47,+21 LA
46,XY LA
FUfenotipo
normale
TAB
perso al
follow up
TAB
TAB/
segniclinici
FU fenotipo
normale
Risultati (Tab.1)
Trisomia 21
formula trofoblasto casi
mesoderma
liquido amniotico (LA)
47
+21
70 confermato coltura
46/47
+21
6 non conferm coltura
non confermato LA
conferm LA mos
46
XX
3 conferm coltura mos
1 confermato coltura
(47,+21)
1 non conferm coltura
1 46/47,+21 coltura
46
XY
1
46/47,+21 coltura
follow up
TAB
confermato LA
46/47,+21 LA
46,XY LA
FUfenotipo
normale
TAB
perso al
follow up
TAB
TAB/
segniclinici
FU fenotipo
normale
Risultati (Tab.1)
Trisomia 21
formula trofoblasto casi
mesoderma
liquido amniotico (LA)
47
+21
70 confermato coltura
46/47
+21
6 non conferm coltura
non confermato LA
conferm LA mos
46
XX
3 conferm coltura mos
1 confermato coltura
(47,+21)
1 non conferm coltura
1 46/47,+21 coltura
46
XY
1
46/47,+21 coltura
follow up
TAB
confermato LA
46/47,+21 LA
46,XY LA
FUfenotipo
normale
TAB
perso al
follow up
TAB
TAB/
segniclinici
FU fenotipo
normale
Risultati (Tab.1)
Trisomia 21
formula trofoblasto casi
mesoderma
liquido amniotico (LA)
47
+21
70 confermato coltura
46/47
+21
6 non conferm coltura
non confermato LA
conferm LA mos
46
XX
3 conferm coltura mos
1 confermato coltura
(47,+21)
1 non conferm coltura
1 46/47,+21 coltura
46
XY
1
46/47,+21 coltura
follow up
TAB
confermato LA
46/47,+21 LA
46,XY LA
FUfenotipo
normale
TAB
perso al
follow up
TAB
TAB/
segniclinici
FU fenotipo
normale
Risultati (Tab.1)
Trisomia 18
formula trofoblasto casi
47
+18
46XX
mesoderma
liquido amniotico (LA)
16
confermato coltura
2
47,XX,+18
47,XX,+18 LA
follow up
TAB
46/47
+18
6
non conferm coltura
non confermato LA
46/47
+18
1
conferm coltura
confermato LA
markersUS
FU fenotipo
norma
igroma cistico
Risultati (Tab.1)
Trisomia 18
formula trofoblasto casi
47
+18
46XX
mesoderma
liquido amniotico (LA)
16
confermato coltura
2
47,XX,+18
47,XX,+18 LA
follow up
TAB
46/47
+18
6
non conferm coltura
non confermato LA
46/47
+18
1
conferm coltura
confermato LA
markersUS
FU fenotipo
norma
igroma cistico
Risultati (Tab.1)
Trisomia 18
formula trofoblasto casi
47
+18
46XX
mesoderma
liquido amniotico (LA)
16
confermato coltura
2
47,XX,+18
47,XX,+18 LA
follow up
TAB
46/47
+18
6
non conferm coltura
non confermato LA
46/47
+18
1
conferm coltura
confermato LA
markersUS
FU fenotipo
norma
igroma cistico
Risultati (Tab.1)
Trisomia 18
formula trofoblasto casi
47
+18
46XX
mesoderma
liquido amniotico (LA)
follow up
16
confermato coltura
TAB
2
47,XX,+18
47,XX,+18 LA
markersUS
FU fenotipo
normale
igroma cistico
46/47
+18
6
non conferm coltura
non confermato LA
46/47
+18
1
conferm coltura
confermato LA
Risultati (Tab.1)
Trisomia 18
formula trofoblasto casi
47
+18
46XX
mesoderma
liquido amniotico (LA)
follow up
16
confermato coltura
TAB
2
47,XX,+18
47,XX,+18 LA
markersUS
FU fenotipo
normale
igroma cistico
46/47
+18
6
non conferm coltura
non confermato LA
46/47
+18
1
conferm coltura
confermato LA
Risultati (Tab.1)
Trisomia 18
formula trofoblasto casi
47
+18
46XX
mesoderma
liquido amniotico (LA)
16
confermato coltura
2
47,XX,+18
47,XX,+18 LA
follow up
TAB
46/47
+18
6
non conferm coltura
non confermato LA
46/47
+18
1
conferm coltura
confermato LA
markersUS
FU fenotipo
norma
igroma cistico
Tutti i casi di trisomia 18 a
mosaico dimostratisi veri nel
feto erano accompagnati da
anomalie ecografiche rilevanti,
onfalocele e igroma cistico
Risultati (Tab.1)
Trisomia 13
formula trofoblasto casi
mesoderma
liquido amniotico (LA)
47
+13
2
conferm coltura mos
47
47
+13
+13
5
1
confermato coltura
non conferm coltura
non confermato LA
46/47
+13
7
non conferm coltura
non confermato LA
follow up
conferm LA mos
post TAB
TAB
FU fenotipo
norma
FU fenotipo
norma
Risultati (Tab.1)
Trisomia 13
formula trofoblasto casi
mesoderma
liquido amniotico (LA)
47
+13
2
conferm coltura mos
47
47
+13
+13
5
1
confermato coltura
non conferm coltura
non confermato LA
46/47
+13
7
non conferm coltura
non confermato LA
follow up
conferm LA mos
post TAB
TAB
FU fenotipo
normale
FU fenotipo
normale
Risultati (Tab.1)
Trisomia 13
formula trofoblasto casi
mesoderma
liquido amniotico (LA)
47
+13
2
conferm coltura mos
47
47
+13
+13
5
1
confermato coltura
non conferm coltura
non confermato LA
46/47
+13
7
non conferm coltura
non confermato LA
follow up
conferm LA mos
post TAB
TAB
FU fenotipo
normale
FU fenotipo
normale
Risultati (Tab.1)
Trisomia 13
formula trofoblasto casi
mesoderma
liquido amniotico (LA)
47
+13
2
conferm coltura mos
47
47
+13
+13
5
1
confermato coltura
non conferm coltura
non confermato LA
46/47
+13
7
non conferm coltura
non confermato LA
follow up
conferm LA mos
post TAB
TAB
FU fenotipo
normale
FU fenotipo
normale
Risultati (Tab.1)
Altre trisomie omogenee
formula trofoblasto casi
mesoderma
liquido amniotico (LA)
follow up
47
47
+10
+10
1
1
confermato coltura confermato cute post TAB
confermato coltura
non confermato LA
47
+15
2
non conferm coltura
47
+15
1
47
47
+16
+16
1
1
confermato coltura
non conferm coltura
non confermato LA
non confermato LA
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
47
47
+20
+20
2
1
conferm coltura mos
non conferm coltura
non confermato LA
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
47
47
+ESAC
+ESAC
1
2
failed coltura
confermato coltura
confermato LA (DN)
confermato LA (DN)
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
non confermato LA
ongoing
1/UPD-/fenotipo
normale
confermato LA post SAB
Risultati (Tab.1)
Altre trisomie omogenee
formula trofoblasto casi
mesoderma
liquido amniotico (LA)
follow up
47
47
+10
+10
1
1
confermato coltura confermato cute post TAB
confermato coltura
non confermato LA
47
+15
2
non conferm coltura
47
+15
1
47
47
+16
+16
1
1
confermato coltura
non conferm coltura
non confermato LA
non confermato LA
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
47
47
+20
+20
2
1
conferm coltura mos
non conferm coltura
non confermato LA
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
47
47
+ESAC
+ESAC
1
2
failed coltura
confermato coltura
confermato LA (DN)
confermato LA (DN)
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
non confermato LA
ongoing
1/UPD-/fenotipo
normale
confermato LA post SAB
Risultati (Tab.1)
Altre trisomie omogenee
formula trofoblasto casi
mesoderma
liquido amniotico (LA)
follow up
47
47
+10
+10
1
1
confermato coltura confermato cute post TAB
confermato coltura
non confermato LA
47
+15
2
non conferm coltura
47
+15
1
47
47
+16
+16
1
1
confermato coltura
non conferm coltura
non confermato LA
non confermato LA
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
47
47
+20
+20
2
1
conferm coltura mos
non conferm coltura
non confermato LA
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
47
47
+ESAC
+ESAC
1
2
failed coltura
confermato coltura
confermato LA (DN)
confermato LA (DN)
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
non confermato LA
ongoing
1/UPD-/fenotipo
normale
confermato LA post SAB
Risultati (Tab.1)
Altre trisomie omogenee
formula trofoblasto casi
mesoderma
liquido amniotico (LA)
follow up
47
47
+10
+10
1
1
confermato coltura confermato cute post TAB
confermato coltura
non confermato LA
47
+15
2
non conferm coltura
47
+15
1
47
47
+16
+16
1
1
confermato coltura
non conferm coltura
non confermato LA
non confermato LA
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
47
47
+20
+20
2
1
conferm coltura mos
non conferm coltura
non confermato LA
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
47
47
+ESAC
+ESAC
1
2
failed coltura
confermato coltura
confermato LA (DN)
confermato LA (DN)
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
non confermato LA
ongoing
1/UPD-/fenotipo
normale
confermato LA post SAB
Risultati (Tab.1)
Altre trisomie omogenee
formula trofoblasto casi
mesoderma
liquido amniotico (LA)
follow up
47
47
+10
+10
1
1
confermato coltura confermato cute post TAB
confermato coltura
non confermato LA
47
+15
2
non conferm coltura
47
+15
1
47
47
+16
+16
1
1
confermato coltura
non conferm coltura
non confermato LA
non confermato LA
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
47
47
+20
+20
2
1
conferm coltura mos
non conferm coltura
non confermato LA
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
47
47
+ESAC
+ESAC
1
2
failed coltura
confermato coltura
confermato LA (DN)
confermato LA (DN)
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
non confermato LA
ongoing
1/UPD-/fenotipo
normale
confermato LA post SAB
Risultati (Tab.1)
Altre trisomie omogenee
formula trofoblasto casi
mesoderma
liquido amniotico (LA)
follow up
47
47
+10
+10
1
1
confermato coltura confermato cute post TAB
confermato coltura
non confermato LA
47
+15
2
non conferm coltura
47
+15
1
47
47
+16
+16
1
1
confermato coltura
non conferm coltura
non confermato LA
non confermato LA
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
47
47
+20
+20
2
1
conferm coltura mos
non conferm coltura
non confermato LA
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
47
47
+ESAC
+ESAC
1
2
failed coltura
confermato coltura
confermato LA (DN)
confermato LA (DN)
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
non confermato LA
ongoing
1/UPD-/fenotipo
normale
confermato LA post SAB
Risultati (Tab.1)
Altre trisomie a mosaico
formula trofoblasto casi
mesoderma
46/47
46/47
46/47
46/47
46/47
46/47
+3
+8
+22
+7
+9
+12
2
1
2
1
1
1
non conferm coltura
non conferm coltura
non conferm coltura
confermato coltura
failed coltura
non conferm coltura
46/47
+ESAC
1
1
1
1
1
1
confermato coltura
confermato coltura
failed coltura
non conferm coltura
non conferm coltura
confermato coltura
46/47
46/47
ish18+invdup15
liquido amniotico (LA)
follow up
non confermato LA
non confermato LA
non confermato LA
non confermato LA
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
no UPD; FU normale
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
non confermato LA
non confermato LA
46/47,+18
non confermato LA
confermato LA
materno
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
perso al follow up
FU fenotipo normale
perso al follow up
Risultati (Tab.1)
Altre trisomie a mosaico
formula trofoblasto casi
mesoderma
46/47
46/47
46/47
46/47
46/47
46/47
+3
+8
+22
+7
+9
+12
2
1
2
1
1
1
non conferm coltura
non conferm coltura
non conferm coltura
confermato coltura
failed coltura
non conferm coltura
46/47
+ESAC
1
1
1
1
1
1
confermato coltura
confermato coltura
failed coltura
non conferm coltura
non conferm coltura
confermato coltura
46/47
46/47
ish18+invdup15
liquido amniotico (LA)
follow up
non confermato LA
non confermato LA
non confermato LA
non confermato LA
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
no UPD; FU normale
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
non confermato LA
non confermato LA
46/47,+18
non confermato LA
confermato LA
materno
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
perso al follow up
FU fenotipo normale
perso al follow up
Risultati (Tab.1)
Altre trisomie a mosaico
formula trofoblasto casi
mesoderma
46/47
46/47
46/47
46/47
46/47
46/47
+3
+8
+22
+7
+9
+12
2
1
2
1
1
1
non conferm coltura
non conferm coltura
non conferm coltura
confermato coltura
failed coltura
non conferm coltura
46/47
+ESAC
1
1
1
1
1
1
confermato coltura
confermato coltura
failed coltura
non conferm coltura
non conferm coltura
confermato coltura
46/47
46/47
ish18+invdup15
liquido amniotico (LA)
follow up
non confermato LA
non confermato LA
non confermato LA
non confermato LA
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
no UPD; FU normale
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
non confermato LA
non confermato LA
46/47,+18
non confermato LA
confermato LA
materno
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
perso al follow up
FU fenotipo normale
perso al follow up
Risultati (Tab.1)
Altre trisomie a mosaico
formula trofoblasto casi
mesoderma
46/47
46/47
46/47
46/47
46/47
46/47
+3
+8
+22
+7
+9
+12
2
1
2
1
1
1
non conferm coltura
non conferm coltura
non conferm coltura
confermato coltura
failed coltura
non conferm coltura
46/47
+ESAC
1
1
1
1
1
1
confermato coltura
confermato coltura
failed coltura
non conferm coltura
non conferm coltura
confermato coltura
46/47
46/47
ish18+invdup15
liquido amniotico (LA)
follow up
non confermato LA
non confermato LA
non confermato LA
non confermato LA
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
no UPD; FU normale
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
non confermato LA
non confermato LA
46/47,+18
non confermato LA
confermato LA
materno
FU fenotipo normale
FU fenotipo normale
perso al follow up
FU fenotipo normale
perso al follow up
Risultati (Tab.2)
Aberrazioni gonosomiche
citotrofoblasto
casi
coltura mesoderma
follow up
45,X /46,XY
5
46,XY
maschio normale
45,X /46,XX
2
46,XX
LA 46,XX
45,X /46,XX /47,XX,+21
1 (2/27/1)
45,X
1
45,X / 46,XX
perso al follow up
45,X
6
45,X
3/6 NT > 4 - TAB
45,X
1
46,X,dic(Y)(q11.2)
LA 45,X / 46,X,dic(Y)(q11.2)
46,XY
trofoblastoFISH 14/300Y+;TAB
LA 46,XX
45,X
1
47,XXY
2
confermato
47,XYY
3
confermato
47, XXX
1
confermato
Risultati (Tab.2)
Aberrazioni gonosomiche
citotrofoblasto
casi
coltura mesoderma
follow up
45,X /46,XY
5
46,XY
maschio normale
45,X /46,XX
2
46,XX
LA 46,XX
45,X /46,XX /47,XX,+21
1 (2/27/1)
45,X
1
45,X / 46,XX
perso al follow up
45,X
6
45,X
3/6 NT > 4 - TAB
45,X
1
46,X,dic(Y)(q11.2)
LA 45,X / 46,X,dic(Y)(q11.2)
46,XY
trofoblastoFISH 14/300Y+;TAB
LA 46,XX
45,X
1
47,XXY
2
confermato
47,XYY
3
confermato
47, XXX
1
confermato
Risultati (Tab.2)
Aberrazioni gonosomiche
citotrofoblasto
casi
coltura mesoderma
follow up
45,X /46,XY
5
46,XY
maschio normale
45,X /46,XX
2
46,XX
LA 46,XX
45,X /46,XX /47,XX,+21
1 (2/27/1)
45,X
1
45,X / 46,XX
perso al follow up
45,X
6
45,X
3/6 NT > 4 - TAB
45,X
1
46,X,dic(Y)(q11.2)
LA 45,X / 46,X,dic(Y)(q11.2)
46,XY
trofoblastoFISH 14/300Y+;TAB
LA 46,XX
45,X
1
47,XXY
2
confermato
47,XYY
3
confermato
47, XXX
1
confermato
Risultati (Tab.2)
Aberrazioni gonosomiche
citotrofoblasto
casi
coltura mesoderma
follow up
45,X /46,XY
5
46,XY
maschio normale
45,X /46,XX
2
46,XX
LA 46,XX
45,X /46,XX /47,XX,+21
1 (2/27/1)
45,X
1
45,X / 46,XX
perso al follow up
45,X
6
45,X
3/6 NT > 4 - TAB
45,X
1
46,X,dic(Y)(q11.2)
LA 45,X / 46,X,dic(Y)(q11.2)
46,XY
trofoblastoFISH 14/300Y+;TAB
LA 46,XX
45,X
1
47,XXY
2
confermato
47,XYY
3
confermato
47, XXX
1
confermato
Risultati (Tab.3)
Traslocazioni reciproche apparentemente bilanciate
formula cromosomica
(trofoblasto e coltura)
familiarità
controllo citogenetica
su LA o tessuto
follow up
46,XX t (13;19) (p11;p11)
46,XX t (1;18) (p32;q11.2)
46,XX t (4;10) (q33;q22)
dn
dn
dn
confermato
confermato
confermato
fenotipo normale
fenotipo normale
fenotipo normale
Risultati (Tab.3)
Aberrazioni cromosomiche strutturali sbilanciate
formula cromosomica
(trofoblasto e coltura)
familiarità
controllo citogenetica
su LA o tessuto
follow up
46,XX/46,XX -11+der(11) t(11p;?)
dn
confermato
malformazioni TAB 20w
46,XY-18+der(18) t(3;18)(p21.3;p11.3)pat
confermato
malformazioni TAB 14w
46,XY/46,XY-15+der(15)t(15p;?)
dn
46, XY
fenotipo normale
46,XY-14+der(18) t(14;18)(q21;q12)
pat
confermato
malformazioni TAB 20w
46,XY-20+der(20)dup20(p11.1p11.2) dn
confermato
no malformaz TAB 11w
46,XYring(15q)
dn
confermato
malformazioni TAB 20w
46,XXdel5(p13)
dn
46,XX
fenotipo normale
46,XX
dn
46, XX, del (5)(p12) SP
cri du chat/
morte perinatale
Risultati (Tab.3)
Aberrazioni cromosomiche strutturali sbilanciate
formula cromosomica
(trofoblasto e coltura)
familiarità
controllo citogenetica
su LA o tessuto
follow up
46,XX/46,XX -11+der(11) t(11p;?)
dn
confermato
malformazioni TAB 20w
46,XY-18+der(18) t(3;18)(p21.3;p11.3)pat
confermato
malformazioni TAB 14w
46,XY/46,XY-15+der(15)t(15p;?)
dn
46, XY
fenotipo normale
46,XY-14+der(18) t(14;18)(q21;q12)
pat
confermato
malformazioni TAB 20w
46,XY-20+der(20)dup20(p11.1p11.2) dn
confermato
no malformaz TAB 11w
46,XYring(15q)
dn
confermato
malformazioni TAB 20w
46,XXdel5(p13)
dn
46,XX
fenotipo normale
46,XX
dn
46, XX, del (5)(p12) SP
cri du chat/
morte perinatale
Risultati (Tab.3)
Aberrazioni cromosomiche strutturali sbilanciate
formula cromosomica
(trofoblasto e coltura)
familiarità
controllo citogenetica
su LA o tessuto
follow up
46,XX/46,XX -11+der(11) t(11p;?)
dn
confermato
malformazioni TAB 20w
46,XY-18+der(18) t(3;18)(p21.3;p11.3)pat
confermato
malformazioni TAB 14w
46,XY/46,XY-15+der(15)t(15p;?)
dn
46, XY
fenotipo normale
46,XY-14+der(18) t(14;18)(q21;q12)
pat
confermato
malformazioni TAB 20w
46,XY-20+der(20)dup20(p11.1p11.2) dn
confermato
no malformaz TAB 11w
46,XYring(15q)
dn
confermato
malformazioni TAB 20w
46,XXdel5(p13)
dn
46,XX
fenotipo normale
46,XX
dn
46, XX, del (5)(p12) SP
cri du chat/
morte perinatale
Risultati (Tab.3)
Aberrazioni cromosomiche strutturali sbilanciate
formula cromosomica
(trofoblasto e coltura)
familiarità
controllo citogenetica
su LA o tessuto
follow up
46,XX/46,XX -11+der(11) t(11p;?)
dn
confermato
malformazioni TAB 20w
46,XY-18+der(18) t(3;18)(p21.3;p11.3)pat
confermato
malformazioni TAB 14w
46,XY/46,XY-15+der(15)t(15p;?)
dn
46, XY
fenotipo normale
46,XY-14+der(18) t(14;18)(q21;q12)
pat
confermato
malformazioni TAB 20w
46,XY-20+der(20)dup20(p11.1p11.2) dn
confermato
no malformaz TAB 11w
46,XYring(15q)
dn
confermato
malformazioni TAB 20w
46,XXdel5(p13)
dn
46,XX
fenotipo normale
46,XX
dn
46, XX, del (5)(p12) SP
cri du chat/
morte perinatale
Risultati (Tab.3)
Traslocazioni robertsoniane
formula cromosomica
(trofoblasto e coltura)
familiarità controllo citogenetica
su LA o tessuto
follow up
45,XX o XYder(13;14)(q10;q10)
mat
6/confermato
4/UPDnegativa/
fenotipo normale
45,XX o XYder(13;14)(q10;q10)
pat
3/confermato
1/UPDnegativa/
fenotipo normale
45,XYishder(15;21)(q10;q10)
dn
ishder(15;22)(q10;q10)
ishder (15;22)
(q10;q10)UPDneg
fenotipo normale
Risultati (Tab.3)
Traslocazioni robertsoniane
formula cromosomica
(trofoblasto e coltura)
familiarità controllo citogenetica
su LA o tessuto
follow up
45,XX o XYder(13;14)(q10;q10)
mat
6/confermato
4/UPDnegativa/
fenotipo normale
45,XX o XYder(13;14)(q10;q10)
pat
3/confermato
1/UPDnegativa/
fenotipo normale
45,XYishder(15;21)(q10;q10)
dn
ishder(15;22)(q10;q10)
ishder (15;22)
(q10;q10)UPDneg
fenotipo normale
Risultati (Tab.3)
Traslocazioni robertsoniane
formula cromosomica
(trofoblasto e coltura)
familiarità controllo citogenetica
su LA o tessuto
follow up
45,XX o XYder(13;14)(q10;q10)
mat
6/confermato
fenotipo normale
4/UPDnegativa/
45,XX o XYder(13;14)(q10;q10)
pat
3/confermato
1/UPDnegativa/
fenotipo normale
45,XYishder(15;21)(q10;q10)
dn
ishder(15;22)(q10;q10)
ishder (15;22)
(q10;q10)UPDneg
fenotipo normale
Discussione
Trisomie autosomiche omogenee

Le trisomie 21 e 18 omogenee senza discrepanze tra
trofoblasto e mesoderma, confrontate con trials internazionali,
consentono di non dubitare dell’affidabilità
nell’identificazione di queste due comuni trisomie.

In due casi di trisomia 18 il trofoblasto mostrava cariotipo
normale, mentre gli altri tessuti (mesoderma e liquido
amniotico) mostravano trisomia 18 omogenea. Tali casi
presentavano segni ecografici importanti: igroma ed
onfalocele.
La trisomia 13 ha mostrato un caso, sugli 8 totali, ove il
trofoblasto positivo non ha trovato riscontro sugli altri tessuti.

Discussione
Trisomie autosomiche omogenee

Le trisomie 10 e 15 in un caso su due si sono dimostrate
rappresentative della condizione fetale sia che fossero viste
solo nel trofoblasto o nel trofoblasto e mesoderma.

Le trisomie 16 e 20 non sono mai state confermate nel feto.

Nel campo delle trisomie autosomiche omogenee:


8 casi sono falsi positivi nel trofoblasto (talvolta anche
nel mesoderma), con la esclusione solo delle trisomie 21
e 18;
2 casi falsi negativi in cui il trofoblasto manca di
identificare la trisomia 18 omogenea.
Discussione
Trisomie autosomiche a mosaico

Trisomia 21 a mosaico:




Trisomia 18 a mosaico:



4 casi risultano veri mosaicismi;
7 casi risultano falsi positivi, di cui 6 hanno la trisomia confinata al
trofoblasto, uno confinata al mesoderma;
Un caso falso negativo con trofoblasto a cariotipo normale, mesoderma
e liquido amniotico a mosaico.
Un caso risulta vero mosaicismo (igroma cistico);
6 casi risultano falsi positivi con trisomia confinata al trofoblasto.
Tutti gli altri casi di mosaicismo per aberrazioni numeriche
autosomiche trovate nel trofoblasto in varia misura confermate
o meno nella coltura di mesoderma, non vennero confermate
sul liquido amniotico ed ebbero follow up normale.
Discussione
Cromosomi marcatori (ESAC)

Marcatori sovranumerari omogenei:


3 casi de novo confermati su liquido amniotico ebbero
fenotipo normale alla nascita, ma non furono disponibili
per ulteriori studi;
Marcatori sovranumerari a mosaico:




un caso di origine materna;
3 casi non confermati;
un caso +invdup(15) confermato;
un caso complesso dove un marcatore non derivativo 18 confinato al
trofoblasto del villo si associò ad un mosaicismo per trisomia 18 nel
liquido amniotico: il caso fu perso al follow up.
Discussione
Anomalie gonosomiche dei cromosomi

Corredi a 47 cromosomi:


Monosomia X:




trisomia X, maschio a disomia X o Y, hanno trovato sempre conferma
fetale;
6 casi hanno trovato conferma nel mesoderma;
2 casi hanno mostrato mosaicismo con una linea maschile (cromosoma
Y normale o derivativo);
un caso ha mostrato mosaicismo con una linea 46,XX.
Anomalie gonosomiche a mosaico:

8 casi di mosaicismo nel trofoblasto non hanno trovato conferma nella
coltura di mesoderma;
Discussione
Riarrangiamenti strutturali

Traslocazione reciproca bilanciata:


3 casi de novo hanno trovato conferma sui tessuti fetali.
Riarrangiamenti sbilanciati:



5 casi hanno trovato conferma sui tessuti fetali;
un caso di derivativo 15 a mosaico e un caso con delezione parziale del
5p non sono stati confermati su liquido amniotico con fenotipo normale
(falsi positivi);
Un caso con cariotipo femminile normale identificato in trofoblasto e
coltura ha rivelato alla nascita delezione 5p12 su sangueperiferico e
sindrome Cri du Chat con morte perinatale (falso negativo). Fig. 1-2
Fig.1. Metafase 46,XX (QFQ)
da preparato semidiretto di
trofoblasto. I cromosomi 5 a
confronto con del(5)(p12) del
cariotipo postnatale (GTG)
Fig.2. Metafase 46,XX (QFQ)
da preparato colture di
mesoderma. I cromosomi 5 a
confronto con del(5)(p12) del
cariotipo postnatale (GTG)
Discussione
Riarrangiamenti strutturali

Traslocazioni robertsoniane:


9 casi familiari con t(13;14), negativi alla UPD 14 in 5 casi esaminati,
hanno mostrato sempre follow up normale;
un caso discordante fra villo coriale, liquido amniotico e sangue
neonatale per una traslocazione tra un cromosoma 15 e 21 nel villo, che
era 15 e 22 negli altri tessuti ha mostrato fenotipo normale.
Conclusioni

Questa casistica decennale di 10000 casi mette in luce
il principale problema biologico per l’affidabilità
diagnostica dei villi coriali: il possibile confinamento
placentare del cariotipo individuato con l’analisi dei
tessuti del trofoblasto e a volte anche del mesoderma.

4 casi sui 10000 sono risultati normali nel trofoblasto
ed un caso anche su coltura, si trattava di:



due trisomie 18;
un mosaicismo per trisomia 21;
una delezione 5p – Cri du Chat;
Conclusioni

Le aberrazioni numeriche autosomiche trovate sui villi
coriali di questa serie mostrano immediata significatività solo
per le trisomie comuni 18 e 21, mentre gli altri casi di trisomie
omogenee necessitano di ulteriori controlli a prescindere dal
dato del mesoderma.
La presenza di 2 falsi negativi
di trisomia 18 limita l’utilizzo
del villo coriale come
strumento rapido di verifica di
dati ultrasonografici allarmanti
Conclusioni

Fra le aberrazioni numeriche a mosaico sul trofoblasto solo la
trisomia 21 sembra meritare attenzione circa la conferma su
tessuti diversi e/o fetali, infatti il cariotipo normale su coltura
non esclude la presenza di tale aberrazione nel feto.
Un caso di falso negativo per
la trisomia 21 a mosaico vera,
esalta la necessità del cariotipo
sul mesoderma come dato
integrato alla diagnosi
cromosomica sui villi coriali
Conclusioni

Gran parte delle trisomie autosomiche meno frequenti e gran
parte dei mosaicismi si sono dimostrate confinate alla
placenta, così come i mosaicismi per le anomalie numeriche
dei gonosomi.

Anche gli riarrangiamenti strutturali non sfuggono al rischio
del confinamento placentare essendosi dimostrati in 2 casi su
10 della nostra serie.
Conclusioni

Nella coscienza delle problematiche biologiche insite nell’uso
diagnostico di un tessuto annesso al feto, ma con una storia
embrionale indipendente, l’analisi cromosomica sui villi
coriali si dimostra strumento efficace e rapido adatto nelle
gravidanze a rischio dove la tempestività della conoscenza del
cariotipo supporta il managemant della gravidanza stessa.

La attenta e completa applicazione dei protocolli diagnostici
deve essere confortata da una completa informazione dei
pazienti e dei loro consulenti sulle problematiche ed i limiti
insiti nell’uso del tessuto dei villi coriali nella diagnosi
cromosomica fetale allo scopo di evitare incaute e totalizzanti
aspettative.
Un grazie particolare al Dr. Lamberto Camurri
ed ai colleghi del laboratorio HI-TECH di
Parma, ai genetisti ed ai tecnici dei laboratori
ARCELLA e BIOLAB di Padova e a tutti i
colleghi Ostetrici che con il loro insostituibile
lavoro hanno reso possibile questo studio.