CORSO TEORICO-PRATICO DI EMATOLOGIA DI LABORATORIO:
IL REFERTO EMATOLOGICO
Prelievo, allestimento e osservazione dello
striscio di sangue periferico
Elisabetta Casali
• Costituito da un vetrino per microscopia ricoperto da un sottile ed omogeneo
strato di sangue venoso, colorato con un colorante ed esaminato in microscopia
ottica
• Usato per complementare ed implementare le informazioni ottenute dagli
emocromocitometri
Fornisce informazioni quantitative riguardo alle cellule
ematiche e può identificare campioni con cellule anomale
Globuli Rossi (RBC)
• variazioni di volume: micro- normo- macro-citosi
• variazioni di colore: ipo- normo-cromia
• variazioni di forma: poichilocitosi
• distribuzione: isolati, impilati, agglutinati
• anormalità: policromasia (RBC bluastri), eritroblasti, corpi di Howell-Jolly, Corpi di
Heinz, parassiti
Globuli Bianchi (WBC)
• stima numerica: leucopenia - leucocitosi
• variazioni di volume
• aspetto del citoplasma: colore, quantità rispetto al nucleo, granuli (corpi di Dohle,
formazioni tondeggianti grigio-blu nei neutrofili), corpi inclusi (parassiti, batteri)
• aspetto del nucleo: forma, colore, struttura della cromatina e dei nucleoli
• conteggio differenziale
Piastrine (PLT)
• stima numerica: adeguata, inadeguata, aumentata
• variazioni di volume: macropiastrine
• presenza di aggregati piastrinici
La corretta identificazione delle cellule anomale richiede:
• un microscopista esperto
• uno striscio di sangue ben eseguito
• un microscopio a luce con buone caratteristiche ottiche
Metodo standard per la preparazione dello striscio periferico:
tecnica push slide sviluppata da Maxwell Wintrope
Adagiare una gocciolina di sangue di 2-3 mm verso l’estremita del
vetrino dal lato della smerigliatura
Poggiare il margine del vetrino spreader sul vetrino inferiore di fronte
alla goccia di sangue
Ritrarre lo spreader fino a toccare la goccia di sangue.
Lasciare che il sangue diffonda per capillarità lungo il margine dello
spreader
Spingere in avanti lo spreader mantenendo un angolo di circa 30
gradi ed un movimento uniforme
Lasciare asciugare e colorare
UniCel DxH Slidemaker Stainer
Coulter Cellular Analysis SystemUniCell
Dispositivo automatizzato per l’esecuzione dello striscio ematico
Funzioni
 Aspira un campione di sangue intero
 Esegue uno striscio sottile di sangue su una
lastrina per microscopio
 Appone diverse sostanze fissanti, coloranti,
tamponi e soluzioni di lavaggio
Modulo di trasporto del campione (STM)
Sistema di trasporto magnetico per spostare le cassette che contengono i
campioni
• Stazione di miscelazione: il campione viene miscelato attaverso 11 oscillazioni
• Modulo di aspirazione del campione: il campione viene aspirato da provette
campione da sangue intero (con cappuccio o fiale aperte)
• Sonda di dispensazione:
1. Predispensa 25 µl di sangue nella coppetta di predispensazione
2. Dispensa una goccia di sangue di circa 4 µl su una lastrina pulita per lo
striscio
Al termine delle due operazioni, la sonda di dispensazione viene lavata ed è pronta
per il campione successivo
Modulo Slidemaker
Modulo Stainer
Cassetto di coloranti contenenti un vassoio con 5 bagni
La colorazione viene ottimizzata
in base a protocolli di colorazione predefiniti
COULTER TruColor TM Wright Stain:
miscela di più coloranti che assicurano una colorazione omogenea e buona riproducibilità
(Romanowski, Wright, Giemsa, Wright-Giemsa modificata e My-GrunWald)
Il colorante Azure B (colorazione blu/viola) è specifico per le strutture cellulari acide:
Acidi nucleici e nucleoproteine
Granuli e proteine acide dei basofili
Granuli dei neutrofili (debolmente acidi)
Il colorante Eosina (colorazione rosa/arancio) è specifico per le strutture cellulari basiche:
Costituenti citoplasmatici
Emoglobina
Granuli degli eosinofili
Colorazione di Wright
1. Metanolo e colorante di Wright per 5’
(fissaggio e disidratazione delle cellule del sangue per preservarne la
morfologia)
2. Colorante di Wright , diluito 1:10 con tampone, distribuito sul vetrino per 6’
(colorazione dei vari costituenti cellulari)
3. Lavaggio con acqua/metanolo (75:25) e acqua (100%)
Come si presentano le cellule dopo la colorazione
Globuli rossi:
colorazione viola(chiaro)/grigio
Neutrofili:
nucleo blu/viola
Basofili
nucleo nascosto dai granuli di colore blu
Eosinofili :
nucleo nascosto dai granuli di colore rosa/arancio
Linfociti:
nucleo molto grande di colore blu
Monociti:
grandi con nucleo blu
Caratteristiche di uno striscio di sangue
Procedure di pulizia
Grazie per l’attenzione
Elisabetta Casali