Analisi dell’espressione di
beta-sinucleina in Anolis carolinensis
mediante metodiche di Western blot
Candidata: Chiara Adamo
Relatore: Prof. Mattia Toni
Le Sinucleine
α-sin
β-sin
Scoperte
nel 1988 da
Marateaux in
γ-sin
T. californica
SINUCLEINOPATIE:
(Fujioka et al., 2013)

Morbo di Parkinson

Demenza da corpi di Lewy

Atrofia multisistemica
(Maroteaux et al., 1988)
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Variabilità del numero di isoforme
delle sinucleine nei pesci
Lampreda
(Petromyzon marinus)
• γ-sin (DY)
• γ-sin (FD)
• “sin lampreda 3”
Pesce palla
(Takifugu rubripes)
• una α-sin
• una β-sin
• due per la gamma:
γ1- e γ2- sin.
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Zebrafish
(Danio rerio)
• Manca α-sin
• una β-sin
• due per la gamma:
γ1- e γ2-sin
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“Fish Sinucleins: An Update”
Isoforme:
;
;
(Toni and Cioni, 2015)
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Anolis carolinensis scelto come modello
Omologia: 86%
• disponibilità di un genoma
sequenziato
Omologia: 89%
• alto grado di identità con le
sinucleine umane
• facile reperibilità
• dimensioni contenute
• resistenza in cattività
Omologia: 68% per X1 e 69% per X2
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Anticorpo Primario: Anticorpo monoclonale commerciale “anti-β-sin”
sviluppato in topo contro l’epitopo di ratto 107-118 aa
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Analisi dell’espressione di β-sin in A. carolinensis
tramite Western blot
C: cervello; MS: midollo spinale; O: occhi; M: muscoli;
I: intestino; F: fegato; P: polmone; Pe: pelle
R: cervello di ratto (controllo positivo)
•
L’anticorpo anti β-sin riconosce una banda
con il peso molecolare di 15-16 kDa nei
campioni di cervello, midollo spinale e
occhio
•
Il peso molecolare apparente della β-sin di
lucertola corrisponde a quello della banda
relativa al cervello di ratto
•
Buona espressione di β-sin nel SNC di
Anolis carolinensis
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in Anolis carolinensis mediante metodiche
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T: telencefalo; TO: tetto ottico; Di: diencefalo; Ce: cervelletto;
TE: tronco encefalico; MS: midollo spinale.
R: cervello di ratto (controllo positivo)
•
l’espressione della β-sin è rilevata in tutte le
regioni encefaliche
•
Possibile ruolo fisiologico di β-sin associato
in particolare all’area del SNC
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 L’anticorpo commerciale scelto, “anti-β-sin”, riconosce in
modo specifico la β-sin di Anolis carolinensis.
 La β-sin risulta conservata nei rettili ed espressa a livello
del SNC, suggerendo un ruolo importante di questa
proteina nei neuroni o nelle cellule della glia nei rettili e
un possibile coinvolgimento nella regolazione delle
trasmissioni sinaptiche anche nei vertebrati non
mammiferi.
 I risultati ottenuti possono rappresentare una base per
futuri studi di immunoistochimica sui pattern temporali e
spaziali dell’espressione delle sinucleine nei rettili con
l’obiettivo di identificare nuovi modelli animali per lo
studio delle sinucleinopatie.
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