S.I.MI.S.A.
STATO AVANZAMENTO LAVORI
SAL I – II - III
Il Progetto
“Strumenti Innovativi per il Miglioramento della Sicurezza
Alimentare”
BUDGET
Ricerca Industriale:
Sviluppo Sperimentale:
Formazione:
5.901.965 €
1.337.462 €
1.037.175 €
Obiettivo Generale
L’obiettivo generale del progetto è la messa a punto di strumenti innovativi e
affidabili per intervenire a livello di:
PREVENZIONE – CONTROLLO – CORREZIONE della contaminazione
al fine di contribuire alla realizzazione di un sistema integrato di sicurezza
lungo tutta la filiera.
Key foods pugliesi: uva e vino, frumento e altri cereali e derivati, ed un
insieme di prodotti freschi quali molluschi bivalvi, carni bovine, mozzarella e
prodotti ortofrutticoli.
Selezionati in base a:
rischio di contaminazione da differenti classi di contaminanti,
valenza economica e territoriale,
livello di interesse scientifico in termini di applicazione di tecnologie innovative.
Problematiche Tecnico-scientifiche
FILIERA
VITI-VINICOLA
FILIERA
CEREALICOLA
PRODOTTI
FRESCHI
Ocratossina A
Fitofarmaci
Allergeni
Brettanomyces
bruxellensis
Micotossine
Fitofarmaci
Funghi tossigeni
Bacilli
Insetti
Metalli pesanti
Pseudomonas spp.
Patogeni
emergenti
Listeria
Salmonella
Limiti imposti dalle normative – Esigenze reali delle imprese
RISULTATI ATTESI:
Metodi rapidi e avanzati per la rivelazione di contaminanti chimici.
Nuovi metodi per il rilevamento di microrganismi patogeni e alteranti.
Acquisizione di nuove conoscenze
Trasferimento tecnologico – Scale up industriale
Struttura del Progetto di Ricerca
% Avanzamento Rendicontazione per OR SAL I - II - III
45%
40%
39%
36%
35%
30%
25%
20%
18%
19%
18%
15%
12%
10%
5%
2%
0%
0%
OR1
OR2
OR3
OR4
OR5
OR6
OR7
OR8
% Avanzamento Rendicontazione per OS SAL I - II - III
90%
80%
76%
70%
60%
48%
50%
40%
39%
39%
40%
40%
30%
25%
21%
20%
18%
17%
18%
17%
9%
10%
3%
7%
2%
0%
0%
0%
OS 8.1
OS 8.2
OS 8.3
0%
OS 1.1
OS 2.1
OS 2.2
OS 2.3
OS 3.1
OS 3.2
OS 4.1
OS 5.1
OS 5.2
OS 5.3
OS 5.4
OS 6.1
OS 6.2
OS 7.1
OS 7.2
OS 7.3
Attività preliminari
OS 2.1: Messa a punto di metodiche di controllo per la •Università degli Studi di Foggia - DiSA
selezione delle uve per la vinificazione e per la
determinazione di ocratossina A in uva e vino
OS 4.1: Messa a punto di metodiche per il trattamento •ISPA-CNR (Bari)
di cariossidi di frumento con ozono gassoso e/o acqua •CDP srl
ozonizzata per prevenire la contaminazione da
microrganismi indesiderati e l'infestazione da insetti
OS 6.1: Messa a punto di un protocollo biotecnologico Università degli Studi di Bari, Dipartimento di Scienze
per ridurre i rischi di alterazione da Pseudomonas spp. del Suolo, della Pianta e degli Alimenti (DISSPA)
nelle mozzarelle
Centro Latte Stasi (a cui, a breve, subentrerà
Sanguedolce, Andria)
Agriplan, Bari
OS7.2: Messa a punto di un prototipo per la diagnosi
rapida di patogeni emergenti in molluschi bivalvi
•Università degli Studi di Foggia, SAFE
•Università degli Studi di Bari, Dipartimento di
Medicina Veterinaria
•BonassisaLab srl
Soggetto attuatore: D.A.Re. scrl
Avanzamento OS 2.1/ OS 4.1
Budget TOTALE OS 2.1
€ 325.208,00
€ 10,174.22
€ 315,033.78
Rendicontato
Budget TOTALE OS 4.1
€ 301.151,00
€ 6,324.63
€ 294,826.37
Residuo
Rendicontato
Residuo
Avanzamento OS 6.1//7.2
Budget TOTALE OS 6.1
€ 370.663,00
Budget TOTALE OS 7.2
€ 733.018,00
€
51,462.84
€ 31,738.81
€ 338,924.19
Rendicontato
€ 681,555.16
Residuo
Rendicontato
Residuo
OR 1 – Strumenti Preventivi Innovativi per la Riduzione del
Rischio di Microrganismi Alteranti in Vino
OS 1.1: Messa a punto di un protocollo biotecnologico per minimizzare
lo sviluppo di lieviti del genere Brettanomyces e per ridurre la
produzione e la presenza di etilfenoli nel vino
Partner:
 Università degli Studi di Foggia - Dipartimento Di Scienze Agrarie, degli Alimenti e
dell’Ambiente (SAFE)
 ISPA-CNR (Lecce)
Soggetto attuatore:
 D.A.Re. scrl
Avanzamento OS 1.1
90%
80%
Budget TOTALE OS 1.1
€ 439.928,00
76%
70%
60%
48%
50%
40%
39%
39%
40%
€ 172,531.67
40%
€ 267,396.33
30%
25%
21%
20%
18% 18%
17%
17%
9%
10%
3%
7%
2%
0%
0%
0%
OS
8.1
OS
8.2
OS
8.3
0%
OS
1.1
OS
2.1
OS
2.2
OS
2.3
OS
3.1
OS
3.2
OS
4.1
OS
5.1
OS
5.2
OS
5.3
OS
5.4
OS
6.1
OS
6.2
OS
7.1
OS
7.2
OS
7.3
Rendicontato
Residuo
Stato di avanzamento delle attività (al 30/04/2013)
 Task 1.1.1: Sviluppo di metodiche biotecnologiche e cromatografiche per l'analisi delle
dinamiche microbiche di Brettanomyces bruxellensis (M1-12)
- stato: completato
 Task 1.1.2: Studio dell’influenza dei parametri fisico-chimici relativi alle vinificazioni aziendali
sullo sviluppo di diversi ceppi di Brettanomyces bruxellensis isolati da vini pugliesi e sulla
connessa produzione di etil-derivati (M5-25)
- stato: in corso (50% completamento)
 Task 1.1.3: Studio di strategie di riduzione del rischio da Brettanomyces bruxellensis e
definizione di un protocollo di prevenzione (M9-27)
- stato: in corso (35% completamento)
OR
Mesi
Attività
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
22
24
26
OR1
OS 1.1
A1.1.1.a
A1.1.1.b
A1.1.2.a
A1.1.2.b
A1.1.2.c
A1.1.2.d
A1.1.3.a
A1.1.3.b
A1.1.3.c
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
28
30
32
34
36
Risultati Principali – Task 1.1.1 (UNIFG, CNR)
Task 1.1.1: Sviluppo di metodiche biotecnologiche e cromatografiche per
l'analisi delle dinamiche microbiche di Brettanomyces bruxellensis
 Selezione di ceppi di Brettanomyces bruxellensis in vini pugliesi e validazione della
metodica molecolare per l’identificazione e quantificazione rapida di B. bruxellensis in
vino
 Ottimizzazione di un metodo basato sull’applicazione dell’ HPLC per la quantificazione
degli acidi idrossicinnamici e dei corrispondenti vinil- ed etil-derivati in vino
Risultati Principali – Task 1.1.2 (UNIFG, CNR)
Task 1.1.2: Studio dell’influenza dei parametri fisico-chimici relativi alle
vinificazioni aziendali sullo sviluppo di diversi ceppi di Brettanomyces
bruxellensis isolati da vini pugliesi e sulla connessa produzione di etil-derivati
 Studio sulla relazione tra sviluppo di B. bruxellensis, produzione di etilderivati, e diversi
parametri chimico-fisici specifici delle vinificazioni svolte presso le aziende proponenti
 Analisi del trascrittoma di un ceppo di B. bruxellensis accresciuto in mosto-vino
Risultati Principali – Task 1.1.3 (UNIFG, CNR)
Task 1.1.3: Studio di strategie di riduzione del rischio da Brettanomyces
bruxellensis e definizione di un protocollo di prevenzione
 Protocollo di gestione delle risorse microbiche per la riduzione di B. bruxellensis e di
fenoli volatili (etil-derivati) da esso prodotti.
 Protocollo di utilizzo delle scorze cellulari di lieviti per la riduzione dei fenoli volatili
(etilderivati) prodotti da B. bruxellensis in vino.
D254
diethyl malate
diethyl succinate
ethyl lactate
monoethyl
succinate
Σ esters malolactic
2phenylethylacetate
3-hydroxyethylbutanoate
ethyl butanoate
ethyl decanoate
ethyl hexanoate
ethyl octanoate
ethyl vanillate
isoamyl acetate
Σ esters
1-butanol
2,3 butanediol
2,3 butanediol
2-phenylethanol
3-hexen-ol (E)
3-hexen-ol (Z)
hexanol
isoamylalcohols
isobutanol
propanol
Σ alcohols
2-methylpropanoic
acid
3-methyl butanoic
acid
benzoic acid
butanoic acid
decanoic acid
hexanoic acid
octanoic acid
phenylacetic acid
propanoic acid
Σ acids
acetoin
acetovanillone
benzaldehyde
butyrolactone
Σ other compounds
D254+VP41
D254+VP41 pFA D254+MLOne
D254+MLOne pFA Red F
mg*L-1
0,84
1,09
3,62
±Ds
0,17
0,34
1,47
mg*L-1
?
3,78
4,32
±Ds
0,58 4,83
10,37
0,09
10,90
19,00
0,01 0,65
0,09
1,20
0,17
0,28
0,24
0,28
0,27
0,03
0,28
7,76
0,41
0,06
0,03
0,01
0,01
0,02
0,01
0,03
0,02
0,45
0,20
0,43
0,06
0,04
0,01
17,21
0,01
0,02
0,16
85,34
2,80
2,56
0,01
0,01
0,01
9,81
0,07
mg*L-1
0,57
1,01
3,41
±Ds
0,11
0,85
1,28
1,17
6,16
0,05
0,22
105,96
0,28
0,64
0,45
0,85
0,56
0,07
0,57
14,42
0,46
3,32
1,20
36,51
0,02
0,03
0,15
128,62
8,97
14,15
193,44
mg*L-1
0,83
1,01
2,87
±Ds
0,41
0,18
0,74
mg*L-1
0,98
1,20
5,35
±Ds
0,10
0,32
0,41
mg*L
0,40
0,46
2,10
4,33
4,71
9,43
2,34
5,46
12,99
2,47
1,66
4,61
0,53
0,32
0,06
0,45
0,12
0,40
0,31
0,25
0,05
0,38
0,05
0,03
0,28
6,37
0,37
0,26
0,07
12,49
0,02
0,04
0,17
80,18
1,43
3,21
98,25
1,70
1,12
0,61
0,80
0,88
1,68
1,97
0,06
0,75
26,95
0,25 2,28
0,02 1,59
0,18 1,41
2,11 40,61
0,01 0,07
0,01 0,66
0,05 0,35
13,60 132,40
1,86 13,60
2,87 19,87
212,86
0,27
0,56
0,44
0,52
0,89
0,02
0,32
0,27
0,46
0,27
0,49
0,55
0,07
0,30
12,16
1,13 0,47
0,63 2,96
0,28 1,21
21,21 29,39
0,02 0,15
0,18 0,03
0,14 0,19
5,92 128,55
3,71 6,65
8,89 19,20
188,81
0,00
0,24
0,07
0,25
0,18
0,05
0,05
0,27
0,60
0,19
0,53
0,76
0,07
0,42
16,28
0,28 0,33
0,91 3,10
0,46 1,25
4,29 34,55
0,19 0,02
0,01 0,03
0,02 0,16
13,12 137,63
0,23 8,67
5,88 12,54
198,30
0,03
0,05
0,01
0,03
0,16
0,06
0,03
0,04
2,96
0,38
1,33
0,00
0,00
0,01
11,11
2,44
9,42
0,11
0,05 0,18
0,08
0,51
0,22
0,17
0,04
2,12
0,23
0,13
0,54
0,16
0,24
0,03
0,37
0,31
0,07
0,12
0,12
0,03
0,00
0,06
0,20
0,02
0,73
0,24
0,58
0,58
0,49
0,36
0,17
0,03
0,20
0,24
0,48
0,05
0,25
0,13
0,67
0,24
0,06
0,28
0,16
0,16
0,05
0,24
0,67
0,28
0,32
0,02
0,16
0,02
0,02
0,01
0,12
0,05
0,12
0,02
0,05
0,21
0,42
0,36
0,18
0,23
4,58
2,94
0,08
0,59
0,17
0,36
0,14
0,42
0,48
0,05
3,31
0,43
0,01 0,07
0,20
0,02 0,91
1,60
0,67
0,26
0,54
0,25
0,63
0,31
0,18
0,05
3,05
0,68
0,08
tr
0,32
1,07
0,05
0,16
0,13
0,21
0,05
0,04
0,06
0,03
1,83
1,66
0,60
0,15
0,80
0,38
0,40
0,16
0,60
5,27
1,52
0,08
0,38
1,84
3,83
1,25
4,26
0,08
0,04
tr
0,26
0,30
0,59
0,04
0,14
0,69
0,28
0,05
0,04
2,35
0,62
0,05
0,06
0,32
0,38
OR 2 – Strumenti di Controllo Innovativi per la
Determinazione di Contaminanti in Uva e Vino
• OS 2.2: Messa a punto di una metodica multi-analita LC-MS(MS) e
sviluppo di metodi rapidi per la determinazione di allergeni nel vino
Partner:
 ISPA-CNR (Bari)
Soggetto attuatore:
 D.A.Re. scrl
Avanzamento OS 2.2
90%
80%
Budget TOTALE OS 2.2
€ 419.261,00
76%
70%
60%
€ 71,385.32
48%
50%
40%
39%
39%
40%
40%
30%
25%
21%
20%
18% 18%
17%
€ 347,875.68
17%
9%
10%
3%
7%
2%
0%
0%
0%
OS
8.1
OS
8.2
OS
8.3
0%
OS
1.1
OS
2.1
OS
2.2
OS
2.3
OS
3.1
OS
3.2
OS
4.1
OS
5.1
OS
5.2
OS
5.3
OS
5.4
OS
6.1
OS
6.2
OS
7.1
OS
7.2
OS
7.3
Rendicontato
Residuo
Stato di avanzamento delle attività (al 30/04/2013)
Task 2.2.1: Messa a punto di una metodica multi-analita LC-MS(MS) e sviluppo di
metodi rapidi per la determinazione di allergeni in vini chiarificati (M1-36)
- stato: in corso (60% di completamento)
Task 2.2.2: Sviluppo di un immunosaggio basato su SPR per la determinazione di
allergeni di latte e uova in vini chiarificati (M7-36)
- stato: in corso (20% di avanzamento)
OR
Mesi
Attività
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
22
24
26
28
30
32
34
36
OR 2
OS 2.2
A2.2.1.a
A2.2.1.b
A2.2.1.c
A2.2.1.d
A2.2.2.a
A2.2.2.b
A2.2.2.c
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
Risultati Principali - Task 2.2.1 (ISPA-CNR)
Task 2.2.1: Messa a punto di una metodica multi-analita LC-MS(MS) e sviluppo di metodi
rapidi per la determinazione di allergeni in vini chiarificati
Attività 2.2.1.a - Sviluppata con successo una metodica sensibile e affidabile per la simultanea estrazione e
purificazione di allergeni di latte e uovo in vini bianchi chiarificati con caseinati (chiarificante A) e bianco d’uovo
(chiarificante B)
Attività 2.2.1.b - Ottimizzate le condizioni di separazione ed analisi dei peptidi derivanti dall’idrolisi enzimatica della
componente allergenica tramite HPLC-spettrometria di massa ad alta risoluzione
Attività 2.2.1c - Almeno due proteine allergeniche rivelate (alfa caseina e beta caseina per agente A; ovalbumina e
lisozima per agente B) ed almeno due peptidi identificati per ciascun allergene in campioni di vino chiarificato.
Limiti di rivelabilità raggiunti con il metodo HPLC-MS/MS sviluppato: < 1 µg/mL
Vino chiarificato Pretrattamento
Allergene
Idrolisi enzimatica
Analisi HPLC-HRMS
Trattamento
bioinformatico
Monaci et al, Multiallergen quintification of fining-related egg and milk proteins in white wines by highresolution-mass-spectrometry. Rapid Commun. Mass. Spec. 2013,27,2009-18.
Risultati Principali - Task 2.2.2 (ISPA-CNR)
Task 2.2.2: Sviluppo di un immunosaggio basato su SPR per la determinazione di
allergeni di latte e uova in vini chiarificati
 Valutazione di chip diversamente modificati e di diverse tipologie di anticorpi (mono e policlonali)
mirati alla messa a punto di un immunosensore SPR per la rivelazione di allergeni di uovo
 Ottimizzazione delle condizioni d’immobilizzazione (pH, forza ionica) dell’anticorpo biotinilato
prescelto per la sua immobilizzazione indiretta su biochip di oro modificati con streptavidina.
Reflectance
(A)
Immunosensore
SPR
Incident
light
Reflected
light
Prism
RU
θ1 θ2
Angle
Metal
RU2
RU1
Time
(B)
DIRECT
OR 2 – Strumenti di Controllo Innovativi per la
Determinazione di Contaminanti in Uva e Vino
OS 2.3: Messa a punto di una metodica analitica per la determinazione di
fitofarmaci in uva e vino e produzione di materiali di riferimento
LE ATTIVITA’ DELL’OS 2.3 SONO SVOLTE CONGIUNTAMENTE A QUELLE DELL’OS 5.1
OS 5.1: Messa a punto di una metodica analitica per la determinazione di
fitofarmaci in cereali, produzione di miscele standard e materiali di
riferimento
Partner:
 Lab. Instruments srl
 ISPA-CNR (Bari)
Soggetto attuatore:
 D.A.Re. scrl
OR 3 – Strumenti Correttivi Innovativi per la Rimozione di
Metaboliti Microbici Indesiderati nel Vino
OS 3.1: Messa a punto di un prototipo per la rimozione dell’ocratossina
A (OTA) nel vino mediante la tecnica del ripasso continuo su
vinacce/buccette
Partner:
 ISPA-CNR (Bari)
 Industrie Fracchiolla srl
Soggetto attuatore:
 D.A.Re. scrl
Avanzamento OS 3.1
90%
80%
Budget TOTALE OS 3.1
€ 812.645,00
76%
70%
60%
€ 148,591.71
48%
50%
40%
39%
39%
40%
40%
30%
25%
21%
20%
18% 18%
17%
€ 664,053.29
17%
9%
10%
3%
7%
2%
0%
0%
0%
OS
8.1
OS
8.2
OS
8.3
0%
OS
1.1
OS
2.1
OS
2.2
OS
2.3
OS
3.1
OS
3.2
OS
4.1
OS
5.1
OS
5.2
OS
5.3
OS
5.4
OS
6.1
OS
6.2
OS
7.1
OS
7.2
OS
7.3
Rendicontato
Residuo
Stato di avanzamento delle attività (al 30/04/2013)
 Task 3.1.1 – Reperimento di vinacce esenti da OTA e di partite di mosti/vini naturalmente
contaminati da OTA
- stato: in corso (10% completamento)
 Task 3.1.2 – Stabilizzazione delle vinacce
- stato: in corso (20% completamento)
 Task 3.1.4 – Sviluppo di un prototipo per il ripasso in continuo su vinacce e/o loro componenti
- stato: in corso (20% completamento)
OR
Mesi
Attività
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
22
24
26
28
30
32
OR 3
OS 3.1
A3.1.1.a
A3.1.1.b
A3.1.1.c
A3.1.2.a
A3.1.2.b
A3.1.3.a
A3.1.3.b
A3.1.4.a
A3.1.4.b
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
34
36
Risultati Principali
 Task 3.1.1: Reperimento di vinacce esenti da OTA e di partite di mosti/vini naturalmente
contaminati da OTA
 Task 3.1.2: Stabilizzazione delle vinacce
 Task 3.1.4: Sviluppo di un prototipo per il ripasso in continuo su vinacce
• Le vinacce (cv amarone) sono state reperite presso il centro di ricerca per la viticoltura di Conegliano (CRA).
• È stata stimata la carica microbica batterica e fungina iniziale mediante conta in piastra:
3,2·105 UFC/g (concentrazione batterica)
2,2·106 UFC/g (concentrazione fungina)
• È stato valutato l’effetto delle diverse condizioni di stabilizzazione (°C, SO2, tempo) sulla carica batterica e
fungina
• È stata misurata la concentrazione di OTA:
3,1 ± 0,2 µg/kg OTA
• È stato ideato (ISPA, Ind. Fracchiolla e consulente enologo) e realizzato (Ind. Fracchiolla) il primo prototipo per
le prove di ripasso
Risultati Principali – Task 3.1.2 (ISPA-CNR)
Popolazione batterica presente nelle vinacce conservate a differenti temperature ed in presenza o assenza di SO2
Risultati Principali – Task 3.1.2 (ISPA-CNR)
Popolazione fungina nelle vinacce conservate a differenti temperature ed in presenza o assenza di SO2
Risultati Principali – Task 3.1.4 (Industrie Fracchiolla, ISPACNR)
• Sono stati condotti incontri di lavoro tra personale dell’ISPA-CNR, dell’Industrie Fracchiolla e dell’enologo
coinvolto nell’attività progettuale per l’ideazione, la progettazione e la realizzazione di un miniprototipo da
laboratorio per le prove di ottimizzazione delle condizioni e modalità di ripasso di vino contaminato da OTA su
vinacce incontaminate
OR 3 – Strumenti Correttivi Innovativi per la Rimozione di
Metaboliti Microbici Indesiderati nel Vino
OS 3.2: Sviluppo di metodologie bio-molecolari per la
decontaminazione/degradazione dell’ocratossina A (OTA) nei mosti-vini
Partner:
 ISPA-CNR (Bari)
 ISPA-CNR (Lecce)
 IBBE-CNR
Soggetto attuatore:
 D.A.Re. scrl
Avanzamento OS 3.2
90%
80%
Budget TOTALE OS 3.2
€ 663.940,00
76%
70%
60%
€ 122,634.78
48%
50%
40%
39%
39%
40%
40%
30%
25%
21%
20%
18% 18%
17%
€ 541,305.22
17%
9%
10%
3%
7%
2%
0%
0%
0%
OS
8.1
OS
8.2
OS
8.3
0%
OS
1.1
OS
2.1
OS
2.2
OS
2.3
OS
3.1
OS
3.2
OS
4.1
OS
5.1
OS
5.2
OS
5.3
OS
5.4
OS
6.1
OS
6.2
OS
7.1
OS
7.2
OS
7.3
Rendicontato
Residuo
Stato di avanzamento delle attività (al 30/04/2013)
Task 3.2.1: Isolamento e caratterizzazione di popolazioni microbiche in grado di degradare l'OTA
(M1-24)
 stato: in corso (65 % completamento)
Task 3.2.2: Identificazione di geni codificanti gli enzimi correlati alla degradazione di OTA in
isolati microbici naturali (M7-34)
 stato: in corso (40 % completamento)
OR
Mesi
Attività
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
22
24
26
28
30
32
34
36
OR 3
OS 3.2
A3.2.1.a
A3.2.1.b
A3.2.1.c
A3.2.2.a
A3.2.2.b
A3.2.2.c
A3.2.3.a
A3.2.3.b
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
Risultati Principali - Task 3.2.1 (ISPA CNR)
Attività 3.2.1.a - Individuazione dei campi e campionamento
Sono stati individuati 4 vigneti rappresentativi dell’areale di coltivazione delle varietà Negroamaro e
Primitivo.
Sono stati effettuati campionamenti di terreno, tralci e grappoli.
Attività 3.2.1.b - Analisi chimica
E’ stata messa a punto una metodica analitica per la determinazione simultanea di OTA e OTalpha
nei diversi substrati liquidi mediante HPLC/FLD.
Attività 3.2.1.c - Analisi microbiologica
Due fermentazioni spontanee, effettuate utilizzando le uve Negroamaro e Primitivo sono state
campionate durante 5 fasi del processo.
E’ stata studiata la dinamica di popolazione di lieviti in vinificazione spontanee.
Sono stati isolati e identificati 35 ceppi di lievito per ciascuna delle 5 fasi
E’ stata indagata la capacità di degradare OTA da parte di 96 ceppi di batteri malolattici.
Risultati Principali - Task 3.2.2 (ISPA CNR, IBBE CNR)
Attività 3.2.2.a - Messa a punto di metodiche
estrazione di DNA e RNA dai campioni di mosto
Il metodo di estrazione di DNA messo a punto
consente, partendo da matrici complesse derivate dalla
filiera vitivinicola, di ottenere materiale genetico
appartenente a microrganismi anche molto distanti dal
punto di vista tassonomico (procarioti ed eucarioti).
CAMPIONE
Estrazione del DNA appartenente all’intera comunità microbica
Il metodo sviluppato prevede l’associazione di un kit
commerciale di estrazione del DNA da suolo (FAST DNA
kit for soil della DBA Italia) con una serie di trattamenti
sviluppati per eliminare le impurità e, quindi,
aumentare la resa di estrazione e successiva
amplificazione di marcatori genetici per la creazione di
librerie di sequenziamento NGS.
Sequenziamento su vasta scala dell’intero
metagenoma o metatrascrittoma
Screening di particolari marcatori genetici
di specie che sono selettivamente
sequenziati
Caratterizzazione bioinformatica della complessità genetica e tassonomica della
comunità microbica
Risultati Principali - Task 3.2.2 (ISPA CNR, IBBE CNR)
Attività 3.2.2.a - Messa a punto di metodiche estrazione
di DNA e RNA dai campioni di mosto : RISULTATI
Acqua di lavaggio dei grappoli
Estrazione del metagenoma
Mosto ad inizio fermentazione
1500 bp
1000
Campione
Resa DNA (ng/μl)
250
Acqua di
lavaggio dei
grappoli
Mosto
Purezza
A260/A280
1
47.2
1.65
2
41.7
1.65
3
40.5
1.49
4
51.3
1.70
5
28.2
1.88
6
26.6
1.73
7
26.8
1.69
8
26.9
1.71
9
29.5
1.60
Amplificazione del marcatore tassonomico fungino:
rDNA ITS1-5.8S-ITS2
M
11
its1
18S rDNA
5.8S
ITS1
ITS2
rDNA
28S rDNA
1500 bo
its4
1000
750
500
Dimensione attesa
dell’amplicone
250
Primers ITS1/ITS4: 5’-GTTTCCGTAGGTGAACCTGC-3’/5’ TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’
400-900 pb
Cavalieri, D. et al (2003). J. Mol. Evol., 57, S226–S232.
(variabile in relazione alla specie)
Amplificazione del marcatore tassonomico batterico:
Gene codificante per l’rRNA 16S
M 11
16Sr
16Sd
Dimensione attesa dell’amplicone
Primers 16Sd/16Sr: 5’-GCTGGCGGCATGCTTAACACAT-3’/5’-GGAGGTGATCCAGCCGCAGGT-3’
Ruiz, A. et al (2000 Int. J. Syst. Evol. Micr., 50, 1981-1987.
1500 pb
OR 5 – Strumenti di Controllo Innovativi per la
Determinazione di Contaminanti in Cereali e Derivati
OS 2.3: Messa a punto di una metodica analitica per la determinazione di
fitofarmaci in uva e vino e produzione di materiali di riferimento
OS 5.1: Messa a punto di una metodica analitica per la determinazione di
fitofarmaci in cereali, produzione di miscele standard e materiali di
riferimento
Partner:
 Lab. Instruments srl
 ISPA-CNR (Bari)
Soggetto attuatore:
 D.A.Re. scrl
Avanzamento OS 2.3
90%
80%
Budget TOTALE OS 2.3
€ 87.140,00
76%
70%
60%
€ 20,501.77
48%
50%
40%
39%
39%
40%
40%
30%
25%
21%
20%
€ 66,638.23
18% 18%
17%
17%
9%
10%
3%
7%
2%
0%
0%
0%
OS
8.1
OS
8.2
OS
8.3
0%
OS
1.1
OS
2.1
OS
2.2
OS
2.3
OS
3.1
OS
3.2
OS
4.1
OS
5.1
OS
5.2
OS
5.3
OS
5.4
OS
6.1
OS
6.2
OS
7.1
OS
7.2
OS
7.3
Rendicontato
Residuo
Avanzamento OS 5.1
90%
80%
Budget TOTALE OS 5.1
€ 135.496,00
76%
70%
60%
48%
50%
40%
39%
39%
40%
40%
€ 64,686.47
€ 70,809.53
30%
25%
21%
20%
18% 18%
17%
17%
9%
10%
3%
7%
2%
0%
0%
0%
OS
8.1
OS
8.2
OS
8.3
0%
OS
1.1
OS
2.1
OS
2.2
OS
2.3
OS
3.1
OS
3.2
OS
4.1
OS
5.1
OS
5.2
OS
5.3
OS
5.4
OS
6.1
OS
6.2
OS
7.1
OS
7.2
OS
7.3
Rendicontato
Residuo
Stato di avanzamento delle attività (al 30/04/2013)
 Task 2.3.1 - Studio di fattibilità, sviluppo di materiali di riferimento (RM) e loro certificabilità per
l’analisi multi residuale di fitofarmaci nella matrice vino mediante strumenti di controllo
innovativi (M1-36)

stato: in corso (50% completamento)
 Task 2.3.2 - Sviluppo e validazione di metodiche multiresiduali in alta risoluzione (LC-HRMS) per
la determinazione di fitofarmaci untargeted nel vino (M7-36)
 stato: in corso (20% completamento)
OR
Mesi
Attività
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
22
24
26
28
30
32
34
36
OR 2
OS 2.3
A2.3.1.a
A2.3.1.b
A2.3.1.c
A2.3.1.d
A2.3.1.e
A2.3.1.f
A2.3.1.g
A2.3.2.a
A2.3.2.b
A2.3.2.c
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
Stato di avanzamento delle attività (al 30/04/2013)
 Task 5.1.1: Individuazione delle sottoclassi di fitofarmaci, studio dell’effetto matrice (frumento)
sull’analisi strumentale di fitofarmaci, di solubilità, stabilità ed allestimento delle aliquote da
destinare al proficiency test (M1-30)
 stato: in corso (50% completamento)
 Task 5.1.2: Sviluppo e confronto di metodiche di rivelazione basate sull’uso di spettrometri di
massa ad alta risoluzione (untargeted analysis) e spettrometri a triplo quadrupolo (targeted
analysis) (M7-36)
 stato: in corso (20% completamento)
OR
Mesi
Attività
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
22
24
26
28
30
32
34
36
OR 5
A5.1.1.a
OS 5.1
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
A5.1.1.b
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
A5.1.2.a
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
A5.1.2.b
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
Risultati Principali – Task 2.3.1 e 5.1.1 (Lab.Instruments)
 Task 2.3.1 e Task 5.1.1: studio di fattibilità e sviluppo di materiali di riferimento
Materiali di riferimento in soluzione standard
-
Approvvigionamento
Allestimento di soluzioni di singoli fitofarmaci e caratterizzazione delle caratteristiche chimico-fisiche e
redazione di “schede prodotto” (circa 220)
Individuazione di sottoclassi da raggruppare in miscele
Allestimento di miscele
Avviamento dell studio di stabilità delle miscele
Risultati Principali - Task 2.3.2 e 5.1.2 (Lab.Instruments)
 Task 2.3.2 e Task 5.1.2: studio di fattibilità e sviluppo di materiali di riferimento
Materiali di riferimento in matrice
-
Raccolta di informazioni in merito all’utilizzo cultivar-specifico di fitofarmaci
Screening e caratterizzazione delle matrici “bianche” per l’allestimento di materiali di riferimento
 Da un set di 20 campioni di VINO BIANCO (circa 2 L per campione) raccolti da produttori privati sono stati
selezionati 8 campioni con tenore di fitofarmaci inferiore al limite di rivelabilità
 E’ un corso la caratterizzazione di un set di 20 campioni di FRUMENTO (duro e tenero) provenienti dal mercato
locale
Risultati Principali
ESEMPIO: miscela formulata per essere inclusa nella matrice VINO
MISCELA ORGANOTIOFOSFORATI/ N-CARBAMOIL-OSSIME
Aldicarb
Aldicarb sulfossido
Aldicarb sulfone
Dimethoate
Omethoate
Formetanate hydrocloride
Methamidophos
Methomyl
Oxamyl
Phosdrin
Monocrotophos
Vamidothion
Fenthion o sulfossido
Demeton-s-methyl sulfossido
Demeton-s-methyl sulfone
Valutazione di N-carbamoil-ossime in solvente
organico, monitoraggio delle potenziali variazioni
temporali dei rapporti tra segnali relativi a differenti
“metaboliti”, studio della sensitività della classe,
valutazione della stabilità accelerata e temporale in
matrice
Studio degli isosteri, eventuale interconversione in
solvente
Incusione di differenti organofosforati e di analoghi
al fine di caratterizzare sul sistema analitico di
riferimento le posizioni relative dei segnali
(ottimizzazione della fase cromatografica),
valutazione degli eventuali isomeri strutturali, scelta
delle condizioni di ionizzazione ottimali che
permettano un sufficiente grado di sensitività della
miscela.
Risultati Principali - Task 2.3.2 e 5.1.2 (Lab.Instruments)
 Task 2.3.2 e Task 5.1.2: sviluppo di metodiche multiresiduali basate sulla
spettrometria di massa ad alta risoluzione (LC-HRMS)
Ottimizzazione delle condizioni strumentali (rivelazione in HRMS e MS/MS) mediante analisi delle soluzioni
di fitofarmaci allestite nell’ambito delle Tasks 2.3.1 e 5.1.1.
Sviluppo di procedure di preparazione del campione (QuEChERs sviluppati dalla Lab Instrument s.r.l.)
OR 5 – Strumenti di Controllo Innovativi per la
Determinazione di Contaminanti in Cereali e Derivati
OS 5.2: Messa a punto di una metodica multi-micotossina in cereali e
derivati e produzione di materiali di riferimento
Partner:
 ISPA-CNR (Bari)
 Lab. Instruments srl
Soggetto attuatore:
 D.A.Re. scrl
Avanzamento OS 5.2
90%
80%
Budget TOTALE OS 5.2
€ 369.878,00
76%
70%
60%
€ 78,616.61
48%
50%
40%
39%
39%
40%
40%
30%
25%
21%
20%
€ 291,261.39
18% 18%
17%
17%
9%
10%
3%
7%
2%
0%
0%
0%
OS
8.1
OS
8.2
OS
8.3
0%
OS
1.1
OS
2.1
OS
2.2
OS
2.3
OS
3.1
OS
3.2
OS
4.1
OS
5.1
OS
5.2
OS
5.3
OS
5.4
OS
6.1
OS
6.2
OS
7.1
OS
7.2
OS
7.3
Rendicontato
Residuo
Stato di avanzamento delle attività (al 30/04/2013)
 Task 5.2.1: Produzione di materiali di riferimento (farine di frumento e mais) multi-micotossina
(M1-36)
 stato: in corso (50% completamento)
 Task 5.2.2: Sviluppo di metodiche multianalita LC-MS(MS) per micotossine in cereali e prodotti
derivati (M1-36)
 stato: in corso (50% completamento)
OR
Mesi
Attività
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
22
24
26
28
30
32
34
36
OR 5
OS 5.2
A5.2.1.a
A5.2.1.b
A5.2.1.c
A5.2.1.d
A5.2.1.e
A5.2.1.f
A5.2.2.a
A5.2.2.b
A5.2.2.c
A5.2.2.d
A5.2.2.e
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
Risultati Principali- Task 5.2.1 (ISPA-CNR)
 Task 5.2.1: Produzione di materiali di riferimento (farine di frumento e mais) multi-micotossina
Livelli desiderati (µg/kg)
MAIS
FRUMENTO
DON
750
750
ZEA
100
75
FB1 + FB2
1000
n.a.
T-2 + HT-2
100
50
Aflatossine totali
4
4
OTA
3
3
Per i livelli target ci si è riferiti ai regolamenti 1881/2006/EC (aflatossine e OTA), 1126/2007/EC (DON, ZEA, fumonisine) e
alla raccomandazione 2013/165/EU (somma di T-2 e HT-2) delle quali sono stati considerati i limiti massimi stabiliti per
frumento e mais destinati al consumo umano diretto.
Risultati Principali – Task 5.2.1 (ISPA-CNR)
MAIS naturalmente contaminato da
DON, FB1, FB2 (30 kg)
Estratti da colture di
F. sporotrichioides (T2-HT2)
F. gramienarum (DON-ZEA)
A. flavus (AFs)
A. parasiticus (AFs)
A. ochraceous (OTA)
Studio di
OMOGENEITA’
STABILITA’
Miscelazione e
omogeneizzazione
Suddivisione in aliquote da 80 g
La stessa strategia è stata utilizzata per la produzione del FRUMENTO contaminato da tossine di Fusarium e OTA
Risultati Principali – Task 5.2.2 (ISPA-CNR)
 Task 5.2.2: Sviluppo di metodiche multianalita LC-MS(MS) per micotossine in cereali e prodotti derivati
Micotossine sottoposte a regolamentazione
Riferimento normativo
Deossinivalenono (DON)
Regolamento 1126/2007/EC
Zearalenone (ZEA)
Regolamento 1126/2007/EC
Fumonisine(FB1 + FB2)
Regolamento 1126/2007/EC
Tossine T-2 e HT-2
Raccomandazione 2013/165/EU
Aflatossine totali (AFB1 + AFB2 AFG1 + AFG2)
Regolamento 1881/2006/EC
Ocratossina A (OTA)
Regolamento 1881/2006/EC
Micotossine emergenti
Motivazione
Nivalenolo (NIV)
Opinione EFSA (EFSA Journal 2013;11(6):3262)
3 e 15-acetil DON
Inclusi dal JECFA nel PMTDI insieme al DON (JECFA/72/SC)
DON-3-glucoside
Contaminante naturale insieme al DON, richiesti dati di incidenza (JECFA/72/SC)
T-2 e HT-2 glucoside
Contaminante naturale insieme a T-2 e HT-2, richiesti dati di incidenza (Raccomandazione
2013/165/EU)
Fumonisine idrolizzate
Contaminanti naturali del mais e/o prodotte durante il processamento del mais
Risultati Principali – Task 5.2.2 (ISPA-CNR)
Analisi
LC-MS/MS
Frumento
Mais
Snack a base di mais
Cereali per colazione
Estrazione sequenziale
acqua e metanolo
(4 min)
Purificazione su IAC
MULTI-ANTICORPO
NIV
DON
AFB1, B2, G1, G2
OTA
FB1, FB2
OTA
ZEA
T-2, HT-2
3-/15-AcDON
DON-3-glucoside
HT-2/T-2-glucoside
APPROCCIO
ALTERNATIVO
Analisi
LC-HRMS
Purificazione su
colonnine SPE
PHFBs, HFBs
…altri metaboliti….
OR 5 – Strumenti di Controllo Innovativi per la
Determinazione di Contaminanti in Cereali e Derivati
OS 5.3: Messa a punto di una metodica analitica unica per la
determinazione di fitofarmaci e micotossine in cereali e derivati
Partner:
 BonassisaLab srl
 Università degli Studi di Foggia, Dipartimento Di Scienze Agrarie, degli Alimenti e
dell’Ambiente (SAFE)
Soggetto attuatore:
 D.A.Re. scrl
Avanzamento OS 5.3
90%
80%
Budget TOTALE OS 5.3
€ 582.378,00
76%
70%
60%
48%
50%
40%
39%
39%
40%
€ 227,691.29
40%
30%
€ 354,686.71
25%
21%
20%
18% 18%
17%
17%
9%
10%
3%
7%
2%
0%
0%
0%
OS
8.1
OS
8.2
OS
8.3
0%
OS
1.1
OS
2.1
OS
2.2
OS
2.3
OS
3.1
OS
3.2
OS
4.1
OS
5.1
OS
5.2
OS
5.3
OS
5.4
OS
6.1
OS
6.2
OS
7.1
OS
7.2
OS
7.3
Rendicontato
Residuo
Stato di avanzamento delle attività (al 30/04/2013)
Task 5.3.1: Sviluppo di una metodica unica per la determinazione di
fitofarmaci e micotossine in cereali e derivati (M3-36)
 stato: in corso (42% completamento)
OR
Mesi
Attività
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
22
24
26
OR 5
A5.3.1.a
OS 5.3
X
X
X
X
A5.3.1.b
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
A5.3.1.c
A5.3.1.d
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
28
30
32
34
36
Risultati Principali – Task 5.3.1 (BonassisaLab)
I principali risultati scientifici:
 Implementazione, validazione e accreditamento di un metodo per la determinazione di micotossine
su filiera cerealicola:
10 g campione – estrazione con miscela acetonitrile/acqua/acido acetico in rapporto 1:2– nessuna fase di
purificazione – analisi in LCMSMS
 Implementazione, validazione di un metodo per la determinazione di residui di fitofarmaci in
cereali e derivati:
10 g campione – estrazione con acetonitrile acqua – purificazione con SPE – analisi LCMSMS e GCMSMS
Sviluppo di una metodica unica per la determinazione di micotossine e pesticidi
10 g campione estrazione con miscela acetonitrile/acqua formiata (5mMol ) – analisi LCMSMS e GCMSMS
Risultati Principali – Task 5.3.1 (BonassisaLab)
Metodo multi-micotossina LC/MSMS:
Determinazione di tutte le 11 micotossine normate nel REG CE 1881/2006
(aflatossine, ocratossina A, deossinivalenolo, zearalenone, tossine T-2 e HT-2, fumonisine)
RISULTATI DELLA VALIDAZIONE
In conformità al Reg. CE 401/2006 sono stati
valutati i criteri di rendimento del metodo per
ciascuna micotossina, pertanto è stata calcolata
sia la deviazione standard relativa (RSDr ),
calcolata a partire dai risultati ottenuti in
condizione di ripetibilità, sia il recupero attraverso
un’aggiunta in matrice.
CRITERIO DI IDONEITA’ ALLO SCOPO
Il laboratorio ha verificato un’incertezza massima
standard adeguata per tutte le micotossine
Risultati Principali – Task 5.3.1 (BonassisaLab)
Metodo LC-MS/MS per la determinazione di 270 fitofarmaci
Validazione del metodo in accordo con:
Document No. SANCO/10684/2009
METHOD VALIDATION AND
QUALITY CONTROL PROCEDURES
FOR PESTICIDE RESIDUES ANALYSIS IN FOOD AND
FEED
Risultati Principali – Task 5.3.1 (BonassisaLab)
Multi GC/MSMS: metodo da 350 molecole
OR 5 – Strumenti di Controllo Innovativi per la
Determinazione di Contaminanti in Cereali e Derivati
OS5.4: Sviluppo di metodi rapidi per la determinazione di micotossine
in cereali e derivati
Partner:
 ISPA-CNR (Bari)
 Molini Tandoi Spa
Soggetto attuatore:
 D.A.Re. scrl
Avanzamento OS 5.4
90%
80%
Budget TOTALE OS 5.4
€ 466.719,00
76%
70%
60%
48%
50%
40%
39%
39%
40%
€ 187,958.26
40%
€ 278,760.74
30%
25%
21%
20%
18% 18%
17%
17%
9%
10%
3%
7%
2%
0%
0%
0%
OS
8.1
OS
8.2
OS
8.3
0%
OS
1.1
OS
2.1
OS
2.2
OS
2.3
OS
3.1
OS
3.2
OS
4.1
OS
5.1
OS
5.2
OS
5.3
OS
5.4
OS
6.1
OS
6.2
OS
7.1
OS
7.2
OS
7.3
Rendicontato
Residuo
Stato di avanzamento delle attività (al 30/04/2013)
 Task 5.4.1: Messa a punto di immunosaggi a polarizzazione di fluorescenza (FP) per la determinazione di
OTA, DON e tossine T-2 e HT-2 in cereali e prodotti derivati (M1-30)
 stato: in corso (60% completamento)
 Task 5.4.2: Messa a punto di un saggio lateral flow (LF) per la determinazione di OTA in cereali e prodotti
derivati (M13-36)
 stato: in corso (15% completamento)
 Task 5.4.3: Messa a punto di metodi di spettroscopia nel vicino infrarosso (FT-NIR) per la determinazione
semi-quantitativa/qualitativa di DON e OTA in cereali e prodotti derivati (M3-36)
 stato: in corso (30% completamento)
 Task 5.4.4: Messa a punto di un metodo basato sul naso elettronico con tecnologia MOS per la
determinazione di DON e OTA in cereali e prodotti derivati (M5-36)
 stato: in corso (40% completamento)
O
OH
N
B
O
T.A.
agitazione
O
O
B
H
H
-butilboronico
H3C
O
H
O
N
a) acetone anidro
CH3
CH3
NO
T.A. O
N
N
O
O
O
N
O
O
H3C
N b) H O
2
O
+
H
H
ildiimidazolo
ONaHCO3
0.1M
O
H
N
O
O
il)-fluoresceina
O
CH3
O
H N
O 2
N
DMF
T.A.
+
N
N
C
N
O
N
O
N
H
O O
OTA
H
OH
NH
OH NaHCO
0.1M
O
3 OH
O
OH
O
O
O
HO
DON-FL
H3C
O
O
O
H3C
N
H
H3C
4'-(aminometil)-fluoresceina
Cl
3-O-succinil-OTA
H
O
N
H
+
O
O
O
CH3
O
O
H3C
3-O-succinil-OTA
OH
H2N
H
H3C
H
H
Cl
O
O
OH
O
O
NH
O
OH
DMF
T.A.
O
NH
O
O
HO
O
N
O
OH
H
H
OO
H
HO
3-O-(imidazolcarbonil)-T2
pH=8.2
H3C
N-idrossisucciniimmide
3-O-(imidazolcarbonil)-T2 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)-carbodiimide
O
O
O
agitazione.
O
3
O
O
+
OH
CH3
O
CHH33C
CH3
O
O
O
pH=8,2
H3C
O
H
H
O
H
CH3OH O
N
3
H3C
1,1'-carbonildiimidazolo
T-2
H
O
O
OH
O
O
N
Cl
H
OH
O
O
O
N
N
O
H C
O
 OAttività
5.4.1.a – Sintesi e isolamento
di Oderivati
fluorescenti (traccianti) delle micotossine:
O
H C
OH
OH
Sono stati sintetizzati, isolati e caratterizzati i traccianti (1 per il DON, 4 per T-2 e HT-2 e 1 per OTA).
3-O-(imidazolcarbonil)-DON
Obiettivo
intermedio a 12 mesi (almeno 1 tracciante per tossina): raggiunto
O b) H O
2
H3C
O
H3C
+
HO
T.A.
O
H
O
O
O
CH3
H
H3C
H
O
O
Cl
HO
HO
4'-amminometil
fluoresceina
T2-FL
OTA-FL
Massa esatta del protonato= 747.174551 Da
 Attività 5.4.1.b – Studio dell’interazione traccianteanticorpo e messa a punto di un metodo competitivo
in soluzione
Sono stati sviluppati tre immunosaggi competitivi per la
determinazione di DON, T-2+HT-2 e OTA in soluzione.
Normalizzata
Polarizzazione
Normalized Polarization
O
O
ON
OH
O
H
H3C
O
a) acetone anidro
O
N
O
H
7,15-O-(butilboronil)-DON
OH
H
O
Risultati Principali – Task 5.4.1 (ISPA-CNR)
1.0
Normalizzata
Polarizzazione
Normalized Polarization
OH
OH
O
0.8
0.8
r = 0.996
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0.0
0.6
2.3
2.5
2.7
2.9
3.1
3.3
Log[OTA] pg/mL
0.4
0.2
0.0
0.1
1
[OTA] ng/mL
10
Risultati Principali – Task 5.4.1 (ISPA-CNR)
 Attività 5.4.1.c – Sviluppo di un protocollo di estrazione compatibile con
l’immunosaggio e valutazione delle performance analitiche dell’immunosaggio FP
E’ stato sviluppato e validato un immunosaggio FP per la determinazione di OTA in frumento.
50
Sensibilità (LOD; LOQ)
0.8 µg/kg; 2.0 µg/kg
45
40
Precisione (CV %)
Intervallo di linearità
87% (range 3-10 µg/kg)
 6%
2 – 12.5 µg/kg
y = -1.63+1.15x
r = 0.995
35
[OTA] µg /kg (FP)
Accuratezza (media)
30
25
20
15
10
Tempo di analisi
 20 min
5
0
0
5
10
15
20
25
30
35
[OTA] µg/kg (HPLC)
Lippolis V., Pascale M., Valenzano S., Porricelli A.C.R., Suman M. and Visconti A. (2013), Food
Analytical Methods, DOI 10.1007/s12161-013-9627-3
40
45
50
Risultati Principali – Task 5.4.2 (ISPA-CNR)
 Attività 5.4.2.a - Messa a punto di un saggio LF basato sull’utilizzo dell’aptamero per la
determinazione di OTA in soluzione
E’ stata valutata l’affinità di 7 diversi aptameri per l’OTA.
Aptamero #2:
Aptamero #3:
Aptamero #4:
Aptamero #5:
Aptamero #6:
Aptamero #7:
5’-GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACA-3’
36 basi, PM = 11311 Da
5’-CTGGGTGTGGGGTGATCAAGGGAGTAGACT-3’
30 basi, PM = 9423 Da
5’-CGGGTGTGGGTGCCTTGATCCAGGGAGTCT-3’
30 basi, PM = 9326 Da
5’-GGGAGGACGAAGCGGAACCGGGTGTGGGTGCCTTGATCCAGGGAGTCTCAGAAGACACGCCCGACA-3’
66 basi, PM = 20569 Da
5’-AGCCTCGTCTGTTCTCCCGGCAGTGTGGGCGAATCTATGCGTACCGTTCGATATCGTGGGGAAGACAAGCAGACGT-3’
76 basi, PM = 23507 Da
5’-GGCAGTGTGGGCGAATCTATGCGTACCGTTCGATATCGTG-3’
40 basi, PM = 12399 Da
(T)22-GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACA-(T)3
61 basi, PM = 18916 Da
300
250
Valote FP (mP)
Aptamero #1:
Bmax
200
150
100
kd
Kd = 125 ± 23 nM
Bmax = 265 ± 12%
50
0
0
1 000
2 000
3 000
Concentrazione aptamero (nM)
4 000
5 000
Risultati Principali – Task 5.4.3 (ISPA-CNR, Molini Tandoi)
 Attività 5.4.3.a - Selezione di campioni di cereali e prodotti derivati naturalmente
contaminati previa analisi con metodo analitico di riferimento
Sono stati analizzati mediante metodi HPLC di riferimento :
 186 campioni di frumento duro naturalmente contaminati da DON (105 selezionati att. 5.4.4.a);
 37 campioni di crusca di frumento duro naturalmente contaminati da DON;
 9 campioni di farinaccio di frumento duro naturalmente contaminati da DON;
 20 campioni di frumento duro naturalmente contaminati da OTA.
Sono stati costruiti un modello quantitativo (retta
PLS) e un modello qualitativo (modello
discriminante) per la predizione del contenuto di
DON in campioni di crusca di frumento duro.
2000
y = 0,82x + 129
R² = 0,82
r = 0,91
1800
1600
[DON] µg/kg (FT-NIR)
 Attività 5.4.3.b - Sviluppo di rette di
calibrazione e di modelli discriminanti FTNIR specifici per ciascuna micotossina e
matrice selezionata
1400
1200
1000
800
600
400
200
0
0
200
400
600
800
1000 1200 1400 1600 1800 2000
[DON] µg/kg (HPLC)
Risultati Principali – Task 5.4.4 (ISPA-CNR)
 Attività 5.4.4.a - Calibrazione del naso elettronico per la classificazione di campioni di
cereali e prodotti derivati a differente contenuto di DON e OTA
E’ stato sviluppato un modello di calibrazione per la discriminazione di campioni di frumento duro a
differente contenuto di DON mediante naso elettronico a tecnologia MOS.
Analisi DFA*
Analisi (n=525)
105 campioni
(macinato)
Classe A ([DON, µg/kg]<1000) - Campioni conformi
Classe B (1000 ≤ [DON, µg/kg] ≤ 2500) - Campioni all’analisi di conferma
Classe C ([DON, µg/kg]>2500) - Campioni non conformi
OR 6 – Strumenti Innovativi per la Prevenzione del rischio di
Contaminazione di Prodotti Freschi
OS 6.2: Impiego di compost e strategie agronomiche innovative per
ridurre il contenuto di metalli pesanti nelle produzioni orticole da
consumo fresco
Partner:
 ISPA-CNR (Bari)
 Università degli Studi di Bari – Dipartimento di Scienze del Suolo, della Pianta e
degli Alimenti (DiSSPA)
Soggetto attuatore:
 D.A.Re. scrl
Avanzamento OS 6.2
90%
80%
Budget TOTALE OS 6.2
€ 216.058,00
76%
70%
60%
€ 37,766.46
48%
50%
40%
39%
39%
40%
40%
30%
25%
21%
20%
18% 18%
17%
€ 178,291.54
17%
9%
10%
3%
7%
2%
0%
0%
0%
OS
8.1
OS
8.2
OS
8.3
0%
OS
1.1
OS
2.1
OS
2.2
OS
2.3
OS
3.1
OS
3.2
OS
4.1
OS
5.1
OS
5.2
OS
5.3
OS
5.4
OS
6.1
OS
6.2
OS
7.1
OS
7.2
OS
7.3
Rendicontato
Residuo
Stato di avanzamento delle attività (al 30/04/2013)
 Task 6.2.1: Individuazione e valutazione di differenti compost idonei all’impiego
come substrati di coltivazione e/o ammendanti in orticoltura (M13-35)
 stato: in corso (60% completamento)
OR
Mesi
Attività
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
22
24
26
28
30
32
34
36
OR 6
A6.2.1.a
A6.2.2.a
A6.2.2.b
OS 6.2
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
A6.2.3.a
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
A6.2.3.b
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
A6.2.4.a
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
A6.2.4.b
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
A6.2.4.c
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
Risultati Principali – Task 6.2.1 (ISPA-CNR, UNIBA)
 Task 6.2.1: Individuazione e valutazione di differenti compost idonei
all’impiego come substrati di coltivazione e/o ammendanti in orticoltura
Saggi di fitotossicità su compost: 4/10 – ISPA.
I saggi di fitotossicità, al momento della presentazione del report, hanno presentato
tutti valori > 60 % di germinabilità (valore imposto dalla legge).
Analisi fisiche sui compost: 4/10 – ISPA.
Risultati Principali Task 6.2.1 (ISPA-CNR, UNIBA)
Analisi chimiche dei metalli pesanti sui compost: 8/10 – DiSSPA
Contenuto medio di metalli nei compost analizzati (mg kg-1 peso secco)
Elementi
Fe°
Mn°
Cu°
Zn°
Ti°
Pb*
Ni*
Co*
Cr*
Cd*
1
8032
314
98
196
616
24
9.7
3.0
15
n.d.
2
5031
115
43
229
308
5.9
8.5
1.5
5.3
n.d.
3
13955
400
92
197
1968
46
40
5.3
63
n.d.
Compost
4
5
8375
10180
219
310
112
293
201
600
973
1325
40
109
9.8
13
1.9
2.1
33
72
n.d.
n.d.
6
13249
425
155
457
2290
35
19
3.7
39
n.d.
* Determinati mediante ICP-OES; °determinati mediante XRF; n.d.: non rilevabile
7
7161
435
167
336
740
41
9.4
2.3
19
n.d.
8
4774
131
42
173
368
6.0
6.2
1.3
6.2
n.d.
OR 7 – Strumenti di Controllo Innovativi per la Determinazione
di Metalli Pesanti e Microrganismi Patogeni in Prodotti Freschi
OS7.1: Sistemi innovativi per la diagnosi rapida di metalli pesanti in
prodotti freschi
Partner:
 ISPA-CNR (Lecce)
 Università del Salento, Dipartimento di Scienze e Tecnologie Biologiche e
Ambientali (DiSTeBA)
 Biotecgen s.r.l.
Soggetto attuatore:
 D.A.Re. scrl
Avanzamento OS 7.1
90%
80%
Budget TOTALE OS 7.1
€ 319.735,00
76%
70%
60%
48%
50%
40%
39%
39%
40%
€ 128,069.10
40%
€ 191,665.90
30%
25%
21%
20%
18% 18%
17%
17%
9%
10%
3%
7%
2%
0%
0%
0%
OS
8.1
OS
8.2
OS
8.3
0%
OS
1.1
OS
2.1
OS
2.2
OS
2.3
OS
3.1
OS
3.2
OS
4.1
OS
5.1
OS
5.2
OS
5.3
OS
5.4
OS
6.1
OS
6.2
OS
7.1
OS
7.2
OS
7.3
Rendicontato
Residuo
Stato di avanzamento delle attività (al 30/04/2013)
 Task 7.1.1: Messa a punto di sistemi innovativi per la rivelazione di metalli
pesanti in matrici alimentari mediante la spettroscopia ATR-FTIR e
microbilance piezoelettriche (M1-36)
 stato: in corso (50% completamento)
OR
Mesi
Attività
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
22
24
26
28
30
32
OR 7
A7.1.1.a
OS 7.1
A7.1.1.b
A7.1.1.c
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
34
36
Risultati Principali – Task 7.1.1 (UNISALENTO, ISPA-CNR)
 Attività 7.1.1.a - Spettroscopia IR su prodotti freschi
Sono state condotte misure atte a testare la validità del protocollo per l’estrazione di metalli pesanti da matrici
alimentari messo a punto dall’unità di ricerca del CNR ISPA di Lecce al fine di effettuare le indagini mediante
spettroscopia IR per lo studio dei segnali differenziali derivanti dalla decomplessazione dei gruppi ligandi.
•
•
Sono stati testati diversi protocolli sperimentali per la definizione della composizione chimica, della temperatura e
del pH delle soluzioni per il trattamento di alimenti da sottoporre ad analisi ATR-FTIR differenziale.
Messa a punto di un dispositivo per le indagini mediante spettroscopia IR in modalità differenza sui campioni
ottenuti. In questo modo è stato possibile ottenere ciclicamente la decomplessazione dei metalli e la
contemporanea acquisizione di spettri differenza (legato meno non legato), in maniera tale da evidenziare i segnali
IR associati ai cambiamenti di singoli gruppi funzionali coinvolti nel binding.
A
B
Risultati Principali – Task 7.1.1 (UNISALENTO, ISPA-CNR)
 Attività 7.1.1.b - Spettroscopia IR su materiali idrofobici ad alta affinità per gli ioni metallici tossici :
Le attività hanno riguardato lo studio di materiali ad alta affinità e selettività per ioni metallici tossici (nichel, cobalto, cromo,
cadmio), idonei alla preparazione di strati attivi stabili e la definizione di parametri analitici (sensibilità, selettività, ecc.) di sensori
chimici a trasduzione ottica nel range IR basati sugli strati attivi selezionati.
•
Sono state eseguite indagini per l’identificazione degli strati attivi caratterizzati dai migliori parametri di sensibilità, stabilità,
rapidità, riutilizzabilità e selettività.
•
In particolare è stato visto che i leganti azotati, quali NH e CN piridinici, possono essere utilizzati nel binding specifico di nichel
e cadmio, monitorato mediante spettroscopia IR. Sono in corso altre analisi per l’individuazione di ulteriori strati attivi per il
legame con il piombo, il cromo e il cobalto.
Risultati Principali – Task 7.1.1 (UNISALENTO, Biotecgen)
 Attività 7.1.1.c - Funzionalizzazione di cristalli di quarzo con specifici ligandi per l’analisi
degli ioni metallici con microbilance piezoelettriche
Le attività hanno riguardato lo studio e l’individuazione dei materiali, della tipologia di deposizione e dello
spessore degli strati attivi scelti. Questi sono stati impiegati come sensori piezoelettrici mostrando
risultati promettenti per la messa a punto definitiva.
• Sono state condotte prove sperimentali per la definizione della tipologia di deposizione su quarzo
piezoelettrico e dello spessore dello strato attivo in grado di garantire le migliori prestazioni
nell’analisi di metalli pesanti in mezzo acquoso.
• È stato possibile dimostrare che ligandi tiofenici mostrano buone potenzialità per il sensing del
piombo e del cadmio.
Struttura chimica del polimero tiofenico
utilizzato nel sensore.
OR 7 – Strumenti di Controllo Innovativi per la Determinazione
di Metalli Pesanti e Microrganismi Patogeni in Prodotti Freschi
OS 7.3: Sviluppo di sistemi di allerta rapidi per la presenza di Listeria e
Salmonella in tagli bovini prima della destinazione d’uso
Partner:
 ISPA-CNR Lecce
 Biotecgen srl
 Industria Ciullo Carni srl
Soggetto attuatore:
 D.A.Re. scrl
Avanzamento OS 7.3
90%
80%
Budget TOTALE OS 7.3
€ 426.107,00
76%
70%
60%
40%
€ 104,437.56
48%
50%
39%
39%
40%
40%
30%
25%
€ 321,669.44
21%
20%
18% 18%
17%
17%
9%
10%
3%
7%
2%
0%
0%
0%
OS
8.1
OS
8.2
OS
8.3
0%
OS
1.1
OS
2.1
OS
2.2
OS
2.3
OS
3.1
OS
3.2
OS
4.1
OS
5.1
OS
5.2
OS
5.3
OS
5.4
OS
6.1
OS
6.2
OS
7.1
OS
7.2
OS
7.3
Rendicontato
Residuo
Stato di avanzamento delle attività (al 30/04/2013)
Task 7.3.1: Analisi bioinformatica e progettazione e sperimentazione di DNA arrays (M1-18)
 stato: in corso (100% completato)
Task 7.3.2: Analisi su matrice complessa (M1-22)
 stato: in corso (65% completato)
Task 7.3.3: Messa a punto di sistemi di rilevamento dei patogeni tramite protein chip biosensori,
DNA microarrays, e immunosensori lateral flow (M4-28)
 stato: in corso (40% completato)
OR
Mesi
Attività
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
OR 7
OS 7.3
A7.3.1.a
A7.3.1.b
A7.3.1.c
A7.3.1.d
A7.3.2.a
A7.3.2.b
A7.3.2.c
A7.3.2.d
A7.3.3.a
A7.3.3.b
A7.3.3.c
A7.3.3.d
A7.3.3.e
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
22
24
26
28
30
32
34
36
Risultati Principali
Messa a punto del protocollo per il Lateral Flow ImmunoAssay
Messa a punto del protocollo per i protein chip Immunoassay
Lateral Flow Immuno Assays: risultati
Scelta della membrana
HF240
Lateral Flow Assay: complessi batteri-anticorpi-goldQD migrano per
capillarità fino a incontrare l’anticorpo fissato alla membrana
HF 180
Alta Porosità ottima mobilità
Risultati preliminari mostrano l’attuale limite di detection del metodo è di 10.000 UFC/ml di Salmonella
Protein Chip Assays
L L
A
B
L L
C
Diluizioni
scalari
Ab control
Ab control
Protein-chips per Salmonelle: risultati di ibridazione
Protein-chips per Listeria
A: con anticorpi fluorescenti (anti-Salmonelle)
B: colorante lipidico fluorescente,
1a, 1b: Campioni di Listeria catturati, rilevati in fluorescenza
blu
C: marcatore di membrana fluorescente
Limite di detection: 1000 UFC/ml
OR 8 – Scale Up Industriale degli Strumenti Preventivi, di
Controllo e Correttivi Messi a Punto nel Progetto
Avanzamento OS 8.1 – 8.2 – 8.3
90%
80%
76%
OS 8.3
€ 131,057.00
70%
60%
48%
50%
OS 8.2
40%
39%
39%
40%
€ 240,361.00
40%
30%
25%
21%
20%
18% 18%
17%
17%
OS 8.1
€ 198,684.00
9%
10%
3%
7%
2%
0%
0%
0%
OS
8.1
OS
8.2
OS
8.3
0%
OS
1.1
OS
2.1
OS
2.2
OS
2.3
OS
3.1
OS
3.2
OS
4.1
OS
5.1
OS
5.2
OS
5.3
OS
5.4
OS
6.1
OS
6.2
OS
7.1
OS
7.2
OS
7.3
€-
€ 50,000.00
€ 100,000.00
€ 150,000.00
Rendicontato
€ 200,000.00
Budget
€ 250,000.00
€ 300,000.00
% Rendicontato Progetto di Ricerca
Ricerca Industriale
Sviluppo Sperimentale
5%
24%
Totale
Ricerca
76%
95%
21%
79%
% Rendicontato
% Budget
Rendicontazione Ricerca Industriale
€ 7,000,000.00
€ 6,000,000.00
€ 5,000,000.00
€
€ 4,000,000.00
€ 3,000,000.00
€ 2,000,000.00
€ 1,000,000.00
€ 0.00
Budget
Rendicontato
Spese di Personale
Costi degli Strumenti e
delle attrezzature
Consulenze
Costi dei fabbricati e
dei terreni
Spese generali
Altri costi di esercizio
TOTALE
€ 2,687,991.00
€ 645,500.00
€ 129,000.00
€ 9,200.00
€ 1,118,479.00
€ 1,311,795.00
€ 5,901,965.00
€ 860,686.93
€ 8,612.37
€ 6,000.00
€ 6,496.31
€ 370,214.29
€ 186,944.22
€ 1,438,954.12
Rendicontazione Sviluppo Sperimentale
€ 1,600,000.00
€ 1,400,000.00
€ 1,200,000.00
€
€ 1,000,000.00
€ 800,000.00
€ 600,000.00
€ 400,000.00
€ 200,000.00
€ 0.00
Spese di Personale
Costi degli Strumenti e
delle attrezzature
Consulenze
Costi dei fabbricati e
dei terreni
Spese generali
Altri costi di esercizio
TOTALE
Budget
€ 625,614.00
€ 2,700.00
€ 102,300.00
€ 9,200.00
€ 281,711.00
€ 315,937.00
€ 1,337,462.00
Rendicontato
€ 32,282.46
€ 0.00
€ 0.00
€ 0.00
€ 16,141.23
€ 23,330.13
€ 71,753.82
Rendicontazione Totale Progetto di Ricerca
€ 8,000,000.00
€ 7,000,000.00
€ 6,000,000.00
€
€ 5,000,000.00
€ 4,000,000.00
€ 3,000,000.00
€ 2,000,000.00
€ 1,000,000.00
€ 0.00
Budget
Rendicontato
Spese di Personale
Costi degli Strumenti e
delle attrezzature
Consulenze
Costi dei fabbricati e
dei terreni
Spese generali
Altri costi di esercizio
TOTALE
€ 3,313,605.00
€ 648,200.00
€ 231,300.00
€ 18,400.00
€ 1,400,190.00
€ 1,627,732.00
€ 7,239,427.00
€ 892,969.39
€ 8,612.37
€ 6,000.00
€ 6,496.31
€ 386,355.52
€ 210,274.35
€ 1,510,707.94
Soggetti Partner coinvolti nei SAL I-II-III
Enti di Ricerca
Aziende
 ISPA CNR
 IBBE CNR
 Università degli Studi di Foggia:
- Dipartimento SAFE
 Università degli Studi di Bari:
- Dipartimento di Medicina Veterinaria
- Dipartimento DISSPA
 Università del Salento:
- Dipartimento DiSTeBA





BonassisaLab srl
Lab.Instruments srl
Industrie Fracchiolla srl
Molini Tandoi spa
Biotecgen srl
% Avanzamento Rendicontazione per Partner SAL I – II - III
70%
61%
61%
60%
50%
43%
42%
40%
36%
30%
27%
13%
10%
21%
19%
20%
12%
6%
8%
10%
0%
0%
0%
0%
0%
0%
0%
0%
Conclusioni
I risultati scientifici fino ad ora conseguiti confermano la possibilità di perseguire
gli obiettivi di ricerca ambiti in fase di progettazione iniziale.
Le difficoltà nell’espletamento di alcune attività progettuali sono dovute
all’impossibilità, da parte di Amministrazioni di alcuni Partner, di effettuare
anticipazioni.
Per il buon esito del progetto si rendono, pertanto, necessarie:
- Proroga
- Rimodulazione dei costi e di alcune attività progettuali a causa di criticità emerse
soprattutto alla luce della rinuncia, da parte di 3 aziende partner, alla
partecipazione al progetto.
S.I.MI.S.A.
PROPOSTA DI RIMODULAZIONE
PROGETTO DI RICERCA
Proposta di Rimodulazione
Principali modifiche richieste:
 Proroga al 30/06/2013 e aggiornamento GANTT
 Riduzione/Azzeramento della voce di costo «Strumenti e Attrezzature» per taluni partner
e ridistribuzione del budget tra le altre voci di costo
 Rinuncia alla partecipazione di progetto da parte dell’azienda Centro Latte Stasi srl e
sostituzione con l’azienda Sanguedolce srl
 Rinuncia alla partecipazione di progetto da parte di Azienda Viti-vinicola Incoronata e
Coop. Lavorazione Prodotti Agricoli e ri-attribuzione dei relativi budget a D.A.Re.
 Sostituzione del task 2.1.2 relativo alla messa a punto di biosensori per la
determinazione simultanea di glucosio ed alcol nelle uve con un task di maggiore
coerenza con l’obiettivo generale del progetto SIMISA. Tale task riguarderà lo sviluppo e
validazione di una metodica analitica ICP-OES per la determinazione simultanea di
potassio e metalli pesanti nelle uve e vino.
S.I.MI.S.A.
PROPOSTA DI RIMODULAZIONE
PROGETTO FORMAZIONE
RAZIONALI DELLA RIMODULAZIONE
La rimodulazione che si intende proporre rispetto al capitolato approvato deriva
dall’esigenza di adeguare gli obiettivi inizialmente previsti rispetto alla nuova
pianificazione temporale e ai vincoli formali conseguenti all’attivazione dei
percorsi formativi.
• L’obiettivo formativo A (ricercatori) non prevede più che i destinatari siano
inseriti in un programma di Dottorato di Ricerca, non essendoci le condizioni
amministrative e regolamentari per l’inclusione di dottorati nei programmi
universitari in corso nel periodo del progetto, ma che siano laureati selezionati
in base procedure di evidenza pubblica, dove il titolo di Dottore di Ricerca
verrà valutato con un punteggio aggiuntivo nella griglia di valutazione dei titoli
prevista dalla procedura selettiva stessa;
• Sia l’obiettivo A che l’obiettivo B (tecnici) saranno esplicati mediante due corsi
di formazione, senza titolo legale, banditi dal CNR in partenariato con i partner
di progetto.
RAZIONALI DELLA RIMODULAZIONE
• E’ stato ridotto il numero di ore di didattica passando da 2.884 ore della
proposta iniziale approvata a 1888 ore dell’attuale. Tale riduzione è dovuta alla
sopravvenuta esigenza di non effettuare due edizioni del corso dell’obiettivo A.
Si prevede infatti di realizzare solo una edizione di tale percorso didattico, non
essendo possibile rispettare la tempistica inizialmente prevista, a causa
dell’allungamento dei tempi di finanziamento del progetto e della conclusione
delle procedure burocratiche di avvio dello stesso
• Il numero dei formandi è rimasto invariato per entrambi i corsi (10 per corso)
• Il valore della borsa di studio nell’obiettivo A è stato diminuito in modo tale da
veicolare le risorse ottenute all’aumento del valore della borsa nell’obiettivo B
• È stato innalzato il limite di età per i formandi portandolo ai 32 anni o 35 anni
se in possesso di dottorato di ricerca
• A causa dei ritardi dovuti all’iter di approvazione del progetto stesso si rende
necessaria una proroga con slittamento della scadenza del progetto a giugno
2015
RAZIONALI DELLA RIMODULAZIONE
• Si è previsto l’ingresso di due partner del progetto di ricerca (Bonassisa e
Labinstruments) anche nel progetto di formazione per le attività del modulo Baffiancamento on the job con spostamento di risorse dal partner CNR-ISPA
• Per adeguamento alle sopravvenute esigenze organizzative, sono state
attribuite ore di docenza al partner UNIFG sia nell’ambito dell’obiettivo A che
nell’ambito dell’obiettivo B
• Il costo complessivo del progetto è stato mantenuto come da decreto.
• I costi totali dei partner UNIFG e D.A.Re sono rimasti invariati, mentre il costo
totale del partner CNR-ISPA è diminuito per l’attribuzione di risorse ai nuovi
partner di progetto.
• In tutti i partner presenti da capitolato tecnico approvato, si sono apportate
variazioni alle interno delle singole voci di costo, in alcuni casi anche attivando
nuove voci di costo, a causa di una più efficiente allocazione delle risorse
rispetto alle attuali necessità e durata delle attività.
RIMODULAZIONE FINANZIARIA
TOTALE COSTI DA DECRETO PROGETTO
CAMPANIA PUGLIA 87.3C ITA UE X UE
COSTO
PERSONALE
DOCENTE
ALTRE SPESE
CORRENTI
STRUEMNTI ED
ATTREZZATURE
COSTI DI
SERVIZI DI
CONSULENZA
COSTO DEI
DESTINATARI
TOTALE
30.000
CAMPANIA
TOT
452.175
COSTO
PERSONALE
DOCENTE
47.000
58.000
452.175
SPESE DI
TRASFERTA DEL
PERSONALE
DOCENTE E DEI
DESTINATARI
DELLA
FORMAZIONE
TOTALE COSTI RIMODULATI
PUGLIA
87.3C
ITA
UE
X UE
TOT
429.900
429.900
37.000
37.000
47.000
SPESE DI
TRASFERTA DEL
PERSONALE
DOCENTE E DEI
DESTINATARI
DELLA
FORMAZIONE
58.000
ALTRE SPESE
CORRENTI
85.880
85.880
STRUMENTI ED
ATTREZZATURE
6.395
6.395
70.000
100.000
378.000
378.000
1.037.175
1.037.175
70.000
100.000
COSTI DI SERVIZI
DI CONSULENZA
380.000
380.000
COSTO DEI
DESTINATARI
1.037.175
1.037.175
TOTALE
30.000
S.I.MI.S.A.
STATO AVANZAMENTO LAVORI
SAL I – II - III