Metodologie Biochimiche
Prof. Mauro Fasano
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Siti web
• Home page
http://fisio.dipbsf.uninsubria.it/cns/fasano/
• Sito di Busto
http://busto.dipbsf.uninsubria.it/
Programma del corso
• Preparazione del campione. Tamponi salini. Dialisi ed
ultrafiltrazione.
• Centrifughe e sedimentazione.
• Metodi immunochimici.
• Metodi spettroscopici: assorbimento, emissione e diffusione della
radiazione elettromagnetica.
• Affinità ligando-recettore.
• Elettroforesi su gel ed elettroforesi capillare.
• Spettrometria di massa in biologia. Accenni alla proteomica.
• Metodi cromatografici: tecniche di ripartizione ed adsorbimento per
la separazione di biomolecole; cromatografia gas-liquido.
• Metodi per la determinazione della struttura delle proteine
• Metodi elettrochimici: potenziometria e voltammetria.
• Analisi e sequenza proteine.
Preparazione del campione
• Scelta del tampone
– PBS
– TBS
– HEPES
• Forza ionica
Lisi cellulare
Rottura meccanica - Polytron
Disgregazione manuale
Omogenizzazione
Dounce
Potter
French Press
Sonicazione
Utilizzo di detergenti
SDS
Tween-20,
Triton X-100
Sulfobetaine
Cells of Saccharomyces cerevisiae
strain DY150 after lysis with Y-PER
Yeast Protein Extraction Reagent.
Detergenti
Inibitori proteasi
Dialisi
Dialisi
Ultrafiltrazione