RICONOSCIMENTO DEL DOLORE Reazioni riconducibili ad un dolore primario risposte protettive; fuga vocalizzazione Reazioni ad un danno duraturo alterazioni dell’attività e/o della coordinazione motoria modifiche motivazionali INDICATORI DI STATI DI SOFFERENZA changes in body weight (and related changes in food and water intake); external physical appearance; measurable clinical signs (e.g., changes in heart rate, in respiratory rate, and in their nature); changes in unprovoked behavior; behavioral responses to external stimuli. ANESTESIA Lo scopo dell’anestesia consiste nel prevenire la percezione degli stimoli dolorosi senza indurre una indebita depressione delle funzioni fisiologiche FASI E PIANI DELL’ANESTESIA GENERALE I. INDUZIONE II. ECCITAZIONE III. ANESTESIA CHIRURGICA a) b) c) Piano 1: perdita del riflesso palpebrale Piano 2: assenza di movimenti oculari; respirazione regolare e profonda Piano 3: paralisi dei muscoli intercostali IV. FASE IPOSSICO-TOSSICA CRITERI PER IL MONITORAGGIO DELLA PROFONDITÀ DELL’ANESTESIA RIFLESSI 1. Riflesso di raddrizzamento 2. Riflesso di deglutizione (riflesso laringeo) 3. Riflesso palpebrale 4. Riflesso podale 5. Riflesso pupillare 6. Riflesso corneale CONTROLLO DELLE FUNZIONI VITALI ECG e ritmo cardiaco gittata cardiaca pressione arteriosa e venosa e pressione nell’arteria polmonare capnogramma stato dei gas disciolti nel sangue e stato acido-base saturazione arteriosa di ossigeno volume respiratorio e frequenza pressione nelle vie respiratorie temperatura corporea EEG ANESTESIA Depressione dei centri respiratori Ipotermia Ventilazione forzata Mantenimento della temperatura corporea Cautela nella manipolazione dell’animale Digiuno Anticolinergici (atropina; glicopirrolato) ANESTESIA Tranquillanti e sedativi Fenotiazine (promazina; acepromazina) Benzodiazepine (diazepam; midazolam) Butirrofenoni (azaperone; droperidolo) Agonisti 2-adrenergici (xilazina; detomidina; medetomidina ANESTESIA Anestetici inalatori 1. 2. 3. a base di etere (etere dietilico; metossiflurano; enflurano; isoflurano) idrocarburi alogenati (alotano) altri (protossido di azoto) Camera per anestesia ANESTESIA Miorilascianti: gliceril guiacolato Bloccanti neuromuscolari: Depolarizzanti (succinilcolina Non depolarizzanti (curaro, pancuronio, gallamina, atacurio e vecuronio Anestetici locali e regionali: (lidocaina, procaina, bupivacaina e tetracaina) PARENTERAL ANESTHESIA OF MICE Agent Dose Duration of surgical anesthesia Pentobarbital 50 mg/kg IP 20-40 minutes Tribromoethanol (avertin) 240 mg/kg IP30 15-45 minutes Metomidate/fentanyl 60 mg/kg + 0.06 mg/kg SQ29 20-30 minutes Ketamine/xylazine 80-100 mg/kg + 10 mg/kg IP29 20-30 minutes PARENTERAL ANESTHESIA OF RATS Agent Dose Onset Duration Pentobarbital 30 mg/kg IP 19 5 90 minutes Pentobarbital 40 mg/kg IP 19 5 120 minutes Ketamine-xylazine 40 mg/kg; 5 mg/kg IP19 5 80 minutes Ketamine-xylazine 60 mg/kg; 7.5 mg/kg19 2 115 minutes Ketamine-medetomidine 75 mg/kg; 0.5 mg/kg29 20-30 minutes EUTANASIA Criteri per una morte “umana” La morte deve sopraggiungere senza segni di panico, dolore o stress minimo intervallo di tempo di coscienza affidabilità e riproducibilità sicurezza per il personale implicato nella procedura minimi effetti fisici e/o psicologici indesiderati sull’animale compatibilità con i requisiti e gli scopi dello studio scientifico scarsi o nulli effetti emotivi sull’osservatore e sull’operatore minimo impatto ambientale ed ecologico strumentazione meccanica semplice e di facile manutenzione locale adibito alla procedura separato dai locali in cui soggiornano gli animali EUTANASIA Meccanismi con cui viene indotta la morte IPOSSIA DEPRESSIONE DIRETTA DELL’ATTIVITÀ NEURONALE COMPROMISSIONE DELL’ATTIVITÀ NEURONALE MEDIANTE METODI FISICI EUTANASIA Metodi fisici concussione dislocazione cervicale decapitazione shock elettrico microonde dissanguamento EUTANASIA Agenti farmacologici non inalatori barbiturici T-61 (TANAX) cloralio idrato chetamina cloridrato magnesio solfato EUTANASIA Anestetici inalatori etere alotano metossiflurano isoflurano enflurano protossido di azoto EUTANASIA Gas non anestetici monossido di carbonio azoto argon anidride carbonica cianuro di potassio EUTANASIA Method of euthanasia Rabbits/Rodents <125gm Rabbits/Rodents >125 gm and < 1 kg Carbon dioxide Method of choice Method of choice Barbiturate overdose (iv) Method of choice Method of choice Barbiturate overdose (ip) Method of choice Method of choice Anesthetic overdose Method of choice Method of choice Exsanguination in anesthetized animal Other acceptable method Other acceptable method KCL (iv) in anesthetized animal Not recommended due to technical difficulty Not recommended due to technical difficulty Decapitation in sedated or anesthetized animal Other acceptable method Other acceptable method Cervical dislocation in anesthetized or sedated animal Other acceptable method Other acceptable method Decapitation in awake animal Acceptable only with scientific justification Acceptable only with scientific justification Cervical dislocation in awake animal Acceptable only with scientific justification Acceptable only with scientific justification Stunning in an awake animal Unacceptable method of euthanasia Unacceptable method of euthanasia EUTANASIA Method of euthanasia Rabbits/Rodents > 1 kg but < 5 kg Dogs and Cats Carbon dioxide Other acceptable method Unacceptable method of euthanasia Barbiturate overdose (iv) Method of choice Method of choice Barbiturate overdose (ip) Other acceptable method Unacceptable method of euthanasia Anesthetic overdose Method of choice Method of choice Exsanguination in anesthetized animal Other acceptable method Other acceptable method KCL (iv) in anesthetized animal Other acceptable method Other acceptable method Decapitation in sedated or anesthetized animal Acceptable only with scientific justification Unacceptable method of euthanasia Cervical dislocation in anesthetized or sedated animal Unacceptable method of euthanasia Unacceptable method of euthanasia Decapitation in awake animal Acceptable only with scientific justification Unacceptable method of euthanasia Cervical dislocation in awake animal Unacceptable method of euthanasia Unacceptable method of euthanasia Stunning in an awake animal Unacceptable method of euthanasia Unacceptable method of euthanasia EUTANASIA Method of euthanasia Non-Human Primates Carbon dioxide Unacceptable method of euthanasia Barbiturate overdose (iv) Method of choice Barbiturate overdose (ip) Unacceptable method of euthanasia Anesthetic overdose Method of choice Exsanguination in anesthetized animal Other acceptable method KCL (iv) in anesthetized animal Other acceptable method Decapitation in sedated or anesthetized animal Unacceptable method of euthanasia Cervical dislocation in anesthetized or sedated animal Unacceptable method of euthanasia Decapitation in awake animal Unacceptable method of euthanasia Cervical dislocation in awake animal Unacceptable method of euthanasia Stunning in an awake animal Unacceptable method of euthanasia EUTANASIA Barbiturate euthanizing doses (mg/kg): Species IV route (mg/kg) IP route (mg/kg) Mouse 150 150 Rat 150 150 Rabbit 100 150 Guinea Pig 120 150 Hamster 150 150 Sheep 90 Goat 90 Chicken 150 150 Cat 80 80 Dog 80 80 Swine 90 Ferret Primate 120 80 12035