disordini non neoplastici dei globuli bianchi
disturbi quantitativi
disturbi qualitativi
• linfoadenopatie
• disordini linfoproliferativi
mielopoiesi
staminale
totipotente
staminale
committed
mieloblasto
promielocita
mielocita
metamielocita
band cell
GN
GN
(pool
marginale
& circolante)
GN
14 giorni
6-8 ore
2 giorni
midollo
progenitori
proliferazione
& maturazione
7 giorni
sangue periferico
riserva
7 giorni
riserva
(50%)
funzionale
(50%)
6-8 ore
aumento pools di riserva e marginale
leucopenia
(confermata)
iporigenerativa
emodialisi
viremia
ipersensibilita’
emolisi
idiopatica
base metabolica
indotta da farmaci
base citotossica
base idiosincrasica
aplasia, ipoplasia midollare
congenita
acquisita
fibrosi midollare, tumori metastatici,
infezioni
ematopoiesi inefficace
aumentato consumo (sepsi grave)
ridotta sopravvivenza
aumentata distruzione
immuno-mediata
farmaci
ipersplenismo
leucaferesi
PNH
pseudoleucopenia
midollo
progenitori
proliferazione
& maturazione
sangue periferico
riserva
riserva
(75%)
funzionale
(25%)
Leucopenia iporigenerativa
midollo
progenitori
proliferazione
& maturazione
sangue periferico
riserva
riserva
(10%)
funzionale
(90%)
Leucopenia:
riduzione dei globuli bianchi al di sotto dei valori normali
granulocitopenia (riduzione dei GN, GE, GB)
neutropenia (GN < 1.500 /l)
neutropenia di grado lieve
neutropenia di grado moderato
neutropenia grave
agranulocitosi
eosinofilopenia (< 40 /l)
stress acuto (steroidi/adrenalina)
infiammazione acuta (IL-5)
sindrome di Cushing
somministrazione di steroidi
basofilopenia ( < 10 /l)
stress acuto (steroidi/adrenalina)
infiammazione acuta (IL-5)
ipertiroidismo
monocitopenia (< 200 /l)
GN 1.000-1.500 /l
GN 500 - 1.000 /l
GN < 500 /l
GN assenti
Neutropenia: sintomi clinici:
riduzione risposte infiammatorie
febbre
dolore
rubor
tumor
infezioni ricorrenti
cute (stafilococco aureo)
intestinali (gram neg)
genitourinarie (gran neg)
afte mucosa orofaringea
sepsi
Cause piu’ frequenti di neutropenia acquisita
(danno midollare)
infezioni virali
mononucleosi infettiva (EBV, CMV)
HBV
HIV
HSV
VZV
parotite
rosolia
influenza
RSV
morbillo
parvovirus
infezioni batteriche
TBC
brucellosi
tifo
funghi
istoplasmosi
farmaci
chemioterapici
antibiotici
neuropsicotropici
cardiovascolari
analgesici
anti-istaminici
Leucocitosi > 11.000 WBC/mmc
Neutrofilia GN > 7.500/mmc
aumento fisiologico (demargination)
stress
attivita’ fisica
convulsioni
ansia
infezioni batteriche acute
danno tessutale ed infiammazione
infarto
ustioni
malattie del collagene
reazioni di ipersensibilita’
stati dismetabolici
insufficienza renale acuta
eclampsia
ketoacidosi
splenectomia
farmaci
adrenalina
cortisone
beta-agonisti
shift maturativo a sinistra
shift maturativo a destra
forte shift maturativo a sinistra
shift maturativo a sinistra
disturbi qualitativi dei globuli bianchi (I)
ipersegmentazione:
3/100 con piu’ di 5 lobi
1/100 con 6 lobi
carenza di ferro
carenza di vitB12
granulazioni tossiche
infezioni
infiammazioni
anomalia di Pelger-Huet
autosomico dominante
(1:6000)
benigno
disturbi qualitativi dei globuli bianchi (II)
deficit di MPO
monociti e GN
autosomico recessivo
(1:2000)
benigno
sindrome di Chediak-Higashi
autosomica recessiva
rara
grave
Anomalia di May-Hegglin
autosomico dominante
raro
numero assoluto linfociti
numero assoluto linfociti T
numero assoluto CD4+
numero assoluto CD8+
rapporto CD4/CD8
800-2600/mmc
800-2200/mmc
>400/mmc
250-750/mmc
>0.9
Linfocitopenia:
< 1.500 /l adulti
< 3.000 /l bambini
terapia con steroidi/ chemioterapia / radioterapia
infezioni virali/batteriche
HIV
TBC
neoplasie
linfoma di Hodgkin
leucemia acuta
tumori solidi
malattie croniche
sarcoidosi
lupus
sclerosi multipla
miastenia grave
sindrome di Guillain Barre’
assoluta
(>4000/mm3)
Linfocitosi
relativa
(<4000/mm3)
influenza
pertosse
tubercolosi
parotite
varicella
Herpes Simplex Virus
rosolia
Brucellosi
mononucleosi infettiva
epatite virale
farmaci
CLL
neutropenia
normale nei bambini sotto i 2 anni
infezione virale acuta
ipertiroidismo
morbo di Addison
LINFOADENOPATIA
definizione:
linfonodi di dimensioni anormali
linfonodi di consistenza anormale
linfonodi palpabili in numero aumentato
epidemiologia:
eta’ > 40 anni: 4% rischio di tumore
eta’ < 40 anni: 0.4% rischio di tumore
linfoadenopatia
localizzata:
1 sola area interessata
generalizzata: 2 o piu’ aree interessate non contigue
Cause piu’ frequenti di linfoadenopatia
infezioni
EBV
Toxoplasmosi
Cytomegalovirus
Febbre da graffio di gatto
Faringite
Tubercolosi
Scarlattina
Varicella Zoster Virus
HBV
HIV
Rosolia
parotite
tumori linfatici
linfoma di Hodgkin
linfoma non-Hodgkin
LLC
LLA
LMA
tumori metastatici
malattie del collagene e vasculiti
RA
LES
melanoma
carcinoma mammario
carcinoma polmonare
carcinoma gastrico
carcinoma prostatico
carcinoma renale
tumori del collo
Anamnesi
graffio da gatto (Toxoplasmosi)
ingestione di carne cruda (Toxoplasmosi)
puntura di zecca (Lyme Disease)
esposizione alla TBC
tossicodipendenze (IV)
trasfusioni
viaggi in Africa, Asia, Australia
Leishmania
febbre tifoide
Diagnosi:
emocromo ed ematochimici completi
sierologia per HIV, EBV, toxo, CMV, HBV, HCV
Rx torace
Eco addome
Biopsia linfonodale (FNA o biopsia)
linfonodo iperplastico
linfoma diffuso a piccole cellule
Incidenza delle principali neoplasie ematologiche
Patologia
No/100.000/
per anno
Linfomi (^)
15-20
Mielomi
3-5
Leucosi Acute
8-10
Leucosi Croniche (*)
5-10
(^) incremento del 150% dal 1950, con netto incremento per NHL rispetto ad HD
(*) notevole variabilità a seconda dell'età: 70 casi/100.000 adulti di oltre 80 anni
Tabella 1. Dati complessivi di incidenza di linfomi in diversi stati Europei nel periodo 1985-1992
e negli Stati Uniti d’America nel periodo 1990-1996.
No. di casi/anno/100.000 abitanti §
Maschi
Femmine
Totale
Danimarca
19,5
14,5
16,8
Finlandia
20,9
15,8
18
Francia
16,2
10,7
13,2
Gran Bretagna
15,0
9,8
12,2
Italia*
17,2
12,6
14,7
Olanda
21,8
12,2
16,4
Spagna
10,4
8,7
9,5
Stati Uniti d’America
19,4
12,1
15,5
Media
17,5
12,0
14,5
§
i valori sono stati ottenuti dal lavoro citato in referenza 18 e dai dati del SEER Cancer Statistics
Review, 1973-1996, accesso a: http://www-seer.ims.nci.nih.gov
*i dati si riferiscono al registro di Firenze, ottenuti su una popolazione di 1,2 milioni
Nazione
Lymphoid malignancies: the last 50 years
Incidence +150%
Mortality + 90%
Several factors may explain the lower increase in
mortality compared to incidence, in particular:
BETTER DIAGNOSIS
MORE EFFECTIVE THERAPY
Fattori associati ad aumentato rischio di insorgenza di linfoma non-Hodgkin (I)
Fattori generali di rischio aumentato




Età avanzata
Sesso maschile
Razza bianca
Stato socioeconomico avanzato
Stato di immunodepressione
 Congenita
 sindrome di Wiskott-Aldrich (WAS)
 common variable immunodeficiency (CVID)
 ataxia teleangectasia (AT)
 severe combined immunodeficiency (SCID)
 X-linked lymphoproliferative disorder (XLP)
 Acquisita
 trapianto d’organo (fegato, cuore, polmone, rene
e midollo emopoietico)
 terapie con immunosoppressori
 AIDS
Fattori associati ad aumentato rischio di insorgenza di linfoma non-Hodgkin (II)
Cronica stimolazione antigenica
Virus
 Malattie autoimmuni
 Sindrome di Sjögren
 Tiroidite di Hashimoto
 Artrite reumatoide
 Lupus eritematoso sistemico
 Morbo celiaco
 Gastrite da Helicobacter pylori
 Flogosi croniche intestinali
 Dermatite erpetiforme
 EBV
 HTLV-I
 HTLV-II
 HHV-8
 HHV-6
 HIV
 HCV
Sostanze tossiche e farmaci
 Utilizzate per lo più in ambiente lavorativo
 Erbicidi
 Pesticidi
 Solventi
 Tinture per capelli
 Fumo
 Difenilidantoina
APPROCCIO DIAGNOSTICO:
biopsia linfonodale
biopsia osteo-midollare
iperplasia linfonodale
Linfoma di Hodgkin
Linfoma follicolare
a piccole cellule clivate
Linfoma diffuso a piccoli linfociti
Linfoma diffuso
a grandi cellule
PTLD
APPROCCIO DIAGNOSTICO:
biopsia linfonodale
biopsia osteo-midollare
tipizzazione immunofenotipica
tipizzazione citogenetica
tipizzazione molecolare
diagnosis of hematological malignancies:
1950: morfologia
1960: citochimica
1970: citogenetica
1980: mAbs
1990: biologia molecolare
2000: genomics and proteomics
ANALISI AL FACS DI LINFOCITI OTTENUTI DA UN LINFONODO DI
LINFOMA FOLLICOLARE
Consequences of chromosomal translocations
regulatory
coding
regulatory
coding
regulatory
coding
regulatory
coding
translocation
regulatory
coding
fusion protein (leukemia)
translocation
regulatory
coding
deregulated transcription (lymphoma)
Chromosomal translocations in lymphoid malignancies
t(8;14)(q24;q32)
t(2:8)(q12;q24)
t(8;22)(q32;q11)
t(1;14)(q21;q32)
t(14;18)(q32;q21)
t(11:14)(q13;q32)MCL
t(14;19)(q32;q13)
t(11;14)(p13;q11) T-ALL
t(14;16)(q32;q23)
t(4;14)(p16;q32)
t(11;14)(q13;q32)MM
t(6;14)(p25;q32)
t(9;14)(p13;q32)
inv(14)(q11;q32)
Burkitt
Burkitt
Burkitt
ALL
FCL
cMYC
cMYC
cMYC
BCL9
BCL2
BCL1
B-CLL
IgH
BCL3
TCL2
MMe
MM
IgH
TCRd
c-MAF
FGFR3
BCL1??
MM
LPL
PTCL
IgH
Ig-kappa
Iglambda
IgH
IgH
IgH
IgH
IgH
IRF4
PAX5
TCRa
IgH
IgH
IgH
normal bone marrow and karyotype
Fluorescence In Situ Hybridisation (FISH)
In situ hybridisation is a technique to directly identify a specific region of DNA
or RNA in a cell. Complementary probes linked to molecules such as biotin or
fluorescein can be used to visualise the target, which can be chromosomes,
interphase nuclei or tissue biopsy.
Advantages and Disadvantages of FISH Techniques
Direct in situ technique is relatively rapid and sensitive.
No cell culture needed.
Result easier to interpret than karyotype.
Can combine FISH with immunostaining ie FICTION
FISH will only provide information about the probe being tested, other aberrations
will not be detected.
Illustration of FISH technique in metaphase and interphase cells.
Normal interphase cells show 2 green spots (BCL-1) and 2 red spots (IgH).
Abnormal interphase cells show 3 green spots and 2 red spots, but there
must be co-localisation of 1 red and 1 green spot.
FISH
CD5+ B-cell lymphoproliferative disorders
Trisomy 12, t (11;14), deletion 13q14, deletion of 17p(p53), deletion of 11q
Diffuse large B-cell lymphoma
3q27 deletion, t (14;18).
Suspected Burkitt lymphoma
t (8;14)
Suspected follicular lymphoma
or CD5- B-cell lymphoproliferative disorder in bone marrow
t (14;18)