Università di Pisa
Dipartimento di Patologia Chirurgica, Medica, Molecolare
e dell’Area Critica
Corso di Laurea in Tecniche di Laboratorio Biomedico
La determinazione delle proteine nelle urine di
pazienti con proteinuria di Bence Jones:
confronto tra metodi
Candidata
Anna Ciraolo
Relatore
Dott.ssa Laura Caponi
Anno Accademico
2013/2014
La determinazione quantitativa della componente
monoclonale nelle urine
PROTEINURIA DI BENCE JONES
La proteinuria di Bence Jones
Catene leggere
legate sulla Ig
Catene leggere κ
(monomeri)
Catene leggere
libere nel siero
Catene leggere λ
(dimeri)
La determinazione quantitativa della proteinuria di
Bence Jones
PROBLEMATICHE
Risultati diversi ottenuti con i vari metodi
Maggiore sensibilità all’albumina da parte dei metodi più usati
Sostanze interferenti
SCOPO DELLO STUDIO
verificare la performance di diversi metodi per il dosaggio delle proteine
nelle urine di pazienti con mieloma multiplo
Selezione dei campioni
49 campioni di urine
41 BJP
20 BJP in ELP
HYDRASIS
ELP
λ
ELP
G
A
M
κ
λ
Software Image J
Proteinuria (metodo turbidimetrico con cloruro di benzetonio BEC);
Albuminuria (metodo immunochimico al nefelometro).
Valutazione quantitativa delle catene leggere urinarie
Area FLC (%): Area totale (100%) = FLCBEC (mg/dl) : Proteine totaliBEC (mg/dl)
FLCBEC (mg/dl) = Area FLC (%) x Proteine totaliBEC (mg/dl)/ Area totale (100%)
Area FLC (%): Area AlbU (%) = FLCAlbU (mg/dl) : AlbU (mg/dl)
FLCAlbU (mg/dl) = Area FLC (%) x AlbU (mg/dl)/ Area AlbU (%)
Correlazione statistica
Correlazione r di Spearman
Valutazione quantitativa delle catene leggere urinarie
Dosaggio della proteinuria
Coomassie G-250
Pyrogallol-Red
Bradford
Lowry modificato
Acido Bicinconinico (BCA)
Dosaggio della proteinuria
Dosaggio della proteinuria dopo concentrazione
Centricon Centrifugal Filter YM-3
Dosaggio della proteinuria dopo precipitazione con acido
tricloroacetico (TCA)
Precipitazione con TCA 10%
Lavaggio in acetone
Solubilizzazione in H2O
Precipitazione con TCA 20%
Solubilizzazione in NaOH
Conclusioni
Problema del dosaggio accurato della proteinuria
Risultati non confrontabili
Dosaggi eseguiti nel medesimo laboratorio con la stessa metodica