Tecniche analitiche e
risultati a confronto:
Separazioni
Cromatografiche e
Spettri di Massa del
muco di lumaca.
Dr. Tatiana Bernardi
Dip. Scienze
Chimiche e Farmaceutiche
La bava di lumaca ha una composizione
complessa di sostanze attive che la
rende un ingrediente cosmetico unico e
non replicabile in laboratorio con un
prodotto di sintesi o una miscela di essi.
Sostanze di origine proteica
Polisaccaridi
Acido glicolico
Allantoina
Analisi
ac.glicolico-allantoina
Preparazione del campione: Muco (1250 µL) sciolto in 25 mL di Potassio di
idrogeno fosfato e scaldare a 60◦C for 15 min.
Agitare per 2 min Vortex e raffreddare a temperatura ambiente.
Regolare il pH a 2.9 con KOH 10 M.
Per eliminare le sostanze lipofile estrazione in esano.
Filtrare la soluzione acquosa a 0.22 µm.
Condizioni operative: Synergi Hydro-RP C-18 reversed-phase column (250
mm × 4.6 mm I.D., 5 m particle size).
Potassio di idrogeno fosfato (pH 2.7; 10 mM) per 15 min.
Velocità della fase mobile 0.7 mL/min.
Rivelatore UV-Vis 200 nm.
In queste condizioni l’allantoina (4 minuti) eluisce prima dell’acido glicolico
(4.3 minuti).
Allantoina 50 mg/L
Acido Glicolico 3000 mg/L
Analisi Spettrometria di massa
Q-TOF
Analisi HPTLC High Performance
Thin Layer Chromatography
12 ore Tirosina
12 ore Fenilalanina
+MS Chip Scan (0.303-2.860 min, 155 Scans) Frag=175.0V 12 ore.d
2.8
166.08575
1
2.6
2.4
2.2
2
1.8
1.6
1.4
162.07609
1
1.2
1
0.8
167.01329
0.6
164.09215
0.4
165.05645
163.08025
1
0.2
172.09458
168.04941
169.07500
160.07406 161.01672
170.04424
174.05347
173.07734
171.09545
0
160
161
162
163
164
165
166
167
168
Counts (%) vs. Mass-to-Charge (m/z)
169
170
171
172
173
174
12 ore Prolina
12 ore Ac. Glutammico e Metionina?
+MS Chip Scan (0.303-2.860 min, 155 Scans) Frag=175.0V 12 ore.d
9.5
148.06073
1
9
8.5
8
7.5
7
150.06857
1
6.5
6
5.5
5
4.5
4
3.5
3
152.06448
1
2.5
2
1.5
149.06343
1
1
0.5
0
144.06736
2
145.11747
146.07344
147.11253
151.03619
156.07646
1
153.13887
1
154.88060
158.03024
-0.5
144
145
146
147
148
Calc. Mass
150.0583
148.0604
149
150
151
152
Counts (%) vs. Mass-to-Charge (m/z)
Mis. Mass
150.068600
148.060700
153
154
Error ppm
68.639989
2.026200
155
156
157
158
Miscela amminoacidi
VALINA
PROLINA
HPTLC SILICE
2-Butanolo/NH3 /Piridina/H2O
TREONINA
ACIDO ASPARTICO
LEUCINA
ACIDO GLUTAMMICO
FENILALANINA
TIROSINA
ARGININA
HPTLC SILICE
2-Butanolo/CH3 COOH/Piridina/H2O
Identificazione sequenza amminoacidica: PROTEOMICA
Spettrometro di massa quadrupolo-tempo di volo interfacciato HPLC
Separazione SDS GEL PERMEATION
Scopo delle ricerche
Spettri IR
AMMINOACIDI
AZOTO
TOTALE
CARATTERIZZAZIONE
AC.GLICOLICO
ALLANTOINA
SOSTANZA
SECCA
METALLI
ATTIVITA’ ANTIMICROBICA
ATTIVITA’ ANTIBIOTICA