HemosIL™ ESPAÑOL - Revisión Prospecto 12/2008 Homocysteine - 0020007800 Aplicación Inmunoensayo automatizado para la determinación cuantitativa de L-homocisteína total en plasma humano citratado por turbidimetría de partículas de látex en los Sistemas de Coagulación de IL. NOTA: Las muestras de pacientes que siguen una terapia de drogas relacionadas con la S-adenosil-metionina pueden mostrar niveles falsamente elevados de homocisteína. Los pacientes que estén tomando metotrexano, carbamacepina, fenitoína, óxido nitroso, anticonvulsivos, o triacetato de 6-azauridina, pueden tener niveles elevados de homocisteína debido a su efecto en la vía metabólica. Referirse a la sección Limitaciones/interferencias de este folleto. Principio La Homocisteína (Hcy) es un aminoácido sulfurado originado en la demetilación de la metionina. La Hcy circula en el plasma mayoritariamente en su forma oxidada ligada a proteínas plasmáticas (principalmente albúmina).1,2 También se encuentran pequeñas cantidades de homocisteína reducida y de su dímero disulfurado (homocistina). La suma de todos los tipos de Hcy del plasma (libre y combinada a proteínas) representa la Hcy total (tHcy). La Hcy puede ser metabolizada a cisteína o metionina por la acción de varios enzimas, cofactores o sustratos. Un incremento en el nivel de Hcy en sangre (hiperhomocisteinemia) puede ocurrir cuando dichas reacciones no están equilibradas.2 Calibrator y otros reactivos: Mezclar suavemente por inversión del vial. El calibrador y resto de reactivos están listos para su uso. Nota: Los reactivos no son intercambiables entre lotes. Los viales que no hayan sido abiertos y se hayan conservado a 2-8°C son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. 136 4,3 - 11,1 µmol/L ACL ELITE/ELITE PRO/8/9/10000 136 4,0 - 11,2 µmol/L ACL Futura/ACL Futura Advance 136 4,1 - 10,6 µmol/L Otros reactivos - Los reactivos abiertos son estables: 2 meses a 2-8°C en el vial original o 8 horas a 15°C en el vial destapado y colocado en los Sistemas de Coagulación de IL. No congelar. Un estudio adicional del rango de normalidad fue realizado en un lugar de Estados Unidos con 125 muestras de individuos aparentemente sanos: Para una óptima estabilidad sacar los reactivos de los instrumentos y conservarlos a 2-8°C en sus viales originales bien tapados. Nota: La concentración de Hcy en el plasma de individuos sanos puede variar con la edad, sexo, área geográfica y factores genéticos. La literatura científica reporta que los hombres tienen niveles más elevados de Hcy que las mujeres, y que las mujeres post-menopáusicas tienen niveles más elevados de Hcy que las pre-menopáusicas. Durante el embarazo se observa una disminución considerable de los valores de Hcy. En países con programas de fortificación de ácido fólico se ha observado una reducción en los niveles de Hcy.1 Método de ensayo Para instrucciones completas del procedimiento del ensayo referirse al Manual de Aplicaciones de IL del instrumento correspondiente. Recolección y preparación de las muestras Después de la centrifugación de los glóbulos rojos la tHcy es estable en el plasma hasta 3 días a 2-8°C o 3 meses a -20°C. Las muestras pueden congelarsedescongelarse hasta 3 veces sin ningún efecto en los resultados del ensayo. Después de congelarse, las muestras deben mezclarse para asegurar su homogeneización.1 Etapa de reducción Reductor R1-SS-Hcy Hcy (R1 es cualquier residuo-SH) Etapa enzimática SAHH Hcy + Adenosina SAH Etapa de aglutinación competitiva Conjugado Aglutinación Látex Anti-SAH + SAH Inhibición de la aglutinación El grado de aglutinación es inversamente proporcional a la concentración de tHcy en la muestra y se determina midiendo el descenso de la luz transmitida causado por los agregados. Nota: Después de la recolección de la sangre y antes de la separación del plasma se produce un aumento de la tHcy que depende del tiempo y temperatura de conservación y que puede prevenirse por centrifugación a 1000 x g durante 10 minutos y separación de los hematíes, antes de 1 hora, o colocando las muestras de sangre en un baño de hielo hasta su centrifugación (hasta 8 horas). Reactivos adicionales y plasmas de control a-SAH Latex Reagent (Núm. Cat. 0020007850): 2 viales x 2 mL de una suspensión liofilizada de partículas de látex de poliestireno sensibilizadas con un anticuerpo monoclonal anti-S-adenosil-L-homocisteína (SAH) en un tampón conteniendo albúmina de suero bovino y 0,02% de BronidoxTM como conservante. C Calibrator (Núm. Cat. 0020007860): 2 viales x 1 mL de S-adenosil-Lhomocisteína (SAH) en PBS (solución tampón fosfato) con conservante. MEDIDAS DE PRECAUCIÓN Y ADVERTENCIAS: El tampón, conjugado y calibrador contienen azida sódica (< 0,1%), que puede reaccionar con las tuberías metálicas dando lugar a azidas altamente explosivas. Tomar las precauciones adecuadas para su desecho. Evitar el contacto con los ojos y la piel (S 24/25). No tirar los residuos por el desagüe (S 29), disponer de este material y su envase en un recipiente adecuado (S 29/35). Usar indumentaria protectora adecuada, guantes y protección ocular/facial (S 36/37/39). Este producto es para diagnóstico in vitro. Preparación a-SAH Latex Reagent: Disolver el contenido de un vial con 2 mL de agua tipo II CLSI (anteriormente NCCLS) o equivalente.9 Tapar el vial y homogeneizar suavemente. Asegurarse de la completa disolución del producto. Mantener el reactivo entre 15-25°C durante 30 minutos. Mezclar suavemente por inversión del vial antes de su uso. No agitar. El estudio de precisión intraserie y total (serie a serie y día a día) fue realizado en diferentes series. 20 4,8 Controles de Homocisteína Núm. Cat. 0020007900 Control Hcy nivel II 22,4 1,5 3,5 Cleaning solution (Solución de limpieza) Núm. Cat. 0009931700 Plasma Hcy 8,1 2,9 5,5 ACL TOP Control de calidad ACL ELITE/ELITE PRO/ 8/9/10000 Media (µmol/L) CV% (Intraserie) CV% (Total) Para realizar un programa completo de control de calidad, se recomienda el uso de dos niveles de control. Los controles de homocisteína se han designado a este efecto.11 Cada laboratorio debe establecer su propia media y desviación estándar, y debe realizar un programa de control de calidad para monitorizar sus resultados. Los controles deben ser analizados como mínimo una vez por cada turno de 8 horas de acuerdo con la normativa Buenas Prácticas del Laboratorio. Consultar la publicación de Westgard et al para la identificación y resolución de situaciones anormales del control de calidad.12 Control Hcy nivel I 12,3 2,3 5,1 Control Hcy nivel II 22,8 4,3 6,2 Plasma Hcy 8,4 2,6 5,9 Media (µmol/L) CV% (Intraserie) CV% (Total) Control Hcy nivel I 10,5 3,5 6,0 Trazabilidad de los calibradores y controles Control Hcy nivel II 21,1 2,6 3,5 El valor del calibrador de Hcy indicado en el folleto ha sido obtenido a través de múltiples determinaciones en los Sistemas de Coagulación de IL usando lotes específicos de reactivos y un Calibrador Estándar interno de Hcy. Plasma Hcy 7,9 3,5 5,6 r Método de referencia Como no hay Estándar Internacional de homocisteína, el Calibrador Estándar interno ha sido preparado diluyendo en un tampón exclusivo una solución concentrada de Sadenosil-L-homocisteína (SAH) en tampón fosfato.13,14 ACL TOP 0,9780 0,2943 0,989 HemosIL Hcy en ACL 9000 ACL Futura/ ACL Advance 0,9459 0,0149 0,989 HemosIL Hcy en ACL 9000 ACL ELITE/ELITE PRO/8/9/10000 0,8292 0,3505 0,992 Hcy Polarización Fluorescencia (FPIA)* Consultar el Manual del Usuario para información adicional. LR Precisión: CV% (Total) B Conjugate (Núm. Cat. 0020007840): 2 viales x 2,5 mL de solución de conjugado en PBS (solución tampón fosfato) con estabilizante y conservante. Características técnicas 2,0 Los resultados de Hcy se informan en µmol/L. Cn Estos resultados se han obtenido utilizando un lote específico de reactivo. Debido a las muchas variables que pueden afectar a los resultados, cada laboratorio debe establecer su propio rango de normalidad. CV% (Intraserie) El kit de Homocisteína consiste en: Enzyme (Núm. Cat. 0020007830): 2 viales x 2 mL de solución de S-adenosil-Lhomocisteína hidrolasa recombinante (SAHH) en tampón fosfato con estabilizante y conservante. Los rangos han sido calculados como recomienda la Federación Internacional de Química Clínica (IFCC).19 11,4 Resultados E Los valores de Hcy en plasma citrato son aproximadamente un 14,6% inferiores que los obtenidos en plasma EDTA o heparina debido a la dilución con el anticoagulante.18 Media (µmol/L) Composición Reductant (Núm. Cat. 0020007820): 2 viales x 2 mL de adenosina y solución de Tris (2-carboxietil) fosfina (TCEP) en tampón fosfato con estabilizante y conservante. 3,5 – 9,3 µmol/L 125 Control Hcy nivel I Los valores de homocisteína (Hcy) pueden ayudar en el diagnóstico y tratamiento de los pacientes sospechosos de tener hiperhomocisteinemia o homocistinuria. Rd ACL TOP Los siguientes reactivos y controles no se suministran con el kit y deben pedirse por separado. El calibrador de Hcy, cuando se utiliza para calibrar el ensayo de Hcy en los Sistemas de Coagulación de IL de acuerdo con las recomendaciones establecidas, demuestra conmutabilidad con los resultados de las muestras de los pacientes. Buffer (Núm. Cat. 0020007810): 2 viales x 9 mL de PBS (solución tampón fosfato) con conservante. Hcy total ACL TOP Los niveles de Hcy en el plasma de un paciente pueden medirse automáticamente en los Sistemas de Coagulación de IL en 3 etapas: 3. Reacción de aglutinación competitiva del látex anti-SAH, con el SAH y el conjugado. N Muestras de 136 donantes aparentemente sanos de un banco de sangre en España fueron usadas para determinar los siguientes rangos de normalidad: a-SAH Latex Reagent - Estabilidad una vez reconstituido: 2 meses a 2-8°C en el vial original o 8 horas a 15°C en el vial destapado y colocado en los Sistemas de coagulación de IL. No congelar. Recoger nueve partes de sangre recién extraída por punción venosa sobre una parte de anticoagulante citrato trisódico.10 2. Conversión enzimática de la Hcy libre a S-adenosil-L-homocisteína (SAH) por acción de la SAH hidrolasa (SAHH) en presencia de un exceso de adenosina. Se ha realizado un estudio del rango de normalidad utilizando el kit de Hcy. Sistema Conservación y estabilidad de los reactivos Concentraciones muy elevadas de Hcy se encuentran en pacientes con homocistinuria, una rara alteración genética que causa retraso mental, arterioesclerosis precoz y tromboembolismo arterial y venoso.1,3 Se conocen otros defectos genéticos menos severos que también producen niveles moderadamente elevados de Hcy. 1 La hiperhomocisteinemia, incluso moderada, es un factor de riesgo establecido de tromboembolismo arterial o venoso.4 Niveles de Hcy elevados también pueden presentarse secundariamente debido a otras enfermedades como la anemia y/o astenia,5,6 y la enfermedad renal crónica.7,8 1. Reducción de la Hcy presente en el plasma, como mezcla de formas disulfuradas y ligada a proteínas, a Hcy libre. Valores esperados ACL Futura/ ACL Advance Correlación: Sistema Pendiente Intersección *Nota: Estudio realizado con pares de plasma citrato sódico (HemosIL Hcy) y plasma EDTA (método de comparación). Los resultados del análisis deben ser usados conjuntamente con el resto de información, incluyendo el contexto clínico. La precisión y los datos de correlación se han obtenido usando lotes específicos de reactivos y de controles. Límite de detección: Limitaciones/interferencias Sistema Las muestras de pacientes que han recibido preparados de anticuerpos monoclonales con fines diagnósticos o terapéuticos pueden contener anticuerpos anti-ratón (HAMA). Los anticuerpos anti-ratón presentes en muestras de suero o plasma pueden interferir en los inmunoensayos que utilicen anticuerpos monoclonales de ratón.15,16 Este tipo de muestras no deben emplearse en el ensayo de Hcy. Establecido por comprobación de 20 replicados del Buffer del kit en varios instrumentos/plataformas utilizando 2 lotes distintos de reactivos. El valor más alto de los obtenidos (valor promedio ± 3DS) fue considerado el límite de detección: Concentraciones de hemoglobina hasta 490 mg/dL, de bilirrubina hasta 18 mg/dL, de triglicéridos hasta 1325 mg/dL, de factor reumatoide hasta 480 UI/mL y de fluoruro sódico no afectan a los resultados de Hcy en ninguno de los sistemas de coagulación de IL. 2,4 µmol/L Sistemas de Coagulación de IL Sensibilidad funcional: Establecida por comprobación de diluciones del calibrador del kit y de una muestra baja de Hcy. Cada dilución se comprobó 5 veces en varios instrumentos/plataformas utilizando 2 lotes distintos de reactivos. El valor de Hcy más bajo de los reportados con un error y un CV inferior al 20% fue considerado la sensibilidad funcional: Nota importante: Las siguientes drogas: metotrexano, carbamacepina, fenitoína, óxido nitroso y triacetato de 6-azauridina pueden dar elevados niveles de Hcy.17 El mecanismo de acción afecta a diferentes partes de la vía metabólica de la Hcy. Valor más bajo de Hcy con un error y un CV <20%: Especificidad analítica Sistema No se ha encontrado reacción cruzada con ninguno de los siguientes compuestos cuya estructura química o uso concurrente puede interferir en el ensayo de Hcy: Sistemas de Coagulación de IL Compuesto S-adenosil-L-metionina L-cisteína Adenosina L-cistationina L-metionina DL-homocisteína-tiolactona Glutation Concentración analizada Reacción cruzada 0,5 mmol/L 5,0 mmol/L 1,0 mmol/L 2,0 mmol/L 0,4 mmol/L 0,1 mmol/L 100 mmol/L 2,6% 0,0% 0,2% 0,1% -0,2% 4,7% 0,0% 4,5 µmol/L Linealidad: Test Regular Test Rerun 4,5 - 30 µmol/L 9 - 60 µmol/L El ensayo no presenta efecto de prozona hasta 600 µmol/L en ninguno de los Sistemas de Coagulación de IL. Los instrumentos que tienen activada la capacidad “Auto-Rerun”, realizan una dilución 1:2 automática de las muestras y corrigen el resultado final por el factor de dilución, expandiendo el rango del test hasta 60 µmol/L. Si el resultado obtenido todavía es superior al rango válido expandido, es decir las muestras se informan con resultados por encima de 60 µmol/L, éstas deben diluirse manualmente 1:10 con el Hcy Buffer (50 µL de muestra + 450 µL de Hcy Buffer) y reanalizarse en el ensayo normal. Los resultados obtenidos deben multiplicarse por 10, para corregir el factor de dilución. Nota: Valor del calibrador de Hcy. Referirse a la última página, después de la Bibliografía, para el valor asignado. ITALIANO - Revisione dell'inserto 12/2008 Homocysteine - 0020007800 Utilizzo Composizione Preparazione dei campioni Test immunologico automatico per la determinazione quantitativa della L-omocisteina totale nel plasma umano citratato sui sistemi di coagulazione ACL. NOTA: I pazienti che sono in terapia farmacologia con S-Adenosil-Metionina possono presentare valori falsamente elevati di omocisteina. I pazienti ai quali sono somministrati metotrexato, carbamazepina, fenitoina, ossido nitrico, anticonvulsivi, o triacetato di 6-azuridina possono presentare valori elevati di omocisteina a causa degli effetti di questi farmaci sull’emostasi. Fare riferimento alla sezione Limitazioni/sostanze interferenti di questo inserto. Il kit Hcy è composto da: Aggiungere a nove parti di sangue fresco venoso una parte di trisodio citrato.10 Nota: Dopo il prelievo e prima della separazione dalle emazie si ha un aumento del livello di omocisteina totale nel plasma, in quanto è tempo e temperatura dipendente. Tale incremento dei livelli plasmatici di Hcy può essere evitato, centrifugando il campione in esame a 1000 x g per 10 minuti entro un’ora dal prelievo e separando il plasma, oppure mantenendolo in bagno di acqua e ghiaccio prima della centrifugazione (fino a un massimo di 8 ore). Dopo separazione dalle emazie la tHcy è stabile nel plasma per almeno 3 giorni a 2-8°C o per 3 mesi a -20°C. B Buffer (Nr. Cat. 0020007810): 2 flaconi da 9 mL di soluzione tampone fosfato (PBS) con aggiunta di conservante. Rd Reductant (Nr. Cat. 0020007820): 2 flaconi da 2 mL di soluzione contenente adenosina e Tris (2-carbossi-etil) fosfina (TCEP) in tampone Bis-Tris con aggiunta di conservante. E Enzyme (Nr. Cat. 0020007830): 2 flaconi da 2 mL di soluzione contenente Sadenosil-L-omocisteina idrolasi (SAHH) ricombinante in tampone fosfato con aggiunta di stabilizzante e conservante. Cn Conjugate (Nr. Cat. 0020007840): 2 flaconi da 2,5 mL di soluzione di coniugato in soluzione tampone fosfato (PBS) con aggiunta di stabilizzante e conservante. LR a-SAH Latex Reagent (Nr. Cat. 0020007850): 2 flaconi da 2 mL di sospensione liofilizzata di particelle di lattice di polistirene legata con un anticorpo monoclonale diretto contro la S-adenosil-L-omocisteina (SAH) in una soluzione contenete albumina bovina serica e 0,02% di BronidoxTM come conservante. I seguenti reattivi non sono forniti insieme al kit e devono essere ordinati separatamente. Controlli per Omocisteina Nr. Cat. 0020007900 C Calibrator (Nr. Cat. 0020007860): 2 flaconi da 1 mL di S-adenosil-L-omocisteina (SAH) in soluzione tampone fosfato (PBS) con aggiunta di conservante. Soluzione detergente Nr. Cat. 0009831700 Principio del metodo L’omocisteina (Hcy) è un amminoacido solforato derivante dalla demetilazione intracellulare della metionina. L’ Hcy circola nel plasma prevalentemente nella sua forma ossidata legata alle proteine del plasma (principalmente l’albumina). 1,2 Possono essere presenti anche piccole quantità di omocisteina ridotta e di omocisteina-disulfide (o omocistina). L’omocisteina totale rappresenta la somma di tutte le forme plasmatiche di Hcy (sia libere che legate alle proteine). L’Hcy può essere poi metabolizzata a cisteina o a metionina attraverso l’azione di diversi enzimi, cofattori e substrati. Quando queste vie metaboliche sono alterate, si verifica un aumento della concentrazione di Hcy nel sangue (iperomocisteinemia).2 Elevate concentrazioni di Hcy si riscontrano nei soggetti affetti da omocistinuria, una rara patologia genetica, che causa ritardo dello sviluppo intellettuale, arteriosclerosi precoce, e tromboembolia arteriosa e venosa.1,3 Si riscontrano anche altre anomalie genetiche meno gravi che portano a concentrazioni di Hcy moderatamente elevate.1 L’iperomocisteinemia, anche se moderata, è considerata un fattore di rischio di eventi tromboembolici venosi e/o arteriosi.4 Un aumento dei livelli di Hcy può anche essere secondario ad altre patologie, come anemia e/o astenia,5,6 e nefropatie croniche.7,8 I livelli di Hcy sono misurati automaticamente sui sistemi per la coagulazione ACL in tre fasi: 1. Riduzione dell’omocisteina, presente nel plasma in esame sotto forma di bisolfuri misti o legata alle proteine, a Hcy libera. 2. Conversione enzimatica della Hcy libera in S-adenosil-L-omocisteina (SAH) a opera dell’SAH idrolasi in presenza di un eccesso di adenosina. 3. Reazione di agglutinazione competitiva tra anticorpi anti-SAH e SAH coniugata. Fase di riduzione Agente riducente R1-SS-Hcy Hcy R1 = qualsiasi residuo di tiolo Fase enzimatica ATTENZIONE: Il tampone, il coniugato e il calibratore contengono meno del 0,1% di sodio azide che potrebbe formare azidi esplosive a contatto con tubature metalliche. Prendere le dovute precauzioni per lo smaltimento. Evitare il contatto con gli occhi e con la pelle (S 24/25). Non gettare i residui nelle fognature; non disfarsi del prodotto e del recipiente se non con le dovute precauzioni (S 29/35). Usare indumenti protettivi e guanti adatti e proteggersi gli occhi/la faccia (S 36/37/39). Questo prodotto è per uso diagnostico in vitro. Preparazione a-SAH Latex Reagent: Sciogliere il contenuto del flacone con 2 mL di acqua di Tipo II secondo il documento CLSI (ex NCCLS) o equivalente.9 Chiudere con il tappo e miscelare delicatamente fino alla completa ricostituzione del materiale. Mantenere il reagente a 15-25°C per 30 minuti e miscelarlo nuovamente prima dell’uso. Non agitare. SAHH Coniugato SAH Il valore del Calibratore Hcy indicato è stato assegnato eseguendo repliche successive sui sistemi di coagulazione ACL con l’impiego di un lotto specifico di reagente rispetto a uno Standard Interno (Aziendale) di Calibratore Hcy. Poiché non è attualmente disponibile uno Standard Internazionale per l’omocisteina, lo Standard Interno è stato preparato diluendo con un tampone dedicato una soluzione concentrata di S-adenosil-Lomocisteina (SAH) in tampone fosfato.13,14 Risultati I risultati del test Hcy sono riportati in µmol/L. Riferirsi al Manuale dell’Operatore per ulteriori informazioni. I risultati del test Hcy dovrebbero essere utilizzati insieme ad altre informazioni, compreso il quadro clinico, per una diagnosi completa. Al termine dei cicli lavorativi si consiglia di conservare i reagenti a 2-8°C nel flacone originale per una migliore stabilità. Inibizione agglutinazione Metodo Il grado di agglutinazione è inversamente proporzionale alla concentrazione di Hcy nel campione ed è determinato misurando la diminuzione della luce trasmessa causata dagli aggregati. La determinazione dell’omocisteina (Hcy) può facilitare la diagnosi e la terapia dei pazienti affetti da sospetta iperomocisteinemia o omocistinuria. Calibratori e materiali di controllo Conservazione e stabilità dei reagenti Agglutinazione Lattice Anti-SAH + Per un completo programma di controllo di qualità si raccomanda l’uso di due livelli di controllo.11 I Controlli per Omocisteina Livello 1 e Livello 2 sono indicati per questo programma. Ogni laboratorio deve definire i valori medi e le deviazioni standard per i controlli utilizzati nel proprio programma di controllo di qualità. I controlli dovrebbero essere analizzati almeno una volta ogni 8 ore. Riferirsi al Manuale dell’Operatore per ulteriori informazioni. Per i casi particolari consultare all’articolo di Westgard et al.12 NOTA: Lotti diversi di reagenti non sono tra loro intercambiabili. Altri reagenti - I reagenti aperti sono stabili per 2 mesi a 2-8°C nel flacone originale o 8 ore a 15°C su sistemi di coagulazione ACL. Non congelare. Fase di agglutinazione competitiva Controllo di qualità Il Calibratore Hcy, quando viene utilizzato per calibrare il test Hcy sui sistemi di coagulazione ACL secondo le raccomandazioni IL, soddisfa il requisito di commutabilità con i plasmi dei pazienti. a-SAH Latex Reagent - Stabilità dopo la ricostituzione: 2 mesi a 2-8°C, 8 ore a 15°C sui sistemi di coagulazione ACL nel flacone originale. Non congelare. SAH Reagenti ausiliari e plasmi di controllo Altri reagenti e Calibratore: Capovolgere tutti i reagenti e il calibratore prima dell’uso. I reagenti e il calibratore sono poi pronti all’uso. I reagenti sigillati sono stabili a 2-8°C fino alla data di scadenza stampata sull’etichetta. Hcy + adenosina I campioni possono essere congelati e scongelati per un massimo di tre volte senza provocare alterazioni significative dei risultati del test. Dopo scongelamento agitare i campioni di plasma per garantirne l’omogeneità. 1 Per le metodiche e le procedure di lavoro riferirsi alle applicazioni dedicate degli strumenti IL. Instrumentation Laboratory Company - Bedford, MA 01730-2443 (USA) Instrumentation Laboratory SpA - V.le Monza 338 - 20128 Milano (Italy) Limitazioni/sostanze interferenti In campioni prelevati da pazienti a cui siano stati somministrati, a scopo diagnostico o terapeutico, preparati di anticorpi monoclonali di topo è possibile rilevare la presenza di anticorpi umani anti-topo (Human anti-mouse antibody - HAMA). Gli HAMA presenti nei campioni di plasma possono interferire negli immunodosaggi che utilizzano gli anticorpi monoclonali anti-topo.15,16 Tali campioni non devono essere utilizzati nel dosaggio della Hcy. I risultati del test Hcy sui sistemi di coagulazione ACL non sono influenzati in presenza di livelli di emoglobina fino a 490 mg/dL, bilirubina fino a 18 mg/dL, trigliceridi fino a 1325 mg/dL, fattore reumatoide fino a 480 UI/mL e fluoruro di sodio fino a 4,0 g/L. 3800-3797 R2 12/2008 HemosIL™ Attenzione: I seguenti farmaci: metotrexato, carbamazepina, fenitoina, ossido nitrico e triacetato di 6-azuridina possono provocare un aumento dei livelli di Hcy17 in quanto il loro meccanismo d’azione influenza, a diversi livelli, il ciclo metabolico dell’omocisteina. Specificità analitica E’ stata verificata ed esclusa una possibile reattività crociata per i seguenti composti la cui struttura chimica o il cui impiego concomitante potrebbero interferire con il test Hcy: Composto Concentrazione Reattività crociata % S-Adenosil-L-metionina L-Cisteina Adenosina L-Cistationina L-Metionina DL-Omocisteina-tiolattone Glutanione 0,5 mmol/L 5 mmol/L 1 mmol/L 2 mmol/L 0,4 mmol/L 0,1 mmol/L 100 mmol/L 2,4 % 0,0 % 0,2 % 0,1 % - 0,2 % 3,7 % 0,0 % Valori attesi Utilizzando il kit Hcy è stato determinato il seguente intervallo di normalità. Sistema Nr tHcy In Spagna, analizzando campioni di 136 soggetti apparentemente sani, donatori, si sono ottenuti i seguenti risultati: ACL TOP 136 4,3 - 11,1 µmol/L ACL ELITE/ELITE PRO/8/9/10000 136 4,0 - 11,2 µmol/L ACL Futura/ACL Advance 136 4,1 - 10,6 µmol/L In un altro studio sull’intervallo di normalità effettuato negli Stati Uniti, analizzando campioni di 126 soggetti apparentemente sani, si sono ottenuti i seguenti risultati: ACL TOP 125 3,5 - 9,3 µmol/L Nota: Nei soggetti sani, la concentrazione plasmatica di Hcy può variare in base a età, sesso, area geografica e fattori genetici. La letteratura scientifica riporta che i valori di riferimento sono più alti negli uomini rispetto alle donne, mentre le donne che hanno superato la menopausa hanno valori di Hcy più alti ripetto a quelle in età pre-menopausa. Durante la gravidanza è stata osservata una riduzione notevole dei valori di Hcy. Nei paesi che attuano programmi di rafforzamento dell’acido folico si osservano concentrazioni di Hcy più basse.1 I valori di Hcy ottenuti con plasma citratato sono approssimativamente più bassi del 14,6% rispetto a quelli degli stessi campioni anticoagulati con EDTA o eparina a causa della diluizione con l’anticoagulante.18 Gli intervalli di riferimento sono stati calcolati seguendo le raccomandazioni dell’International Federation of Clinical Chemistry (IFCC).19 Tali risultati sono stati ottenuti utilizzando un lotto specifico di reagente. A causa delle numerose variabili che possono influenzare i risultati, ogni laboratorio dovrebbe stabilire il proprio intervallo di normalità. Limite di rilevabilità: Sistema Prestazioni Sensibilità Funzionale: Precisione: La precisione, nella serie e totale (tra ciclo e ciclo e tra giorno e giorno), è stata verificata eseguendo numerosi test.20 ACL TOP Media (µmol/L) CV% (nella serie) CV% (Totale) Controllo Hcy Livello 1 Controllo Hcy Livello 2 Campione Hcy ACL ELITE/ELITE PRO/ 8/9/10000 11,4 22,4 8,1 Media (µmol/L) 2,0 1,5 2,9 CV% (nella serie) 4,8 3,5 5,5 CV% (Totale) Controllo Hcy Livello 1 Controllo Hcy Livello 2 Campione Hcy ACL Futura/ACL Advance 12,3 22,8 8,4 Media (µmol/L) 2,3 4,3 2,6 CV% (nella serie) 5,1 6,2 5,9 CV% (Totale) 3,5 2,6 3,5 6,0 3,5 5,6 Controllo Hcy Livello 1 Controllo Hcy Livello 2 Campione Hcy Correlazione: Sistema Pendenza 10,5 21,1 7,9 Intercetta r Metodo di riferimento ACL TOP 0.9780 0.2943 0.989 HemosIL Hcy su ACL 9000 ACL Futura 0.9459 0.0149 0.989 HemosIL Hcy su ACL 9000 ACL ELITE/ELITE 0.8292 0.3503 0.992 Hcy in immunofluorescenza PRO /8/9/10000 di polarizzazione* *NOTA: Questo studio ha confrontato campioni di plasmi di pazienti raccolti in provette con sodio citrato (HemosIL Hcy) ed EDTA (metodo di riferimento). I risultati dei test di precisione e di correlazione sono stati ottenuti usando uno specifico lotto di reagenti e controlli. Imunoensaio em latex automatizado e melhorado para a determinação quantitativa da L-homocisteína total no plasma humano citratado nos sistemas de coagulação da IL. NOTA: As amostras dos doentes que estão medicados com fármacos com S-adenosilmetionina podem apresentar níveis falsamente elevados de homocisteína. Os doentes que estão a tomar metotrexato, carbamazepina, fenitoína, óxido nitroso, anticonvulsivantes, ou 6-azuridina triacetato, podem ter níveis elevados de homocisteína devido ao seu efeito na via de actuação. Consulte a secção de Limitações/Substâncias interferentes neste folheto informativo. Resumo e príncipio A homocisteína é um aminoácido sulfídrico (Hcy) derivado da desmetilação intracelular da metionina. A Hcy circula no plasma, maioritariamente na forma oxidada ligada a proteínas plasmáticas (principalmente albumina).1,2 Também estão presentes, quantidades menores de homocisteína reduzida e de dímeros dissulfidicos Hcy (homocistina). A adição de todas as espécies de Hcy encontradas no plasma (livre e ligada ao plasma) representam a Hcy total (tHcy). A Hcy pode ser metabolizada a cisteína ou a metionina, através da acção de várias enzimas, cofactores e substratos. Pode ocorrer um aumento do nível sanguíneo de Hcy (hiperhomocisteinemia) quando ocorrem problemas nestas reacções.2 Em indíviduos com homocistinúria, encontram-se níveis gravemente elevados de Hcy. Trata-se de uma doença genética rara que provoca atraso mental, arterioesclerose precoce e tromboembolismo venoso e arterial.1,3 Outros erros genéticos menos graves podem causar, níveis moderadamente elevados de Hcy .1 A hiperhomocisteinemia, mesmo que moderada, é um factor de risco bem estabelecido para o tromboembolismo venoso/arterial.4 O aumento dos níveis de Hcy também podem surgir secundariamente a alguma doença, tal como anemia e/ou astenia 5,6 e doença renal crónica.7,8 Os níveis de Hcy no plasma dos doentes são medidos automaticamente nos sistemas de coagulação da IL, em três fases: 1. Redução dos dissulfidos e formas de Hcy ligadas às proteínas misturados, presentes nas amostras de plasma, a Hcy livre. 2. Conversão enzimática da Hcy livre a S-adenosil-L-homocisteína (SAH) pela hidrolase SAH (SAHH) na presença de adenosina em excesso. 3. Reacção de aglutinação competitiva entre anti-SAH e conjugado/SAH. Passo de Redução Agente redutor R1-SS-Hcy Hcy (R1 é qualquer residuo tiol) SAH Passo de aglutinação competitiva Conjugado Aglutinaçäo Anti-SAH Latex + SAH Inibiçäo da aglutinaçäo O grau de aglutinação é inversamente proporcional à concentração de tHcy na amostra e é determinado pela medição do decréscimo da luz transmitida, causada pelos agregados. Os valores de homocisteína (Hcy) podem apoiar no diagnóstico e tratamento de doentes com suspeita de hiperhomocisteinemia ou homocistinúria. Composição O kit Hcy consiste em: B Buffer (Cat. No. 0020007810): 2 frascos x 9 mL de PBS (solução de tampão fosfato) com conservante. Rd Reductant (Cat. No. 0020007820): 2 frascos x 2 mL de adenosina e solução Tris (2-carboxietil) fosfina (TCEP) em tampão Bis-Tris com conservante. E Enzyme (Cat. No. 0020007830): 2 frascos x 2 mL de solução S-adenosil-Lhomcisteína-hidrolase recombinante (SAHH) em tampão fosfato com estabilizante e conservante. Cn Conjugate (Cat. No. 0020007840): 2 frascos x 2.5 mL de solução de conjugado em PBS (solução de tampão fosfato) com estabilizante e conservante. LR a-SAH Latex Reagent (Cat. No. 0020007850): 2 frascos x 2 mL de uma suspensão liofilizada de partículas de latex de poliestireno revestidas com um anticorpo monoclonal anti S-adenosil-L-homocisteína (SAH) em tampão com albumina sérica bovina e Bronidox(tm)0.02% como conservante. C Conservação e estabilidade dos reagentes Os reagentes selados são estáveis até ao fim do prazo de validade impresso no frasco, desde que conservados entre 2-8°C. a-SAH Latex Reagent - Estabilidade pós-reconstituição: 2 meses entre 2-8°C no frasco original, 8 horas a 15°C instalado nos Sistemas de coagulação da IL. Não congele. Outros Reagentes - Os reagentes abertos são estáveis: 2 meses entre 2-8°C no frasco original, 8 horas a 15°C instalado nos Sistemas de coagulação da IL. Não congele. Para optimização da estabilidade remova os reagentes do sistema e conserve-os entre 2-8°C no frasco original. Procedimentos instrumento/teste Consulte as aplicações adequadas do instrumento IL para conhecer os procedimentos completos do ensaio. Colheita e preparação das amostras Nove partes de sangue venoso recente são adicionados a uma parte de citrato trissódico.10 Nota: Após a colheita de sangue e antes da separação do plasma, há um aumento dependente do tempo e da temperatura na tHcy, que pode ser evitado, quer por centrifugação a 1000 x g durante 10 minutos no espaço de uma 1 hora e removendo o plasma das células ou mantendo as amostras de sangue em gelo até centrifugá-las (até 8 horas). Após a remoção dos eritrócitos, a tHcy é estável no plasma durante pelo menos, 3 dias entre 2-8°C ou 3 meses a -20°C. As amostras podem ser congeladas-descongeladas até 3 vezes, sem qualquer efeito significativo sobre os resultados do ensaio. Após descongelar as amostras, deverá misturá-las para assegurar a homgeneidade.1 Reagentes adicionais e plasmas de controlo Os seguintes itens não são fornecidos com o kit e têm de ser adquiridos separadamente. Américas, Região do Pacífico e Europa Cat. No. Homocysteine Controls 0020007900 Cleaning solution 0009831700 Calibrator (Cat. No. 0020007860): 2 frascos x 1 mL de S-adenosil-L-homcisteína (SAH) em PBS (solução de tampão fosfato) com conservante. PRECAUÇÕES E AVISOS: Rastreabilidade dos calibradores e materiais de controlo Preparação a-SAH Latex Reagent: Dissolva o conteúdo de cada frasco em 2 mL de água CLSI tipo II (anteriormente NCCLS) ou equivalente.9 volte a colocar a tampa e rode suavemente. Assegure-se de que o produto foi completamente reconstituído. Mantenha o reagente entre 15-25°C durante 30 minutos e inverta-o cuidadosamente para misturar, antes de utilizar. Não agite com força. Valore di Hcy misurabile con inaccuratezza e CV < 20%: 4.5 µmol/L Linearità: Sistema Regular Test Rerun Test Sistemi di coagulazione ACL 4,5 - 30 µmol/L 9 - 60 µmol/L L’effetto “prozona” è assente fino a 600 µmol/L sui sistemi di coagulazione ACL. Con risultati superiori ai 30 µmol/L i campioni in esame devono essere diluiti 1:2 (1+1) con il Tampone Hcy (es. 200 µL di campione + 200 µL di Tampone Hcy) e rianalizzati. Gli strumenti con diluizione e ripetizione automatica dei campioni eseguono automaticamente queste operazioni e la relativa correzione del risultato, estendendo l’intervallo di linearità fino a 60 µmol/L. Se si ottiene un risultato al di fuori del limite alto dell’intervallo di linearità (ad esempio per valori di Hcy superiori a 60 µmol/L), il campione deve essere diluito manualmente 1:10 con il Tampone Hcy (es. 50 µL di campione + 450 µL di Tampone Hcy) e rianalizzati con la metodica di base. I risultati devono essere poi moltiplicati per il relativo fattore di diluizione. Nota: Valore del Calibratore Hcy: consultare l’ultima pagina dopo la bibliografia per il valore di riferimento. Sistema N tHcy 136 dadores aparentemente saudáveis do banco de sangue espanhol foram utilizados para determinar os seguintes intervalos normais: ACL TOP 136 4.3 - 11.1 µmol/L ACL ELITE/ELITE PRO/8/9/10000 136 4.0 - 11.2 µmol/L ACL Futura/ACL Advance 136 4.1 - 10.6 µmol/L Foi realizado um estudo adicional de intervalo normal nos EUA utilizando 126 amostras de indiv’duos aparentemente saudáveis: ACL TOP 125 3.5 – 9.3 µmol/L Nota: A concentração de Hcy no plasma de indivíduos saudáveis pode variar com a idade, sexo, área geográfica e factores genéticos. A literatura científica atribui aos homens valores mais elevados do que nas mulheres, e as mulheres pós-menopáusicas têm valores de Hcy mais elevados do que, as pré-menopáusicas. Durante a gravidez, observa-se um decréscimo considerável dos valores de Hcy. Os valores de Hcy são consideravelmente menores. Em países com programas de suplementação com ácido fólico, podem observar-se níveis reduzidos de Hcy.1 O plasma citratado tem resultados mais baixos, em cerca de 14,6%, em relação ao plasma heparinizado ou com EDTA, devido à diluição com o anticoagulante.18 Os intervalos foram calculados como recomendado pela International Federation of Clinical Chemistry (IFCC).19 Estes resultados foram obtidos utilizando um lote específico de reagente. Devido a muitas variáveis que podem afectar os resultados, cada laboratório deverá estabelecer o seu intervalo normal. Características de desempenho Precisão: A precisão intra-análise e total (de análise para análise e de dia para dia) foi avaliada ao longo de múltiplas análises.20 ACL TOP Média (µmol/L) CV% (intra-análise) CV% (Total) Hcy Control Level 1 Hcy Control Level 2 Amostra de plasma Hcy 11.4 22.4 8.1 ACL ELITE/ELITE PRO/ 8/9/10000 Média (µmol/L) Hcy Control Level 1 Hcy Control Level 2 Amostra de plasma Hcy 12.3 22.8 8.4 Média (µmol/L) Hcy Control Level 1 Hcy Control Level 2 Amostra de plasma Hcy 2.0 1.5 2.9 4.8 3.5 5.5 CV% (intra-análise) CV% (Total) 2.3 4.3 2.6 5.1 6.2 5.9 CV% (intra-análise) CV% (Total) 10.5 21.1 7.9 3.5 2.6 3.5 6.0 3.5 5.6 Correlação: Sistema Declive Intercepção r Método comparativo ACL TOP 0.9780 0.2943 0.989 HemosIL Hcy no ACL 9000 ACL Futura/ 0.9459 0.0149 0.989 HemosIL Hcy no ACL 9000 O valor notificado do Hcy Calibrator foi determinado após várias análises nos Sistemas d e coagulação da IL utilizando lotes de reagentes específicos e contra um lote padrão de Hcy Calibrator interno. Como actualmente não está disponível um Padrão internacional de Hcy, o lote padrão interno de Hcy Calibrator foi preparado pela diluição com um tampão dedicado, uma solução stock concentrada de S-adenosil-L-homcisteína (SAH) em tampão fosfato.13,14 O Hcy Calibrator, quando é utilizado para calibrar o ensaio Hcy nos Sistemas de coagulação da IL, de acordo com as recomendações da IL, demonstra comutabilidade com as amostras dos doentes. ACL ELITE/ELITE PRO /8/9/10000 0.8292 0.3503 0.992 Fluorescência Hcy Imunoensaio de olarização* Resultados Estabelecido pela análise de 20 replicados do kit Buffer em múltiplas plataformas de instrumentos utilizando 2 lotes de reagentes diferentes. O valor obtido mais elevado (média + 3DP) foi determinado como sendo o limite de detecção: Os resultados da Hcy são dados em µmol/L. Consulte o Manual do Operador do instrumento para obter informação adicional. Para formar um diagnóstico, os resultados do ensaio devem ser utilizados com outra informação, incluindo o contexto clínico. Limitações/substâncias interferentes As amostras de doentes que receberam preparações de anticorpo monoclonal de ratinho para diagnóstico ou terapêutica, podem conter anticorpos humanos anti-ratinho (HAMA). Os HAMA estão presentes nas amostras de plasma ou soro podem interferir nos imunoensaios que utilizam anticorpos monoclonais de ratinho.15,16 Estas amostras não devem ser analisadas com o ensaio Hcy. Os resultados da Hcy nos sistemas de coagulação da IL não são afectados pela hemoglobina até 490 mg/dL, bilirubina até 18 mg/dL, triglicéridos 1325 mg/dL, factor reumatóide até 480 IUI/mL e fluoreto de sódio até 4.0 g/L. Nota importante : os fármacos seguintes- metotrexato, carbamazepina, fenitoína, óxido nítrico e triacetato de 6-azauridina, podem causar níveis elevados de Hcy.17 o mecanismo de acção afecta partes diferentes da via metabólica da Hcy. Especificidade analítica O Buffer, o Conjugate e o Calibrator contêm azida sódica em concentração inferior a 0.1%, que pode formar azidas explosivas em contacto com a canalização de metal. Utilize os procedimentos adequados de eliminação. Evitar o contacto com a pele e os olhos (S 24/25). Não deitar os resíduos no esgoto; não eliminar o produto e o seu recipiente sem tomar as precauções de segurança devidas (S 29/35). Usar vestuário de protecção, luvas e equipamento protector para os olhos/face adequados. (S 36/37/39). Este produto destina-se a uso em diagnóstico in vitro. Sono stati analizzati diverse diluizioni del calibratore contenuto nel kit e campioni con basso valore di Hyc. Ogni diluizione e campione è stato analizzato per 5 volte su strumenti differenti, utilizzando 2 lotti di reagenti diversi. La sensibilità analitica è stata calcolata riportando il valore di inaccuratezza più alto, di Hcy, con CV < 20%: ACL Futura/ACL Advance São recomendados dois níveis de controlo para um programa completo de controlo de qualidade.11 Os Homocysteine Controls foram concebidos para este programa. Cada laboratório deve estabelecer a sua média e o seu desvio padrão e deve também estabelecer um programa de controlo de qualidade para monitorizar as análises do laboratório. Os controlos devem ser analisados, pelo menos uma vez, em cada turno de 8 horas, de acordo com as boas práticas de laboratório. Consulte Westgard et al para identificação e resolução de situações fora do controlo.12 SAHH Hcy + Adenosina Outros Reagentes e Calibrador: Inverta para misturar, antes de utilizar. Os reagentes/ calibrador estão prontos a utilizar. NOTA: Os reagentes não são intercambiáveis entre lotes. Controlo de qualidade Passo Enzimático 2,4 µmol/L Sistemi di coagulazione ACL PORTUGUÊS - Revisão do folheto 12/2008 Homocysteine - 0020007800 Utilização prevista Sono stati analizzati 20 replicati del tampone contenuto nel del kit su strumenti differenti, utilizzando 2 lotti di reagenti diversi. Il limite di rilevabilità è stato calcolato sul valore più alto (media + 3 DS): Não foi encontrada reactividade cruzada com os compostos seguintes, cuja estrutura química ou uso simultâneo possa interferir com ensaio da Hcy: Composto S-Adenosil-L-metionina L-Cisteina Adenosina L-Cistationina L-Metionina DL-Homcisteína-tiolactona Glutationa concentração analisada % de reactividade cruzada 0.5 mmol/L 5 mmol/L 1 mmol/L 2 mmol/L 0.4 mmol/L 0.1 mmol/L 100 mmol/L 2.4% 0.0% 0.2% 0.1% -0.2% 3.7% 0.0% *NOTA: Este estudo utilizou um emparelhamento de citrato de sódio (IL Hcy) versus EDTA (método comparativo) Amostras de plasma de doentes A precisão e os resultados de correlação foram obtidos utilizando lotes específicos de reagentes e controlos. Limite de detecção: Sistema 2.4 µmol/L Sistemas de Coagulação da IL Sensibilidade Funcional: Estabelecido pela análise de diluições do kit de calibração e uma amostra Hcy baixa. Cada diluição foi analisada 5 vezes em múltiplas plataformas de instrumentos utilizando 2 lotes de reagentes diferentes. O valor de Hcy mais elevado notificado com inexactidão CV <20% foi determinado como a sensibilidade funcional: O valor mensurável mais baixo de Hcy com inexactidão e CV < 20%: 4.5 µmol/L Linearidade: Sistema Teste regular Teste de re-análise Sistemas de Coagulação da IL 4.5 - 30 µmol/L 9 - 60 µmol/L O ensaio não demonstra efeito de prózona até 600 µmol/L nos sistemas de coagulação da IL. Os instrumentos com capacidade de “Auto Rerun” executam a diluição de 1:2 e a correcção automática dos resultados, alarga o intervalo do teste para 60 µmol/L. Se o resultado continuar a exceder o intervalo alargado, ou seja, amostras com resultados acima de 60 µmol/L, então a amostra deve ser diluída manualmente de 1:10 com Hcy Buffer (50 µL de amostra + 450 µL de Hcy Buffer) e reanalisada no ensaio padrão. O resultado deve ser multiplicado por 10 para corrigir a diluição. Nota: Valor do Hcy Calibrator- consulte a última página, a seguir à bibliografia para saber qual o valor atribuído. Valores esperados Realizou-se um estudo de intervalo normal com o kit Homocysteine. Bibliography / Literatur / Bibliografía / Bibliographie / Bibliografia /Bibliografia / Litteratur / Litteraturförteckning / 1. Refsum H, Smith AD, Ueland PM, Nexo E, Clarke R, McPartlin J, Johnston C, Engbaek F, Schneede J, McPartlin C, Scott JM. Facts and recommendations about total homocysteine determinations: an expert opinion. Clin Chem 2004; 50 (1):3-32 2. Finkelstein JD. Methionine metabolism in mammals. J Nutr Biochem 1990; 1:228-237. 3. Mudd SH, et al. Disorder of Transsulfuration. In: C.R. Scriver, A.L. Beaudet, W.S. Sly, et al., eds. The metabolic basis of inherited disease New York: McGraw-Hill, 1995: 1297-1327. 4. Boushey, Carol J, et al. A Quantitative Assessment of Plasma Homocysteine as a Risk Factor for Vascular Disease, JAMA, October 4, 1995-Vol 274, No. 13: 1049-1057. 5. Allen, Robert H, et al. Diagnosis of Cobalamin Deficiency I: Usefulness of Serum Methylmalonic Acid and Total Homocysteine Concentrations, American Journal of Hematology 1990; 34:90-98. 6. Stabler, Sally P, et.al. The Use of Homocysteine and Other Metabolites in the Specific Diagnosis of Vitamin B-12 Deficiency J Nutr 126: 1266S-1272S, 1996. 7. Guttormsen AB, Svarstad E, Ueland PM, Refsum H. Elimination of homocysteine from plasma in subjects with end-stage renal failure. Irish J Med Sci 1995; 164 (Suppl. 15): 8. 8. Bostom AG, Lathrop L. Hyperhomocysteinemia in end-stage renal disease (ESDR): Prevalence, etiology, and potential relationship to arteriosclerotic outcomes. Kidney Int 1997; 52:10-20. 9. Clinical Laboratory Standards Institute/NCCLS. Preparation and Testing of Reagent Water in the Clinical Laboratory, Third Edition, CLSI/NCCLS Document C3-A3; Vol. 17 No. 18. 10. Clinical Laboratory Standards Institute/NCCLS. Collection, Transport, and Processing of Blood Specimens for Testing Plasma-Based Coagulation Assays, Fourth Edition, CLSI/NCCLS Document H21-A4; Vol. 23 No. 35. 11. Zucker S, Cathey MH, West B. Preparation of Quality Control Specimens for Coagulation, Am J Clin Pathol 1970; 53: 924-927. 12. Westgard JO, Barry PL. Cost-Effective Quality Control: Managing the Quality and Productivity of Analytical Processes, AACC Press 1986. 13. Refsum H, Ueland PM, Svardal M. Fully Automated Fluorescence Assay for Determining Total Homocysteine in Plasma. Clin Chem 1989; 35:1921-27. 14. Fiskerstrand T, Refsum H, Kvalheim G, Ueland PM. Homocysteine and other thiols in plasma and urine: Automated determination and sample stability. Clin Chem 1993; 39: 263-271. 15. Primus FJ, Kelly EA, Hansen HJ, et al. “Sandwich”- Type Immunoassay of Carcinoembryonic Antigen in Patients Receiving Murine Monoclonal Antibodies for Diagnosis and Therapy. J Clin Chem 1988; 34: 261-4. 16. Schroff RW, Foon KA, Beatty SM et al. Human Anti-Murine Immunoglobulin Responses in Patients receiving Monoclonal Antibody Therapy. Cancer Res 1985; 45: 879-85. 17. Davis RE. Clinical chemistry of vitamin B12. Adv Clin Chem 1985; 24: 163-216. 18. Compatibility of the Abbott IMx Homocystein Assay with Citrate-Anticoagulated Plasma and Stability of Homocysteine in Citrat Whole Blood. Clin Chem 2001; 47: 1704-1707. 19. Solberg HE. Approved Recommendation (1987) on the Theory of Reference Values. Part 5. Statistical Treatment of Collected Reference Values. Determination of Reference Limits. J Clin Chem Clin Biochem 1987; 25: 645-656 20. Clinical Laboratory Standards/NCCLS. Evaluation of Precision Performance of Clinical Devices- Second Edition; Tentative Guideline. CLSI/NCCLS Document EP5-T2. Villanova, PA: CLSI/NCCLS, March 1992. Instrumentation Laboratory Company - Bedford, MA 01730-2443 (USA) Instrumentation Laboratory SpA - V.le Monza 338 - 20128 Milano (Italy) EP and US Patents EP 623174/US 5631127/US 5827645, US 5958717/US6063581 ACL, ACL Futura and ACL TOP are trademarks of Instrumentation Laboratory. ©2006 Instrumentation Laboratory Issued December 2008 REFERENCE VALUE ACL TOP C ACL ELITE/ELITE PRO/8/9/10000 ACL Futura/ACL Advance µmol/L 3800-3797 R2 12/2008 Homocysteine Printed Insert Sheet: Revision: Issued: C.O.: 0020007800 3800-3797 R2 December 2008 412126 LANGUAGES ESPAÑOL ITALIAN PORTUGUESE TECHNICAL SPEC'S PAPER: SIZE: PRINT: PRINT COLOR: White paper, 50-60 g/m2 weight. DIN A3 (297 x 420 mm.). Front/Back. Front - Top band Green Pantone 382, all remaining type in black. Back - All type in black. Instrumentation Laboratory Company - Bedford, MA 01730-2443 (USA) Instrumentation Laboratory SpA - V.le Monza 338 - 20128 Milano (Italy) 3800-3797 R2 12/2008