 Onclarity™ HPV Assay
English: pages 1 – 16 Deutsch: Seiten 32 – 47 Español: páginas 64–79
Français: pages 16 – 31 Italiano: pagina 48 – 63
U
8089899(02)
2014-01
442946
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INTENDED USE
The BD Onclarity HPV Assay is an amplified DNA test for the qualitative detection of high risk types of human
papillomavirus (HPV). The assay detects all high risk HPV types (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66,
and 68) and provides the capability for genotyping of six high risk types (HPV 16, 18, 31, 45, 51 and 52). Cervical
specimens that are tested with the BD Onclarity HPV Assay include the BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection
Kit, BD SurePath™ Preservative Fluid, and PreservCyt® Solution (using an aliquot that is removed prior to or after
processing for either the BD SurePath or ThinPrep™ Pap test). The BD Onclarity HPV Assay is performed with the
BD Viper™ LT System.
SUMMARY AND EXPLANATION
Human papillomavirus (HPV) is the most common sexually transmitted virus in the world, with 50% of sexually active
people having genital HPV at some point in their lives. People often do not know that they are infected and do not
take precautions to prevent the spread of the virus to others. There are more than 40 types of HPV that can infect
the genital tract.1 In many cases, HPV infections are transient, and the body will clear the virus on its own. In some
instances however, the virus is persistent and will cause normal cells to become abnormal, leading to cancer. These
oncogenic types of HPV are classified as high risk, and include HPV 16 and 18. Other types are considered low risk, as
they do not appear to cause cancer. According to the World Health Organization (WHO), HPV is the second biggest
cause of female cancer mortality worldwide, claiming about 250,000 lives annually. In Europe alone, the disease claims
about 15,000 lives each year.2 It is estimated that nearly 70% of cervical cancers are caused by HPV types 16 and 18.3
Today, Pap tests can inform a clinician if there are changes to the cervical cells. If those cells are abnormal, an HPV test
may be done to determine if those cervical changes are due to a strain of HPV which can lead to cervical cancer. Not
all molecular assays can distinguish among the different types of HPV.
The BD Onclarity HPV Assay, when tested with the BD Viper LT System, is an amplified DNA assay for the qualitative
detection of high risk types of human papillomavirus (HPV). The assay detects HPV types 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51,
52, 56, 58, 59, 66, and 68 and allows simultaneous identification of the high-risk types 16, 18, 31, 45, 51, 52 and other
high-risk genotypes reported by genotype group (P1: 33/58; P2: 56/59/66; P3: 35/39/68). Cervical specimens that may
be tested with the BD Onclarity HPV Assay include BD SurePath Preservative Fluid (using an aliquot that is removed
prior to or after processing for the BD SurePath Pap test), PreservCyt Solution (using an aliquot that is removed prior
to or after processing for the PreservCyt Pap test), and the BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit.
PRINCIPLES OF THE PROCEDURE
The BD Onclarity Human Papillomavirus (HPV) Assay is designed for use with the BD SurePath Preservative Fluid
(using an aliquot that is removed prior to or after processing for the BD SurePath Pap test), PreservCyt Solution
(using an aliquot that is removed prior to or after processing for the PreservCyt Pap test), and the BD Onclarity HPV
Cervical Brush Collection Kit, applicable reagents, the BD Viper LT System and BD FOX™ Extraction.
Specimens undergo a pre-warm step in the BD Pre-warm Heater to homogenize the matrix, lyse cells, and release DNA
capable of being extracted and amplified. After cooling, the specimens are loaded onto the BD Viper LT System which
then performs all the steps involved in extraction and amplification of target DNA, without further user intervention.
The specimen is transferred to an extraction tube that contains ferric oxide particles in a dissolvable film. Acid is then
added to lower the pH and induce a positive charge on the ferric oxide, which in turn binds the negatively charged
DNA. The particles and bound DNA are then pulled to the sides of the extraction tube by magnets and the treated
specimen is aspirated to waste. The particles are washed and a high pH elution buffer is added to elute the purified
DNA. Finally, a neutralization buffer is used to adjust the pH of the eluate to the optimum for DNA amplification. The
BD Onclarity HPV Assay is based on the simultaneous amplification and detection of target DNA using amplification
primers and fluorescently-labeled detector probes using real-time polymerase chain reaction (PCR). The reagents are
dried in three tubes (G1, G2, and G3) that are capable of detecting the 14 HPV genotypes and a specimen-derived
internal control consisting of a fragment of DNA from the human beta globin gene. Each single tube contains the
amplification primers, fluorescently-labeled detector probes, DNA polymerase, nucleotides and other reagents
necessary for amplification for the respective assays. The BD Viper LT System pipettes a portion of the purified DNA
solution from each extraction tube into the three BD Onclarity HPV PCR tubes (G1, G2, and G3) which are then sealed
to prevent contamination. The presence or absence of HPV DNA is determined by the PCR cycle at which the signal
crosses a pre-established threshold. In addition, the assay will extract, amplify and detect a fragment of the human
beta globin gene as an internal control to assess specimen processing, extraction, and amplification.
REAGENTS AND MATERIALS PROVIDED:
Each BD Onclarity HPV Assay Reagent Pack contains:
BD Onclarity HPV G1 PCR tubes, 2 x 96: each G1 PCR tube contains approximately 32.5 pmol oligonucleotides,
20 pmol fluorescently-labeled detector probes, 80 nmol dNTPs, and 0.52 units of DNA polymerase with stabilizers
and buffer components.
BD Onclarity HPV G2 PCR tubes, 2 x 96: each G2 PCR tube contains approximately 42.5 pmol oligonucleotides,
30 pmol fluorescently-labeled detector probes, 80 nmol dNTPs, and 0.52 units of DNA polymerase with stabilizers
and buffer components.
BD Onclarity HPV G3 PCR tubes, 2 x 96: each G3 PCR tube contains approximately 42.5 pmol oligonucleotides,
25 pmol fluorescently-labeled detector probes, 80 nmol dNTPs, and 0.52 units of DNA polymerase with stabilizers
and buffer components.
NOTE: Each pouch contains one desiccant bag.
Control Set for the BD Onclarity HPV Assay: 24 BD Onclarity HPV Positive Control tubes containing approximately
14,430 copies of HPV 16 linearized plasmid, 8,325 copies HPV 18 linearized plasmid, 8,418 copies of HPV 56 linearized
plasmid, and 3,885 copies of a plasmid containing a human beta globin gene sequence in carrier nucleic acid, and 24
BD Onclarity HPV Negative Controls tubes containing carrier nucleic acid alone. The concentrations of the carrier
nucleic acid and plasmids are determined spectrophotometrically.
BD Onclarity HPV Liquid Based Cytology Specimen (LBC) Diluent Tubes: 400 tubes each containing approximately
1.7 mL of buffer with salt, detergent, and preservative.
BD FOX PCR Extraction Tubes: 48 strips of 8 tubes, each containing approximately 10 mg of iron oxide in a dissolvable film.
BD Viper PCR Extraction Reagent Trough with Piercing Tool: each 5 cavity Extraction Reagent trough contains
approximately 16.5 mL Binding Acid, 72.5 mL Wash Buffer, 25.4 mL Elution Buffer, 19.4 mL Neutralization Buffer with
preservative and 15.5 mL Waste Neutralization Solution.
INSTRUMENT, EQUIPMENT AND SUPPLIES
Materials Provided: BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit, BD Viper LT Instrument, BD Viper LT
Instrument Plates, BD Viper LT Pipette Tips, BD Viper LT Solid Waste Liners, BD Viper LT System PCR Tube/Tray
Kit, BD Viper LT System PCR Accessory Kit, BD Viper Pre-warm Heater, BD Viper LT Specimen Rack, BD Viper
Neutralization Pouches, Specimen Tubes and Caps for use on the BD Viper System (Extracted Mode), BD ProbeTec™
Chlamydia trachomatis/Neisseria gonorrhoeae (CT/GC) Amplified DNA Assay Endocervical Specimen Collection and
DRY TRANSPORT Kit.
Materials Required But Not Provided: Nitrile gloves, displacement pipettes, polypropylene aerosol-resistant tips
capable of delivering 0.5 ± 0.05 mL, vortex mixer, 0.5% (v/v) sodium hypochlorite, 1% (v/v) sodium hypochlorite, 3% (w/v)
hydrogen peroxide, isopropyl alcohol, molecular biology-grade nuclease-free water.
Storage and Handling Requirements: The BD Onclarity HPV LBC Diluent and the BD Onclarity HPV Cervical
Brush Diluent should be stored at 2 – 25 ºC. All other reagents may be stored at 2 – 33 ºC. Unopened Reagent Packs
are stable until the expiration date. Once a pouch is opened, the PCR tubes are stable for 4 weeks if properly sealed or
until the expiration date, whichever comes first. Do not freeze.
WARNINGS AND PRECAUTIONS
1.For in vitro Diagnostic Use.
2. Pathogenic microorganisms, including hepatitis viruses and Human Immunodeficiency Virus, may be present in
clinical specimens. “Standard Precautions”4-7 and institutional guidelines should be followed in handling all items
contaminated with blood and other body fluids. For additional specific warnings, cautions and notes specific to
the BD Viper LT, consult the BD Viper LT System User’s Manual.
Specimen:
3. For liquid-based cytology specimens, use only the BD Onclarity HPV LBC Diluent tubes.
4. For cervical brush specimens, use only the BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit.
5. Optimal performance of the BD Onclarity HPV Assay requires proper specimen collection, handling and transport.
6. To reduce unnecessary bleeding, do not over-rotate the cervical brush during specimen collection.
7. Proper labeling should accompany each specimen to the laboratory.
8. When breaking the shaft of the cervical brush, take care to avoid splashing, spilling, or creating aerosols. Avoid
contamination of the cervical brush head.
9. Take care to avoid cross-contamination during the specimen handling steps. Ensure that specimen containers do not
contact one another, and discard used materials without passing over open containers. If gloves come in contact with
specimen, change gloves to avoid cross-contamination.
10. Under- or over-dispensing of LBC specimen into the BD Onclarity HPV LBC Diluent tube may affect assay performance.
Over filling the tubes may also result in liquid overflow on the BD Viper LT deck, and could cause contamination.
11. Cervical specimens must be collected and tested before the expiration date of the BD Onclarity HPV LBC Diluent tube
or the BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent tube.
12. Use only polypropylene aerosol-resistant pipette tips to transfer specimens to the BD Onclarity HPV LBC Diluent tubes.
Assay/Reagent:
13. BD Onclarity HPV Positive and Negative Controls must be pre-warmed within 24 hours of hydration.
14. Use only sample and control tubes with pierceable caps on the BD Viper LT System. Do not remove pierceable
caps prior to running the instrument. Be sure to replace any punctured pierceable caps with new pierceable caps
prior to running the instrument.
15. Do not interchange or mix kit reagents from kits with different lot numbers.
2
16. Do not test the BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent tube if received in the laboratory without the brush
present. A false negative test result may occur.
17. Use only the BD Viper LT pipette tips as supplied by BD with the BD Viper LT System.
18. BD Viper PCR Extraction Reagent Trough with Piercing Tool
DANGER
H314 Causes severe burns and eye damage. H302 Harmful if swallowed.
P260 Do not breathe dust/fume/gas/mist/vapours/spray. P280 Wear protective gloves/protective clothing/eye
protection/face protection. P303/361/353 IF ON SKIN (or hair): Remove/Take off immediately all contaminated
clothing. Rinse skin with water/shower. P304/340 IF INHALED: Remove victim to fresh air and keep at rest in a
position comfortable for breathing. P405 Store locked up. P501 Dispose of contents/container in accordance with
local/regional/national/international regulations.
19. Use only the BD Viper LT Clear Plate Sealers on the PCR tubes with the BD Viper LT System.
20. Reagent pouches containing unused PCR tubes MUST be carefully resealed after opening. Verify that desiccant is
present prior to resealing the reagent pouches.
21. The PCR tubes MUST be properly sealed with the BD Viper LT Clear Plate Sealers prior to removing the plate
from the BD Viper LT System. Sealing ensures a closed reaction for amplification and detection and is necessary
to avoid contamination of the instrument and work area with amplification products. Do not remove sealing
material from PCR tubes at any time.
22. To prevent contamination of the work environment with amplification products, use the disposal bags provided in
the BD Viper LT System PCR Accessory Kit to dispose of tested PCR tubes. Make sure the bags are properly closed
before disposal.
23. Although dedicated work areas are not required because the BD Viper LT design reduces the possibility of
amplicon contamination in the testing environment, other precautions for controlling contamination, particularly
to avoid contamination of specimens during manipulation, are necessary.
24. CHANGE GLOVES if they come in contact with specimen or appear to be wet, to avoid contaminating other
specimens. Change gloves before leaving work area and upon entry into work area.
25. In the event of contamination, refer to the BD Viper LT System User’s Manual for cleaning instructions.
26. Contact BD Technical Service and Support in the event of an unusual situation, such as a spill into the BD Viper LT
instrument or DNA contamination that cannot be removed by cleaning.
SPECIMEN COLLECTION AND TRANSPORT
Cervical specimens that may be tested with the BD Onclarity HPV Assay include the BD Onclarity HPV Cervical Brush
Collection Kit, BD SurePath Preservative Fluid (using an aliquot that is removed prior to or after processing with the
BD SurePath Pap test) and PreservCyt Solution (using an aliquot that is removed prior to or after processing for the
ThinPrep Pap test).
For U.S. and international shipments, specimens should be labeled in compliance with applicable state, federal, and
international regulations covering the transport of clinical specimens and etiologic agents/infectious substances. Time
and temperature conditions for storage must be maintained during transport.
CERVICAL BRUSH SPECIMEN COLLECTION
1. Insert the BD Onclarity HPV Cervical Brush into the endocervix until only the bottom most bristles are exposed at
the os. Slowly rotate ¼ to ½ turn in one direction. To reduce unnecessary bleeding, do not over-rotate the brush.
2. Remove cap from the BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent tube and immediately place the brush into the
bottom of the tube.
3. Carefully break the shaft at the score line. Avoid splashing of the contents.
4. Tightly recap the tube.
CERVICAL BRUSH SPECIMEN STORAGE AND TRANSPORT
The cervical brush specimens in BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent tubes must be stored and transported to the
laboratory and/or test site within 30 days after collection if kept at 2 – 30 ºC or within 30 days after collection if kept
frozen at -20 ºC. Specimen storage and transport should not exceed the expiration date of the Cervical Brush Diluent
tube.
LBC SPECIMEN COLLECTION
BD SurePath or PreservCyt specimens must be collected using either an endocervical broom or a brush/spatula
combination as described in the BD SurePath or PreservCyt product insert. Once collected, BD SurePath or
PreservCyt specimens can be stored and transported in their original vials for up to 30 days at 2 – 30 °C or 30 days if
kept frozen at -20 ºC prior to transfer to BD Onclarity HPV LBC Specimen Diluent tubes.
3
LBC SPECIMEN STORAGE AND TRANSPORT
LBC Specimen Transfer to BD Onclarity HPV LBC Diluent tubes - Prior to or After Removing an Aliquot for
Processing for either the BD SurePath or ThinPrep Test.
A 0.5 mL aliquot of either the BD SurePath or PreservCyt specimen is manually transferred from the original vial to the
BD Onclarity HPV LBC Specimen Diluent tube prior to or after processing for either the BD SurePath or ThinPrep Pap
test. Wear gloves when handling the BD Onclarity HPV LBC Specimen Diluent tube and the BD SurePath or PreservCyt
specimen vial. If gloves come in contact with the specimen, immediately change them to prevent contamination of other
specimens.
BD SurePath Specimen Transfer Prior to or After Processing for the BD SurePath test
NOTE: Refer to the BD PrepStain™ Slide Processor or BD Totalys™ SlidePrep Product Insert for instructions on
removing an aliquot from the BD SurePath specimen vial prior to performing the BD SurePath liquid-based Pap test.
NOTE: Handle one specimen at a time for processing.
1. Label a BD Onclarity HPV LBC Diluent tube with patient identification information.
2. Remove the cap from the BD Onclarity HPV LBC Diluent tube.
3. In order to ensure a homogenous mixture, vortex the BD SurePath specimen vial for 10-20 s.
4. Quickly transfer 0.5 mL from the specimen vial using an aerosol-resistant tip to the BD Onclarity HPV LBC Diluent
tube within one minute of vortexing.
5. Discard pipette tip.
NOTE: A separate pipette tip must be used for each specimen.
6. Tighten the cap on the BD Onclarity HPV LBC Diluent tube securely.
7. Invert the BD Onclarity HPV LBC Diluent tube 3 – 4 times to ensure that the specimen and diluent are well mixed.
PreservCyt Specimen Transfer Prior to or After Processing for the ThinPrep Pap test
NOTE: Refer to the ThinPrep 2000/3000 System Operator’s Manual Addendum for instructions on removing an aliquot
from the PreservCyt specimen vial prior to performing the ThinPrep test.
NOTE: Handle one specimen at a time for processing.
1. Label a BD Onclarity HPV LBC Diluent tube with patient identification information.
2. Remove the cap from the BD Onclarity HPV LBC Diluent tube.
3. In order to ensure a homogenous mixture, vortex the PreservCyt specimen vial at high speed for 8-12 s.
4. Immediately transfer 0.5 mL from the specimen vial using an aerosol-resistant tip to the BD Onclarity HPV LBC
Diluent tube.
5. Discard pipette tip.
NOTE: A separate pipette tip must be used for each specimen.
6. Tighten the cap on the BD Onclarity HPV LBC Diluent tube securely.
7. Invert the BD Onclarity HPV LBC Diluent tube 3 – 4 times to ensure that the specimen and diluent are well mixed.
Storage and Transport of Specimens Transferred to the BD HPV LBC Diluent tubes
After manual transfer to a BD Onclarity HPV LBC Diluent tube, the diluted specimen can be stored at 2 – 30 °C for up
to 15 days, or up to 30 days when stored at -20 °C.
PROCESSING PROCEDURE FOR ALL SPECIMENS
NOTE: If specimens are frozen, make sure they are thawed completely at room temperature and mixed by inversion
prior to proceeding.
1. Using the Tube Layout Report, place the specimens in order in the BD Viper LT Specimen Rack and lock into place.
2. Specimens are ready to be pre-warmed.
3. Change gloves prior to proceeding to avoid contamination.
QUALITY CONTROL PREPARATION
1. Uncap a BD Onclarity HPV Negative Control and a BD Onclarity HPV LBC Diluent tube.
2. Pour the entire contents of the BD Onclarity HPV LBC Diluent tube into the BD Onclarity HPV Negative Control.
3. Re-cap the rehydrated BD Onclarity HPV Negative Control. Re-cap and discard the empty BD Onclarity HPV LBC
Diluent tube.
4. Uncap a BD Onclarity HPV Positive Control and a BD Onclarity HPV LBC Diluent tube.
5. Pour the entire contents of the BD Onclarity HPV LBC Diluent tube into the BD Onclarity HPV Positive Control.
6. Re-cap the rehydrated BD Onclarity HPV Positive Control. Re-cap and discard the empty BD Onclarity HPV LBC
Diluent tube.
7. Using the Tube Layout Report, place the rehydrated BD Onclarity HPV Negative Control into the appropriate
position in the BD Onclarity LT Specimen Rack.
8. Using the Tube Layout Report, place the rehydrated BD Onclarity HPV Positive Control into the appropriate
position in the BD Onclarity LT Specimen Rack.
9. Controls are ready to be pre-warmed with the specimens.
NOTE: Controls must be pre-warmed within 24 hours of hydration.
PRE-WARM PROCEDURE
NOTE: The pre-warm procedure must be applied to all specimens to ensure that the specimen matrix is homogeneous
prior to loading on the BD Viper LT System. Failure to pre-warm specimens may have an adverse impact on
performance of the BD Onclarity HPV Assay and/or BD Viper LT System.
4
NOTE: Refrigerated or frozen specimens must be thawed completely at room temperature prior to pre-warming.
1. Insert the BD Viper LT Specimen Rack into the BD Pre-warm Heater and select the BD Onclarity HPV Assay prewarm protocol on the BD Viper LT Instrument.
2.The BD Pre-warm Heater will automatically pre-warm the specimens and controls according to the BD Onclarity
HPV Assay pre-warm protocol.
3. After the BD Onclarity HPV Assay pre-warm protocol is complete, remove the rack from the heater and load into
the BD Viper LT instrument.
4. Refer to the Test Procedure for testing specimens and controls.
5. After pre-warming, specimens may be stored for up to 7 days at 2 – 30 ºC or for up to 30 days at -20 °C without
additional pre-warming prior to testing on the BD Viper LT System.
6. After pre-warming, controls may be stored for up to 24 h at 2 – 30 °C without additional pre-warming prior to
testing on the BD Viper LT System.
TEST PROCEDURE
Refer to the BD Viper LT System User’s Manual for specific instructions for operating and maintaining the components
of the system. The optimum environmental conditions for the HPV assay were found to be 18 - 27 ºC and 20 - 85 %
Relative Humidity.
QUALITY CONTROL
Quality control must be performed in accordance with applicable local, state and/or federal regulations or accreditation
requirements and your laboratory’s standard Quality Control procedures. It is recommended that the user refer to
pertinent CLSI guidance and CLIA regulations for appropriate Quality Control practices.
The Control Set for the BD Onclarity HPV Assay is provided separately. One Positive and one Negative Control must
be included in each assay run and for each new reagent kit lot number. Controls must be positioned according to the
BD Viper LT System User’s Manual. The HPV Positive Control will monitor for substantial reagent failure only. The
HPV Negative Control monitors for reagent and/or environmental contamination. Additional controls may be tested
according to guidelines or requirements of local, state, and/or federal regulations or accrediting organizations.
General QC Information for the BD Viper LT System:
The location of the PCR tubes is shown in a color-coded plate layout screen on the LCD Monitor. The plus symbol (+)
within the tube indicates the positive QC sample. The minus symbol (-) within the tube indicates the negative QC sample.
A QC pair must be logged in for each reagent kit lot number. If QC pairs have not been properly logged in, a message
box appears that prevents saving the rack and proceeding with the run until complete. Additional (optional) QC tubes
for testing may be logged in. These tubes are tested as regular samples and do not affect the Pass/Fail status of the
run. Refer to the BD Viper LT System User’s Manual for instructions.
NOTE: BD Onclarity HPV Controls must be manually hydrated prior to loading them into the BD Viper LT Specimen
Rack.
Interpretation of Quality Control Results:
The BD Onclarity HPV Positive Control and the BD Onclarity HPV Negative Control must test as positive and
negative, respectively, in order to obtain patient results. If controls do not perform as expected, the run is considered
invalid and patient results will not be reported by the instrument. If either of the controls does not provide the
expected results, repeat the entire run using a new set of controls, new extraction tubes, new extraction reagent
trough, and new PCR tubes. If the issue does not resolve, contact BD Technical Service and Support for additional
information.
Table 1: Interpretation of Quality Control Results
Control Type
Tube Result Report Symbol
BD Onclarity HPV Positive Control
OK
QC Disposition
QC Pass
BD Onclarity HPV Positive Control
QC Failure
BD Onclarity HPV Positive Control
QC Failure
BD Onclarity HPV Positive Control
QC Failure
BD Onclarity HPV Negative Control
OK
QC Pass
BD Onclarity HPV Negative Control
QC Failure
BD Onclarity HPV Negative Control
QC Failure
BD Onclarity HPV Negative Control
Refer to the Interpretation of Test Results for a description of Tube Result Report symbols.
QC Failure
INTERPRETATION OF TEST RESULTS
The BD Onclarity HPV Assay uses the real-time polymerase chain reaction to detect the presence of Human
Papillomavirus (HPV) in clinical specimens. All calculations are performed automatically by the BD Viper LT software.
The presence or absence of clinically relevant HPV DNA is determined by the PCR cycle (Ct) at which the signal crosses
a pre-established threshold. The assay will extract, amplify and detect a fragment of the human beta- globin gene
as an internal control to assess specimen processing, extraction, amplification, and to indicate the presence of PCR
inhibitors. If the HPV-specific signal is greater than a cycle threshold, the internal control is utilized by the algorithm in
the interpretation of the result. If the HPV-specific signal is less than or equal to a cycle threshold, the internal control
is ignored by the algorithm.
5
For HPV specimens, an “HR” result (the combination of all genotypes) appears on the Tube Results Report. A positive
symbol in this column indicates that one or more genotypes that the HPV assay is capable of detecting has a positive
result. The “GT” column is used to report results for geno­types that are not available in your region. These results
cannot be purchased.
Specific genotypes and combined genotypes appear in columns. If the results for a genotype have been purchased,
those results are reported as explained below. If any genotype results have not been configured for automatic
purchase, those results are masked by a “key” icon.
The instrument can be configured to purchase / report specific genotypes when the run is complete. See the BD Viper LT
System User’s Manual for instructions on authorizing automatic genotype reporting.
If assay control results are not as expected, patient results are not reported. See the Quality Control section for expected
control values. Reported results are determined as follows.
Table 2: Interpretation of High Risk HPV Genotype HPV Test Results for the BD Onclarity HPV Assay
High Risk HPV Result
HR
HR
Interpretation
Result
Positive for High Risk HPV types
HPV HR Positive
Negative for High Risk HPV types
HPV HR Negative
HPV DNA, if present, is not detectable
Internal Control Failure
HPV DNA, if present, is not detectable.
Extraction Transfer Failure
HPV DNA, if present, is not detectable.
Liquid Level Failure
HPV DNA, if present, is not detectable.
Error
Table 3: Interpretation of Specific HPV Genotype Test Results for the BD Onclarity HPV Assay
HPV Genotype Result
16
16
18
18
45
45
P1
P1
31
31
P2
P2
51
51
52
52
P3
P3
GT
GT
--
Interpretation
Result
Positive for HPV type 16
HPV type 16 Positive
Negative for HPV type 16
HPV type 16 Negative
Positive for HPV type 18
HPV type 18 Positive
Negative for HPV type 18
HPV type 18 Negative
Positive for HPV type 45
HPV type 45 Positive
Negative for HPV type 45
HPV type 45 Negative
Positive for HPV types 33 and/or 58
HPV type 33 and/or 58 Positive
Negative for HPV types 33 and/or 58
HPV type 33 and/or 58 Negative
Positive for HPV type 31
HPV type 31 Positive
Negative for HPV type 31
HPV type 31 Negative
Positive for HPV types 56, 59 and/or 66
HPV type 56, 59 and/or 66 Positive
Negative for HPV types 56, 59 and/or 66
HPV type 56, 59 and/or 66 Negative
Positive for HPV type 51
HPV type 51 Positive
Negative for HPV type 51
HPV type 51 Negative
Positive for HPV type 52
HPV type 52 Positive
Negative for HPV type 52
HPV type 52 Negative
Positive for HPV types 35, 39 and/or 68
HPV type 35, 39 and/or 68 Positive
Negative for HPV types 35, 39 and/or 68
HPV type 35, 39 and/or 68 Negative
Positive HPV Genotype result(s) not available
in your region
Negative HPV Genotype result(s) not available
in your region
Positive HPV Genotype result(s)
restricted
Negative HPV Genotype result(s)
restricted
HPV genotype result is available for purchase
Genotype result is locked
HPV genotype result is not available for
purchase
HPV Negative result, Internal Control
failure, Liquid Level failure or Extraction
Transfer failure
6
Monitoring for the Presence of DNA Contamination
At least monthly, the following test procedure should be performed to monitor the work area and equipment surfaces
for the presence of DNA contamination. Environmental monitoring is essential to detect contamination prior to the
development of a problem.
1. For each area to be tested, use a clean collection swab from the BD ProbeTec Chlamydia trachomatis/Neisseria
gonorrhoeae (CT/GC) Amplified DNA Assay Endocervical Specimen Collection and DRY TRANSPORT Kit.
2. Pour off some molecular biology grade nuclease-free water into a small clean container.
3. Dip the swab into the molecular biology grade nuclease-free water and wipe the first area using a broad sweeping
motion.
4. Remove the cap of a BD Onclarity HPV LBC Diluent tube and insert the swab into the Diluent. Mix by swirling the
swab in the BD Onclarity HPV Diluent for 5 – 10 s.
5. Express the swab along the inside of the tube so that liquid runs back into the bottom of the tube.
6. Remove the swab carefully from the BD Onclarity HPV LBC Diluent tube to avoid splashing. Discard the swab.
7. Tightly recap the BD Onclarity HPV LBC Diluent tube with the black pierceable cap.
8. Repeat for each desired area.
9. After all swabs have been collected and expressed, process them according to the Pre-warming Procedure and
then follow the Test Procedure.
Consult the BD Viper LT System User’s Manual for more information on Environmental Monitoring and Cleaning
Procedures. If a contamination event does not resolve, contact BD Technical Service and Support for additional
information.
LIMITATIONS OF THE PROCEDURE
1. Optimal performance of the test requires adequate specimen collection and handling. Refer to the Specimen
Collection and Transport sections of this insert.
2. A negative test result does not exclude the possibility of infection because test results may be affected by
improper specimen collection, technical error, specimen mix-up, or the number of organisms in the specimen
which may be below the sensitivity of the test.
3.The BD Onclarity HPV Assay provides qualitative results.
4. Use of the BD Onclarity HPV Assay is limited to personnel who have been trained in the assay procedure and the
BD Viper LT System.
PERFORMANCE CHARACTERISTICS
BD Onclarity HPV Cervical Brush specimens, BD SurePath specimens and/or PreservCyt specimens, were collected
from 836 protocol compliant women who were referred for follow-up due to abnormal Pap test or HPV infection, or
women attending a clinic for a routine visit at two geographically diverse clinical sites in Europe. Two specimens were
collected from each enrolled subject in the following order: a BD SurePath specimen (Site A) or a PreservCyt specimen
(Site B), and a BD Onclarity HPV Cervical Brush specimen (transported in a BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent
tube). For each cytology vial collected, 0.5 mL was aliquoted into a BD Onclarity HPV LBC Diluent tube. Cytology, HPV
DNA results (digene® Hybrid Capture 2 (hc2) High-Risk HPV DNA Test), and Roche LINEAR ARRAY® HPV Genotyping
Test (RLA) results were available for most of the specimens. Histology results were available for most of the subjects
attending a high-risk clinic.
Each site also enrolled residual specimens (BD SurePath or PreservCyt) with associated cytology results, HPV DNA
results (digene Hybrid Capture 2 High-Risk HPV DNA Test), Roche LINEAR ARRAY HPV Genotyping Test results, and
where applicable, histology results. For each specimen enrolled, 0.5 mL was aliquoted into a BD Onclarity HPV LBC
Diluent tube. There were 510 compliant retrospective specimens enrolled, with histology results available for 234
women.
All specimens were tested on the BD Viper LT System in accordance with the assay package insert and user’s manual.
For each media type, the clinical sensitivity and specificity for detection of disease, which is defined as (1) Cervical
Intraepithelial Neoplasia (CIN2) or greater histology result or (2) Cervical Intraepithelial Neoplasia (CIN3) or greater
histology result, was calculated. Final data analysis includes BD Onclarity HPV assay results from 472 BD SurePath
specimens, 361 PreservCyt specimens, and a total of 515 BD Onclarity HPV Cervical Brush specimens: 247 BD Onclarity
HPV Cervical Brush specimens (in BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent) for Site A and 268 BD Onclarity HPV Cervical
Brush specimens (in BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent) for Site B. The performance estimates for the detection
of high grade cervical disease for the BD Onclarity HPV assay and the hc2 assay are presented in Tables 4 and 5 for
BD SurePath media, Tables 8 and 9 for PreservCyt media, and Tables 12 and 13 for the BD Onclarity HPV Cervical Brush
specimens.
BD Onclarity HPV assay results were also compared to HPV DNA results from the digene Hybrid Capture 2 High-Risk
HPV DNA Test and Roche LINEAR ARRAY HPV Genotyping Test (composite comparator). A positive result from both
the hc2 and RLA (high risk) assays is defined as composite comparator positive, a negative result from both the hc2
and RLA (high risk) assays is defined as composite comparator negative, and when the two assays disagree (or results
were not available for both tests), the composite comparator result is defined as unresolved. Positive, negative,
and overall percent agreement was calculated for each media type versus the composite comparator. Final data
analysis includes BD Onclarity HPV Assay and composite comparator results (regardless of histology status) from 670
BD SurePath specimens and 674 PreservCyt specimens. (Tables 6 and 10)
The absolute risk of disease (CIN2+ and CIN3+) in the study population for each media type was calculated for each
genotype or genotype group in the BD Onclarity HPV assay. The absolute risks are calculated when the genotype (or
genotype group) is present alone and/or in the presence of other genotypes. An absolute risk table is shown for each
media type. Each media was only collected at one site; thus differences in HPV and genotype positivity rates due to
population variation may be expected. (Tables 7 and 11)
7
BD SurePath Specimen Clinical Performance
Table 4: Performance of the BD Onclarity HPV Assay with BD SurePath Media Compared to Histology
Results (CIN2+)
BD Onclarity HPV Assay
Estimate
hc2 HPV DNA Test
95% Confidence Interval
Estimate
95% Confidence Interval
Sensitivity
97.9% (190/194)
(94.8%, 99.2%)
98.4% (190/193)
(95.5%, 99.5%)
Specificity
22.7% (63/278)
(18.1%, 27.9%)
17.0% (47/277)
(13.0%, 21.8%)
Table 5: Performance of the BD Onclarity HPV Assay with BD SurePath Media Compared to Histology
Results (CIN3+)
BD Onclarity HPV Assay
hc2 HPV DNA Test
Estimate
95% Confidence Interval
Estimate
95% Confidence Interval
Sensitivity
97.7% (126/129)
(93.4%, 99.2%)
98.4% (126/128)
(94.5%, 99.6%)
Specificity
18.7% (64/343)
(14.9%, 23.1%)
14.0% (48/342)
(10.8%, 18.1%)
Table 6: Performance of the BD Onclarity HPV Assay with BD SurePath Media Compared to the Composite
Comparator
Composite Comparator Result
BD
Onclarity
HPV Assay
Positive
Negative
Unresolved*
Total
Positive
532
6
27
565
Negative
8
50
47
105
Total
540
56
74
670
Positive
Percent
Agreement
(95%
Confidence
Interval)
Negative
Percent
Agreement
(95%
Confidence
Interval)
Overall
Percent
Agreement
(95%
Confidence
Interval)
98.5%
(97.1%, 99.2%)
89.3%
(78.5%, 95.0%)
97.7%
(96.1%, 98.6%)
*hc2 and RLA results do not agree or results were not available for both tests.
Table 7: Absolute Risk of CIN2+ and CIN3+ for BD Onclarity HPV Assay Genotypes BD SurePath Media
BD
Onclarity
HPV Assay
Genotype
Infection due to one
or more genotype
Infection due to
single genotype or
genotype group
Absolute
Absolute
95%
95%
Risk
Risk
Confidence
Confidence
Interval
Interval
CIN2+
CIN2+
Infection due to one
or more genotype
Infection due to
single genotype or
genotype group
Absolute
Risk
CIN3+
95%
Confidence
Interval
Absolute
Risk
CIN3+
95%
Confidence
Interval
HPV16
63.9%
(99/155)
(56.1%,
71.0%)
64.9%
(48/74)
(53.5%,
74.8%)
43.9%
(68/155)
(36.3%,
51.7%)
47.3%
(35/74)
(36.3%,
58.5%)
HPV18
50.0%
(24/48)
(36.4%,
63.6%)
50.0%
(7/14)
(26.8%,
73.2%)
43.8%
(21/48)
(30.7%,
57.7%)
42.9%
(6/14)
(21.4%,
67.4%)
HPV45
46.7%
(21/45)
(32.9%,
60.9%)
23.5%
(4/17)
(9.6%,
47.3%)
31.1%
(14/45)
(19.5%,
45.7%)
17.6%
(3/17)
(6.2%,
41.0%)
HPV33/58
49.4%
(42/85)
(39.0%,
59.8%)
47.1%
(16/34)
(31.5%,
63.3%)
31.8%
(27/85)
(22.8%,
42.3%)
23.5%
(8/34)
(12.4%,
40.0%)
HPV31
64.2%
(52/81)
(53.3%,
73.8%)
72.7%
(16/22)
(51.8%,
86.8%)
40.7%
(33/81)
(30.7%,
51.6%)
50.0%
(11/22)
(30.7%,
69.3%)
HPV56/59/66
25.5%
(25/98)
(17.9%,
35.0%)
0.0%
(0/29)
(0.0%,
11.7%)
13.3%
(13/98)
(7.9%,
21.4%)
0.0%
(0/29)
(0.0%,
11.7%)
HPV51
41.7%
(15/36)
(27.1%,
57.8%)
25.0%
(2/8)
(7.1%,
59.1%)
25.0%
(9/36)
(13.8%,
41.1%)
12.5%
(1/8)
(2.2%,
47.1%)
HPV52
35.1%
(20/57)
(24.0%,
48.1%)
33.3%
(4/12)
(13.8%,
60.9%)
19.3%
(11/57)
(11.1%,
31.3%)
16.7%
(2/12)
(4.7%,
44.8%)
HPV35/39/68
36.0%
(27/75)
(26.1%,
47.3%)
33.3%
(7/21)
(17.2%,
54.6%)
17.3%
(13/75)
(10.4%,
27.4%)
19.0%
(4/21)
(7.7%,
40.0%)
8
PreservCyt Specimen Clinical Performance
Table 8: Performance of the BD Onclarity HPV Assay with PreservCyt Media Compared to Histology Results
(CIN2+)
BD Onclarity HPV Assay
hc2 HPV DNA Test
Estimate
95%
Confidence Interval
Estimate
95%
Confidence Interval
Sensitivity
94.7% (160/169)
(90.2%, 97.2%)
97.0% (160/165)
(93.1%, 98.7%)
Specificity
50.5% (97/192)
(43.5%, 57.5%)
40.8% (75/184)
(33.9%, 48.0%)
Table 9: Performance of the BD Onclarity HPV Assay with PreservCyt Media Compared to Histology Results
(CIN3+)
BD Onclarity HPV Assay
hc2 HPV DNA Test
Estimate
95%
Confidence Interval
Estimate
95%
Confidence Interval
Sensitivity
94.4% (85/90)
Specificity
37.3% (101/271)
(87.6%, 97.6%)
97.7% (85/87)
(92.0%, 99.4%)
(31.7%, 43.2%)
29.8% (78/262)
(24.6%, 35.6%)
Table 10: Performance of the BD Onclarity HPV Assay with PreservCyt Media Compared to the Composite
Comparator
Composite Comparator Result
BD
Onclarity
HPV Assay
Positive
Negative
Unresolved*
Total
Positive
246
5
18
269
Negative
10
366
29
405
Total
256
371
47
674
Positive
Percent
Agreement
(95%
Confidence
Interval)
Negative
Percent
Agreement
(95%
Confidence
Interval)
Overall
Percent
Agreement
(95%
Confidence
Interval)
96.1%
(93.0%, 97.9%)
98.7%
(96.9%, 99.4%)
97.6%
(96.1%, 98.5%)
* hc2 and RLA results do not agree or results were not available for both tests.
Table 11: Absolute Risk of CIN2+ and CIN3+ for BD Onclarity HPV Assay Genotypes PreservCyt Media
BD
Onclarity
HPV Assay
Genotype
HPV 16
HPV 18
HPV 45
HPV 33/58
HPV 31
HPV
56/59/66
HPV 51
HPV 52
HPV
35/39/68
Infection due to one
or more genotype
Absolute
Risk
CIN2+
77.1%
(84/109)
50.0%
(12/24)
50.0%
(6/12)
70.0%
(28/40)
67.7%
(42/62)
34.0%
(18/53)
48.0%
(12/25)
73.9%
(17/23)
38.5%
(10/26)
95%
Confidence
Interval
(68.3%,
84.0%)
(31.4%,
68.6%)
(25.4%,
74.6%)
(54.6%,
81.9%)
(55.4%,
78.0%)
(22.7%,
47.4%)
(30.0%,
66.5%)
(53.5%,
87.5%)
(22.4%,
57.5%)
Infection due to
single genotype or
genotype group
Absolute
Risk
CIN2+
81.4%
(57/70)
45.5%
(5/11)
25.0%
(1/4)
75.0%
(15/20)
71.0%
(22/31)
11.1%
(2/18)
27.3%
(3/11)
85.7%
(6/7)
40.0%
(2/5)
95%
Confidence
Interval
(70.8%,
88.8%)
(21.3%,
72.0%)
(4.6%,
69.9%)
(53.1%,
88.8%)
(53.4%,
83.9%)
(3.1%,
32.8%)
(9.7%,
56.6%)
(48.7%,
97.4%)
(11.8%,
76.9%)
9
Infection due to one
or more genotype
Absolute
Risk
CIN3+
44.0%
(48/109)
29.2%
(7/24)
16.7%
(2/12)
35.0%
(14/40)
30.6%
(19/62)
9.4%
(5/53)
16.0%
(4/25)
26.1%
(6/23)
15.4%
(4/26)
95%
Confidence
Interval
(35.1%,
53.4%)
(14.9%,
49.2%)
(4.7%,
44.8%)
(22.1%,
50.5%)
(20.6%,
43.0%)
(4.1%,
20.3%)
(6.4%,
34.7%)
(12.5%,
46.5%)
(6.1%,
33.5%)
Infection due to
single genotype or
genotype group
Absolute
Risk
CIN3+
50.0%
(35/70)
18.2%
(2/11)
0.0
(0/4)
50.0%
(10/20)
41.9%
(13/31)
0.0%
(0/18)
18.2%
(2/11)
42.9%
(3/7)
20.0%
(1/5)
95%
Confidence
Interval
(38.6%,
61.4%)
(5.1%,
47.7%)
(0.0%,
49.0%)
(29.9%,
70.1%)
(26.4%,
59.2%)
(0.0%,
17.6%)
(5.1%,
47.7%)
(15.8%,
75.0%)
(3.6%,
62.4%)
BD Onclarity HPV Cervical Brush Specimen Clinical Performance
Table 12: Performance of the BD Onclarity HPV Assay with the BD Onclarity HPV Cervical Brush Compared
to Histology Results (CIN2+)
BD Onclarity HPV Assay
Estimate
Estimate
95%
Confidence Interval
Sensitivity
97.2% (104/107)
(92.1%, 99.0%)
99.1% (106/107)
(94.9%, 99.8%)
Specificity
17.9% (25/140)
(12.4%, 25.0%)
21.4% (30/140)
(15.4%, 28.9%)
Sensitivity
100.0% (121/121)
(96.9%, 100.0%)
97.5% (116/119)
(92.8%, 99.1%)
Specificity
37.4% (55/147)
(30.0%, 45.5%)
43.0% (61/142)
(35.1%, 51.2%)
Site
A
B
hc2 HPV DNA Test
95%
Confidence Interval
Table 13: Performance of the BD Onclarity HPV Assay with the BD Onclarity HPV Cervical Brush Compared
to Histology Results (CIN3+)
BD Onclarity HPV Assay
Estimate
Sensitivity
97.3% (72/74)
Specificity
15.0% (26/173)
Sensitivity
Specificity
Site
A
B
hc2 HPV DNA Test
95%
Confidence Interval
Estimate
95%
Confidence Interval
(90.7%, 99.3%)
98.6% (73/74)
(92.7%, 99.8%)
(10.5%, 21.1%)
17.3% (30/173)
(12.4%, 23.7%)
100.0% (60/60)
(94.0%, 100.0%)
98.3% (57/58)
(90.9%, 99.7%)
26.4% (55/208)
(20.9%, 32.8%)
31.0% (63/203)
(25.1%, 37.7%)
Analytical Studies
Analytical Sensitivity at the Clinical Cutoff:
The limit of detection (LOD) at the HPV clinical cutoff was determined for the BD Onclarity HPV Assay using
HPV positive cell lines: SiHa (HPV 16), HeLa (HPV 18) and MS751 (HPV 45) and cloned plasmid DNA containing the
sequences for the following HPV genotypes: HPV 31, 33, 35, 39, 51, 52, 56, 58, 59, 66, and 68 in BD SurePath
Preservative Fluid, PreservCyt Solution and BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent containing a HPV-negative cell
line (C33A). The HPV cell lines were tested individually whereas the HPV plasmids were tested collectively in three
groups: 1) HPV 31, 33, 51, 52, and 59; 2) HPV 56, 58, 68; and 3) HPV 35 and 66. A minimum of forty-five replicates of
each of six target levels for the HPV cell lines and twenty replicates of each of six target levels for the HPV plasmids
were tested across a minimum of three lots of reagents and a minimum of three BD Viper LT Systems. The LOD is the
level of HPV DNA in the undiluted specimen that has positive results above the clinical cutoff at least 95% of the time.
The maximum LOD value for each of the HPV genotypes and media is described in Table 14.
Table 14: Analytical Sensitivity
Target
BD SurePath Media
(95% Confidence
Interval)
PreservCyt Media
(95% Confidence
Interval)
BD Onclarity HPV Cervical
Brush Diluent
(95% Confidence Interval)
SiHa (HPV 16) cells/mL
1584 (1276 – 1962)
1835 (1426 – 2358)
137 (131 – 144)
HeLa (HPV 18) cells/mL
915 (739 – 1131)
1786 (1175 – 2715)
51 (46 – 56)
MS751 (HPV 45) cells/mL
3793 (2944 – 4888)
5425 (4167 – 7066)
305 (284 – 343)
HPV 31 copies/mL
3652 (3159 – 3868)
4118 (3898 – 4228)
692 (650 – 817)
HPV 33 copies/mL
7326 (6578-8932)
8272 (7946 – 8743)
1376 (1272 – 1451)
HPV 35 copies/mL
6820 (6477 – 7282)
7282 (6895 – 7674)
1552 (1317 – 1780)
HPV 39 copies/mL
7894 (7115 – 8193)
8272 (7810 – 9398)
1531 (1419 – 1685)
HPV 51 copies/mL
6697 (5796-7097)
5909 (5553 – 6824)
1229 (1155 – 1353)
HPV 52 copies/mL
3582 (3414 – 4184)
4184 (3740 – 4761)
833 (744 – 934)
HPV 56 copies/mL
4976 (4140 – 5698)
4774 (4479 – 5997)
836 (737 – 911)
HPV 58 copies/mL
10094 (9403 – 11180)
11488 (8989 – 12360)
2990 (2656 – 7819)
HPV 59 copies/mL
4400 (4145 – 5069)
4374 (4105 – 5482)
772 (722 – 899)
HPV 66 copies/mL
3793 (3621 – 4030)
4462 (4008 – 4844)
701 (646 – 767)
HPV 68 copies/mL
10415 (9799 – 11642)
10481 (9816 – 12082)
2079 (1995 – 2125)
10
Cross-Reactivity:
A panel of bacteria, yeast and cultured viruses along with cloned plasmid DNA containing high-risk and low-risk HPV
target sequences was used to evaluate the analytical specificity of the BD Onclarity HPV Assay on the BD Viper
LT System. Each potential cross-reactant was tested individually in BD SurePath Preservative Fluid and PreservCyt
Solution containing a HPV-negative cell line (C33A). The microorganisms are described in Tables 15 and 16. The BD
Onclarity HPV Assay did not cross-react with any of the microorganisms tested.
Table 15: Microorganisms Tested for Analytical Specificity
Bacteria*
Viruses**
Actinomyces israelii
Adenovirus, type 5
Atopobium vaginae
EBV-1, B95-8 Strain
Bacteroides fragilis
HCMV. AD169 Strain
Bacteroides ureolyticus
HIV-1
Bifidobacterium adolescentis
HSV1
Bifidobacterium brevi
Bifidobacterium longum ssp. longum
High risk HPV***
HSV2
Chlamydia trachomatis
HPV 16
Clostridium perfringens
HPV 18
Corynebacterium genitalium
HPV 31
Enterobacter cloacae ssp. cloacae
HPV 33
Enterococcus faecalis
HPV 35
Enterococcus faecium
HPV 39
Escherichia coli
HPV 45
Fusobacterium nucleatum ssp. nucleatum
HPV 51
Gardnerella vaginalis
HPV 52
Klebsiella pneumonia ssp. ozaenae
HPV 56
Lactobacillus acidophilus
HPV 58
Mycobacterium smegmatis
HPV 59
Mycoplasma genitalium
HPV 66
Neisseria gonorrhoeae
HPV 68
Peptostreptococcus anaerobius
Prevotella bivia
Prevotella disiens
Proteus mirabilis
Proteus vulgaris
Providencia stuartii
Pseudomonas aeruginosa
Staphylococcus aureus
Staphylococcus epidermidis
Streptococcus agalactiae
Streptococcus pyogenes
Ureaplasma urealyticum
Yeast/Protozoa****
Candida albicans
Trichomonas vaginalis
*Bacteria tested at approximately 1.0 x 107 CFU/mL except for the following: Chlamydia trachomatis (1.0 x 107 EB/mL),
Mycobacterium smegmatis (2.5 x 106 CFU/mL), and Ureaplasma urealyticum (8.0 x 106 CFU/mL).
**Viruses tested at 1.0 x 106 VP/mL.
***High risk HPV plasmid DNA tested at 1.0 x 106 copies/mL.
**** Yeast (Candida albicans tested at approximately 1.0 x 107 CFU/mL Protozoa; Protozoa (Trichomonas vaginalis) tested
at 1.4 x 106 CFU/mL.
11
Table 16: Low risk HPV Plasmids Tested for Analytical Specificity
HPV 6
HPV 69
HPV 11
HPV 70
HPV 26
HPV 73
HPV 30
HPV 82
HPV 34
HPV 97
HPV 53
HPV c85
HPV 67
*Low-risk HPV plasmid DNA tested at 1.0 x 106 copies/mL.
Interfering Substances:
The potential for interference in the BD Onclarity HPV Assay on the BD Viper LT System was determined with exogenous
and endogenous substances that may be present in clinical cervical specimens. Contrived HPV negative specimens and HPV
positive specimens (co-spiked with SiHa, HeLa and MS751 cells at 3 x LOD) were tested in the presence or absence of each
potential interfering substance. Substances used in these studies are described in Table 17. The concentrations represent
the highest level of substance that did not result in any interference in the BD Onclarity HPV Assay.
Table 17: Potential Interfering Substances
Potential Interfering
Substance
BD Onclarity HPV
Cervical Brush
Diluent
Concentration
tested
KY® Vaginal Lubricant
VCF® Vaginal Contraceptive
Film
VCF® Vaginal Contraceptive
Foam
BD SurePath Media
PreservCyt Media
Concentration
tested
Concentration
tested
10% (w/v)
6% (w/v)
10% (w/v)
3% (w/v)
10% (w/v)
10% (w/v)
10% (w/v)
10% (w/v)
10% (w/v)
Conceptrol® Contraceptive Gel
1% (w/v)
10% (w/v)
10% (w/v)
Monistat® 3*
2% (w/v)
2% (w/v)
1.8% (w/v)
Clotrimazole 7
10% (w/v)
10% (w/v)
10% (w/v)
Vagistat®-1 Tioconazole
2% (w/v)
2% (w/v)
2% (w/v)
Clindamycin Vaginal Cream
9% (w/v)
10% (w/v)
10% (w/v)
Summer’s Eve® Douche
10% (v/v)
10% (v/v)
10% (v/v)
Zovirax® (Acyclovir) Cream
10% (w/v)
8% (w/v)
10% (w/v)
Vandazole™ Gel
(Metronidazole Vaginal Gel,
0.75%)
10% (w/v)
10% (w/v)
10% (w/v)
Summer’s Eve® Deodorant
2% (w/v)
3% (w/v)
2% (w/v)
Bovine Mucin
10% (v/v)
10% (v/v)
10% (v/v)
Progesterone
20 ng/mL
20 ng/mL
20 ng/mL
Estradiol
1.2 ng/mL
1.2 ng/mL
1.2 ng/mL
Whole Blood
3% (v/v)
5% (v/v)
5% (v/v)
Leukocytes
1x106 cells/mL
1x106 cells/mL
1x106 cells/mL
Semen
10% (v/v)
10% (v/v)
10% (v/v)
Acetic Acid Wash**
5% (v/v)
Blood + Acetic Acid Wash
5% Blood (v/v),
2.5% Acetic Acid Wash (v/v)
*Concentrations higher than those listed resulted in liquid level failures during extraction on the BD Viper LT System.
**Acetic Acid Wash consists of 1 part Glacial Acetic Acid: 9 parts CytoLyt® solution.
12
Competitive Target Interference:
The potential for the inhibition of HPV detection due to one target present at a high level and another target present
at low levels during a mixed infection was evaluated in the BD Onclarity HPV Assay. SiHa, HeLa and MS751 cells were
tested individually or collectively at 3 x LOD in the presence or absence of competitive HPV target(s) at 1.0 x 106 copies/
mL in BD SurePath Preservative Fluid, PreservCyt Solution and BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent containing a HPV
negative cell line (C33A) (Table 18).
Table 18: Competitive Target Interference
Individual HPV
Cellular Targets at
3 x LOD
HPV Plasmids at
1 x 106 copies/mL
HPV Cellular Target
Detection in the Presence
or Absence of Competing
Genotypes (HPV
Plasmids)
SiHa (HPV 16)
HPV 18 + HPV 45
Yes
HeLa (HPV 18)
HPV 16 + HPV 45
Yes
HPV 45 (MS751)
HPV 16 + HPV 18
Yes
G1 Genotypes with G2
co-amplified targets
SiHa + HeLa + MS751
HPV 31 + HPV 33 +
HPV 56 + HPV 58 +
HPV 59 + HPV 66
Yes
G1 Genotypes with G3
co-amplified targets
SiHa + HeLa + MS751
HPV 35 + HPV 39 +
HPV 51+ HPV 52 +
HPV 68
Yes
HPV Assay Tube Type
G1 Genotypes with G1
co-amplified targets
Reproducibility:
The reproducibility of the BD Onclarity HPV Assay was evaluated on the BD Viper LT instrument using a four-member
panel consisting of negative, high negative, low positive, and moderate positive specimens. The positive panel members
were composed of SiHa, HeLa and MS751 cells spiked collectively into pools of HPV negative clinical BD SurePath
specimens and BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent containing a HPV negative cell line (C33A). The panel was tested
across an equal distribution of three lots of reagents and three instruments over 12 days. The data are summarized in
Table 19.
13
Table 19: Summary of Reproducibility Data for the BD Onclarity HPV Assay on the BD Viper LT System
Inter-Run
Media
Cell Line
(Genotype)
SurePath
SiHa
(HPV 16)
HeLa
(HPV 18)
MS-751
(HPV 45)
Panel
Level
Concentration
cells/mL
Neg
0
High
Neg
Low
Pos
Mod
Pos
1582
Neg
0
High
Neg
Low
Pos
Mod
Pos
Cervical Brush Diluent
914
2742
0
3793
395
11378
0
Total
100%
(216/216)
97.69%
(211/216)
100%
(216/216)
100%
(216/216)
100%
(216/216)
98.61%
(213/216)
99.54%
(215/216)
100%
(216/216)
100%
(216/216)
100%
(216/216)
100%
(216/216)
99.54%
(215/216)
100%
(214/214)
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
(98.27% –
100%)
% Correct
Mean
Ct
SD
%CV
SD
%CV
SD
%CV
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
35.28
0.16
0.46
0.54
1.52
0.57
1.62
32.31
0.16
0.50
0.22
0.69
0.30
0.92
31.07
0.22
0.69
0.22
0.71
0.35
1.11
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
35.89
0.24
0.68
0.75
2.09
0.85
2.37
32.70
0.16
0.50
0.30
0.92
0.37
1.14
30.68
0.13
0.43
0.22
0.72
0.30
0.98
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
35.77
0.00
0.00
0.52
1.45
0.55
1.53
32.71
0.20
0.60
0.26
0.80
0.36
1.10
31.33
0.18
0.57
0.35
1.10
0.41
1.31
High
Neg
32
100%
(218/218)
36.29
0.09
0.25
0.59
1.63
0.62
1.71
Low
Pos
205
94.91%
(205/216)
(91.11% –
97.13%)
33.63
0.26
0.78
0.33
0.97
0.43
1.27
615
100%
(216/216)
(98.25% –
100%)
31.80
0.16
0.51
0.18
0.56
0.25
0.79
(98.24% –
100%)
0
100%
(214/214)
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
High
Neg
13
99.07%
(214/216)
(96.69% –
99.75%)
35.69
0.10
0.29
0.78
2.18
0.80
2.23
Low
Pos
76
99.08%
(216/218)
(96.72% –
99.75%)
33.34
0.15
0.44
0.25
0.76
0.30
0.91
228
99.54%
(215/216)
(97.42% –
99.92%)
32.07
0.24
0.73
0.25
0.78
0.37
1.16
(98.24% –
100%)
Neg
Mod
Pos
0
100%
(214/214)
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
High
Neg
59
100%
(216/216)
(98.25% –
100%)
36.54
0.22
0.61
0.62
1.68
0.66
1.81
Low
Pos
457
99.54%
(215/216)
(97.42% –
99.92%)
33.22
0.16
0.48
0.25
0.75
0.32
0.95
1371
100%
(218/218)
(98.27% –
100%)
31.74
0.14
0.43
0.21
0.67
0.27
0.84
Neg
MS-751
(HPV 45)
102
Neg
Mod
Pos
HeLa
(HPV 18)
4746
High
Neg
Low
Pos
Mod
Pos
Neg
SiHa
(HPV 16)
342
Intra-Run
95%
Confidence
Interval
(98.25% –
100%)
(94.7% –
99.01%)
(100% –
98.25%)
(100% –
98.25%)
(98.25% –
100%)
(96% –
99.53%)
(97.42% –
99.92%)
(100% –
98.25%)
(98.25% –
100%)
(98.25% –
100%)
(100% –
98.25%)
(97.42% –
99.92%)
(98.24% –
100%)
Mod
Pos
Cross Contamination:
A study was performed to evaluate the risk of producing a false positive result in either the same run (within run crosscontamination) or in a subsequent run (between run carry-over contamination) on the BD Viper LT System. One run
was performed per day over five days on each of three instruments comprising a total of 675 test replicates. Each run
consisted of BD SurePath Preservative Fluid or PreservCyt Solution specimens containing a HPV negative cell line (C33A)
with and without SiHa cells spiked at 1.0 x 105 cells/mL arranged in an alternating checkerboard pattern. The overall
contamination rate with both BD SurePath Preservative Fluid and PreservCyt Solution was 0.00%.
Neat (In-vial) Specimen Stability:
Analytical studies were performed to support the storage claims for the stability of neat cervical specimens. BD SurePath
Preservative Fluid, PreservCyt Solution and BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent specimens containing a HPV negative
cell line (C33A), were spiked with SiHa cells at 3 x LOD and stored at 2 – 8 °C, 30 °C and -20 °C for multiple time points.
At each time point, the specimens were removed from storage and tested with the BD Onclarity HPV Assay on the
BD Viper LT System. Twenty-four assay replicates were generated for each condition (specimen type/temperature/
duration). Stability was achieved for 30 days at 2 – 30 °C and -20 °C.
Diluted Specimen Stability:
Analytical studies were performed to support the storage claims for the stability of diluted cervical specimens. BD SurePath
Preservative Fluid and PreservCyt Solution specimens containing a HPV negative cell line (C33A) were spiked with SiHa cells at
3 X LOD, diluted with BD HPV LBC Diluent and then stored at 2 – 8 °C, 30 °C and -20 °C for multiple time points. At each time
point, the specimens were removed from storage and tested with the BD Onclarity HPV Assay on the BD Viper LT
14
System. Twenty-four assay replicates were generated for each condition (specimen type/temperature/duration). Stability was
achieved for 15 days 2 – 30 °C and for 30 days at -20 °C.
Post Pre-warm Specimen Stability:
Analytical studies were performed to support the storage claims for the stability of post pre-warm cervical specimens.
BD SurePath Preservative Fluid, PreservCyt Solution and BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent specimens
containing a HPV negative cell line (C33A), were spiked with SiHa cells at 3 x LOD, diluted with BD Onclarity HPV
LBC Diluent and then pre-warmed with the BD Viper LT Pre-warm Heater. The processed specimens were stored at
2 – 8 °C, 30 °C and -20 °C for multiple time points. At each time point, the specimens were removed from storage and
tested with the BD Onclarity HPV Assay on the BD Viper LT System. Twenty-four assay replicates were generated for
each condition (specimen type/temperature/duration). Stability was achieved for 7 days at 2 – 30 °C and for 30 days at
-20 °C
INTERPRETATION OF TABLES
Symbols and Abbreviations
Symbols
(+) (-) #
%
positive
negative
number
percentage
Abbreviations
ASCUS
Atypical squamous cells of undetermined significance
cfu
colony forming units
CI Confidence Interval
CIN
Cervical intraepithelial neoplasia
CV Coefficient of Variation
HPV Human Papillomavirus
HR
High Risk
LBC
Liquid-Based Cytology
n
number
NA
Not applicable
NEGNegative
NPA Negative Percent Agreement
PBS
Phosphate Buffered Saline
PCR
Polymerase Chain Reaction
POSPositive
PPA Positive Percent Agreement
QC
Quality Control
SD Standard Deviation
AVAILABILITY
The following BD Onclarity and BD Viper products for use on the BD Viper LT are also available:
Cat. No. Description
442946 BD Onclarity™ HPV Assay Reagent Pack, 192 tests
441993 Control Set for the BD Onclarity™ HPV Assay, 24 positive and 24 negative tubes
442841 BD Viper™ PCR Extraction Reagent Trough with Piercing Tool, 12 Extraction Reagent Troughs
441992 BD FOX™ PCR Extraction Tubes, 384 tubes
441354 BD Viper™ System Neutralization Pouch, 12 pouches
442840
BD Onclarity™ HPV Liquid Based Cytology Specimen (LBC) Diluent Tubes, 400
441991 BD Onclarity™ HPV Assay Cervical Brush Collection Kit, 100
442957 BD Viper™ LT System PCR Tube/Tray Kit
443430 Key Card for the BD Viper™ LT System
440476
BD ProbeTec™ Chlamydia trachomatis/Neisseria gonorrhoeae (CT/GC) Amplified DNA Assay Endocervical Specimen Collection and DRY TRANSPORT Kit
441996 BD Viper™ LT Pipette Tips, 3840
441995 BD Viper™ LT Solid Waste Liners, 80
442950 BD™ Pre-warm Heater
442967 BD Viper™ LT System PCR Accessory kit
442839 BD Viper™ LT System
15
REFERENCES
1.http://www.cdc.gov/std/HPV/STDFact-HPV.htm
2.http://www.emcdda.europa.eu/html.cfm/index33767EN.html
3. Cervical cancer, human papillomavirus (hpv), and hpv vaccines – key points for policy-makers and health
professionals http://whqlibdoc.who.int/hq/2008/who_rhr_08.14_eng.pdf
4. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2005. Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers
from occupationally acquired infections, 3rd ed., CLSI, Wayne, PA.
5. Garner, J.S. 1996. Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human
Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect.
Control Hosp. Epidemiol. 17:53-80.
6. U.S. Department of Health and Human Services. 2007. Biosafety in microbiological and biomedical
laboratories,HHS Publication (CDC), 5th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C.
7. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection
of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the
meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p. 0021-0045.
For Technical Information: In the United States, contact BD Technical Service and Support at 800-638-8663 or www.bd.com/ds.
 Onclarity HPV Assay
Français
APPLICATION
Le BD Onclarity HPV Assay (Test HPV) est un test d’ADN amplifié permettant d’effectuer une détection qualitative de
types de papillomavirus humain (HPV) à haut risque. Le test détecte tous les types de HPV à haut risque (16, 18, 31, 33,
35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 et 68) et permet de définir le génotype de six types à haut risque (HPV 16, 18, 31, 45, 51
et 52). Les échantillons cervicaux sont analysés avec le BD Onclarity HPV Assay, ce qui inclut la BD Onclarity HPV Cervical
Brush Collection Kit (Trousse de prélèvement avec brosse cervicale), le BD SurePath Preservative Fluid (Liquide de
conservation) et la solution PreservCyt Solution (en utilisant une aliquote prélevée avant ou après toute préparation pour
le test de Papanicolaou BD SurePath ou ThinPrep). Le BD Onclarity HPV Assay est exécuté sur le système BD Viper LT.
RÉSUMÉ ET EXPLICATION
Les papillomavirus humains (HPV) sont la cause la plus fréquente de virus sexuellement transmissibles dans le monde.
Ainsi, 50 % de la population sexuellement active contractera des HPV au cours de sa vie. Les individus ignorent souvent
qu’ils sont infectés et ne prennent pas les précautions nécessaires pour éviter de transmettre le virus à d’autres personnes.
Il existe plus de 40 types de HPV susceptibles d’infecter les voies génitales.1 Dans la plupart des cas, les infections à HPV
sont transitoires et l’organisme élimine lui-même le virus. Cependant, dans d’autres cas, le virus est persistant et attaque
les cellules normales qui deviennent malignes, entraînant un cancer. Ces types oncogènes de HPV sont classés à haut
risque et incluent les HPV 16 et 18. Les autres types sont considérés à faible risque car ils ne semblent pas provoquer de
cancer. D’après l’Organisation Mondiale de la Santé (OMS), le HPV est la deuxième cause la plus importante de mortalité
par cancer chez les femmes dans le monde, provoquant environ 250 000 décès par an. En Europe uniquement, cette
maladie provoque le décès d’environ 15 000 personnes chaque année.2 On estime que presque 70 % des cancers du
col de l’utérus sont provoqués par des HPV de type 16 et 18.3
Aujourd’hui, les tests de Papanicolaou permettent d’informer le médecin en cas de modifications anormales des cellules
du col de l’utérus. Si ces cellules sont anormales, un test HPV peut être effectué pour déterminer si ces modifications
des cellules du col de l’utérus sont dues à une souche de HPV susceptible de provoquer un cancer du col de l’utérus.
Les tests moléculaires ne permettent pas tous d’opérer une distinction parmi les différents types de HPV.
Le BD Onclarity HPV Assay, exécuté sur le système BD Viper LT, est un test d’ADN amplifié permettant d’effectuer une
détection qualitative de types de papillomavirus humain (HPV) à haut risque. Le test détecte les types de HPV 16, 18,
31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 et 68 et permet d’identifier simultanément les types à haut risque 16, 18, 31, 45,
51, 52 et d’autres génotypes à haut risque rapportés par groupe de génotype (P1 : 33/58 ; P2 : 56/59/66 ; P3 : 35/39/68).
Les échantillons cervicaux peuvent être analysés avec le BD Onclarity HPV Assay, ce qui inclut le BD SurePath Preservative
Fluid (à l’aide d’une aliquote prélevée avant ou après le traitement pour le test de Papanicolaou BD SurePath), la solution
PreservCyt Solution (à l’aide d’une aliquote prélevée avant ou après le traitement pour le test de Papanicolaou
PreservCyt) et la trousse BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit.
PRINCIPES DE LA MÉTHODE
Le BD Onclarity Human Papillomavirus (HPV) Assay est conçu pour être utilisé avec le BD SurePath Preservative Fluid
(à l’aide d’une aliquote prélevée avant ou après le traitement pour le test de Papanicolaou BD SurePath), la solution
PreservCyt Solution (à l’aide d’une aliquote prélevée avant ou après le traitement pour le test de Papanicolaou
PreservCyt), la trousse BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit, les réactifs applicables, le système BD Viper LT et
la technologie d’extraction BD FOX Extraction.
Les échantillons sont soumis à une étape de préchauffage avec le BD Pre-warm Heater (Bloc chauffant de préchauffage
BD) pour homogénéiser la matrice, lyser les cellules et libérer l’ADN susceptible d’être extrait et amplifié. Une fois
refroidis, les échantillons sont placés dans le BD Viper LT, qui effectue alors toutes les étapes nécessaires pour extraire
et amplifier l’ADN cible, sans aucune intervention supplémentaire de la part de l’utilisateur. L’échantillon est transféré
dans un tube d’extraction qui contient des particules d’oxyde de fer sous forme de film soluble. De l’acide est ensuite
ajouté pour réduire le pH et créer une charge positive sur l’oxyde de fer, qui se lie alors à l’ADN négativement chargé.
Les particules et l’ADN fixé sont ensuite attirés vers les bords du tube d’extraction par des aimants, et l’échantillon traité
est aspiré et mis au rebut. Les particules sont lavées et un tampon d’élution à pH élevé est ajouté pour éluer l’ADN purifié.
Enfin, un tampon de neutralisation est utilisé pour optimiser le pH de l’éluat en vue de l’amplification de l’ADN. Le
16
test BD Onclarity HPV Assay repose sur l’amplification et la détection simultanées de l’ADN cible à l’aide d’amorces
d’amplification et de sondes de détection couplées à un marqueur fluorescent utilisant la réaction en chaîne par
polymérase (PCR) en temps réel. Ces réactifs sont séchés dans trois tubes (G1, G2 et G3) susceptibles de détecter les
génotypes HPV 14 et un contrôle interne dérivé de l’échantillon contenant un fragment d’ADN de gène bêta-globine
humain. Chaque tube contient les amorces d’amplification, les sondes de détection couplées à un marqueur fluorescent,
l’ADN polymérase, des nucléotides et d’autres réactifs nécessaires à l’amplification des tests respectifs. Le système BD Viper
LT transfère une partie de la solution d’ADN purifié de chaque tube d’extraction dans les trois tubes BD Onclarity HPV
PCR (G1, G2 et G3), qui sont ensuite scellés pour empêcher toute contamination. La présence ou l’absence d’ADN de HPV
est déterminée par le cycle PCR au niveau duquel le signal croise un seuil prédéfini. En outre, le test extrait, amplifie et
détecte un fragment du gène bêta-globine humain comme contrôle interne afin d’évaluer le traitement, l’extraction
et l’amplification de l’échantillon.
REACTIFS ET MATERIAUX FOURNIS :
Chaque BD Onclarity HPV Assay Reagent Pack (Jeu de réactifs) contient :
Tubes BD Onclarity HPV G1 PCR, 2 x 96 : chaque tube PCR G1 contient environ 32,5 pmol d’oligonucléotides, 20 pmol
de sondes de détection couplées à un marqueur fluorescent, 80 nmol de dNTP et 0,52 unités d’ADN polymérase
ainsi que des stabilisants et tampons.
Tubes BD Onclarity HPV G2 PCR, 2 x 96 : chaque tube PCR G2 contient environ 42,5 pmol d’oligonucléotides, 30 pmol
de sondes de détection couplées à un marqueur fluorescent, 80 nmol de dNTP et 0,52 unités d’ADN polymérase
ainsi que des stabilisants et tampons.
Tubes BD Onclarity HPV G3 PCR, 2 x 96 : chaque tube PCR G3 contient environ 42,5 pmol d’oligonucléotides, 25 pmol
de sondes de détection couplées à un marqueur fluorescent, 80 nmol de dNTP et 0,52 unités d’ADN polymérase
ainsi que des stabilisants et tampons.
REMARQUE : chaque sachet contient un sachet de dessiccatif.
Jeu de contrôles pour le BD Onclarity HPV Assay : 24 BD Onclarity HPV Positive Control Tubes (tubes de témoin positif)
contenant environ 2 500 copies/mL de plasmides linéarisés HPV 16, 1 900 copies/mL de plasmides linéarisés HPV
18, 5 150 copies/mL de plasmides linéarisés HPV 56 et 2 950 copies/mL d’un plasmide contenant une séquence d’ADN
bêta-globine dans un acide nucléique porteur, ainsi que 24 BD Onclarity HPV Negative Control Tubes (tubes de témoin
négatif) contenant un acide nucléique porteur seul. Les concentrations de l’acide nucléique porteur et de plasmides
sont déterminées par spectrophotométrie.
BD Onclarity HPV Liquid Based Cytology Specimen (LBC) Diluent Tubes (Tubes de diluant) : 400 tubes contenant chacun
environ 1,7 mL de tampon avec sel, détergent et conservateur.
BD FOX PCR Extraction Tubes (Tubes d’extraction) : 48 barrettes de 8 tubes contenant chacun environ 10 mg d’une
solution d’oxyde de fer dans un film soluble.
BD Viper PCR Extraction Reagent Trough with Piercing Tool (Cuve de réactifs d’extraction avec outil de perçage) : chaque
cuve de réactifs d’extraction à 5 cavités contient environ 16,5 mL d’acide de liaison, 72,5 mL de tampon de lavage,
25,4 mL de tampon d’élution, 19,4 mL de tampon de neutralisation avec agent de conservation et 15,5 mL de solution
de neutralisation des déchets.
INSTRUMENT, MATÉRIEL ET CONSOMMABLES
Matériaux fournis : BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit (Trousse de prélèvement avec brosse cervicale),
système BD Viper LT, BD Viper LT Instrument Plates (Plaques pour instrument), BD Viper LT Pipette Tips (Embouts de
pipette), BD Viper LT Solid Waste Liners (Liners pour déchets solides), BD Viper LT System PCR Tube/Tray Kit (Kit de
plateaux/tubes PCR du système BD Viper), BD Viper LT System PCR Accessory Kit (Kit d’accessoires PCR du système
BD Viper), BD Viper Pre-warm Heater (Bloc chauffant de préchauffage), BD Viper LT Specimen Rack (Portoir d’échantillons),
BD Viper Neutralization Pouches (Sachets de neutralisation), Tubes d’échantillons et bouchons utilisables sur le système
BD Viper (Mode d’extraction), BD ProbeTec Chlamydia trachomatis/Neisseria gonorrhoeae (CT/GC) Amplified DNA Assay
Endocervical Specimen Collection and DRY TRANSPORT Kit (Trousse de prélèvement et de transport à sec d’échantillons
endocervicaux BD ProbeTec pour le test d’ADN amplifié Chlamydia trachomatis/Neisseria gonorrhoeae (CT/GC)).
Matériaux requis mais non fournis : gants de nitrile, pipettes à déplacement d’air, embouts en polypropylène résistant
aux aérosols capables de distribuer 0,5 ± 0,05 mL, agitateur vortex, solution d’hypochlorite de sodium à 0,5 % (v/v),
solution d’hypochlorite de sodium à 1 % (v/v), solution de peroxyde d’hydrogène à 3 % (p/v), alcool isopropylique, eau
moléculaire de qualité biologique sans nucléase.
Impératifs de manipulation et de conservation : Le diluant BD Onclarity HPV LBC Diluent et le diluant BD Onclarity
HPV Cervical Brush Diluent (Diluant pour brosse cervicale) doivent être conservés à une température comprise entre
2 et 25 °C. Tous les autres réactifs peuvent être conservés à une température comprise entre 2 et 33 °C. Les jeux de
réactifs non entamés restent stables jusqu’à la date de péremption. Une fois qu’un sachet est ouvert, les tubes PCR
restent stables pendant 4 semaines si le sachet est correctement refermé ou jusqu’à la date d’expiration, la première
condition remplie prévalant. Ne pas congeler.
AVERTISSEMENTS ET PRÉCAUTIONS
1. Pour le diagnostic in vitro.
2. Des micro-organismes pathogènes, notamment les virus de l’hépatite et de l’immunodéficience humaine, sont
susceptibles d’être présents dans les échantillons cliniques. Respecter les « Précautions standard »4-7 et les consignes
en vigueur dans l’établissement pour manipuler tout objet contaminé avec du sang et d’autres liquides organiques.
Pour d’autres avertissements, précautions et remarques spécifiques au système BD Viper LT, consulter le manuel
d’utilisation correspondant.
Échantillon :
3. Pour les échantillons de cytologie en milieu liquide, utiliser uniquement des tubes BD Onclarity HPV LBC Diluent.
4. Pour les échantillons sur brosse cervicale, utiliser uniquement la trousse BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit.
5. Une performance optimale du test BD Onclarity HPV Assay suppose un prélèvement, une manipulation et un
transport adéquats des échantillons.
17
6. Pour limiter les saignements, ne pas faire tourner excessivement la brosse cervicale au cours du prélèvement de
l’échantillon.
7. Étiqueter soigneusement chaque prélèvement destiné au laboratoire.
8. Lors du bris de la tige de la brosse cervicale, veiller à ne pas éclabousser, renverser le contenu ni créer d’aérosols.
Éviter toute contamination de la tête de la brosse cervicale.
9. Prendre soin d’éviter la contamination croisée pendant la manipulation des échantillons. S’assurer que les récipients
contenant les échantillons ne se touchent pas et jeter les matériaux utilisés sans passer au-dessus de récipients
ouverts. Si les gants entrent en contact avec un échantillon, les changer pour éviter toute contamination croisée.
10. La distribution d’une quantité insuffisante ou excessive d’échantillons LBC dans le tube BD Onclarity HPV LBC
Diluent peut affecter la performance du test. Le remplissage excessif des tubes peut également occasionner un
débordement du liquide sur le plateau du BD Viper LT et causer une contamination.
11. Les échantillons cervicaux doivent être prélevés et testés avant la date de péremption des tubes de diluant
BD Onclarity HPV LBC Diluent ou BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent.
12. Utiliser seulement des embouts de pipettes en polypropylène résistant aux aérosols pour transférer les échantillons
dans les tubes de diluant BD Onclarity HPV LBC Diluent.
Test/réactif :
13.Les BD Onclarity HPV Positive and Negative Controls (contrôles positifs et négatifs) doivent être préchauffés dans
les 24 heures suivant l’hydratation.
14. Utiliser exclusivement des tubes d’échantillons et de contrôles avec bouchon perçable avec le système BD Viper LT.
Ne pas enlever les bouchons perçables avant de démarrer l’instrument. Veiller à remplacer les bouchons percés par
de nouveaux bouchons perçables avant de démarrer l’instrument.
15. Ne pas échanger ni mélanger les réactifs de la trousse avec ceux de trousses portant des numéros de lot différents.
16. Ne pas tester le tube de diluant BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent s’il a été acheminé jusqu’au laboratoire
sans la brosse. Un faux négatif pourrait être obtenu.
17. N’utiliser que les embouts de pipettes BD Viper LT fournis par BD avec le système BD Viper LT.
18. BD Viper PCR Extraction Reagent Trough with Piercing Tool (Cuve de réactifs d’extraction avec outil de perçage).
DANGER
H314 Cause de graves brûlures et lésions oculaires. H302 Nocif en cas d’ingestion.
P260 Ne pas respirer les poussières/fumées/gaz/émanations/vapeurs/aérosols. P280 Porter des gants de protection/
un vêtement de protection/des lunettes de protection/un masque de protection du visage. P303/361/353 EN CAS
DE CONTACT AVEC LA PEAU (ou les cheveux) : enlever immédiatement les vêtements contaminés. Rincer la peau
soigneusement à l’eau/se doucher. P304/340 EN CAS D’INHALATION : transporter la victime à l’extérieur et la
maintenir au repos dans une position où elle peut confortablement respirer. P405 Garder sous clef. P501 Mettre
au rebut le contenu/le récipient conformément aux règlements locaux/régionaux/nationaux/internationaux.
19. Utiliser uniquement les BD Viper LT Clear Plate Sealers (Bandes d’étanchéité transparentes) sur les tubes PCR avec
le système BD Viper LT.
20. Les sachets de réactifs contenant des tubes PCR non utilisés DOIVENT impérativement être refermés après ouverture.
Vérifier la présence du dessiccatif avant de refermer les sachets de réactifs.
21. Les tubes PCR DOIVENT être correctement scellés avec les bandes BD Viper LT Clear Plate Sealers avant de retirer la
plaque du système BD Viper LT. La bande d’étanchéité garantit un milieu réactionnel clos pour l’amplification et
la détection. Elle est indispensable pour éviter la contamination de l’instrument et de la paillasse par des produits
d’amplification. Ne jamais retirer les bandes d’étanchéité placées sur les tubes PCR.
22. Pour empêcher la contamination de la paillasse par des produits d’amplification, utiliser les sachets à déchets
fournis dans la BD Viper LT System PCR Accessory Kit (Trousse d’accessoires) pour jeter les tubes PCR analysés.
Vérifier que les sachets sont correctement fermés avant de les jeter.
23. Même s’il n’est pas nécessaire de disposer de postes de travail dédiés, car la conception du BD Viper LT réduit la
possibilité de contamination par les produits d’amplification dans l’environnement de travail, d’autres précautions
s’imposent pour éviter la contamination, en particulier pour éviter la contamination des échantillons au cours de
la manipulation.
24. CHANGER DE GANTS dès qu’ils entrent en contact avec un échantillon ou semblent humides pour éviter de
contaminer d’autres échantillons. Changer de gants avant de pénétrer dans la zone de travail ou de la quitter.
25. En cas de contamination, se reporter au Manuel d’utilisation du système BD Viper LT pour obtenir des instructions
de nettoyage.
26. Contacter le service et l’assistance techniques de BD en cas de situation inhabituelle, comme un déversement dans
l’instrument BD Viper LT ou une contamination par de l’ADN impossible à éliminer par nettoyage.
PRÉLÈVEMENT ET TRANSPORT DES ÉCHANTILLONS
Les échantillons cervicaux qui peuvent être analysés avec le BD Onclarity HPV Assay incluent la BD Onclarity HPV Cervical
Brush Collection Kit, le BD SurePath Preservative Fluid (à l’aide d’une aliquote prélevée avant ou après le traitement
pour le test de Papanicolaou BD SurePath) et la solution PreservCyt Solution (à l’aide d’une aliquote prélevée avant ou
après le traitement pour le test de Papanicolaou ThinPrep).
18
Pour les envois nationaux et internationaux, étiqueter les échantillons conformément à la réglementation nationale
ou internationale concernant le transport d’échantillons cliniques et d’agents étiologiques ou de produits infectieux.
La durée et la température de conservation doivent être maintenues pendant le transport.
PRÉLÈVEMENT DES ÉCHANTILLONS AVEC BROSSE CERVICALE
1. Insérer la brosse cervicale BD Onclarity HPV Cervical Brush dans l’endocol jusqu’à ce que seuls les poils les plus bas
sur la tige soient exposés au niveau de l’orifice du col de l’utérus. Faire tourner lentement de ¼ à ½ tour dans un
sens. Pour éviter les saignements, ne pas trop faire tourner la brosse.
2. Déboucher le tube de BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent et placer immédiatement la brosse au fond du tube.
3. Briser doucement la tige au niveau de la ligne pré-limée. Éviter la dispersion du contenu.
4. Bien reboucher le tube.
CONSERVATION ET TRANSPORT D’ÉCHANTILLONS SUR BROSSE CERVICALE
Les échantillons sur brosse cervicale contenus dans les tubes BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent doivent être
conservés et acheminés au laboratoire/centre investigateur dans les 30 jours suivant le prélèvement s’ils sont conservés
à une température comprise entre 2 et 30 °C ou dans les 30 jours suivant le prélèvement s’ils sont conservés au
congélateur à -20 °C. La conservation et le transport des échantillons ne doivent pas dépasser la date de péremption
figurant sur le tube de diluant de la brosse cervicale.
PRÉLÈVEMENT DES ÉCHANTILLONS LBC
Les échantillons BD SurePath ou PreservCyt doivent être prélevés en utilisant un dispositif de type balai endocervical
ou une combinaison brosse/spatule, tel que décrit dans la notice des produits BD SurePath ou PreservCyt. Une fois
prélevés, les échantillons BD SurePath ou PreservCyt peuvent être conservés et transportés dans leur flacon d’origine
jusqu’à 30 jours entre 2 et 30 °C ou jusqu’à 30 jours au congélateur à -20 °C avant leur transfert dans les tubes de
diluant Onclarity HPV LBC Specimen Diluent.
CONSERVATION ET TRANSPORT DES ÉCHANTILLONS LBC
Transfert de l’échantillon LBC dans des tubes BD Onclarity HPV LBC Diluent – avant ou après le
prélèvement d’une aliquote en vue du traitement d’un test BD SurePath ou ThinPrep.
Un volume aliquote de 0,5 mL de l’échantillon BD SurePath ou PreservCyt est transféré manuellement du flacon
d’origine dans le tube BD Onclarity HPV LBC Specimen Diluent avant ou après le traitement d’un test de Papanicolaou
BD SurePath ou ThinPrep. Porter des gants lors de la manipulation du tube BD Onclarity HPV LBC Specimen Diluent
et du flacon d’échantillon BD SurePath ou PreservCyt. Si les gants entrent en contact avec l’échantillon, en changer
immédiatement pour éviter de contaminer d’autres échantillons.
Transfert des échantillons BD SurePath avant ou après le traitement pour les tests BD SurePath
REMARQUE : consulter la notice du système BD PrepStain Slide Processor (Préparateur de lames) ou BD Totalys
SlidePrep pour les instructions concernant la manière de prélever une aliquote du flacon d’échantillon BD SurePath
avant d’effectuer le test de Papanicolaou en milieu liquide BD SurePath.
REMARQUE : manipuler un seul échantillon à la fois pour le traitement.
1. Étiqueter un tube BD Onclarity HPV LBC Diluent avec les données d’identification de la patiente.
2. Retirer le bouchon du tube BD Onclarity HPV LBC Diluent.
3. Pour obtenir un mélange homogène, mélanger au vortex le flacon d’échantillon BD SurePath pendant 10 à 20 s.
4. Transférer rapidement 0,5 mL du flacon d’échantillon, à l’aide d’un embout résistant aux aérosols, dans le tube
BD Onclarity HPV LBC Diluent, dans la minute suivant l’agitation au vortex.
5. Jeter l’embout de pipette.
REMARQUE : utiliser un embout de pipette distinct pour chaque échantillon.
6. Bien serrer le bouchon du tube BD Onclarity HPV LBC Diluent.
7. Inverser le tube BD Onclarity HPV LBC Diluent 3 à 4 fois pour assurer un mélange correct de l’échantillon et du
diluant.
Transfert des échantillons PreservCyt avant ou après le traitement pour les tests de Papanicolaou ThinPrep
REMARQUE : se reporter à l’addenda au manuel d’utilisation du système ThinPrep 2000/3000 pour des instructions
concernant le prélèvement d’une aliquote à partir du flacon d’échantillon PreservCyt avant d’effectuer le test ThinPrep.
REMARQUE : manipuler un seul échantillon à la fois pour le traitement.
1. Étiqueter un tube BD Onclarity HPV LBC Diluent avec les données d’identification de la patiente.
2. Retirer le bouchon du tube BD Onclarity HPV LBC Diluent.
3. Pour obtenir un mélange homogène, agiter au vortex le flacon d’échantillon PreservCyt à grande vitesse pendant
8 à 12 s.
4. Transférer immédiatement 0,5 mL du flacon d’échantillon, à l’aide d’un embout résistant aux aérosols, dans le tube
BD Onclarity HPV LBC Diluent.
5. Jeter l’embout de pipette.
REMARQUE : utiliser un embout de pipette distinct pour chaque échantillon.
6. Bien serrer le bouchon du tube BD Onclarity HPV LBC Diluent.
7. Inverser le tube BD Onclarity HPV LBC Diluent 3 à 4 fois pour assurer un mélange correct de l’échantillon et du
diluant.
19
Conservation et transport des échantillons transférés dans les tubes BD HPV LBC Diluent
Après le transfert manuel dans un tube BD Onclarity HPV LBC Diluent, l’échantillon dilué peut être conservé entre 2 et
30 °C pendant 15 jours maximum ou à -20 °C pendant 30 jours maximum.
PROCÉDURE DE TRAITEMENT DE TOUS LES ÉCHANTILLONS
REMARQUE : si les échantillons étaient congelés, s’assurer qu’ils sont complètement dégelés à température ambiante
et les mélanger par inversion avant de continuer.
1. À l’aide du Tube Layout Report (Rapport de configuration des tubes), placer les échantillons à l’endroit approprié
dans le portoir d’échantillons du système BD Viper LT et les verrouiller en place.
2. Les échantillons sont prêts à être préchauffés.
3. Changer de gants avant de continuer pour éviter la contamination.
PRÉPARATION DU CONTRÔLE DE QUALITÉ
1. Déboucher un tube de contrôle négatif BD Onclarity HPV Negative Control et un tube de diluant BD Onclarity HPV
LBC Diluent.
2. Verser tout le contenu du tube de diluant BD Onclarity HPV LBC Diluent dans le contrôle négatif BD Onclarity HPV
Negative Control.
3. Reboucher le tube de contrôle négatif réhydraté BD Onclarity HPV Negative Control. Reboucher et mettre au rebut
le tube de diluant BD Onclarity HPV LBC Diluent vide.
4. Déboucher un tube de contrôle positif BD Onclarity HPV Positive Control et un tube de diluant BD Onclarity HPV
LBC Diluent.
5. Verser tout le contenu du tube de diluant BD Onclarity HPV LBC Diluent dans le contrôle positif BD Onclarity HPV
Positive Control.
6. Reboucher le tube de contrôle positif réhydraté BD Onclarity HPV Positive Control. Reboucher et mettre au rebut
le tube de diluant BD Onclarity HPV LBC Diluent vide.
7. À l’aide du Tube Layout Report (Rapport de configuration des tubes), placer le contrôle négatif réhydraté
BD Onclarity HPV Negative Control à l’emplacement approprié dans le portoir d’échantillons BD Viper LT.
8. À l’aide du Tube Layout Report (Rapport de configuration des tubes), placer le contrôle positif réhydraté BD Onclarity
HPV Positive Control à l’emplacement approprié dans le portoir d’échantillons BD Viper LT.
9. Les contrôles sont prêts à être préchauffés avec les échantillons.
REMARQUE : les contrôles doivent être préchauffés dans les 24 heures suivant l’hydratation.
MÉTHODE DE PRÉCHAUFFAG
REMARQUE : la méthode de préchauffage doit être appliquée à tous les échantillons pour assurer une matrice d’échantillon
homogène avant le chargement dans le système BD Viper LT. L’omission de l’étape de préchauffage des échantillons
peut altérer les performances du test BD Onclarity HPV Assay et/ou du système BD Viper LT.
REMARQUE : les échantillons réfrigérés ou congelés doivent être décongelés à température ambiante avant le
préchauffage.
1. Introduire le portoir d’échantillons BD Viper LT dans le BD Pre-warm Heater et sélectionner le protocole de
préchauffage du test BD Onclarity HPV Assay sur le système BD Viper LT.
2.Le BD Pre-warm Heater préchauffe automatiquement les échantillons et les contrôles conformément au protocole
de préchauffage du test BD Onclarity HPV Assay.
3. Une fois le protocole de préchauffage du test BD Onclarity HPV Assay effectué, sortir le portoir du bloc chauffant
et le charger sur le système BD Viper LT.
4. Suivre les instructions de la section Mode opératoire du test pour analyser les échantillons et les contrôles.
5. Une fois préchauffés, les échantillons peuvent être conservés jusqu’à 7 jours entre 2 et 30 ºC ou jusqu’à 30 jours
à -20 ºC sans préchauffage supplémentaire avant leur analyse sur le système BD Viper LT.
6. Une fois préchauffés, les contrôles peuvent être conservés jusqu’à 24 heures entre 2 et 30 ºC sans préchauffage
supplémentaire avant leur analyse sur le système BD Viper LT.
MODE OPÉRATOIRE DU TEST
Consulter le manuel d’utilisation du système BD Viper LT pour connaître les instructions détaillées de fonctionnement
et de maintenance des éléments du système. Les conditions environmentales optimales pour le dosage HPV se sont
avérées étre 18 à 27 ºC et 20 à 85 % d’humidité relative.
CONTRÔLE DE QUALITÉ
Effectuer les contrôles de qualité conformément à la réglementation nationale et/ou internationale, aux exigences
des organismes d’homologation concernés et aux procédures de contrôle de qualité en vigueur dans l’établissement.
Il est recommandé à l’utilisateur de consulter les directives CLSI et la réglementation CLIA correspondantes pour plus
d’informations sur les modalités de contrôle de qualité.
Le jeu de contrôles pour le test BD Onclarity HPV Assay est fourni séparément. Inclure un contrôle positif et un contrôle
négatif dans chaque série de tests et pour chaque nouveau numéro de lot de trousse de réactifs. Les contrôles doivent
être placés aux emplacements spécifiés dans le manuel d’utilisation du BD Viper LT. Le contrôle positif HPV ne peut
révéler qu’une non conformité significative du réactif. Le contrôle négatif HPV détecte une contamination du réactif
et/ou de l’environnement. D’autres contrôles peuvent être testés conformément aux directives ou aux exigences des
réglementations nationale ou internationale ou des organismes d’homologation.
Informations générales sur le CQ du système BD Viper LT :
L’emplacement des tubes PCR est indiqué sur un écran de configuration de plaque à code de couleur affiché sur le
moniteur LCD. Le symbole plus (+) à l’intérieur du tube indique l’échantillon de CQ positif. Le symbole moins (-) à
20
l’intérieur du tube indique l’échantillon de CQ négatif. Une paire de CQ doit être enregistrée pour chaque numéro
de lot de trousse de réactifs. Dans le cas contraire, un message s’affiche, qui empêche la sauvegarde du portoir et la
poursuite de l’analyse jusqu’à la saisie correcte de la paire. L’utilisateur peut saisir d’autres tubes de CQ (facultatif)
pour le test. Ces tubes sont testés comme des échantillons normaux et n’affectent pas l’état d’échec/réussite de
l’analyse. Consulter le manuel d’utilisation du système BD Viper LT pour plus d’informations.
REMARQUE : les contrôles BD Onclarity HPV doivent être hydratés manuellement avant leur chargement dans le
portoir d’échantillons BD Viper LT.
Interprétation des résultats du contrôle de qualité :
Les contrôles positif et négatif BD Onclarity HPV Positive Control et BD Onclarity HPV Negative Control doivent
donner un résultat positif et négatif, respectivement, pour que les résultats d’échantillons soient valables. Si les
contrôles ne produisent pas les résultats escomptés, la série de tests est considérée comme non valide et l’instrument
ne rapporte pas les résultats cliniques. Si l’un des contrôles ne produit pas le résultat escompté, répéter toute la série
avec un nouveau jeu de contrôles, de nouveaux tubes d’extraction, de nouvelles cuves de réactifs d’extraction et de
nouveaux tubes PCR. Si le problème persiste, contacter le service et l’assistance technique de BD pour de plus amples
informations.
Tableau 1 : interprétation des résultats du contrôle de qualité
Type de contrôle
Symbole de résultat du tube
BD Onclarity HPV Positive Control
OK
Résultat du CQ
CQ conforme
BD Onclarity HPV Positive Control
CQ non conforme
BD Onclarity HPV Positive Control
CQ non conforme
BD Onclarity HPV Positive Control
CQ non conforme
BD Onclarity HPV Negative Control
OK
CQ conforme
BD Onclarity HPV Negative Control
CQ non conforme
BD Onclarity HPV Negative Control
CQ non conforme
BD Onclarity HPV Negative Control
CQ non conforme
Consulter la section Interprétation des résultats pour obtenir la description des symboles de résultat de tube.
INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS
Le test BD Onclarity HPV Assay utilise la réaction en chaîne par polymérase pour déceler la présence du papillomavirus
humain (HPV) dans les échantillons cliniques. Tous les calculs sont effectués automatiquement par le logiciel BD Viper LT.
La présence ou l’absence d’ADN de HPV cliniquement pertinente est déterminée par le cycle PCR (Ct) au niveau duquel
le signal croise un seuil prédéfini. Le test extrait, amplifie et détecte un fragment du gène bêta-globine humain comme
contrôle interne afin d’évaluer le traitement, l’extraction et l’amplification de l’échantillon et d’indiquer la présence
d’inhibiteurs de la PCR. Si le signal spécifique au HPV est supérieur à un seuil de cycle, le contrôle interne est utilisé par
l’algorithme dans l’interprétation du résultat. Si le signal spécifique au HPV est inférieur ou égal à un seuil de cycle, le
contrôle interne est ignoré par l’algorithme.
Pour les échantillons HPV, un résultat « HR » (la combinaison de tous les génotypes) apparaît sur le Tube Results Report
(Rapport des résultats du tube). Un symbole positif dans cette colonne indique qu’un ou plusieurs génotypes décelables
par le test HPV présente un résultat positif. La colonne « GT » est utilisée pour rapporter des résultats pour des génotypes
non disponibles dans votre pays. Ces résultats ne peuvent pas être achetés.
Des génotypes spécifiques et des génotypes combinés apparaissent dans des colonnes. Si les résultats d’un génotype
ont été achetés, ces résultats sont rapportés comme expliqué ci-dessous. Si les résultats d’un génotype n’ont pas été
configurés pour un achat automatique, ces résultats sont masqués par une icône représentant une « clé ».
L’instrument peut être configuré pour acheter/rapporter des génotypes spécifiques une fois l’analyse terminée. Consulter
le Manuel d’utilisation du système BD Viper LT pour des instructions sur l’autorisation de rapports automatiques de
génotype.
Si les contrôles du test ne donnent pas les résultats escomptés, les résultats des échantillons cliniques ne sont pas pris en
considération. Voir la section Contrôle de qualité pour connaître les valeurs attendues pour les contrôles. Les résultats
rapportés sont déterminés comme suit.
Tableau 2 : interprétation des résultats des tests de HPV de génotype HPV à haut risque du test
BD Onclarity HPV Assay
Résultat HPV à haut
risque
HR
HR
Interprétation
Résultat
Positif pour les types de HPV à haut risque
HPV HR positif
Négatif pour les types de HPV à haut risque
HPV HR négatif
ADN HPV, si présent, non décelable
Erreur de contrôle interne
ADN HPV, si présent, non décelable
Transfert d’extraction non conforme
ADN HPV, si présent, non décelable
Niveau de liquide non conforme
ADN HPV, si présent, non décelable.
Erreur
21
Tableau 3 : interprétation des résultats des tests de HPV de génotype spécifique du test BD Onclarity HPV
Assay
Résultat de génotype de
HPV
16
16
18
18
45
45
P1
P1
31
31
P2
P2
51
51
52
52
P3
P3
GT
GT
--
Interprétation
Résultat
Positif pour HPV, type 16
HPV de type 16 positif
Négatif pour HPV, type 16
HPV de type 16 négatif
Positif pour HPV, type 18
HPV de type 18 positif
Négatif pour HPV, type 18
HPV de type 18 négatif
Positif pour HPV, type 45
HPV de type 45 positif
Négatif pour HPV, type 45
HPV de type 45 négatif
Positif pour HPV, types 33 et/ou 58
HPV de types 33 et/ou 58 positif
Négatif pour HPV, types 33 et/ou 58
HPV de types 33 et/ou 58 négatif
Positif pour HPV, type 31
HPV de type 31 positif
Négatif pour HPV, type 31
HPV de type 31 négatif
Positif pour HPV, types 56, 59 et/ou 66
HPV de types 56, 59 et/ou 66 positif
Négatif pour HPV, types 56, 59 et/ou 66
HPV de types 56, 59 et/ou 66 négatif
Positif pour HPV, type 51
HPV de type 51 positif
Négatif pour HPV, type 51
HPV de type 51 négatif
Positif pour HPV, type 52
HPV de type 52 positif
Négatif pour HPV, type 52
HPV de type 52 négatif
Positif pour HPV, types 35, 39 et/ou 68
HPV de types 35, 39 et/ou 68 positif
Négatif pour HPV, types 35, 39 et/ou 68
HPV de types 35, 39 et/ou 68 négatif
Résultat(s) de génotype HPV positif non
disponible(s) dans votre pays
Résultat(s) de génotype HPV positif
limité(s)
Résultat(s) de génotype HPV négatif non
disponible(s) dans votre pays
Résultat de génotype HPV disponible à
l’achat
Résultat(s) de génotype HPV négatif
limité(s)
Résultat de génotype HPV non
disponible à l’achat
Résultat de génotype verrouillé.
Résultat HPV négatif, erreur de
contrôle interne, erreur de niveau
de liquide ou erreur de transfert
d’extraction
Dépistage de la présence d’ADN contaminant
Au moins une fois par mois, réaliser le test suivant pour dépister la présence d’ADN contaminant sur la paillasse et le
matériel. Le contrôle du poste de travail est essentiel pour détecter une contamination avant qu’un problème ne se
développe.
1. Pour chaque zone à tester, utiliser un écouvillon de prélèvement propre de la trousse BD ProbeTec Chlamydia
trachomatis/Neisseria gonorrhoeae (CT/GC) Amplified DNA Assay Endocervical Specimen Collection and DRY
TRANSPORT Kit (Trousse de prélèvement et de transport à sec d’échantillons endocervicaux BD ProbeTec pour le
test de détection d’ADN amplifié de Chlamydia trachomatis/Neisseria gonorrhoeae (CT/GC)).
2. Verser de l’eau moléculaire de qualité biologique sans nucléase dans un petit récipient propre.
3. Tremper l’écouvillon dans l’eau moléculaire de qualité biologique sans nucléase et essuyer la première surface en
utilisant un grand mouvement de balayage.
4. Retirer le bouchon du tube BD Onclarity HPV LBC Diluent et introduire l’écouvillon dans le diluant. Mélanger en
tournant l’écouvillon dans le tube BD Onclarity HPV Diluent pendant 5 à 10 s.
5. Presser l’écouvillon contre la paroi interne du tube pour faire redescendre le liquide au fond du tube.
6. Sortir délicatement l’écouvillon du tube BD Onclarity HPV LBC Diluent pour éviter les éclaboussures. Jeter l’écouvillon.
7. Bien refermer le tube BD Onclarity HPV LBC Diluent avec le bouchon perçable noir.
8. Renouveler l’opération pour chaque zone à tester.
9. Une fois tous les écouvillonnages prélevés et exprimés, les traiter selon la procédure de préchauffage, puis suivre
le mode opératoire du test.
Consulter le Manuel d’utilisation du système BD Viper LT pour plus d’informations sur les méthodes de contrôle
environnemental et de nettoyage. Si la contamination persiste, contacter le service et l’assistance technique de BD pour
plus d’informations.
22
LIMITES DE LA PROCÉDURE
1. Une performance optimale du test nécessite un prélèvement et une manipulation adéquate des échantillons.
Se reporter à la section « Prélèvement et transport de l’échantillon » de cette notice.
2. Un résultat négatif n’exclut pas l’éventualité d’une infection car les résultats du test peuvent être affectés par un
prélèvement inapproprié des échantillons, une erreur technique, une substitution d’échantillons ou une concentration
de microorganismes dans l’échantillon inférieure à la sensibilité du test.
3. Le test BD Onclarity HPV Assay fournit des résultats qualitatifs.
4. L’utilisation du test BD Onclarity HPV Assay est réservée aux personnes ayant reçu la formation nécessaire à la
réalisation de ce test et familiarisées avec le système BD Viper LT.
CARACTÉRISTIQUES DE PERFORMANCES
Les échantillons BD Onclarity HPV Cervical Brush, les échantillons BD SurePath et/ou les échantillons PreservCyt ont été
prélevés sur 836 femmes répondant aux critères du protocole et suivies pour un test Pap anormal ou une infection à
HPV ou sur des femmes se rendant en consultation de routine dans deux centres cliniques géographiquement dispersés
en Europe. Deux échantillons ont été prélevés sur chacun des sujets recrutés dans l’ordre suivant : un échantillon
BD SurePath (Centre A) ou un échantillon PreservCyt (Centre B), et un échantillon BD Onclarity HPV Cervical Brush
(transporté dans un tube BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent). Pour chaque flacon d’échantillon cytologique
recueilli, une aliquote de 0,5 mL a été prélevée dans un tube BD Onclarity HPV LBC Diluent. Les résultats d’ADN HPV de
cytologie (digene Hybrid Capture 2 (hc2) High-Risk HPV DNA Test) et les résultats Roche LINEAR ARRAY HPV Genotyping
Test (RLA) étaient disponibles pour la plupart des échantillons. Les résultats de l’histologie étaient disponibles pour la
plupart des femmes à risque élevé.
Chaque centre a également recruté des échantillons résiduels (BD SurePath ou PreservCyt) associés aux résultats de
cytologie, des résultats d’ADN HPV (digene Hybrid Capture 2 High-Risk HPV DNA Test), des résultats Roche LINEAR
ARRAY HPV Genotyping Test et, le cas échéant, des résultats d’histologie. Pour chaque échantillon recruté, une aliquote
de 0,5 mL a été prélevée dans un tube BD Onclarity HPV LBC Diluent. 510 échantillons rétrospectivement conformes
ont été recrutés avec des résultats d’histologie disponibles pour 234 femmes.
Tous les échantillons ont été analysés sur le système BD Viper LT conformément à la notice du test et au manuel
d’utilisation. Pour chaque type de milieu, la sensibilité et la spécificité cliniques ont été calculées pour la détection de
la maladie, définie comme étant (1) une néoplasie cervicale intraépithéliale (CIN 2) ou de grade histologique supérieur
ou (2) une néoplasie cervicale intraépithéliale (CIN 3) ou de grade histologique supérieur. L’analyse finale des données
inclut les résultats du test BD Onclarity HPV Assay réalisé sur 472 échantillons BD SurePath, 361 échantillons PreservCyt
et un total de 515 échantillons BD Onclarity HPV Cervical Brush : 247 échantillons BD Onclarity HPV Cervical Brush
(recueillis dans des tubes BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent) pour le centre A et 268 échantillons BD Onclarity
HPV Cervical Brush (recueillis dans des tubes BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent) pour le centre B. Les estimations
de performance pour la détection d’une maladie du col utérin de haut grade avec le test BD Onclarity HPV Assay et
le test hc2 sont présentées dans les tableaux 4 et 5 pour le milieu BD SurePath, dans les tableaux 8 et 9 pour le milieu
PreservCyt et dans les tableaux 12 et 13 pour les échantillons de la BD Onclarity HPV Cervical Brush.
Les résultats du test BD Onclarity HPV Assay ont également été comparés aux résultats d’ADN HPV du test digene
Hybrid Capture 2 High-Risk HPV DNA Test et du test Roche LINEAR ARRAY HPV Genotyping Test (référence composite).
Un résultat positif issu des tests hc2 et RLA (haut risque) est défini comme étant une référence composite positive, un
résultat négatif issu des tests hc2 et RLA (haut risque) est défini comme étant une référence composite négative, et
lorsque les deux tests génèrent des résultats différents (ou lorsque les résultats ne sont pas disponibles pour les deux
tests), le résultat de la référence composite est défini comme non résolu. Le pourcentage de concordance positive,
négative et globale a été calculé pour chaque type de milieu par rapport à la référence composite. L’analyse finale des
données inclut les résultats du test BD Onclarity HPV Assay et de la référence composite (quelle que soit l’histologie)
provenant de 670 échantillons BD SurePath et 674 échantillons PreservCyt. (Tableaux 6 et 10)
Le risque absolu de maladie (CIN 2+ et CIN 3+) dans la population étudiée de chaque type de milieu a été calculé pour
chaque génotype ou groupe de génotypes avec le test BD Onclarity HPV Assay. Les risques absolus sont calculés lorsque
seul le génotype (ou groupe de génotypes) est présent et/ou en présence d’autres génotypes. Un tableau répertoriant
les risques absolus est présenté pour chaque type de milieu. Chaque milieu a été prélevé uniquement sur un centre.
Par conséquent, des différences entre les taux de positivité de HPV et de génotype dues à la diversité de la population
sont susceptibles de survenir. (Tableaux 7 et 11)
Performance clinique des échantillons BD SurePath
Tableau 4 : Performances du test BD Onclarity HPV Assay avec le milieu BD SurePath par rapport aux
résultats de l’histologie (CIN 2+)
BD Onclarity HPV Assay
hc2 HPV DNA Test
Sensibilité
97,9 % (190/194)
Intervalle de confiance à
95 %
(94,8 %, 99,2 %)
Spécificité
22,7 % (63/278)
(18,1 %, 27,9 %)
Estimation
98,4 % (190/193)
Intervalle de confiance à
95 %
(95,5 %, 99,5 %)
17,0 % (47/277)
(13,0 %, 21,8 %)
Estimation
Tableau 5 : Performances du test BD Onclarity HPV Assay avec le milieu BD SurePath par rapport aux
résultats de l’histologie (CIN 3+)
Sensibilité
BD Onclarity HPV Assay
Intervalle de confiance à
95 %
97,7 % (126/129)
(93,4 %, 99,2 %)
hc2 HPV DNA Test
Intervalle de confiance à
95 %
98,4 % (126/128)
(94,5 %, 99,6 %)
Spécificité
18,7 % (64/343)
14,0 % (48/342)
Estimation
(14,9 %, 23,1 %)
23
Estimation
(10,8 %, 18,1 %)
Tableau 6 : Performances du test BD Onclarity HPV Assay avec le milieu BD SurePath par rapport à la
référence composite
Résultat de la référence
composite
Pourcentage de Pourcentage de Pourcentage de
concordance
concordance
concordance
positive
négative
globale
BD Onclarity
Positif
Négatif Non résolu* Total
HPV Assay
(Intervalle de
(Intervalle de
(Intervalle de
confiance à
confiance à
confiance à
95 %)
95 %)
95 %)
Positif
532
6
27
565
Négatif
8
50
47
105
Total
540
56
74
670
98,5 %
(97,1 %, 99,2 %)
89,3 %
(78,5 %, 95,0 %)
97,7 %
(96,1 %, 98,6 %)
*Les résultats hc2 et RLA ne concordent pas ou bien les résultats n’étaient pas disponibles pour les deux tests.
Tableau 7 : Risque absolu de CIN 2+ et CIN 3+ pour les génotypes du test BD Onclarity HPV Assay avec le
milieu BD SurePath
Génotype de
BD Onclarity
HPV Assay
HPV16
Infection due à un
Infection due à un ou
Infection due à un ou
seul génotype ou à un
plusieurs génotypes
plusieurs génotypes
groupe de génotypes
Intervalle
Intervalle
Intervalle
Risque
Risque
Risque
de
de
de
absolu
absolu
absolu
confiance
confiance
confiance
CIN2+
CIN2+
CIN3+
à 95 %
à 95 %
à 95 %
63,9 %
(56,1 %,
64,9 %
(53,5 %,
43,9 %
(36,3 %,
(99/155)
71,0 %)
(48/74)
74,8 %)
(68/155)
51,7 %)
Infection due à un
seul génotype ou à un
groupe de génotypes
Intervalle
Risque
de
absolu
confiance
CIN3+
à 95 %
47,3 %
(36,3 %,
(35/74)
58,5 %)
HPV18
50,0 %
(24/48)
(36,4 %,
63,6 %)
50,0 %
(7/14)
(26,8 %,
73,2 %)
43,8 %
(21/48)
(30,7 %,
57,7 %)
42,9 %
(6/14)
(21,4 %,
67,4 %)
HPV45
46,7 %
(21/45)
(32,9 %,
60,9 %)
23,5 %
(4/17)
(9,6 %,
47,3 %)
31,1 %
(14/45)
(19,5 %,
45,7 %)
17,6 %
(3/17)
(6,2 %,
41,0 %)
HPV33/58
49,4 %
(42/85)
(39,0 %,
59,8 %)
47,1 %
(16/34)
(31,5 %,
63,3 %)
31,8 %
(27/85)
(22,8 %,
42,3 %)
23,5 %
(8/34)
(12,4 %,
40,0 %)
HPV31
64,2 %
(52/81)
(53,3 %,
73,8 %)
72,7 %
(16/22)
(51,8 %,
86,8 %)
40,7 %
(33/81)
(30,7 %,
51,6 %)
50,0 %
(11/22)
(30,7 %,
69,3 %)
HPV56/59/66
25,5 %
(25/98)
(17,9 %,
35,0 %)
0,0 %
(0/29)
(0,0 %,
11,7 %)
13,3 %
(13/98)
(7,9 %,
21,4 %)
0,0 %
(0/29)
(0,0 %,
11,7 %)
HPV51
41,7 %
(15/36)
(27,1 %,
57,8 %)
25,0 %
(2/8)
(7,1 %,
59,1 %)
25,0 %
(9/36)
(13,8 %,
41,1 %)
12,5 %
(1/8)
(2,2 %,
47,1 %)
HPV52
35,1 %
(20/57)
(24,0 %,
48,1 %)
33,3 %
(4/12)
(13,8 %,
60,9 %)
19,3 %
(11/57)
(11,1 %,
31,3 %)
16,7 %
(2/12)
(4,7 %,
44,8 %)
HPV35/39/68
36,0 %
(27/75)
(26,1 %,
47,3 %)
33,3 %
(7/21)
(17,2 %,
54,6 %)
17,3 %
(13/75)
(10,4 %,
27,4 %)
19,0 %
(4/21)
(7,7 %,
40,0 %)
Performance clinique des échantillons PreservCyt
Tableau 8 : Performances du test BD Onclarity HPV Assay avec le milieu PreservCyt par rapport aux résultats
de l’histologie (CIN 2+)
BD Onclarity HPV Assay
hc2 HPV DNA Test
Estimation
Intervalle de confiance à
95 %
Estimation
Intervalle de confiance à
95 %
Sensibilité
94,7 % (160/169)
(90,2 %, 97,2 %)
97,0 % (160/165)
(93,1 %, 98,7 %)
Spécificité
50,5 % (97/192)
(43,5 %, 57,5 %)
40,8 % (75/184)
(33,9 %, 48,0 %)
Tableau 9 : Performances du test BD Onclarity HPV Assay avec le milieu PreservCyt par rapport aux résultats
de l’histologie (CIN 3+)
BD Onclarity HPV Assay
hc2 HPV DNA Test
Estimation
Intervalle de confiance à
95 %
Estimation
Intervalle de confiance à
95 %
Sensibilité
94,4 % (85/90)
Spécificité
37,3 % (101/271)
(87,6 %, 97,6 %)
97,7 % (85/87)
(92,0 %, 99,4 %)
(31,7 %, 43,2 %)
29,8 % (78/262)
(24,6 %, 35,6 %)
24
Tableau 10 : Performances du test BD Onclarity HPV Assay avec le milieu PreservCyt par rapport à la référence
composite
Résultat de la référence
composite
BD Onclarity
HPV Assay
Positif
Négatif Non résolu* Total
Positif
246
5
18
269
Négatif
10
366
29
405
Total
256
371
47
674
Pourcentage de
concordance
positive
Pourcentage de
concordance
négative
Pourcentage de
concordance
globale
(Intervalle de
confiance à
95 %)
(Intervalle de
confiance à
95 %)
(Intervalle de
confiance à
95 %)
96,1 %
(93,0 %, 97,9 %)
98,7 %
(96,9 %, 99,4 %)
97,6 %
(96,1 %, 98,5 %)
* Les résultats hc2 et RLA ne concordent pas ou bien les résultats n’étaient pas disponibles pour les deux tests.
Tableau 11 : Risque absolu de CIN 2+ et CIN 3+ pour les génotypes du test BD Onclarity HPV Assay avec le
milieu PreservCyt
Génotype de
BD Onclarity
HPV Assay
Infection due à
un ou plusieurs
génotypes
Risque
absolu
CIN2+
HPV 16
HPV 18
HPV 45
HPV 33/58
HPV 31
HPV
56/59/66
HPV 51
HPV 52
HPV
35/39/68
77,1 %
(84/109)
50,0 %
(12/24)
50,0 %
(6/12)
70,0 %
(28/40)
67,7 %
(42/62)
34,0 %
(18/53)
48,0 %
(12/25)
73,9 %
(17/23)
38,5 %
(10/26)
Intervalle
de
confiance
à 95 %
(68,3 %,
84,0 %)
(31,4 %,
68,6 %)
(25,4 %,
74,6 %)
(54,6 %,
81,9 %)
(55,4 %,
78,0 %)
(22,7 %,
47,4 %)
(30,0 %,
66,5 %)
(53,5 %,
87,5 %)
(22,4 %,
57,5 %)
Infection due à un
seul génotype ou
à un groupe de
génotypes
Intervalle
Risque
de
absolu
confiance
CIN2+
à 95 %
81,4 %
(70,8 %,
(57/70)
88,8 %)
45,5 %
(21,3 %,
(5/11)
72,0 %)
25,0 %
(4,6 %,
(1/4)
69,9 %)
75,0 %
(53,1 %,
(15/20)
88,8 %)
71,0 %
(53,4 %,
(22/31)
83,9 %)
11,1 %
(3,1 %,
(2/18)
32,8 %)
27,3 %
(9,7 %,
(3/11)
56,6 %)
85,7 %
(48,7 %,
(6/7)
97,4 %)
40,0 %
(11,8 %,
(2/5)
76,9 %)
Infection due à
un ou plusieurs
génotypes
Intervalle
de
confiance
à 95 %
(35,1 %,
53,4 %)
(14,9 %,
49,2 %)
(4,7 %,
44,8 %)
(22,1 %,
50,5 %)
(20,6 %,
43,0 %)
(4,1 %,
20,3 %)
(6,4 %,
34,7 %)
(12,5 %,
46,5 %)
(6,1 %,
33,5 %)
Risque
absolu
CIN3+
44,0 %
(48/109)
29,2 %
(7/24)
16,7 %
(2/12)
35,0 %
(14/40)
30,6 %
(19/62)
9,4 %
(5/53)
16,0 %
(4/25)
26,1 %
(6/23)
15,4 %
(4/26)
Infection due à un
seul génotype ou
à un groupe de
génotypes
Intervalle
Risque
de
absolu
confiance
CIN3+
à 95 %
50,0 %
(38,6 %,
(35/70)
61,4 %)
18,2 %
(5,1 %,
(2/11)
47,7 %)
0,0
(0,0 %,
(0/4)
49,0 %)
50,0 %
(29,9 %,
(10/20)
70,1 %)
41,9 %
(26,4 %,
(13/31)
59,2 %)
0,0 %
(0,0 %,
(0/18)
17,6 %)
18,2 %
(5,1 %,
(2/11)
47,7 %)
42,9 %
(15,8 %,
(3/7)
75,0 %)
20,0 %
(3,6 %,
(1/5)
62,4 %)
Performance clinique des échantillons BD Onclarity HPV Cervical Brush
Tableau 12 : Performances du test BD Onclarity HPV Assay avec le milieu BD Onclarity HPV Cervical Brush
par rapport aux résultats de l’histologie (CIN 2+)
BD Onclarity HPV Assay
Estimation
Estimation
Intervalle de
confiance à 95 %
Sensibilité
97,2 % (104/107)
(92,1 %, 99,0 %)
99,1 % (106/107)
(94,9 %, 99,8 %)
Sensibilité
17,9 % (25/140)
(12,4 %, 25,0 %)
21,4 % (30/140)
(15,4 %, 28,9 %)
Sensibilité
100,0 % (121/121)
(96,9 %, 100,0 %)
97,5 % (116/119)
(92,8 %, 99,1 %)
Sensibilité
37,4 % (55/147)
(30,0 %, 45,5 %)
43,0 % (61/142)
(35,1 %, 51,2 %)
Centre
A
B
hc2 HPV DNA Test
Intervalle de
confiance à 95 %
25
Tableau 13 : Performances du test BD Onclarity HPV Assay avec le milieu BD Onclarity HPV Cervical Brush
par rapport aux résultats de l’histologie (CIN 3+)
BD Onclarity HPV Assay
Estimation
Sensibilité
97,3 % (72/74)
Sensibilité
15,0 % (26/173)
Sensibilité
Sensibilité
Centre
A
B
hc2 HPV DNA Test
Intervalle de
confiance à 95 %
Estimation
Intervalle de
confiance à 95 %
(90,7 %, 99,3 %)
98,6 % (73/74)
(92,7 %, 99,8 %)
(10,5 %, 21,1 %)
17,3 % (30/173)
(12,4 %, 23,7 %)
100,0 % (60/60)
(94,0 %, 100,0 %)
98,3 % (57/58)
(90,9 %, 99,7 %)
26,4 % (55/208)
(20,9 %, 32,8 %)
31,0 % (63/203)
(25,1 %, 37,7 %)
Etudes analytiques
Sensibilité analytique calculée au niveau du seuil clinique :
La limite de détection (LD) au niveau du seuil clinique HPV a été déterminée pour le test BD Onclarity HPV Assay à l’aide
de lignées cellulaires HPV positives : SiHa (HPV 16), HeLa (HPV 18) et MS751 (HPV 45) et ADN cloné dans un plasmide
contenant les séquences des génotypes HPV suivants : HPV 31, 33, 35, 39, 51, 52, 56, 58, 59, 66 et 68 avec les milieux
BD SurePath Preservative Fluid, PreservCyt Solution et BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent contenant une lignée
cellulaire HPV négative (C33A). Les lignées cellulaires HPV ont été analysées individuellement alors que les plasmides
HPV ont été analysés ensemble dans trois groupes : 1) HPV 31, 33, 51, 52 et 59 ; 2) HPV 56, 58, 68 ; et 3) HPV 35 et 66.
Un minimum de quarante-cinq réplicats de chacun des six niveaux cibles des lignées cellulaires HPV et vingt réplicats
de chacun des six niveaux cibles des plasmides HPV ont été analysés avec un minimum de trois lots de réactifs et
un minimum de trois systèmes BD Viper LT. La LD est la concentration d’ADN HPV présente dans l’échantillon dilué
présentant des résultats positifs au-dessus du seuil clinique au moins 95 % du temps. La valeur LD maximum de chacun
des génotypes HPV et des milieux sont décrits dans le tableau 14.
Tableau 14 : Sensibilité analytique
Cible
Milieu BD SurePath
(Intervalle de
confiance à 95 %)
Milieu PreservCyt
(Intervalle de
confiance à 95 %)
BD Onclarity HPV
Cervical Brush Diluent
(Intervalle de
confiance à 95 %)
SiHa (HPV 16) cellules/mL
1 584 (1 276 – 1 962)
1 835 (1 426 – 2 358)
137 (131 – 144)
HeLa (HPV 18) cellules/mL
915 (739 – 1 131)
1 786 (1 175 – 2 715)
51 (46 – 56)
MS751 (HPV 45) cellules/mL
3 793 (2 944 – 4 888)
5 425 (4 167 – 7 066)
305 (284 – 343)
HPV 31 copies/mL
3 652 (3 159 – 3 868)
4 118 (3 898 – 4 228)
692 (650 – 817)
HPV 33 copies/mL
7 326 (6 578 – 8 932)
8 272 (7 946 – 8 743)
1 376 (1 272 – 1 451)
HPV 35 copies/mL
6 820 (6 477 – 7 282)
7 282 (6 895 – 7 674)
1 552 (1 317 – 1 780)
HPV 39 copies/mL
7 894 (7 115 – 8 193)
8 272 (7 810 – 9 398)
1 531 (1 419 – 1 685)
HPV 51 copies/mL
6 697 (5 786 – 7 097)
5 909 (5 553 – 6 824)
1 229 (1 155 – 1 353)
HPV 52 copies/mL
3 582 (3 414 – 4 184)
4 184 (3 740 – 4 761)
833 (744 – 934)
HPV 56 copies/mL
4 976 (4 140 – 5 698)
4 774 (4 479 – 5 997)
836 (737 – 911)
HPV 58 copies/mL
10 094 (9 403 – 11 180)
11 488 (8 989 – 12 360)
2 990 (2 656 – 7 819)
HPV 59 copies/mL
4 400 (4 145 – 5 069)
4 374 (4 105 – 5 482)
772 (722 – 899)
HPV 66 copies/mL
3 793 (3 621 – 4 030)
4462 (4008 – 4 844)
701 (646 – 767)
HPV 68 copies/mL
10 415 (9 799 – 11 642)
10 481 (9 816 – 12 082)
2 079 (1 995 – 2 125)
Réactivité croisée :
Une galerie de bactéries, levures et virus cultivés avec de l’ADN cloné dans un plasmide contenant des séquences cibles
de HPV à haut risque et à faible risque a été utilisée pour évaluer la spécificité analytique du test BD Onclarity HPV
Assay sur le système BD Viper LT. Chaque déclencheur de réaction croisée potentiel a été analysé individuellement avec
le BD SurePath Preservative Fluid et la PreservCyt Solution contenant une lignée cellulaire HPV négative (C33A). Les
microorganismes sont décrits dans les tableaux 15 et 16. Le test BD Onclarity HPV Assay n’a déclenché aucune réaction
croisée avec les microorganismes testés.
26
Tableau 15 : Microorganismes testés pour la spécificité analytique
Bactéries*
Virus**
Actinomyces israelii
Adénovirus de type 5
Atopobium vaginae
EBV-1, souche B95-8
Bacteroides fragilis
HCMV. Souche AD169
Bacteroides ureolyticus
HIV-1
Bifidobacterium adolescentis
HSV1
Bifidobacterium brevi
HSV2
Bifidobacterium longum ssp. longum
HPV à haut risque***
Chlamydia trachomatis
HPV 16
Clostridium perfringens
HPV 18
Corynebacterium genitalium
HPV 31
Enterobacter cloacae ssp. cloacae
HPV 33
Enterococcus faecalis
HPV 35
Enterococcus faecium
HPV 39
Escherichia coli
Fusobacterium nucleatum ssp. nucleatum
HPV 45
Gardnerella vaginalis
HPV 52
Klebsiella pneumonia ssp. ozaenae
HPV 56
Lactobacillus acidophilus
HPV 58
Mycobacterium smegmatis
HPV 59
Mycoplasma genitalium
HPV 66
Neisseria gonorrhoeae
HPV 68
HPV 51
Peptostreptococcus anaerobius
Prevotella bivia
Prevotella disiens
Proteus mirabilis
Proteus vulgaris
Providencia stuartii
Pseudomonas aeruginosa
Staphylococcus aureus
Staphylococcus epidermidis
Streptococcus agalactiae
Streptococcus pyogenes
Ureaplasma urealyticum
Levures/Protozoaires****
Candida albicans
Trichomonas vaginalis
* Bactéries analysées à environ 1,0 x 107 UFC/mL à l’exception des bactéries suivantes : Chlamydia trachomatis
(1,0 x 107 CI/mL), Mycobacterium smegmatis (2,5 x 106 UFC/mL) et Ureaplasma urealyticum (8,0 x 106 UFC/mL).
**Virus analysés à 1,0 x 106 PV/mL.
***ADN plasmidique de HPV à haut risque analysé à 1,0 x 106 copies/mL.
**** Levures (Candida albicans) analysées à environ 1,0 x 107 UFC/mL ; Protozoaires (Trichomonas vaginalis) analysés à
1,4 x 106 UFC/mL.
TTableau 16 : Plasmides HPV à faible risque testés pour la spécificité analytique
HPV 6
HPV 69
HPV 11
HPV 70
HPV 26
HPV 73
HPV 30
HPV 82
HPV 34
HPV 97
HPV 53
HPV c85
HPV 67
*ADN plasmidique de HPV à faible risque analysé à 1,0 x 106 copies/mL.
27
Substances interférentes :
Les interférences potentielles avec le BD Onclarity HPV Assay sur le système BD Viper LT ont été déterminées avec
des substances endogènes et exogènes susceptibles d’être présentes dans des échantillons cervicaux cliniques. Une
combinaison d’échantillons HPV négatifs et HPV positifs (co-ensemencés avec les cellules SiHa, HeLa et MS751 à 3 x LD)
ont été analysés en présence ou en l’absence de chaque substance potentiellement interférente. Les substances utilisées
dans cette étude sont décrites au tableau 17. Les valeurs indiquées représentent les concentrations de substance les plus
élevées ne générant pas d’interférence avec le BD Onclarity HPV Assay.
Tableau 17 : Substances potentiellement interférentes
Substance potentiellement
interférente
BD Onclarity HPV
Cervical Brush
Diluent
Concentration
testée
Milieu BD SurePath
Milieu PreservCyt
Concentration
testée
Concentration
testée
Gel lubrifiant KY
10 % (p/v)
6 % (p/v)
10 % (w/v)
VCF Vaginal Contraceptive
Film (Film contraceptif vaginal)
3 % (w/v)
10 % (w/v)
10 % (w/v)
VCF Vaginal Contraceptive
Foam (Mousse contraceptive
vaginal)
10 % (w/v)
10 % (w/v)
10 % (w/v)
Gel contraceptif Conceptrol
1 % (w/v)
10 % (w/v)
10 % (w/v)
Monistat 3*
2 % (w/v)
2 % (w/v)
1,8 % (w/v)
10 % (w/v)
Clotrimazole 7
10 % (w/v)
10 % (w/v)
Vagistat-1 Tioconazole
2 % (w/v)
2 % (w/v)
2 % (w/v)
Crème vaginale clindamycine
9 % (w/v)
10 % (w/v)
10 % (w/v)
Summer’s Eve Douche
(soin d’hygiène intime)
10 % (v/v)
10 % (v/v)
10 % (v/v)
Crème Zovirax (Acyclovir)
10 % (w/v)
8 % (w/v)
10 % (w/v)
Gel Vandazole (gel vaginal de
métronidazole, 0,75 %)
10 % (w/v)
10 % (w/v)
10 % (w/v)
Summer’s Eve Deodorant
(Déodorant)
2 % (w/v)
3 % (w/v)
2 % (w/v)
Mucine bovine
10 % (v/v)
10 % (v/v)
10 % (v/v)
Progestérone
20 ng/mL
20 ng/mL
20 ng/mL
Estradiol
1,2 ng/mL
1,2 ng/mL
1,2 ng/mL
Sang total
3 % (v/v)
5 % (v/v)
5 % (v/v)
Leucocytes
1x106
1x106
cellules/mL
cellules/mL
1x106 cellules/mL
Liquide séminal
10 % (v/v)
10 % (v/v)
10 % (v/v)
Nettoyant à l’acide acétique**
5 % (v/v)
Sang + Nettoyant à l’acide
acétique
5 % de sang (v/v),
2,5 % de nettoyant à
l’acide acétique (v/v)
*Les concentrations supérieures à celles indiquées ont généré des erreurs de niveau de liquide au cours de l’extraction
sur le système BD Viper LT.
**Le nettoyant à l’acide acétique contient 1 volume d’acide acétique glacial : 9 volumes de solution CytoLyt.
28
Interférences avec des cibles concurrentes :
L’inhibition potentielle de la détection du HPV due à la présence d’une cible à une concentration élevée et d’une autre
cible à une concentration faible lors d’une infection mixte a été évaluée avec le test BD Onclarity HPV Assay. Les cellules
SiHa, HeLa et MS751 ont été analysées individuellement ou en groupe à 3 x LD en présence ou en l’absence de cible(s) HPV
concurrente(s) à 1,0 x 106 copies/mL avec les milieux BD SurePath Preservative Fluid, PreservCyt Solution et BD Onclarity
HPV Cervical Brush Diluent contenant une lignée cellulaire HPV négative (C33A) (Tableau 18).
Tableau 18 : Interférences avec des cibles concurrentes :
Type de tube de test HPV
Cibles cellulaires
individuelles HPV
à 3 x LD
Plasmides HPV à
1 x 106 copies/mL
Détection de cible
cellulaire HPV en
présence ou en l’absence
de génotypes concurrents
(plasmides HPV)
SiHa (HPV 16)
HPV 18 + HPV 45
Oui
Génotypes G1 avec cibles
co-amplifiées G1
HeLa (HPV 18)
HPV 16 + HPV 45
Oui
HPV 45 (MS751)
HPV 16 + HPV 18
Oui
Génotypes G1 avec cibles
co-amplifiées G2
SiHa + HeLa + MS751
HPV 31 + HPV 33 +
HPV 56 + HPV 58 +
HPV 59 + HPV 66
Oui
Génotypes G1 avec cibles
co-amplifiées G3
SiHa + HeLa + MS751
HPV 35 + HPV 39 +
HPV 51+ HPV 52 +
HPV 68
Oui
Reproductibilité :
La reproductibilité du test BD Onclarity HPV Assay a été évaluée sur le système BD Viper LT à l’aide d’un panel de quatre
membres se composant d’échantillons négatifs, fortement négatifs, faiblement positifs et moyennement positifs. Les
membres positifs du panel étaient composés des cellules SiHa, HeLa et MS751 ensemencées collectivement en groupes
d’échantillons cliniques BD SurePath HPV négatifs et avec le milieu BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent contenant
une lignée cellulaire HPV négative (C33A). Le panel a été testé de façon équitable avec trois lots de réactifs et sur trois
instruments pendant 12 jours. Les données sont résumées dans le tableau 19.
29
Tableau 19 : Résumé des données de reproductibilité du test BD Onclarity HPV Assay sur le système
BD Viper LT
Inter-série
Lignée
Milieu cellulaire
(Génotype)
SurePath
SiHa
(HPV 16)
HeLa
(HPV 18)
MS-751
(HPV 45)
Cervical Brush Diluent
SiHa
(HPV 16)
Niveau du
panel
Concentration
cellules/mL
Nég
0
Fortement nég.
342
Faiblement pos.
1 582
Moyennement
pos.
4 746
Nég
0
Fortement nég.
102
Faiblement pos.
914
Moyennement
pos.
2 742
Nég
0
Fortement nég,
395
Faiblement pos.
3 793
Moyennement
pos.
11 378
Nég
0
SD
%CV
SD
%CV
NA
NA
NA
NA
0,54
1,52
0,57
1,62
0,22
0,69
0,30
0,92
0,22
0,71
0,35
1,11
NA
NA
NA
NA
0,75
2,09
0,85
2,37
0,30
0,92
0,37
1,14
0,22
0,72
0,30
0,98
NA
NA
NA
NA
0,52
1,45
0,55
1,53
0,26
0,80
0,36
1,10
0,35
1,10
0,41
1,31
NA
NA
NA
NA
Fortement nég.
32
36,29
0,09
0,25
0,59
1,63
0,62
1,71
205
94,91 %
(205/216)
(91,11 % –
97,13 %)
33,63
0,26
0,78
0,33
0,97
0,43
1,27
615
100 %
(216/216)
(98,25 % –
100 %)
31,80
0,16
0,51
0,18
0,56
0,25
0,79
0
100 %
(214/214)
(98,24 % –
100 %)
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
Fortement nég.
13
99,07 %
(214/216)
(96,69 % –
99,75 %)
35,69
0,10
0,29
0,78
2,18
0,80
2,23
Faiblement pos.
76
99,08 %
(216/218)
(96,72 % –
99,75 %)
33,34
0,15
0,44
0,25
0,76
0,30
0,91
228
99,54 %
(215/216)
(97,42 % –
99,92 %)
32,07
0,24
0,73
0,25
0,78
0,37
1,16
0
100 %
(214/214)
(98,24 % –
100 %)
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
Fortement nég.
59
100 %
(216/216)
(98,25 % –
100 %)
36,54
0,22
0,61
0,62
1,68
0,66
1,81
Faiblement pos.
457
99,54 %
(215/216)
(97,42 % –
99,92 %)
33,22
0,16
0,48
0,25
0,75
0,32
0,95
1 371
100 %
(218/218)
(98,27 % –
100 %)
31,74
0,14
0,43
0,21
0,67
0,27
0,84
Moyennement
pos.
Nég
Moyennement
pos.
(98,27 % –
100 %)
Total
Faiblement pos.
Nég
MS-751
(HPV 45)
100 %
(216/216)
97,69 %
(211/216)
100 %
(216/216)
100 %
(216/216)
100 %
(216/216)
98,61 %
(213/216)
99,54 %
(215/216)
100 %
(216/216)
100 %
(216/216)
100 %
(216/216)
100 %
(216/216)
99,54 %
(215/216)
100 %
(214/214)
Intra-série
100 %
(218/218)
Moyennement
pos.
HeLa
(HPV 18)
% corrects
Intervalle de
Moyenne
confiance
SD %CV
Ct
à 95 %
(98,25 % –
NA
NA
NA
100 %)
(94,7 % –
35,28
0,16 0,46
99,01 %)
(100 % –
32,31
0,16 0,50
98,25 %)
(100 % –
31,07
0,22 0,69
98,25 %)
(98,25 % –
NA
NA
NA
100 %)
(96 % –
35,89
0,24 0,68
99,53 %)
(97,42 % –
32,70
0,16 0,50
99,92 %)
(100 % –
30,68
0,13 0,43
98,25 %)
(98,25 % –
NA
NA
NA
100 %)
(98,25 % –
35,77
0,00 0,00
100 %)
(100 % –
32,71
0,20 0,60
98,25 %)
(97,42 % –
31,33
0,18 0,57
99,92 %)
(98,24 % –
NA
NA
NA
100 %)
Contamination croisée :
Une étude a été effectuée afin d’évaluer le risque d’obtenir un résultat faussement positif soit dans la même série
(contamination croisée intra-série) soit dans une série suivante (contamination entre séries) sur le système BD Viper LT.
Une série a été testée tous les jours pendant cinq jours sur chacun des trois instruments soit un total de 675 réplicats
de tests. Chaque série se composait d’échantillons BD SurePath Preservative Fluid ou PreservCyt Solution contenant
une lignée cellulaire HPV négative (C33A) avec et sans cellules SiHa ensemencées à 1,0 x 105 cellules/mL organisées
comme sur un échiquier. Le taux global de contamination avec les milieux BD SurePath Preservative Fluid et PreservCyt
Solution était de 0,00 %.
Stabilité des échantillons non dilués (en flacon) :
Des études analytiques ont été réalisées pour valider les conditions de stockage permettant de garantir la stabilité des
échantillons cervicaux non dilués. Les échantillons BD SurePath Preservative Fluid, PreservCyt Solution et BD Onclarity HPV
Cervical Brush Diluent contenant une lignée cellulaire HPV négative (C33A), ont été ensemencés avec des cellules SiHa
à 3 x LD et stockés entre 2 et 8 °C, 30 °C et -20 °C à différents points expérimentaux. À chaque point expérimental, les
échantillons étaient sortis et analysés avec le test BD Onclarity HPV Assay sur le système BD Viper LT. Vingt-quatre répétitions
du test ont été faites pour chaque condition (type d’échantillon/température/durée). La stabilité a été atteinte pendant
30 jours à une température comprise entre 2 et 30 °C et à -20 °C.
Stabilité des échantillons dilués :
Des études analytiques ont été réalisées pour valider les conditions de stockage permettant de garantir la stabilité des
échantillons cervicaux dilués. Les échantillons BD SurePath Preservative Fluid et PreservCyt Solution contenant une lignée
30
cellulaire HPV négative (C33A) ont été ensemencés avec des cellules SiHa à 3 X LD, dilués avec le BD HPV LBC Diluent et
stockés entre 2 et 8 °C, à 30 °C et à -20 °C à différents points expérimentaux. À chaque point expérimental, les échantillons
étaient sortis et analysés avec le test BD Onclarity HPV Assay sur le système BD Viper LT. Vingt-quatre répétitions du test ont
été faites pour chaque condition (type d’échantillon/température/durée). La stabilité a été atteinte pendant 15 jours à une
température comprise entre 2 et 30 °C et pendant 30 jours à -20 °C.
Stabilité des échantillons après préchauffage :
Des études analytiques ont été réalisées pour valider les conditions de stockage permettant de garantir la stabilité
des échantillons cervicaux après préchauffage. Les échantillons BD SurePath Preservative Fluid, PreservCyt Solution
et BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent contenant une lignée cellulaire HPV négative (C33A), ont été ensemencés
avec des cellules SiHa à 3 x LD, dilués avec le BD Onclarity HPV LBC Diluent, puis préchauffés avec le BD Viper LT Pre-warm
Heater. Les échantillons traités ont été stockés à une température comprise entre 2 et 8 °C, à 30 °C et à -20 °C à
différents points expérimentaux. À chaque point expérimental, les échantillons étaient sortis et analysés avec le test
BD Onclarity HPV Assay sur le système BD Viper LT. Vingt-quatre répétitions du test ont été faites pour chaque condition
(type d’échantillon/température/durée). La stabilité a été atteinte pendant 7 jours à une température comprise entre
2 et 30 °C et pendant 30 jours à -20 °C.
INTERPRÉTATION DES TABLEAUX
Symboles et abréviations
Symboles
(+) (-) #
%
positif
négatif
nombre
pourcentage
Abréviations
ASCUS
Atypical squamous cells of undetermined significance (Cellules squameuses atypiques d’importance
indéterminée)
UFC
Unités formant colonies
IC Intervalle de confiance
CIN
Cervical intraepithelial neoplasia (Néoplasie cervicale intraépithéliale)
CV Coefficient de variation
HPV Human Papillomavirus (Papillomavirus humain)
HR
Haut risque
LBC
Cytologie en milieu liquide (Liquid-Based Cytology)
n
Nombre
NA
Non applicable
NEGNégatif
PCN Pourcentage de concordance négatif
PBS
Sérum physiologique tamponné au phosphate (Phosphate Buffered Saline)
PCR
Réaction en chaîne de polymérase (Polymerase Chain Reaction)
POSPositif
PCP Pourcentage de concordance positif
CQ
Contrôle de qualité
E-T Écart type
CONDITIONNEMENT
Les produits suivants BD Onclarity et BD Viper compatibles avec le BD Viper LT sont également disponibles :
N° réf. Description
442946 BD Onclarity HPV Assay Reagent Pack, 192 tests
441993 Control Set for the BD Onclarity HPV Assay, 24 tubes positifs et 24 tubes négatifs
442841 BD Viper PCR Extraction Reagent Trough with Piercing Tool, 12 cuves de réactifs d’extraction
441992 BD FOX PCR Extraction Tubes, 384 tubes
441354 BD Viper System Neutralization Pouch, 12 sachets
442840
BD Onclarity HPV Liquid Based Cytology Specimen (LBC) Diluent, 400 tubes
441991 BD Onclarity HPV Assay Cervical Brush Collection Kit, 100
442957 BD Viper LT System PCR Tube/Tray Kit
443430 Key Card for the BD Viper LT System (Carte clé pour le système BD Viper LT)
440476
BD ProbeTec Chlamydia trachomatis/Neisseria gonorrhoeae (CT/GC) Amplified DNA Assay Endocervical
Specimen Collection and DRY TRANSPORT Kit
441996 BD Viper LT Pipette Tips, 3 840
441995 BD Viper LT Solid Waste Liners, 80
442950 BD Pre-warm Heater
442967 BD Viper LT System PCR Accessory kit
442839 Systèm BD Viper LT
RÉFÉRENCES: Voir la rubrique “References” du texte anglais
31
 Onclarity HPV Assay
Deutsch
VERWENDUNGSZWECK
Der BD Onclarity HPV Assay (HPV-Test) ist ein amplifizierter DNA-Test für den qualitativen Nachweis von
Hochrisikotypen der humanen Papillomaviren (HPV). Mit dem Assay können alle Hochrisiko-HPV-Typen (16, 18,
31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 und 68) nachgewiesen werden. Außerdem bietet er die Möglichkeit zur
Genotypisierung von sechs Hochrisikotypen (HPV 16, 18, 31, 45, 51 und 52). Zu den mit dem BD Onclarity HPV Assay
getesteten zervikalen Proben zählen BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit (zervikales Bürsten-Entnahmeset),
BD SurePath Preservative Fluid (Konservierungsflüssigkeit) und PreservCyt-Lösung. (Dazu wird ein Aliquot verwendet,
das vor oder nach der Verarbeitung für den BD SurePath- oder ThinPrep-Pap-Test entnommen wird). Der
BD Onclarity HPV Assay wird mit dem BD Viper LT System durchgeführt.
ZUSAMMENFASSUNG UND ERKLÄRUNG
Humane Papillomaviren (HPV) sind die am häufigsten vorkommenden sexuell übertragbaren Viren weltweit. Rund 50 %
aller sexuell aktiven Personen leiden einmal in ihrem Leben an einer HPV-Erkrankung im Genitalbereich. Die Betroffenen
wissen häufig nicht, dass sie infiziert sind, und ergreifen keine Maßnahmen, um eine Übertragung des Virus auf andere
zu verhindern. Es sind mehr als 40 HPV-Typen bekannt, die eine Infektion des Genitalbereich auslösen können.1 In
vielen Fällen handelt es sich um transiente HPV-Infektionen, die von alleine ausheilen. In einigen Fällen ist das Virus
jedoch persistent und löst eine abnorme Entwicklung normaler Zellen aus, die zu einer Krebserkrankung führt. Diese
onkogenen HPV-Typen werden als Hochrisikoviren eingestuft. Zu diesen zählen unter anderem HPV 16 und 18. Andere
Typen werden als Niedrigrisikoviren bezeichnet, da von diesen kein Krebsrisiko auszugehen scheint. Laut der World
Health Organization (WHO) ist HPV weltweit mit etwa 250.000 Todesfällen pro Jahr die zweithäufigste Ursache für
krebsbedingte Todesfälle bei Frauen. Allein in Europa sterben jährlich etwa 15.000 Menschen an der Erkrankung.2
Schätzungen zufolge werden fast 70 % aller Fälle von Gebärmutterhalskrebs durch die HPV-Typen 16 und 18
hervorgerufen.3
Heute können Ärzte Pap-Tests einsetzen, um Veränderungen an den Zellen des Gebärmutterhalses festzustellen. Weisen
diese Zellen Anomalitäten auf, kann ein HPV-Test durchgeführt werden, um zu untersuchen, ob die Veränderungen
der Gebärmutter durch einen HPV-Typ hervorgerufen werden, der zu Gebärmutterhalskrebs führen kann. Nicht alle
molekularen Assays können die verschiedenen HPV-Typen unterscheiden
Mit dem BD Viper LT System durchgeführt, ist der BD Onclarity HPV Assay ein amplifizierter DNA-Assay für den qualitativen
Nachweis von Hochrisikotypen der humanen Papillomaviren (HPV). Mit dem Assay können die HPV-Typen 16, 18, 31,
33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 und 68 nachgewiesen werden. Außerdem bietet er gleichzeitig die Möglichkeit zur
Identifizierung der Hochrisikotypen 16, 18, 31, 45, 51 und 52 sowie anderer Hochrisiko-Genotypen, die nach Genotypgruppe
berichtet werden (P1: 33/58; P2: 56/59/66; P3: 35/39/68). Zu den zervikalen Proben, die mit dem BD Onclarity HPV
Assay getestet werden können, zählen BD SurePath Preservative Fluid (mithilfe eines Aliquots, das vor oder nach der
Verarbeitung für den BD SurePath-Pap-Test entnommen wird), PreservCyt-Lösung (mithilfe eines Aliquots, das vor oder
nach der Verarbeitung für den PreservCyt-Pap-Test entnommen wird) und BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit.
VERFAHRENSGRUNDLAGEN
Der BD Onclarity Human Papillomavirus (HPV) Assay wurde für die Verwendung mit der BD SurePath Preservative Fluid
(mithilfe eines Aliquots, das vor oder nach der Verarbeitung für den BD SurePath-Pap-Test entnommen wird), der
PreservCyt-Lösung (mithilfe eines Aliquots, das vor oder nach der Verarbeitung für den PreservCyt-Pap-Test entnommen
wird) und dem BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit, den zugehörigen Reagenzien, dem BD Viper LT System
und der BD FOX Extraction (Extraktion) entwickelt.
Die Proben durchlaufen einen Vorwärmschritt im BD Pre-warm Heater (Vorwärmblock). Dieser dient der Homogenisierung
der Matrix, der Lysierung der Zellen und der Freisetzung der DNA, die extrahiert und amplifiziert werden kann. Nach
dem Kühlvorgang werden die Proben in das BD Viper LT System eingesetzt, in dem anschließend die Schritte zur
Extraktion und Amplifikation der Ziel-DNA erfolgen, ohne dass ein weiteres Eingreifen durch den Benutzer erforderlich
ist. Die Probe wird in ein Extraktionsröhrchen übertragen, das Eisenoxidpartikel in löslicher Folie enthält. Anschließend
wird Säure hinzugefügt, um den pH-Wert zu senken und das Eisenoxid positiv zu laden, was wiederum zur Bindung
der negativ geladenen DNA führt. Dann werden die Partikel und die gebundene DNA mit Magneten an die Seiten des
Extraktionsröhrchens gezogen und die behandelte Probe wird angesaugt und entsorgt. Die Partikel werden gereinigt
und es wird ein Elutionspuffer mit hohem pH-Wert hinzugefügt, um die gereinigte DNA zu eluieren. Schließlich wird
ein Neutralisierungspuffer verwendet, um den pH-Wert des Eluats für die Amplifikation der DNA zu optimieren.
Der BD Onclarity HPV Assay basiert auf dem gleichzeitigen Amplifizieren und Nachweisen der Ziel-DNA mithilfe von
Amplifikations-Primern und mit fluoreszierendem Farbstoff markierten Nachweissonden unter Verwendung einer
Polymerase-Kettenreaktion (PCR) in Echtzeit. Die Reagenzien liegen getrocknet in drei Röhrchen (G1, G2 und G3) vor,
mithilfe derer die 14 HPV-Genotypen nachgewiesen werden können, sowie in einer aus der Probe gewonnenen internen
Kontrolle, bestehend aus DNA-Fragmenten des humanen Beta-Globin-Gens. Jedes einzelne Röhrchen enthält die
Amplifikations-Primer, mit fluoreszierendem Farbstoff markierte Nachweissonden, DNA-Polymerase, Nukleotide und
weitere, für die Amplifikation erforderliche Reagenzien zu dem jeweiligen Assay. Das BD Viper LT System pipettiert
einen Teil der gereinigten DNA-Lösung aus jedem Extraktionsröhrchen in eines der drei BD Onclarity HPV-PCR-Röhrchen
(G1, G2 und G3), die anschließend versiegelt werden, um eine Kontaminierung zu verhindern. Das Vorhandensein oder
Nichtvorhandensein von HPV-DNA wird anhand des PCR-Zyklus bestimmt, bei dem das Signal einen vordefinierten
Schwellenwert überschreitet. Zusätzlich wird als interne Kontrolle zur Beurteilung der Verarbeitung, Extraktion und
Amplifikation der Probe im Rahmen des Assays ein Fragment des humanen Beta-Globin-Gens extrahiert, amplifiziert
und nachgewiesen.
32
MITGELIEFERTE REAGENZIEN UND ARBEITSMATERIALIEN:
Jede Reagenzienpackung des BD Onclarity HPV Assay enthält:
BD Onclarity HPV G1-PCR-Röhrchen, 2 x 96: jedes G1-PCR-Röhrchen enthält ca. 32,5 pmol Oligonukleotide,
20 pmol mit fluoreszierendem Farbstoff markierte Nachweissonde, 80 nmol dNTPs und 0,52 Einheiten DNAPolymerase mit Stabilisatoren und Pufferkomponenten.
BD Onclarity HPV G2-PCR-Röhrchen, 2 x 96: jedes G2-PCR-Röhrchen enthält ca. 42,5 pmol Oligonukleotide,
30 pmol mit fluoreszierendem Farbstoff markierte Nachweissonde, 80 nmol dNTPs und 0,52 Einheiten DNAPolymerase mit Stabilisatoren und Pufferkomponenten.
BD Onclarity HPV G3-PCR-Röhrchen, 2 x 96: jedes G3-PCR-Röhrchen enthält ca. 42,5 pmol Oligonukleotide,
25 pmol mit fluoreszierendem Farbstoff markierte Nachweissonde, 80 nmol dNTPs und 0,52 Einheiten DNAPolymerase mit Stabilisatoren und Pufferkomponenten.
HINWEIS: Jeder Beutel enthält einen Trockenmittelbeutel.
Kontrollset für den BD Onclarity HPV Assay: 24 BD Onclarity HPV Positive Control Tubes (Positiv-Kontrollröhrchen) mit ca.
14.430 Kopien von linearisierten HPV 16-Plasmiden, 8.325 Kopien von linearisierten HPV 18-Plasmiden, 8.418 Kopien von
linearisierten HPV 56-Plasmiden sowie 3.885 Kopien eines Plasmids mit einer Gensequenz des humanen Beta-Globins in
Trägernukleinsäure und 24 BD Onclarity HPV Negative Control Tubes (Negativ-Kontrollröhrchen), die nur Trägernukleinsäure
enthalten. Die Konzentrationen der Trägernukleinsäure und der Plasmide werden mittels Spektralphotometrie bestimmt.
BD Onclarity HPV Liquid-Based Cytology Specimen (LBC) Diluent Tubes (Verdünnungsmittelröhrchen): 400 Röhrchen
mit jeweils ca. 1,7 mL Puffer mit Salz, Reinigungsmittel und Konservierungsmittel.
BD FOX PCR Extraction Tubes (PCR-Extraktionsröhrchen): 48 Streifen mit 8 Röhrchen, die jeweils ca. 10 mg Eisenoxid in
löslicher Folie enthalten.
BD Viper PCR Extraction Reagent Trough with Piercing Tool (PCR-Extraktionsreagenzbehälter und
Punktionswerkzeug): Jeder mit 5 Kammern versehene Extraktionsreagenzbehälter enthält ca. 16,5 mL bindende Säure,
72,5 mL Waschpuffer, 25,4 mL Elutionspuffer und 19,4 mL Neutralisierungspuffer mit Konservierungsmittel sowie
15,5 mL Abfallneutralisierungslösung.
GERÄT, LABORUTENSILIEN UND VERBRAUCHSMATERIALIEN
Mitgeliefertes Arbeitsmaterial: BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit, BD Viper LT Instrument (Gerät),
BD Viper LT Instrument Plates (Geräteplatten), BD Viper LT Pipette Tips (Pipettenspitzen), BD Viper LT Solid Waste
Liners (Beutel für Feststoffabfall), BD Viper LT System PCR Tube/Tray Kit (PCR-Röhrchen-/-Schalen-Kit), BD Viper LT
System PCR Accessory Kit (PCR-Zubehörkit), BD Viper Pre-warm Heater (Vorwärmblock), BD Viper LT Specimen Rack
(Probenständer), BD Viper Neutralization Pouches, Specimen Tubes and Caps (Neutralisierungsbeutel, Probenröhrchen
und Kappen) zur Verwendung mit dem BD Viper-System (Extraktionsmodus), BD ProbeTec™ Chlamydia trachomatis/
Neisseria gonorrhoeae (CT/GC) Amplified DNA Assay Endocervical Specimen Collection and DRY TRANSPORT Kit (Kit
für die endozervikale Entnahme und den TROCKENTRANSPORT von Proben für den amplifizierten DNA-Test).
Benötigtes, jedoch nicht mitgeliefertes Arbeitsmaterial: Nitrilhandschuhe, Verdrängungspipetten,
aerosolbeständige Pipettenspitzen aus Polypropylen für 0,5 ± 0,05 mL, Vortex-Mischer, 0,5%iges (v/v)
Natriumhypochlorit, 1%iges (v/v) Natriumhypochlorit, 3%iges (w/v) Wasserstoffperoxid, Isopropyl-Alkohol,
nukleasefreies Wasser für molekularbiologische Zwecke.
Aufbewahrung und Handhabung: Das BD Onclarity HPV LBC Diluent (Verdünnungsmittel) und das BD Onclarity
HPV Cervical Brush Diluent (Verdünnungsmittel für die zervikale Bürste) müssen bei 2 – 25 °C aufbewahrt werden. Alle
anderen Reagenzien können bei 2 – 33 °C aufbewahrt werden. Ungeöffnet sind die Reagenzienpackungen bis zum
Verfallsdatum stabil. Nach dem Öffnen eines Beutels sind die ordnungsgemäß verschlossenen PCR-Röhrchen 4 Wochen
lang bzw. bis zum Verfallsdatum stabil (es gilt der jeweils frühere Zeitpunkt). Nicht einfrieren.
WARNUNGEN UND VORSICHTSMASSNAHMEN
1. In-vitro-Diagnostikum.
2. Klinische Proben können pathogene Mikroorganismen, wie z. B. Hepatitis-Viren und HIV, enthalten. Beim
Umgang mit allen mit Blut oder anderen Körperflüssigkeiten kontaminierten Artikeln sind die „Allgemeinen
Vorsichtsmaßnahmen“4-7 sowie die einschlägigen Institutionsrichtlinien zu beachten. Weitere spezielle Vorsichtsund Warnhinweise sowie Anmerkungen zum BD Viper LT-Gerät enthält das Benutzerhandbuch zum BD Viper LT
T- System.
Proben:
3. Für flüssigkeitsbasierte Zytologieproben nur die BD Onclarity HPV LBC Diluent-Röhrchen verwenden.
4. Für zervikale Bürstenabstriche nur das BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit verwenden.
5. Für ein optimales Ergebnis des BD Onclarity HPV Assay ist Voraussetzung, dass die Proben ordnungsgemäß
entnommen, gehandhabt und transportiert werden.
6. Zervikale Bürste bei der Abstrichentnahme nicht zu stark drehen, um unnötiges Bluten zu reduzieren.
7. Die zum Labor gesandten Proben müssen ordnungsgemäß beschriftet sein.
8. Beim Abbrechen des Stiels der zervikalen Bürste darauf achten, dass der Inhalt nicht verspritzt oder verschüttet
wird oder Aerosole entstehen. Kopf der zervikalen Bürste vor Kontaminierung schützen.
9. Kreuzkontaminierung während der Handhabung der Proben vermeiden. Sicherstellen, dass die Probenbehälter nicht
mit anderen in Berührung kommen. Verwendetes Arbeitsmaterial entsorgen, ohne dieses über offene Probenbehälter
hinweg zu transportieren. Sollten die Handschuhe mit den Proben in Berührung kommen, sind sie zu wechseln,
um eine Kreuzkontaminierung zu vermeiden.
10. Eine übermäßige oder zu geringe Befüllung der BD Onclarity HPV LBC Diluent-Röhrchen mit LBC-Proben kann
die Testleistung beeinträchtigen. Eine übermäßige Befüllung der Röhrchen kann auch zu einem Überlaufen von
Flüssigkeit auf das BD Viper LT-Deck führen und Kontaminierungen verursachen.
33
11. Zervikale Proben müssen vor Ablauf des Verfallsdatums des BD Onclarity HPV LBC Diluent-Röhrchens oder des
BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent-Röhrchens entnommen und getestet werden.
12. Zum Transferieren von Proben in die BD Onclarity HPV LBC Diluent-Röhrchen dürfen nur aerosolbeständige
Pipettenspitzen aus Polypropylen verwendet werden.
Test/Reagenz:
13.Die BD Onclarity HPV Positive und Negative Controls müssen innerhalb von 24 Stunden nach der Hydrierung
vorgewärmt werden.
14. Nur Proben- und Kontrollröhrchen mit durchbohrbaren Kappen im BD Viper LT System verwenden. Die
durchbohrbaren Kappen vor dem Starten des Geräts nicht entfernen. Punktierte durchbohrbare Kappen vor dem
Starten des Geräts unbedingt durch neue durchbohrbare Kappen ersetzen.
15. Reagenzien aus Kits mit verschiedenen Chargennummern nicht gegeneinander austauschen oder miteinander
kombinieren.
16. BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent-Röhrchen nicht testen, wenn die Bürste beim Eintreffen im Labor fehlt.
Andernfalls kann es zu falsch negativen Testergebnissen kommen.
17. Nur die BD Viper LT-Pipettenspitzen verwenden, die im Lieferumfang des BD Viper LT Systems enthalten sind.
18. BD Viper PCR Extraction Reagent Trough with Piercing Tool (PCR-Extraktionsreagenzbehälter und Punktionswerkzeug)
VORSICHT
H314 Verursacht schwere Verätzungen und schwere Augenschäden. H302 Gesundheitsschädlich bei Verschlucken.
P260 Staub/Rauch/Gas/Nebel/Dampf/Aerosol nicht einatmen. P280 Schutzhandschuhe/Schutzkleidung/Augenschutz/
Gesichtsschutz tragen. P303/361/353 BEI BERÜHRUNG MIT DER HAUT (oder dem Haar): Alle kontaminierten
Kleidungsstücke sofort ausziehen. Haut mit Wasser abwaschen/duschen. P304/340 BEI EINATMEN: Die betroffene
Person an die frische Luft bringen und in einer Position ruhigstellen, die das Atmen erleichtert. P405 Unter Verschluss
aufbewahren. P501 Inhalt/Behälter gemäß den örtlichen/regionalen/nationalen/internationalen Bestimmungen
entsorgen.
19. Nur die BD Viper LT Clear Plate Sealers (durchsichtigen Plattensiegel) auf den PCR-Röhrchen mit dem BD Viper LT
System verwenden.
20. Reagenzienbeutel mit nicht verwendeten PCR-Röhrchen MÜSSEN nach dem Öffnen wieder sorgfältig verschlossen
werden. Vor dem Verschließen der Reagenzienbeutel sicherstellen, dass Trockenmittel vorhanden ist.
21. Die PCR-Röhrchen MÜSSEN vor dem Entfernen der Platte aus dem BD Viper LT System ordnungsgemäß mit den
BD Viper LT Clear Plate Sealers verschlossen werden. Das Verschließen gewährleistet eine geschlossene Reaktion
bei Amplifikation und Nachweis und ist notwendig, um eine Kontaminierung des Geräts und des Arbeitsbereichs
mit Amplifikationsprodukten zu vermeiden. Keinesfalls die Abdeckung von den PCR-Röhrchen entfernen.
22. Zur Entsorgung der getesteten PCR-Röhrchen die im BD Viper LT System PCR Accessory Kit (PCR-Zubehör-Kit)
enthaltenen Entsorgungsbeutel verwenden, um eine Kontaminierung des Arbeitsbereichs mit Amplifikationsprodukten
zu vermeiden. Vor der Entsorgung sicherstellen, dass die Beutel ordnungsgemäß verschlossen sind.
23. Aufgrund des Designs des BD Viper LT Systems, durch das das Amplikon-Kontaminierungsrisiko im Testbereich
reduziert wird, ist zwar kein dedizierter Arbeitsbereich erforderlich, jedoch müssen anderweitige
Vorsichtsmaßnahmen, insbesondere zur Vermeidung von Probenkontaminierungen während der Verarbeitung,
getroffen werden.
24. Sollten die Handschuhe mit den Proben in Berührung kommen oder feucht erscheinen, HANDSCHUHE unverzüglich
WECHSELN, um Kontaminierungen anderer Proben zu vermeiden. Handschuhe vor dem Verlassen des Arbeitsbereichs
und beim erneuten Betreten des Arbeitsbereichs wechseln.
25. Im Falle einer Kontaminierung die Reinigungsanweisungen im Benutzerhandbuch zum BD Viper LT System befolgen.
26. Im Fall eines ungewöhnlichen Vorgangs, z. B. bei einer Verschüttung in das BD Viper LT-Gerät oder bei einer DNAKontaminierung, die durch Reinigen nicht beseitigt werden kann, den technischen Kundendienst und Support von
BD verständigen.
PROBENENTNAHME UND -TRANSPORT
Zu den zervikalen Proben, die mit dem BD Onclarity HPV Assay getestet werden können, zählen BD Onclarity HPV
Cervical Brush Collection Kit, BD SurePath Preservative Fluid (mithilfe eines Aliquots, das vor oder nach der Verarbeitung
für den BD SurePath-Pap-Test entnommen wird) und PreservCyt-Lösung (mithilfe eines Aliquots, das vor oder nach der
Verarbeitung für den ThinPrep-Pap-Test entnommen wird).
Für den Versand im In- und Ausland sind die Proben gemäß den jeweils geltenden gesetzlichen Bestimmungen für den
Transport von medizinischen Proben und Krankheitserregern bzw. infektiösen Substanzen zu beschriften. Während
des Transports sind die maximalen Lagerzeiten und die Temperaturbedingungen für die Lagerung einzuhalten.
ENTNAHME VON ZERVIKALEN BÜRSTENABSTRICHEN
1. BD Onclarity HPV Cervical Brush in den Zervikalkanal einführen, bis nur noch die untersten Borsten der Bürste
aus dem Muttermund herausragen. ¼- bis ½-Drehung in eine Richtung drehen. Bürste nicht überdrehen, um
unnötiges Bluten zu reduzieren.
2. Den Deckel des BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent-Röhrchens entfernen und die Bürste unverzüglich bis zum
Röhrchenboden einführen.
3. Den Stiel der Bürste vorsichtig an der perforierten Linie abbrechen. Verspritzen des Inhalts vermeiden.
4. Das Röhrchen wieder fest verschließen.
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LAGERUNG UND TRANSPORT VON ZERVIKALEN BÜRSTENABSTRICHEN
Die zervikalen Bürstenabstriche in BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent-Röhrchen müssen innerhalb von 30 Tagen
nach Probenentnahme zum Labor und/oder Testzentrum transportiert werden, wenn sie bei Temperaturen von 2 – 30 ºC
gelagert werden, oder innerhalb von 30 Tagen, wenn sie bei -20 ºC gefroren gelagert werden. Proben dürfen nicht über
das Verfallsdatum des Verdünnungsmittelröhrchens für die zervikale Bürste hinaus gelagert und transportiert werden.
ENTNAHME VON LBC-PROBEN
BD SurePath- oder PreservCyt-Proben müssen entweder mit einer endozervikalen Bürste oder einer endozervikalen
Bürste-Spatel-Kombination gemäß den Anweisungen in der BD SurePath- bzw. PreservCyt-Packungsbeilage entnommen
werden. Nach der Entnahme können BD SurePath- oder PreservCyt-Proben in der Originalflasche bei 2 – 30 °C bis zu
30 Tage gelagert bzw. transportiert werden oder bei -20 ºC gefroren 30 Tage gelagert werden, bevor sie in BD Onclarity
HPV LBC Specimen Diluent-Röhrchen (Probenverdünnungsmittelröhrchen) übertragen werden.
LAGERUNG UND TRANSPORT VON LBC-PROBEN
LBC-Probenübertragung in BD Onclarity HPV LBC Diluent-Röhrchen – vor oder nach dem Entfernen eines
Aliquots für die Verarbeitung für den BD SurePath- oder ThinPrep-Test.
Ein Aliquot von 0,5 mL der BD SurePath- oder der PreservCyt-Probe wird vor oder nach der Verarbeitung für den
BD SurePath- bzw. ThinPrep-Pap-Test aus der Originalflasche in das BD Onclarity HPV LBC Specimen Diluent-Röhrchen
von Hand übertragen. Bei der Handhabung des BD Onclarity HPV LBC Specimen Diluent-Röhrchens und der
BD SurePath- oder PreservCyt-Probenflasche müssen Handschuhe getragen werden. Sollten die Handschuhe mit den
Proben in Berührung kommen, sind sie unverzüglich zu wechseln, um keine anderen Proben zu kontaminieren.
BD SurePath-Probenübertragung vor oder nach der Verarbeitung für den BD SurePath-Test
HINWEIS: Die Packungsbeilage zum BD PrepStain Slide Processor (Objektträgerverarbeitungssystem) oder
BD Totalys SlidePrep (Objektträgerverarbeitungssystem) enthält Anweisungen zur Entnahme eines Aliquots aus der
BD SurePath-Probenflasche vor der Durchführung des flüssigkeitsbasierten BD SurePath-Pap-Tests.
HINWEIS: Jede Probe einzeln verarbeiten.
1.Das BD Onclarity HPV LBC Diluent-Röhrchen mit den Patientenkenndaten beschriften.
2. Die Kappe des BD Onclarity HPV LBC Diluent-Röhrchens abnehmen.
3. Zur Herstellung einer homogenen Mischung das BD SurePath-Probenröhrchen 10 – 20 s lang vortexen.
4. Mithilfe einer aerosolbeständigen Spitze schnell innerhalb einer Minute nach dem Vortexen 0,5 mL aus der
Probenflasche in das BD Onclarity HPV LBC Diluent-Röhrchen transferieren.
5. Pipettenspitze entsorgen.
HINWEIS: Für jede Probe ist die Verwendung einer neuen Pipettenspitze erforderlich.
6.Das BD Onclarity HPV LBC Diluent-Röhrchen mit der Kappe fest verschließen.
7.Das BD Onclarity HPV LBC Diluent-Röhrchen 3 – 4 Mal umdrehen, um eine gründliche Mischung von Probe und
Verdünnungsmittel zu gewährleisten.
PreservCyt-Probenübertragung vor oder nach der Verarbeitung für den ThinPrep-Pap-Test
HINWEIS: Im Nachtrag zum ThinPrep 2000/3000 System-Benutzerhandbuch finden Sie Anweisungen zur Entnahme
eines Aliquots aus der PreservCyt-Probenflasche vor der Durchführung des ThinPrep-Tests.
HINWEIS: Jede Probe einzeln verarbeiten.
1.Das BD Onclarity HPV LBC Diluent-Röhrchen mit den Patientenkenndaten beschriften.
2. Die Kappe des BD Onclarity HPV LBC Diluent-Röhrchens abnehmen.
3. Zur Herstellung einer homogenen Mischung die PreservCyt-Probenflasche bei hoher Geschwindigkeit 8 – 12 s lang
vortexen.
4. Sofort mithilfe einer aerosolbeständigen Spitze 0,5 mL aus der Probenflasche in das BD Onclarity HPV LBC DiluentRöhrchen transferieren.
5. Pipettenspitze entsorgen.
HINWEIS: Für jede Probe ist die Verwendung einer neuen Pipettenspitze erforderlich.
6.Das BD Onclarity HPV LBC Diluent-Röhrchen mit der Kappe fest verschließen.
7.Das BD Onclarity HPV LBC Diluent-Röhrchen 3 – 4 Mal umdrehen, um eine gründliche Mischung von Probe und
Verdünnungsmittel zu gewährleisten.
Lagerung und Transport von Proben, die in BD HPV LBC Diluent-Röhrchen übertragen wurden
Nach der manuellen Übertragung in ein BD Onclarity HPV LBC Diluent-Röhrchen können die verdünnten Proben bis zu
15 Tage lang bei 2 – 30 °C oder bis zu 30 Tage lang bei -20 °C gelagert werden.
VERARBEITUNGSVERFAHREN FÜR ALLE PROBEN
HINWEIS: Bei gefrorenen Proben sicherstellen, dass sie bei Raumtemperatur vollständig aufgetaut sind und durch
Umdrehen gut gemischt wurden, bevor sie weiterverarbeitet werden.
1. Anhand des Röhrchenanordnungsberichts die Proben in der richtigen Reihenfolge in den BD Viper LT Specimen
Rack einsetzen und einrasten lassen.
2. Damit sind die Proben für das Vorwärmen bereit.
3. Vor dem weiteren Vorgehen die Handschuhe wechseln, um Kontaminierungen zu vermeiden.
VORBEREITUNG DER QUALITÄTSKONTROLLEN
1. Die Kappen einer BD Onclarity HPV Negative Control und eines BD Onclarity HPV LBC Diluent-Röhrchens abnehmen.
2. Gesamten Inhalt des BD Onclarity HPV LBC Diluent-Röhrchens in die BD Onclarity HPV Negative Control geben.
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3. Die rehydrierte BD Onclarity HPV Negative Control wieder verschließen. Das leere BD Onclarity HPV LBC DiluentRöhrchen wieder verschließen und entsorgen.
4. Die Kappen einer BD Onclarity HPV Positive Control und eines BD Onclarity HPV LBC Diluent-Röhrchens abnehmen.
5. Gesamten Inhalt des BD Onclarity HPV LBC Diluent-Röhrchens in die BD Onclarity HPV Positive Control geben.
6. Die rehydrierte BD Onclarity HPV Positive Control wieder verschließen. Das leere BD Onclarity HPV LBC
Diluent-Röhrchen wieder verschließen und entsorgen.
7. Anhand des Röhrchenanordnungsberichts die rehydrierte BD Onclarity HPV Negative Control an der richtigen Position
in das BD Viper LT Specimen Rack einsetzen.
8. Anhand des Röhrchenanordnungsberichts die rehydrierte BD Onclarity HPV Positive Control an der richtigen Position
in das BD Viper LT Specimen Rack einsetzen.
9. Damit sind die Kontrollen für das Vorwärmen mit den Proben bereit.
HINWEIS: Kontrollen müssen innerhalb von 24 Stunden nach der Hydrierung vorgewärmt werden.
VORWÄRMVERFAHREN
HINWEIS: Das Vorwärmverfahren muss für alle Proben durchgeführt werden, um sicherzustellen, dass die Probenmatrix
homogen ist, bevor sie in das BD Viper LT System eingesetzt wird. Werden Proben nicht vorgewärmt, kann dies die
Leistung des BD Onclarity HPV Assay und/oder des BD Viper LT Systems beeinträchtigen.
HINWEIS: Gefrorene oder im Kühlschrank aufbewahrte Proben müssen vor dem Vorwärmen bei Raumtemperatur
vollständig aufgetaut werden.
1.Das BD Viper LT Specimen Rack in den BD Pre-warm Heater einsetzen und das Vorwärmprotokoll für den BD Onclarity
HPV Assay auf dem BD Viper LT-Gerät auswählen.
2. Die Proben werden durch den BD Pre-warm Heater automatisch vorgewärmt und das Vorwärmen wird gemäß
dem Vorwärmprotokoll für den BD Onclarity HPV Assay gesteuert.
3. Nach Abschluss des Vorwärmprotokolls für den BD Onclarity HPV Assay den Ständer vom Wärmeblock nehmen
und in das BD Viper LT-Gerät einsetzen.
4. Anweisungen zum Testen von Proben und Kontrollen siehe „Testverfahren“.
5. Nach dem Vorwärmen können Proben bis zu 7 Tage lang bei 2 – 30 ºC oder 30 Tage lang bei -20 ºC gelagert werden,
ohne dass vor dem Testen im BD Viper LT System ein weiteres Vorwärmen erforderlich ist.
6. Nach dem Vorwärmen können Kontrollen bis zu 24 Stunden bei 2 – 30 ºC gelagert werden, ohne dass vor dem
Testen im BD Viper LT System ein weiteres Vorwärmen erforderlich ist.
TESTVERFAHREN
Bezüglich spezifischer Anweisungen zum Systembetrieb und zur Wartung der Systemkomponenten siehe das
Benutzerhandbuch zum BD Viper LT System. Als optimale Umgebungsbedingungen für den HPV Test erwiesen sich
18 - 27 ºC bei 20 - 85% relativer Luftfeuchtigkeit.
QUALITÄTSKONTROLLE
Die Qualitätskontrolle muss unter Einhaltung der örtlich, landesweit und/oder bundesweit geltenden Bestimmungen
oder der Auflagen der Akkreditierungsorganisationen sowie der Standard-Qualitätskontrollverfahren des betreffenden
Labors erfolgen. Benutzern wird geraten, die einschlägigen CLSI-Richtlinien und CLIA-Vorschriften bezüglich geeigneter
Maßnahmen zur Qualitätskontrolle einzusehen.
Das Kontrollenset für den BD Onclarity HPV Assay ist separat erhältlich. Bei jedem Testlauf und für jede neue
Reagenzien-Kit-Chargennummer müssen je eine positive Kontrolle und eine negative Kontrolle mitgeführt werden.
Die Kontrollen sind gemäß dem Benutzerhandbuch zum BD Viper LT System zu positionieren. Die positive HPV-Kontrolle
dient nur zur Überprüfung erheblichen Reagenzienversagens. Die negative HPV-Kontrolle dient zur Überprüfung auf
Reagenzien- und/oder Umgebungskontaminierung. Zusätzliche Kontrollen können in Übereinstimmung mit den Richtlinien
oder Auflagen der örtlich, landesweit und/oder bundesweit geltenden Bestimmungen oder Akkreditierungsorganisationen
getestet werden.
Allgemeine QK-Informationen für das BD Viper LT System:
Die Position der PCR-Röhrchen wird in einem farbcodierten Plattenanordnungsbildschirm auf dem LCD-Monitor angezeigt.
Ein Pluszeichen (+) in einem Röhrchen gibt an, dass es sich um eine positive QK-Probe handelt. Ein Minuszeichen (-) in
einem Röhrchen gibt an, dass es sich um eine negative QK-Probe handelt. Für jede Reagenzien-Kit-Chargennummer
muss ein QK-Paar eingegeben werden. Wenn die QK-Paare nicht ordnungsgemäß eingegeben wurden, wird ein
Meldungsfenster angezeigt, das das Speichern des Ständers und ein Fortsetzen des Durchlaufs verhindert, bis die
Qualitätskontrolle vollständig ist. Es können weitere (optionale) QK-Röhrchen eingegeben werden. Diese Röhrchen
werden als normale Proben getestet und haben keine Auswirkungen auf den Status „Bestanden“ bzw. „Nicht bestanden“
des Laufs. Informationen dazu siehe das Benutzerhandbuch zum BD Viper LT Systems.
HINWEIS: BD Onclarity HPV-Kontrollen müssen vor dem Einsetzen in das BD Viper LT Specimen Rack manuell hydriert
werden.
Interpretation der Qualitätskontrollergebnisse:
Die BD Onclarity HPV Positive Control (Positivkontrolle) und die BD Onclarity HPV Negative Control (Negativkontrolle)
müssen positiv bzw. negativ ausfallen, damit Patientenergebnisse berichtet werden können. Wenn die Kontrollen
nicht erwartungsgemäß ausfallen, ist der Testlauf ungültig und die Patientenergebnisse werden vom Gerät nicht
berichtet. Wenn eine der Kontrollen nicht die zu erwartenden Ergebnisse erbringt, den gesamten Lauf mit einem
neuen Kontrollenset, neuen Extraktionsröhrchen, einer neuen Extraktionsreagenzmulde und neuen PCR-Röhrchen
wiederholen. Wenn sich das Problem nicht lösen lässt, zusätzliche Informationen vom technischen Kundendienst und
Support von BD anfordern.
36
Tabelle 1: Interpretation der Qualitätskontrollergebnisse
Kontrolltyp
BD Onclarity HPV Positive Control
Symbol im
Röhrchenergebnisbericht
OK
QK-Ergebnis
QK bestanden
BD Onclarity HPV Positive Control
QK nicht bestanden
BD Onclarity HPV Positive Control
QK nicht bestanden
BD Onclarity HPV Positive Control
QK nicht bestanden
BD Onclarity HPV Negative Control
OK
QK bestanden
BD Onclarity HPV Negative Control
QK nicht bestanden
BD Onclarity HPV Negative Control
QK nicht bestanden
BD Onclarity HPV Negative Control
QK nicht bestanden
Die Symbole im Röhrchenergebnisbericht sind unter „Interpretation der Testergebnisse“ beschrieben.
INTERPRETATION DER TESTERGEBNISSE
Beim BD Onclarity HPV Assay wird eine Polymerase-Kettenreaktion in Echtzeit verwendet, um humane Papillomaviren
(HPV) in klinischen Proben nachzuweisen. Alle Berechnungen werden durch die BD Viper LT-Software automatisch
durchgeführt. Das Vorhandensein oder Nichtvorhandensein von klinisch relevanter HPV-DNA wird anhand des PCR-Zyklus
(Ct) bestimmt, bei dem das Signal einen vordefinierten Schwellenwert überschreitet. Im Rahmen des Assays wird ein
Fragment des humanen Beta-Globin-Gens extrahiert, amplifiziert und nachgewiesen. Dies dient als interne Kontrolle
zur Bewertung der Verarbeitung, Extraktion und Amplifikation der Probe und bietet Hinweise auf das Vorhandensein
von PCR-Inhibitoren. Wenn das HPV-spezifische Signal höher als ein Schwellenwert des Zyklus ist, verwendet der
Algorithmus bei der Interpretation der Ergebnisse die interne Kontrolle. Wenn das HPV-spezifische Signal kleiner oder
gleich einem Schwellenwert des Zyklus ist, ignoriert der Algorithmus die interne Kontrolle.
Bei HPV-Proben wird im Röhrchenergebnisbericht ein „HR“-Ergebnis (die Kombination aller Genotypen) angezeigt.
Ein positives Symbol in dieser Spalte zeigt an, dass für einen oder mehrere Genotypen, die mit dem HPV-Assay
nachgewiesen werden können, ein positives Ergebnis erzielt wurde. Die Spalte „GT“ wird verwendet, um die Ergebnisse
für Genotypen anzuzeigen, die in Ihrer Region nicht verfügbar sind. Diese Ergebnisse können nicht gekauft werden.
Die spezifischen Genotypen und kombinierten Genotypen werden in Spalten angezeigt. Wenn das Ergebnis für einen
Genotyp gekauft wurde, werden diese Ergebnisse wie im Folgenden erläutert berichtet. Wenn die Ergebnisse für einen
Genotyp nicht für den automatischen Erwerb konfiguriert wurden, sind diese Ergebnisse durch ein „Schlüssel“-Symbol
verdeckt.
Das Gerät kann so konfiguriert werden, dass spezifische Genotypen gekauft/berichtet werden, nachdem der Lauf beendet
ist. Für Anweisungen zur Autorisierung des automatischen Berichtens von Genotypen siehe das Benutzerhandbuch zum
BD Viper LT System.
Falls die Kontrollergebnisse nicht erwartungsgemäß ausfallen, werden die Patientenergebnisse nicht berichtet.
Informationen zu den erwarteten Kontrollwerten siehe den Abschnitt zur Qualitätskontrolle. Berichtete Ergebnisse
werden wie folgt interpretiert.
Tabelle 2: Interpretation der Ergebnisse des Tests auf Hochrisiko-HPV-Genotypen für den BD Onclarity HPV Assay
Hochrisiko-HPVErgebnis
HR
HR
Interpretation
Ergebnis
Positiv auf Hochrisiko-HPV-Typen
HPV-HR positiv
Negativ auf Hochrisiko-HPV-Typen
HPV-HR negativ
HPV-DNA, falls vorhanden, ist nicht
nachweisbar.
Versagen der internen Kontrolle
HPV-DNA, falls vorhanden, ist nicht
nachweisbar.
HPV-DNA, falls vorhanden, ist nicht
nachweisbar.
HPV-DNA, falls vorhanden, ist nicht
nachweisbar.
Extraktionstransfer fehlgeschlagen
Fehler beim Flüssigkeitsstand
Fehler
Tabelle 3: Interpretation der Ergebnisse des Tests auf spezifische HPV-Genotypen für den BD Onclarity HPV Assay
HPV-Genotypergebnis
16
16
18
18
45
45
Interpretation
Ergebnis
Positiv auf HPV-Typ 16
HPV-Typ 16 positiv
Negativ auf HPV-Typ 16
HPV-Typ 16 negativ
Positiv auf HPV-Typ 18
HPV-Typ 18 positiv
Negativ auf HPV-Typ 18
HPV-Typ 18 negativ
Positiv auf HPV-Typ 45
HPV-Typ 45 positiv
Negativ auf HPV-Typ 45
HPV-Typ 45 negativ
(Fortsetzung)
37
HPV-Genotypergebnis
P1
P1
31
31
P2
P2
51
51
52
52
P3
P3
GT
GT
--
Interpretation
Ergebnis
Positiv auf HPV-Typen 33 und/oder 58
HPV-Typen 33 und/oder 58 positiv
Negativ auf HPV-Typen 33 und/oder 58
HPV-Typen 33 und/oder 58 negativ
Positiv auf HPV-Typ 31
HPV-Typ 31 positiv
Negativ auf HPV-Typ 31
HPV-Typ 31 negativ
Positiv auf HPV-Typen 56, 59 und/oder 66
HPV-Typen 56, 59 und/oder 66 positiv
Negativ auf HPV-Typen 56, 59 und/oder 66
HPV-Typen 56, 59 und/oder 66 negativ
Positiv auf HPV-Typ 51
HPV-Typ 51 positiv
Negativ auf HPV-Typ 51
HPV-Typ 51 negativ
Positiv auf HPV-Typ 52
HPV-Typ 52 positiv
Negativ auf HPV-Typ 52
HPV-Typ 52 negativ
Positiv auf HPV-Typen 35, 39 und/oder 68
HPV-Typen 35, 39 und/oder 68 positiv
Negativ auf HPV-Typen 35, 39 und/oder 68
HPV-Typen 35, 39 und/oder 68 negativ
Positive(s) Ergebnis(se) für HPV-Genotyp in
Ihrer Region nicht verfügbar
Positive(s) Ergebnis(se) für
HPV-Genotyp eingeschränkt
Negative(s) Ergebnis(se) für HPV-Genotyp in
Ihrer Region nicht verfügbar
Ergebnis für HPV-Genotyp kann gekauft
werden
Negative(s) Ergebnis(se) für
HPV-Genotyp eingeschränkt
Ergebnis für HPV-Genotyp kann nicht gekauft
werden
Genotypergebnis ist gesperrt
Negatives HPV-Ergebnis, Versagen
der internen Kontrolle, Fehler
beim Flüssigkeitsstand oder
Extraktionstransfer fehlgeschlagen
Überprüfung auf Vorliegen von DNA-Kontaminierungen
Das folgende Testverfahren sollte mindestens einmal im Monat durchgeführt werden, um den Arbeitsbereich und die
Geräteoberflächen auf das Vorliegen von DNA-Kontaminierungen zu überprüfen. Die Überprüfung des Umfelds ist
äußerst wichtig, um eine Kontaminierung bereits vor der Entstehung von Schwierigkeiten zu erkennen.
1. Für jeden zu testenden Bereich einen sauberen Abstrichtupfer aus dem BD ProbeTec Chlamydia trachomatis/
Neisseria gonorrhoeae (CT/GC) Amplified DNA Assay Endocervical Specimen Collection and DRY TRANSPORT Kit
verwenden.
2. Etwas nukleasefreies Wasser für molekularbiologische Zwecke in einen kleinen, sauberen Behälter geben.
3. Den Abstrichtupfer in das nukleasefreie Wasser für molekularbiologische Zwecke eintauchen und anschließend in
langen Zügen über den ersten Bereich streichen.
4. Die Kappe von einem BD Onclarity HPV LBC Diluent-Röhrchen abnehmen und den Tupfer in das Verdünnungsmittel
geben. Den Abstrichtupfer zum Mischen 5 – 10 s lang im BD Onclarity HPV Diluent-Röhrchen schwenken.
5. Den Abstrichtupfer an der Röhrcheninnenwand ausdrücken, sodass sich die Flüssigkeit am Röhrchenboden sammelt.
6. Den Abstrichtupfer vorsichtig aus dem BD Onclarity HPV LBC Diluent-Röhrchen herausziehen, um Spritzer zu
vermeiden. Den Abstrichtupfer entsorgen.
7. Das BD Onclarity HPV LBC Diluent-Röhrchen mit der schwarzen durchbohrbaren Kappe wieder fest verschließen.
8. Für jeden gewünschten Bereich wiederholen.
9. Wenn alle Tupferproben genommen und in Verdünnungsmittel ausgepresst wurden, diese entsprechend des
Vorwärmverfahrens aufbereiten und anschließend das Testverfahren befolgen.
Weitere Informationen zur Überprüfung des Umfelds und zu den Reinigungsverfahren siehe das Benutzerhandbuch
zum BD Viper LT System. Lässt sich ein Kontaminierungsereignis nicht beseitigen, zusätzliche Informationen vom
technischen Kundendienst und Support von BD anfordern.
VERFAHRENSBESCHRÄNKUNGEN
1. Voraussetzung für eine optimale Testleistung ist die ordnungsgemäße Probenentnahme und -handhabung. Siehe
den Abschnitt „Probenentnahme und Transport“ in dieser Packungsbeilage.
2. Ein negatives Testergebnis schließt die Möglichkeit einer Infektion nicht aus, da die Testergebnisse durch
unsachgemäße Probenentnahme, technische Fehler, Probenverwechslung oder eine Anzahl von Mikroorganismen
in der Probe, die unterhalb der Nachweisgrenze des Tests liegt, beeinträchtigt werden können.
3.Der BD Onclarity HPV Assay liefert qualitative Ergebnisse.
4. Die Verwendung des BD Onclarity HPV Assay ist auf Personal beschränkt, das im Testverfahren geschult und mit
dem BD Viper LT System vertraut ist.
LEISTUNGSMERKMALE
An zwei geographisch unterschiedlichen Klinikstandorten in Europa wurden BD Onclarity HPV Cervical Brush-Proben,
BD SurePath-Proben und/oder PreservCyt-Proben von 836 dem Protokoll gemäß geeigneten Frauen entnommen, die
aufgrund abnormer Ergebnisse beim Pap-Test oder einer HPV-Infektion zur Folgeuntersuchung erschienen, sowie von
Frauen, die im Rahmen einer Routineuntersuchung in einer Klinik vorstellig wurden. Von jeder Studienteilnehmerin
wurden zwei Proben in der folgenden Reihenfolge entnommen: eine BD SurePath-Probe (Standort A) oder eine
38
PreservCyt-Probe (Standort B) und eine BD Onclarity HPV Cervical Brush-Probe (transportiert in einem BD Onclarity HPV
Cervical Brush Diluent-Röhrchen). Aus jedem entnommenen zytologischen Fläschchen wurden 0,5 mL in ein BD Onclarity
HPV LBC Diluent-Röhrchen aliquotiert. Zu den meisten Proben waren Zytologie, HPV-DNA-Ergebnisse (digene Hybrid
Capture 2 (hc2) High-Risk HPV DNA Test) und das Ergebnis des Roche LINEAR ARRAY HPV Genotyping Test (RLA)
verfügbar. Zu den meisten Probanden, die eine Hochrisiko-Klinik besuchten, waren Histologieergebnisse verfügbar.
An jedem Standort wurden außerdem Restproben (BD SurePath oder PreservCyt) mit zugehörigen Zytologieergebnissen,
HPV-DNA-Ergebnissen (digene Hybrid Capture 2 High-Risk HPV DNA Test), Ergebnissen des Roche LINEAR ARRAY HPV
Genotyping Test und, sofern verfügbar, Histologieergebnissen einbezogen. Von jeder einbezogenen Probe wurden
0,5 mL in ein BD Onclarity HPV LBC Diluent-Röhrchen aliquotiert. Es wurden 510 konforme retrospektive Proben
einbezogen, und zu 234 Frauen waren Histologieergebnisse verfügbar.
Alle Proben wurden mit dem BD Viper LT System gemäß den Angaben in der Packungsbeilage des Assays und dem
Benutzerhandbuch getestet. Für jeden Medientyp wurde die klinische Sensitivität und Spezifität beim Nachweis einer
Erkrankung berechnet, die definiert war als (1) Histologieergebnis zervikale intraepitheliale Neoplasie (CIN2) oder höher
oder (2) Histologieergebnis zervikale intraepitheliale Neoplasie (CIN3) oder höher. Die finale Datenanalyse umfasst
BD Onclarity HPV Assay-Ergebnisse von 472 BD SurePath-Proben, 361 PreservCyt-Proben und insgesamt 515 BD Onclarity
HPV Cervical Brush-Proben: 247 BD Onclarity HPV Cervical Brush-Proben (in BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent) für
Standort A und 268 BD Onclarity HPV Cervical Brush-Proben (in BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent) für Standort
B. Die Leistungseinschätzung für den Nachweis einer hochgradigen zervikalen Erkrankung durch den BD Onclarity
HPV-Assay und den hc2-Assay sind in den folgenden Tabellen dargestellt: Tabellen 4 und 5 für BD SurePath-Medien,
Tabellen 8 und 9 für PreservCyt-Medien und Tabellen 12 und 13 für die BD Onclarity HPV Cervical Brush-Proben.
Die Ergebnisse des BD Onclarity HPV Assay wurden außerdem mit den HPV-DNA-Ergebnissen des digene Hybrid
Capture 2 High-Risk HPV DNA Test und des Roche LINEAR ARRAY HPV Genotyping Test (zusammengesetzter
Vergleichstest) verglichen. Ein positives Ergebnis der beiden (Hochrisiko-)Assays hc2 und RLA ist als positives Ergebnis
des zusammengesetzten Vergleichstests definiert, ein negatives Ergebnis der beiden (Hochrisiko-)Assays hc2 und RLA
ist als negatives Ergebnis des zusammengesetzten Vergleichstests definiert. Wenn die Ergebnisse der beiden Assays
nicht übereinstimmen (oder nicht für beide Tests ein Ergebnis verfügbar war) ist das Ergebnis des zusammengesetzten
Vergleichstests als ungeklärt definiert. Für jeden Medientyp wurden die positive, die negative, und die gesamte
Übereinstimmung in Prozent mit dem zusammengesetzten Vergleichstest berechnet. Die finale Datenanalyse umfasst
die Ergebnisse des BD Onclarity HPV Assay und des zusammengesetzten Vergleichstests (unabhängig vom histologischen
Status) von 670 BD SurePath-Proben und 674 PreservCyt -Proben. (Tabellen 6 und 10)
Das absolute Risiko einer Erkrankung (CIN2+ oder CIN3+) bei der Studienpopulation zu jedem Medientyp wurde
mithilfe des BD Onclarity HPV Assay für jeden Genotyp oder jede Genotypgruppe berechnet. Es wurden die absoluten
Risiken berechnet, wenn der Genotyp (oder die Genotypgruppe) alleine und/oder in Gegenwart anderer Genotypen
vorliegt. Zu jedem Medientyp ist eine Tabelle mit dem absoluten Risiko abgebildet. Jedes Medium wurde nur an einem
Standort entnommen, daher kann erwartet werden, dass aufgrund der Populationsvariation Unterschiede bei den
Positivraten von HPV und Genotypen auftreten. (Tabellen 7 und 11)
Klinische Leistung mit BD SurePath-Proben
Tabelle 4: Leistung des BD Onclarity HPV Assay mit BD SurePath-Medien im Vergleich zu
Histologieergebnissen (CIN2+)
BD Onclarity HPV Assay
Schätzung
hc2 HPV DNA Test
95-%-Konfidenzintervall
Schätzung
95-%-Konfidenzintervall
Sensitivität
97,9 % (190/194)
(94,8 %, 99,2 %)
98,4 % (190/193)
(95,5 %, 99,5 %)
Spezifität
22,7 % (63/278)
(18,1 %, 27,9 %)
17,0 % (47/277)
(13,0 %, 21,8 %)
Tabelle 5: Leistung des BD Onclarity HPV Assay mit BD SurePath-Medien im Vergleich zu
Histologieergebnissen (CIN3+)
BD Onclarity HPV Assay
hc2 HPV DNA Test
Schätzung
95-%-Konfidenzintervall
Schätzung
95-%-Konfidenzintervall
Sensitivität
97,7 % (126/129)
(93,4 %, 99,2 %)
98,4 % (126/128)
(94,5 %, 99,6 %)
Spezifität
18,7 % (64/343)
(14,9 %, 23,1 %)
14,0 % (48/342)
(10,8 %, 18,1 %)
Tabelle 6: Leistung des BD Onclarity HPV Assay mit BD SurePath-Medien im Vergleich zum
zusammengesetzten Vergleichstest
Ergebnis des
zusammengesetzten
Vergleichstests
BD
Onclarity Positiv Negativ Ungeklärt* Gesamt
HPV Assay
Positiv
532
6
27
565
Negativ
8
50
47
105
Gesamt
540
56
74
670
PositivÜbereinstimmung
in Prozent
NegativÜbereinstimmung
Übereinstimmung in Prozent insgesamt
in Prozent
(95-%(95-%(95-%Konfidenzintervall) Konfidenzintervall) Konfidenzintervall)
98,5%
(97,1%, 99,2%)
89,3%
(78,5%, 95,0%)
97,7%
(96,1%, 98,6%)
*hc2- und RLA-Ergebnisse stimmen nicht überein oder es war nicht für beide Tests ein Ergebnis verfügbar.
39
Tabelle 7: Absolutes CIN2+- und CIN3+-Risiko bei BD Onclarity HPV Assay-Genotypen auf BD SurePathMedien
Infektion durch
einen oder mehrere
BD Onclarity
Genotypen
HPV AssayAbsolutes
95-%Genotyp
CIN2+KonfidenRisiko
zintervall
Infektion durch einen
Genotyp oder eine
Genotyp-Gruppe
Infektion durch
einen oder mehrere
Genotypen
Infektion durch einen
Genotyp oder eine
Genotyp-Gruppe
Absolutes
CIN2+Risiko
95-%Konfidenzintervall
Absolutes
CIN3+Risiko
95-%Konfidenzintervall
Absolutes
CIN2+Risiko
95-%Konfidenzintervall
HPV16
63,9 %
(99/155)
(56,1 %,
71,0 %)
64,9 %
(48/74)
(53,5 %,
74,8 %)
43,9 %
(68/155)
(36,3 %,
51,7 %)
47,3 %
(35/74)
(36,3 %,
58,5 %)
HPV18
50,0 %
(24/48)
(36,4 %,
63,6 %)
50,0 %
(7/14)
(26,8 %,
73,2 %)
43,8 %
(21/48)
(30,7 %,
57,7 %)
42,9 %
(6/14)
(21,4 %,
67,4 %)
HPV45
46,7 %
(21/45)
(32,9 %,
60,9 %)
23,5 %
(4/17)
(9,6 %,
47,3 %)
31,1 %
(14/45)
(19,5 %,
45,7 %)
17,6 %
(3/17)
(6,2 %,
41,0 %)
HPV33/58
49,4 %
(42/85)
(39,0 %,
59,8 %)
47,1 %
(16/34)
(31,5 %,
63,3 %)
31,8 %
(27/85)
(22,8 %,
42,3 %)
23,5 %
(8/34)
(12,4 %,
40,0 %)
HPV31
64,2 %
(52/81)
(53,3 %,
73,8 %)
72,7 %
(16/22)
(51,8 %,
86,8 %)
40,7 %
(33/81)
(30,7 %,
51,6 %)
50,0 %
(11/22)
(30,7 %,
69,3 %)
HPV56/59/66
25,5 %
(25/98)
(17,9 %,
35,0 %)
0,0 %
(0/29)
(0,0 %,
11,7 %)
13,3 %
(13/98)
(7,9 %,
21,4 %)
0,0 %
(0/29)
(0,0 %,
11,7 %)
HPV51
41,7 %
(15/36)
(27,1 %,
57,8 %)
25,0 %
(2/8)
(7,1 %,
59,1 %)
25,0 %
(9/36)
(13,8 %,
41,1 %)
12,5 %
(1/8)
(2,2 %,
47,1 %)
HPV52
35,1 %
(20/57)
(24,0 %,
48,1 %)
33,3 %
(4/12)
(13,8 %,
60,9 %)
19,3 %
(11/57)
(11,1 %,
31,3 %)
16,7 %
(2/12)
(4,7 %,
44,8 %)
HPV35/39/68
36,0 %
(27/75)
(26,1 %,
47,3 %)
33,3 %
(7/21)
(17,2 %,
54,6 %)
17,3 %
(13/75)
(10,4 %,
27,4 %)
19,0 %
(4/21)
(7,7 %,
40,0 %)
Klinische Leistung mit PreservCyt-Proben
Tabelle 8: Leistung des BD Onclarity HPV Assay mit PreservCyt-Medien im Vergleich zu
Histologieergebnissen (CIN2+)
BD Onclarity HPV Assay
hc2 HPV DNA Test
Schätzung
95-%-Konfidenzintervall
Schätzung
95-%-Konfidenzintervall
Sensitivität
94,7 % (160/169)
(90,2 %, 97,2 %)
97,0 % (160/165)
(93,1 %, 98,7 %)
Spezifität
50,5 % (97/192)
(43,5 %, 57,5 %)
40,8 % (75/184)
(33,9 %, 48,0 %)
Tabelle 9: Leistung des BD Onclarity HPV Assay mit PreservCyt-Medien im Vergleich zu
Histologieergebnissen (CIN3+)
BD Onclarity HPV Assay
hc2 HPV DNA Test
Schätzung
95-%-Konfidenzintervall
Schätzung
95-%-Konfidenzintervall
Sensitivität
94,4 % (85/90)
(87,6 %, 97,6 %)
97,7 % (85/87)
(92,0 %, 99,4 %)
Spezifität
37,3 % (101/271)
(31,7 %, 43,2 %)
29,8 % (78/262)
(24,6 %, 35,6 %)
Tabelle 10: Leistung des BD Onclarity HPV Assay mit PreservCyt-Medien im Vergleich zum
zusammengesetzten Vergleichstest
Ergebnis des
zusammengesetzten
Vergleichstests
BD
Onclarity
Positiv Negativ Ungeklärt* Gesamt
HPV
Assay
Positiv
246
5
18
269
Negativ
10
366
29
405
Gesamt
256
371
47
674
PositivÜbereinstimmung
in Prozent
NegativÜbereinstimmung
in Prozent
Übereinstimmung
in Prozent
insgesamt
(95-%(95-%(95-%Konfidenzintervall) Konfidenzintervall) Konfidenzintervall)
96,1 %
(93,0 %, 97,9 %)
98.7 %
(96,9 %, 99,4 %)
97,6 %
(96,1 %, 98,5 %)
* hc2- und RLA-Ergebnisse stimmen nicht überein oder es war nicht für beide Tests ein Ergebnis verfügbar.
40
Tabelle 11: Absolutes CIN2+- und CIN3+-Risiko bei BD Onclarity HPV Assay-Genotypen auf PreservCytMedien
BD
Onclarity
HPV AssayGenotyp
HPV 16
HPV 18
HPV 45
HPV 33/58
HPV 31
HPV
56/59/66
HPV 51
HPV 52
HPV
35/39/68
Infektion durch
einen oder mehrere
Genotypen
Infektion durch einen
Genotyp oder eine
Genotyp-Gruppe
Absolutes
CIN2+Risiko
95-%Konfidenzintervall
Absolutes
CIN2+Risiko
77.1 %
(84/109)
50,0 %
(12/24)
50,0 %
(6/12)
70,0 %
(28/40)
67,7 %
(42/62)
34,0 %
(18/53)
48,0 %
(12/25)
73,9 %
(17/23)
38,5 %
(10/26)
(68,3 %,
84,0 %)
(31,4 %,
68,6 %)
(25,4 %,
74,6 %)
(54,6 %,
81,9 %)
(55,4 %,
78,0 %)
(22,7 %,
47,4 %)
(30,0 %,
66,5 %)
(53,5 %,
87,5 %)
(22,4 %,
57,5 %)
81,4 %
(57/70)
45,5 %
(5/11)
25,0 %
(1/4)
75,0 %
(15/20)
71,0 %
(22/31)
11,1 %
(2/18)
27,3 %
(3/11)
85,7 %
(6/7)
40,0 %
(2/5)
Infektion durch
einen oder mehrere
Genotypen
95-%Absolutes
KonfidenCIN3+zintervall
Risiko
(70,8 %,
88,8 %)
(21,3 %,
72,0 %)
(4,6 %,
69,9 %)
(53,1 %,
88,8 %)
(53,4 %,
83,9 %)
(3,1 %,
32,8 %)
(9,7 %,
56,6 %)
(48,7 %,
97,4 %)
(11,8 %,
76,9 %)
44,0 %
(48/109)
29,2 %
(7/24)
16,7 %
(2/12)
35,0 %
(14/40)
30,6 %
(19/62)
9,4 %
(5/53)
16,0 %
(4/25)
26,1 %
(6/23)
15,4 %
(4/26)
Infektion durch einen
Genotyp oder eine
Genotyp-Gruppe
95-%Konfidenzintervall
Absolutes
CIN3+Risiko
95-%Konfidenzintervall
(35,1 %,
53,4 %)
(14,9 %,
49,2 %)
(4,7 %,
44,8 %)
(22,1 %,
50,5 %)
(20,6 %,
43,0 %)
(4,1 %,
20,3 %)
(6,4 %,
34,7 %)
(12,5 %,
46,5 %)
(6,1 %,
33,5 %)
50,0 %
(35/70)
18,2 %
(2/11)
0,0
(0/4)
50,0 %
(10/20)
41,9 %
(13/31)
0,0 %
(0/18)
18,2 %
(2/11)
42,9 %
(3/7)
20,0 %
(1/5)
(38,6 %,
61,4 %)
(5,1 %,
47,7 %)
(0,0 %,
49,0 %)
(29,9 %,
70,1 %)
(26,4 %,
59,2 %)
(0,0 %,
17,6 %)
(5,1 %,
47,7 %)
(15,8 %,
75,0 %)
(3,6 %,
62,4 %)
Klinische Leistung mit BD Onclarity HPV Cervical Brush-Proben
Tabelle 12: Leistung des BD Onclarity HPV Assay mit der BD Onclarity HPV Cervical Brush im Vergleich zu
Histologieergebnissen (CIN2+)
BD Onclarity HPV Assay
A
B
hc2 HPV DNA Test
Schätzung
95-%-Konfidenzintervall
Schätzung
95-%-Konfidenzintervall
Sensitivität
97,2 % (104/107)
(92,1 %, 99,0 %)
99,1 % (106/107)
(94,9 %, 99,8 %)
Spezifität
17,9 % (25/140)
(12,4 %, 25,0 %)
21,4 % (30/140)
(15,4 %, 28,9 %)
Sensitivität
100,0 % (121/121)
(96,9 %, 100,0 %)
97,5 % (116/119)
(92,8 %, 99,1 %)
Spezifität
37,4 % (55/147)
(30,0 %, 45,5 %)
43,0 % (61/142)
(35,1 %, 51,2 %)
Labor
Tabelle 13: Leistung des BD Onclarity HPV Assay mit der BD Onclarity HPV Cervical Brush im Vergleich zu
Histologieergebnissen (CIN3+)
BD Onclarity HPV Assay
Schätzung
95-%-Konfidenzintervall
Sensitivität
97,3 % (72/74)
Spezifität
15,0 % (26/173)
Sensitivität
Spezifität
Labor
A
B
hc2 HPV DNA Test
Schätzung
95-%-Konfidenzintervall
(90,7 %, 99,3 %)
98,6 % (73/74)
(92,7 %, 99,8 %)
(10,5 %, 21,1 %)
17,3 % (30/173)
(12,4 %, 23,7 %)
100,0 % (60/60)
(94,0 %, 100,0 %)
98,3 % (57/58)
(90,9 %, 99,7 %)
26,4 % (55/208)
(20,9 %, 32,8 %)
31,0 % (63/203)
(25,1 %, 37,7 %)
Analytische Studien
Analytische Sensitivität am klinischen Schwellenwert:
Die Nachweisgrenze (Limit of Detection, LOD) am klinischen Schwellenwert für HPV wurde für den BD Onclarity HPV
Assay mithilfe der folgenden HPV-positiven Zelllinien bestimmt: SiHa (HPV 16), HeLa (HPV 18) und MS751 (HPV 45)
sowie geklonter Plasmid-DNA mit den Sequenzen der folgenden HPV-Genotypen: HPV 31, 33, 35, 39, 51, 52, 56, 58, 59,
66 und 68 in BD SurePath Preservative Fluid, PreservCyt-Lösung und BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent mit einer
HPV-negativen Zelllinie (C33A). Die HPV-Zelllinien wurden einzeln getestet, während die HPV-Plasmide in drei Gruppen
aufgeteilt getestet wurden 1) HPV 31, 33, 51, 52 und 59, 2) HPV 56, 58, 68 und 3) HPV 35 und 66. Es wurde ein Minimum
von 45 Replikaten jeder der sechs Zielkonzentrationen für die HPV-Zelllinien sowie von 20 Replikaten jeder der sechs
Zielkonzentrationen für die HPV-Plasmide mit mindestens drei Reagenzienchargen und mindestens drei BD Viper LT
Systemen getestet. Die LOD ist die Konzentration von HPV-DNA in unverdünnten Proben, für die in mindestens 95 %
der Fälle positive Ergebnisse über dem klinischen Schwellenwert erzielt werden. Der maximale LOD-Wert für jeden
HPV-Genotyp und jedes Medium ist in Tabelle 14 dargestellt.
41
Tabelle 14: Analytische Sensitivität
Ziel
BD SurePath-Medien
(95-%-Konfidenzintervall)
PreservCyt-Medien
(95-%-Konfidenzintervall)
BD Onclarity HPV Cervical
Brush Diluent
(95-%-Konfidenzintervall)
SiHa (HPV 16) Zellen/mL
1584 (1276 – 1962)
1835 (1426 – 2358)
137 (131 – 144)
HeLa (HPV 18) Zellen/mL
915 (739 – 1131)
1786 (1175 – 2715)
51 (46 – 56)
MS751 (HPV 45) Zellen/mL
3793 (2944 – 4888)
5425 (4167 – 7066)
305 (284 – 343)
HPV 31 Kopien/mL
3652 (3159 – 3868)
4118 (3898 – 4228)
692 (650 – 817)
HPV 33 Kopien/mL
7326 (6578 – 8932)
8272 (7946 – 8743)
1376 (1272 – 1451)
HPV 35 Kopien/mL
6820 (6477 – 7282)
7282 (6895 – 7674)
1552 (1317 – 1780)
HPV 39 Kopien/mL
7894 (7115 – 8193)
8272 (7810 – 9398)
1531 (1419 – 1685)
HPV 51 Kopien/mL
6697 (5786 – 7097)
5909 (5553 – 6824)
1229 (1155 – 1353)
HPV 52 Kopien/mL
3582 (3414 – 4184)
4184 (3740 – 4761)
833 (744 – 934)
HPV 56 Kopien/mL
4976 (4140 – 5698)
4774 (4479 – 5997)
836 (737 – 911)
HPV 58 Kopien/mL
10094 (9403 – 11180)
11488 (8989 – 12360)
2990 (2656 – 7819)
HPV 59 Kopien/mL
4400 (4145 – 5069)
4374 (4105 – 5482)
772 (722 – 899)
HPV 66 Kopien/mL
3793 (3621 – 4030)
4462 (4008 – 4844)
701 (646 – 767)
HPV 68 Kopien/mL
10415 (9799 – 11642)
10481 (9816 – 12082)
2079 (1995 – 2125)
Kreuzreaktion:
Es wurde ein Testprofil aus Bakterien, Hefe und kultivierten Viren in Kombination mit geklonter Plasmid-DNA mit
Hochrisiko- und Niedrigrisiko-HPV-Zielsequenzen verwendet, um die analytische Spezifität des BD Onclarity HPV Assay
auf dem BD Viper LT System zu bewerten. Jede potenzielle Kreuzreaktion wurde einzeln in BD SurePath Preservative
Fluid und PreservCyt-Lösung mit einer HPV-negativen Zelllinie (C33A) getestet. Die Mikroorganismen sind in den
Tabellen 15 und 16 beschrieben. Der BD Onclarity HPV Assay zeigte bei keinem der getesteten Mikroorgansimen eine
Kreuzreaktion.
42
Tabelle 15: Bezüglich analytischer Spezifität getestete Mikroorganismen
Bakterien*
Viren**
Actinomyces israelii
Adenovirus Typ 5
Atopobium vaginae
EBV-1, B95-8-Stamm
Bacteroides fragilis
HCMV. AD169-Stamm
Bacteroides ureolyticus
HIV-1
Bifidobacterium adolescentis
HSV1
Bifidobacterium brevi
HSV2
Bifidobacterium longum ssp. longum
Hochrisiko-HPV***
Chlamydia trachomatis
HPV 16
Clostridium perfringens
HPV 18
Corynebacterium genitalium
HPV 31
Enterobacter cloacae ssp. cloacae
HPV 33
Enterococcus faecalis
HPV 35
Enterococcus faecium
HPV 39
Escherichia coli
HPV 45
Fusobacterium nucleatum ssp. nucleatum
HPV 51
Gardnerella vaginalis
HPV 52
Klebsiella pneumonia ssp. ozaenae
HPV 56
Lactobacillus acidophilus
HPV 58
Mycobacterium smegmatis
HPV 59
Mycoplasma genitalium
HPV 66
Neisseria gonorrhoeae
HPV 68
Peptostreptococcus anaerobius
Prevotella bivia
Prevotella disiens
Proteus mirabilis
Proteus vulgaris
Providencia stuartii
Pseudomonas aeruginosa
Staphylococcus aureus
Staphylococcus epidermidis
Streptococcus agalactiae
Streptococcus pyogenes
Ureaplasma urealyticum
Hefe/Protozoen****
Candida albicans
Trichomonas vaginalis
*Bakterien wurden bei ca. 1,0 x 107 KBE/mL getestet, mit folgenden Ausnahmen: Chlamydia trachomatis
(1,0 x 107 EB/mL), Mycobacterium smegmati (2,5 x 106 KBE/mL)und Ureaplasma urealyticum (8,0 x 106 KBE/mL).
**Viren wurden bei 1,0 x 106 VP/mL getestet.
***Hochrisiko-HPV-Plasmid-DNA wurde bei 1,0 x 106 Kopien/mL getestet.
**** Hefe (Candida albicans) wurde bei ca. 1,0 x 107 KBE/mL getestet; Protozoen (Trichomonas vaginalis) wurden bei
1,4 x 106 KBE/mL getestet.
Tabelle 16: Bezüglich analytischer Spezifität getestete Niedrigrisiko-HPV-Plasmide
HPV 6
HPV 69
HPV 11
HPV 70
HPV 26
HPV 73
HPV 30
HPV 82
HPV 34
HPV 97
HPV 53
HPV c85
HPV 67
*Niedrigrisiko -HPV-Plasmid-DNA wurde bei 1,0 x 106 Kopien/mL getestet.
43
Störsubstanzen:
Das Potential für Störungen des BD Onclarity HPV Assay auf dem BD Viper LT System wurde mithilfe exogener und
endogener Substanzen bestimmt, die in klinischen zervikalen Proben vorkommen können. Dazu wurden erstellte HPVnegative Proben und HPV-positive Proben (beimpft mit SiHa-, HeLa- und MS751-Zellen bei 3 x LOD) in Gegenwart oder
Abwesenheit jeder der potenziell störenden Substanzen getestet. Die in dieser Studie verwendeten Substanzen sind in
Tabelle 17 beschrieben. Die Konzentrationen geben den höchsten Wert an, bei dem die Substanzen keine Störung des
BD Onclarity HPV Assay verursachten.
Tabelle 17: Potenzielle Störsubstanzen
Potenzielle Störsubstanz
BD Onclarity HPV
Cervical Brush
Diluent
Getestete
Konzentration
BD SurePathMedien
PreservCyt-Medien
Getestete
Konzentration
Getestete
Konzentration
KY-Vaginalgleitgel
10 % (w/v)
6 % (w/v)
10 % (w/v)
VCF kontrazeptiver
Vaginalfilm
3 % (w/v)
10 % (w/v)
10 % (w/v)
VCF kontrazeptiver
Vaginalschaum
10 % (w/v)
10 % (w/v)
10 % (w/v)
Conceptrol kontrazeptives Gel
1 % (w/v)
10 % (w/v)
10 % (w/v)
Monistat 3*
2 % (w/v)
2 % (w/v)
1,8 % (w/v)
Clotrimazol 7
10 % (w/v)
10 % (w/v)
10 % (w/v)
Vagistat-1 Tioconazol
2 % (w/v)
2 % (w/v)
2 % (w/v)
Clindamycin-Vaginalcreme
9 % (w/v)
10 % (w/v)
10 % (w/v)
Summer’s Eve-Intimdusche
10 % (v/v)
10 % (v/v)
10 % (v/v)
Zovirax-(Acyclovir-)Creme
10 % (w/v)
8 % (w/v)
10 % (w/v)
Vandazole Gel
(Metronidazol-Vaginalgel,
0,75 %)
10 % (w/v)
10 % (w/v)
10 % (w/v)
Summer’s Eve-Deodorant
2% (w/v)
3% (w/v)
2 % (w/v)
Rinder-Mucin
10% (v/v)
10% (v/v)
10 % (v/v)
Progesteron
20 ng/mL
20 ng/mL
20 ng/mL
Estradiol
1,2 ng/mL
1,2 ng/mL
1,2 ng/mL
Vollblut
3 % (v/v)
5 % (v/v)
5 % (v/v)
Leukozyten
1x106
1x106
Zellen/mL
Zellen/mL
1x106 Zellen/mL
Sperma
10 % (v/v)
10 % (v/v)
10 % (v/v)
Essigsäure-Spülung**
5 % (v/v)
Blut + Essigsäure-Spülung
5 % Blut (v/v),
2,5 % Essigsäure-Spülung
(v/v)
*Höhere Konzentrationen als die angegebenen führten zu Flüssigkeitsstand-Fehlern während der Extraktion auf dem
BD Viper LT System.
**Essigsäure-Spülung besteht aus 1 Teil Eisessig: 9 Teilen CytoLyt-Lösung.
Störung durch konkurrierende Ziele:
Für den BD Onclarity HPV Assay wurde eine Bewertung des Potentials einer Inhibierung des HPV-Nachweises aufgrund
des Vorliegens eines Ziels in hoher Konzentration und eines anderen in niedriger Konzentration bei einer Mischinfektionen
durchgeführt. SiHa-, HeLa- und MS751-Zellen wurden einzeln oder gemeinsam bei 3 x LOD in Gegenwart oder
Abwesenheit eines oder mehrerer konkurrierender HPV-Ziele bei 1,0 x 106 Kopien/mL in BD SurePath Preservative Fluid,
PreservCyt-Lösung und BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent mit einer HPV-negativen Zelllinie (C33A) getestet
(Tabelle 18).
44
Tabelle 18: Störung durch konkurrierende Ziele
HPV-Assay-Röhrchentyp
Individuelle zelluläre
HPV-Ziele bei
3 x LOD
HPV-Plasmide bei
1 x 106 Kopien/mL
Nachweis der zellulären
HPV-Ziele in Gegenwart
oder Abwesenheit
konkurrierender
Genotypen (HPVPlasmide)
SiHa (HPV 16)
HPV 18 + HPV 45
Ja
G1-Genotypen mit
koamplifizierten G1-Zielen
HeLa (HPV 18)
HPV 16 + HPV 45
Ja
HPV 45 (MS751)
HPV 16 + HPV 18
Ja
G1-Genotypen mit
koamplifizierten G2-Zielen
SiHa + HeLa + MS751
HPV 31 + HPV 33 +
HPV 56 + HPV 58 +
HPV 59 + HPV 66
Ja
G1-Genotypen mit
koamplifizierten G3-Zielen
SiHa + HeLa + MS751
HPV 35 + HPV 39 +
HPV 51+ HPV 52 +
HPV 68
Ja
Reproduzierbarkeit:
Die Reproduzierbarkeit des BD Onclarity HPV Assay wurde im BD Viper LT-Gerät mithilfe eines Testpanels mit 4 Proben
bewertet, das sich aus negativen, stark negativen, schwach positiven und mäßig positiven Proben zusammensetzte.
Die positiven Proben des Testpanels setzten sich aus SiHa-, HeLa- und MS751-Zellen zusammen, mit denen Pools aus
HPV-negativen klinischen BD SurePath-Proben und BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent mit einer HPV-negativen
Zelllinie (C33A) beimpft wurden. Das Testpanel wurde über 12 Tage gleichmäßig auf 3 Reagenzienchargen und 3 Geräte
verteilt getestet. Die Daten sind in Tabelle 19 zusammengefasst.
45
Tabelle 19: Zusammenfassung der Reproduzierbarkeitsdaten für den BD Onclarity HPV Assay auf dem BD
Viper LT System
Zwischen
Läufen
Medien
Zelllinie
(Genotyp)
SurePath
SiHa
(HPV 16)
HeLa
(HPV 18)
MS-751
(HPV 45)
PanelStufe
Konzentration
Zellen/mL
Neg.
0
Stark
neg.
Schwach
pos.
Mäßig
pos.
1582
Neg.
0
Stark
neg.
Schwach
pos.
Mäßig
pos.
Cervical Brush Diluent
914
2742
0
3793
Stark
neg.
Schwach
pos.
395
11378
0
100 %
(216/216)
97,69 %
(211/216)
100 %
(216/216)
100 %
(216/216)
100 %
(216/216)
98,61 %
(213/216)
99,54 %
(215/216)
100 %
(216/216)
100 %
(216/216)
100 %
(216/216)
100 %
(216/216)
99,54 %
(215/216)
100 %
(214/214)
Gesamt
95-%Konfidenzintervall
Mittl.
CT
SD
%CV
SD
%CV
SD
%CV
(98,25 % – 100 %)
NZ
NZ
NZ
NZ
NZ
NZ
NZ
(94,7 % – 99,01 %)
35,28
0,16
0,46
0,54
1,52
0,57
1,62
(100 % – 98,25 %)
32,31
0,16
0,50
0,22
0,69
0,30
0,92
(100 % – 98,25 %)
31,07
0,22
0,69
0,22
0,71
0,35
1,11
(98,25 % – 100 %)
NZ
NZ
NZ
NZ
NZ
NZ
NZ
(96 % – 99,53 %)
35,89
0,24
0,68
0,75
2,09
0,85
2,37
(97,42 % – 99,92 %)
32,70
0,16
0,50
0,30
0,92
0,37
1,14
(100 % – 98,25 %)
30,68
0,13
0,43
0,22
0,72
0,30
0,98
(98,25 % – 100 %)
NZ
NZ
NZ
NZ
NZ
NZ
NZ
(98,25 % – 100 %)
35,77
0,00
0,00
0,52
1,45
0,55
1,53
(100 % – 98,25 %)
32,71
0,20
0,60
0,26
0,80
0,36
1,10
(97,42 % – 99,92 %)
31,33
0,18
0,57
0,35
1,10
0,41
1,31
(98,24 % – 100 %)
NZ
NZ
NZ
NZ
NZ
NZ
NZ
32
100 %
(218/218)
(98,27 % – 100 %)
36,29
0,09
0,25
0,59
1,63
0,62
1,71
205
94,91 %
(205/216)
(91,11 % – 97,13 %)
33,63
0,26
0,78
0,33
0,97
0,43
1,27
615
100 %
(216/216)
(98,25 % – 100 %)
31,80
0,16
0,51
0,18
0,56
0,25
0,79
0
100 %
(214/214)
(98,24 % – 100 %)
NZ
NZ
NZ
NZ
NZ
NZ
NZ
Stark
neg.
13
99,07 %
(214/216)
(96,69 % – 99,75 %)
35,69
0,10
0,29
0,78
2,18
0,80
2,23
Schwach
pos.s
76
99,08 %
(216/218)
(96,72 % – 99,75 %)
33,34
0,15
0,44
0,25
0,76
0,30
0,91
228
99,54 %
(215/216)
(97,42 % – 99,92 %)
32,07
0,24
0,73
0,25
0,78
0,37
1,16
Neg.
Mäßig
pos.
0
100 %
(214/214)
(98,24 % – 100 %)
NZ
NZ
NZ
NZ
NZ
NZ
NZ
Stark
neg.
59
100 %
(216/216)
(98,25 % – 100 %)
36,54
0,22
0,61
0,62
1,68
0,66
1,81
Schwach
pos.
457
99,54 %
(215/216)
(97,42 % – 99,92 %)
33,22
0,16
0,48
0,25
0,75
0,32
0,95
1371
100 %
(218/218)
(98,27 % – 100 %)
31,74
0,14
0,43
0,21
0,67
0,27
0,84
Neg.
MS-751
(HPV 45)
102
Neg.
Mäßig
pos.
HeLa
(HPV 18)
4746
Stark
neg.
Schwach
pos.
Mäßig
pos.
Neg.
SiHa
(HPV 16)
342
%
korrekt
Innerh.
Lauf
Mäßig
pos.
Kreuzkontamination:
Es wurde eine Studie zur Evaluierung des Risikos eines falsch positiven Ergebnisses im selben Testlauf (Kreuzkontamination
innerhalb von Läufen) oder in einem Folgedurchlauf (Verschleppungskontamination zwischen Läufen) des BD Viper LT
Systems durchgeführt. Über einen Zeitraum von fünf Tagen wurde auf drei Geräten jeweils ein Lauf pro Tag durchgeführt,
sodass insgesamt 675 Testreplikate einbezogen wurden. Jeder Lauf bestand aus Proben in BD SurePath Preservative Fluid
oder PreservCyt-Lösung, die eine HPV-negative Zelllinie (C33A) mit und ohne SiHa-Zellen, die bei 1,0 x 105 Zellen/
mL angeimpft wurden, enthielten. Diese Proben wurden abwechselnd in einem Schachbrettmuster angeordnet. Die
Kontaminationsrate betrug bei BD SurePath-Konservierungsflüssigkeit und PreservCyt-Lösung insgesamt 0,00 %.
Stabilität unverdünnter Proben (in der Flasche):
Es wurden analytische Studien durchgeführt, mit denen die Lagerbedingungen bezüglich der Stabilität unverdünnter
zervikaler Proben überprüft werden sollten. Dazu wurden Proben in BD SurePath Preservative Fluid-, PreservCyt-Lösungund BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent, die eine HPV-negative Zelllinie (C33A) enthielten, mit SiHa Zellen bei
3 x LOD angeimpft und über mehrere Zeitpunkte hinweg bei 2 – 8 °C, 30 °C und -20 °C gelagert. Zu jedem Zeitpunkt
wurden die Proben aus dem Lagerort entnommen und mit dem BD Onclarity HPV Assay auf dem BD Viper LT System
getestet. Es wurden für jede Bedingung (Probentyp/Temperatur/Lagerdauer) 24 Assay-Replikate generiert. Bei 2 – 30 °C
und bei -20 °C wurde eine Stabilität über 30 Tage erzielt.
Stabilität verdünnter Proben:
Es wurden analytische Studien durchgeführt, mit denen die Lagerbedingungen bezüglich der Stabilität verdünnter
zervikaler Proben überprüft werden sollten. Dazu wurden Proben in BD SurePath Preservative Fluid- und PreservCyt46
Lösung, die eine HPV-negative Zelllinie (C33A) enthielten, mit SiHa Zellen bei 3 x LOD angeimpft, mit BD HPV LBC
Diluent verdünnt und anschließend über mehrere Zeitpunkte hinweg bei 2 – 8 °C, 30 °C und -20 °C gelagert. Zu jedem
Zeitpunkt wurden die Proben aus dem Lagerort entnommen und mit dem BD Onclarity HPV Assay auf dem BD Viper
LT System getestet. Es wurden für jede Bedingung (Probentyp/Temperatur/Lagerdauer) 24 Assay-Replikate generiert.
Bei 2 – 30 °C wurde eine Stabilität über 15 Tage erzielt und bei -20 °C eine Stabilität über 30 Tage.
Stabilität von Proben nach dem Vorwärmen:
Es wurden analytische Studien durchgeführt, mit denen die Lagerbedingungen bezüglich der Stabilität zervikaler
Proben nach dem Vorwärmen überprüft werden sollten. Dazu wurden Proben in BD SurePath Preservative Fluid,
PreservCyt-Lösung und BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent, die eine HPV-negative Zelllinie (C33A) enthielten,
mit SiHa Zellen bei 3 x LOD angeimpft, mit BD Onclarity HPV LBC Diluent verdünnt und anschließend mit dem
BD Viper LT Pre-warm Heater vorgewärmt. Die so verarbeiteten Proben wurden über mehrere Zeitpunkte hinweg
bei 2 – 8 °C, 30 °C und -20 °C gelagert. Zu jedem Zeitpunkt wurden die Proben aus dem Lagerort entnommen und
mit dem BD Onclarity HPV Assay auf dem BD Viper LT System getestet. Es wurden für jede Bedingung (Probentyp/
Temperatur/Lagerdauer) 24 Assay-Replikate generiert. Bei 2 – 30 °C wurde eine Stabilität über 7 Tage erzielt und bei
-20 °C eine Stabilität über 30 Tage.
INTERPRETATION DER TABELLEN
Symbole und Abkürzungen
Symbole
(+) (-) #
%
Positiv
Negativ
Anzahl
Prozentsatz
Abkürzungen
ASCUS
Atypische Plattenepithelzellen unbestimmter Signifikanz
cfu
Koloniebildende Einheiten
CI Konfidenzintervall
CIN
Zervikale intraepitheliale Neoplasie
CV Variationskoeffizient
HPV Human Papillomavirus
HRHochrisiko
LBC
Flüssigkeitsbasierte Zytologie
n
Anzahl
NZ
Nicht zutreffend
NEGNegativ
NPA Negativ-Übereinstimmung in Prozent
PBS
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung
PCRPolymerase-Kettenreaktion
POSPositiv
PPA Positiv-Übereinstimmung in Prozent
QCQualitätskontrolle
SD Standardabweichung
LIEFERBARE PRODUKTE
Die folgenden BD Onclarity- und BD Viper-Produkte zur Verwendung mit dem BD Viper LT System sind ebenfalls erhältlich:
Best.- Nr.
442946 441993 442841 441992 441354 442840
441991 442957 443430 440476
441996 441995 442950 442967 442839 Beschreibung
BD Onclarity HPV Assay Reagent Pack, 192 Tests
Control Set for the BD Onclarity Onclarity HPV Assay, 24 positive und 24 negative Röhrchen
BD Viper PCR Extraction Reagent Trough with Piercing Tool, 12 Extraktionsreagenzbehälter
BD FOX PCR Extraction Tubes, 384 Röhrchen
BD Viper System Neutralization Pouch, 12 Beutel
BD Onclarity HPV Liquid Based Cytology Specimen (LBC) Diluent Tubes, 400
BD Onclarity HPV Assay Cervical Brush Collection Kit, 100
BD Viper LT System PCR Tube/Tray Kit
Key Card for the BD Viper LT System
BD ProbeTec Chlamydia trachomatis/Neisseria gonorrhoeae (CT/GC) Amplified DNA Assay Endocervical
Specimen Collection and DRY TRANSPORT Kit
BD Viper LT Pipette Tips, 3840
BD Viper LT Solid Waste Liners, 80
BD Pre-warm Heater
BD Viper LT System PCR Accessory kit
BD Viper LT System
LITERATUR: S. “References” im englischen Text.
47
 Onclarity HPV Assay
Italiano
USO PREVISTO
Il BD Onclarity HPV Assay (test HPV BD Onclarity) è un test per DNA amplificato per il rilevamento qualitativo di tipi
di HPV (Human Papillomavirus, papillomavirus umano) ad alto rischio. Il test rileva tutti i tipi di HPV a rischio elevato
(16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 e 68) e offre la possibilità di genotipizzazione di sei tipi ad alto rischio
(HPV 16, 18, 31, 45, 51 e 52). I campioni cervicali testati con il BD Onclarity HPV Assay includono BD Onclarity HPV
Cervical Brush Collection Kit (kit di raccolta spazzole cervicali per BD Onclarity HPV), BD SurePath Preservative Fluid
(liquido conservante BD SurePath) e PreservCyt Solution (soluzione PreservCyt), utilizzando un’aliquota che viene
rimossa prima o dopo il trattamento per il BD SurePath Pap test (Pap test BD SurePath) o ThinPrep Pap test (Pap test
ThinPrep). Il BD Onclarity HPV Assay viene eseguito con il sistema BD Viper LT.
SOMMARIO E SPIEGAZIONE
Il papillomavirus umano (HPV) è il virus a trasmissione sessuale più comune al mondo, con il 50% degli individui
sessualmente attivi affetti da HPV genitale nell’arco della loro vita. Le persone spesso non sono consapevoli di aver
contratto l’infezione e non prendono precauzioni al fine di prevenire la diffusione del virus ad altri soggetti. Esistono
oltre 40 tipi di HPV che possono interessare il tratto genitale.1 In molti casi, le infezioni da HPV sono transitorie e il corpo
elimina il virus da solo. In alcune situazioni, tuttavia, il virus è persistente e causa un’alterazione delle cellule normali
che diventano anomale fino a sviluppare il tumore. Questi tipi oncogeni di HPV sono classificati come ad alto rischio
e comprendono HPV 16 e 18. Altre tipologie sono considerate a basso rischio poiché non sembrano causare il tumore.
Secondo l’Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS), l’HPV è la seconda causa principale di mortalità correlata a
tumore nelle donne in tutto il mondo, con 250.000 decessi all’anno. Soltanto in Europa, la patologia colpisce 15.000
soggetti ogni anno.2 Si stima che quasi il 70% dei carcinomi cervicali sia causato dai tipi di HPV 16 e 18.3
Oggi, i Pap test rivelano al medico la presenza di variazioni delle cellule cervicali. Se tali cellule risultano anomale,
è possibile eseguire un test HPV per determinare se queste alterazioni cervicali siano dovute al ceppo di HPV che può
portare al carcinoma cervicale. Non tutti i test molecolari sono in grado di distinguere i diversi tipi di HPV.
Il BD Onclarity HPV Assay, quando eseguito con il sistema BD Viper LT, è un test per DNA amplificato per il rilevamento
qualitativo di tipi di papillomavirus umano (HPV) ad alto rischio. Il test rileva i tipi di HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51,
52, 56, 58, 59, 66 e 68 e consente di identificare contemporaneamente i tipi ad alto rischio 16, 18, 31, 45, 51, 52 e altri
genotipi ad alto rischio refertati per gruppo di genotipi (P1: 33/58; P2: 56/59/66; P3: 35/39/68). I campioni cervicali che
possono essere testati con il BD Onclarity HPV Assay includono BD SurePath Preservative Fluid (utilizzando un’aliquota
che viene rimossa prima o dopo il trattamento per il BD SurePath Pap test) e PreservCyt Solution (utilizzando un’aliquota
che viene rimossa prima o dopo il trattamento per il PreservCyt Pap test (Pap test PreservCyt)) e il BD Onclarity HPV
Cervical Brush Collection Kit.
PRINCIPI DELLA PROCEDURA
Il BD Onclarity HPV Assay è concepito per l’uso con BD SurePath Preservative Fluid (utilizzando un’aliquota che viene
rimossa prima o dopo il trattamento con il BD SurePath Pap test), PreservCyt Solution (utilizzando un’aliquota che
viene rimossa prima o dopo il trattamento con il PreservCyt Pap test) e il BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection
Kit, i reagenti applicabili, il sistema BD Viper LT e la tecnologia di estrazione BD FOX.
I campioni vengono sottoposti a una fase di pre-riscaldamento nel BD Pre-warm Heater (termoblocco di pre-riscaldamento
BD) per omogeneizzare la matrice, eseguire la lisi delle cellule e il rilascio del DNA il quale può essere estratto e
amplificato. Dopo il raffreddamento, i campioni vengono caricati sul sistema BD Viper LT che esegue tutte le fasi previste
per l’estrazione e l’amplificazione del DNA bersaglio, senza ulteriore intervento dell’utente. Il campione viene trasferito
in una provetta di estrazione che contiene particelle di ossido ferrico in una pellicola dissolvibile. Successivamente, viene
aggiunto acido per abbassare il pH e indurre una carica positiva sull’ossido ferrico, che a sua volta lega il DNA a carica
negativa. Le particelle e il DNA legato vengono quindi attratti verso i lati della provetta di estrazione da magneti e il
campione trattato viene aspirato nel materiale di scarto. Le particelle vengono lavate e viene aggiunto un tampone di
eluizione a pH elevato per eluire il DNA purificato. Infine, viene utilizzato un tampone di neutralizzazione per regolare il
pH dell’eluito alla condizione ottimale per l’amplificazione del DNA. Il BD Onclarity HPV Assay si basa sull’amplificazione
e la determinazione simultanee del DNA bersaglio mediante primer di amplificazione e sonde di rilevamento marcate
con un agente fluorescente utilizzando PCR (Polymerase Chain Reaction, reazione a catena della polimerasi) in tempo
reale. I reagenti vengono essiccati in tre provette (G1, G2 e G3) e sono in grado di rilevare i genotipi HPV 14 e un
controllo interno derivato dal campione costituito da un frammento di DNA del gene della beta-globina umana. Ogni
singola provetta contiene i primer di amplificazione, sonde di rilevamento marcate con un agente fluorescente, DNA
polimerasi, nucleotidi e altri reagenti necessari per l’amplificazione per i rispettivi test. Il sistema BD Viper LT pipetta
una parte della soluzione di DNA purificata da ogni provetta di estrazione in tre provette BD Onclarity HPV PCR (G1,
G2 e G3) che vengono successivamente sigillate per evitare la contaminazione. La presenza o l’assenza di DNA HPV
è determinata dal ciclo PCR in cui il segnale supera una soglia prestabilita. Inoltre, il test estrae, amplifica e rileva un
frammento del gene della beta-globina umana come un controllo interno per valutare il trattamento, l’estrazione e
l’amplificazione del campione.
REAGENTI E MATERIALI FORNITI:
Ciascun BD Onclarity HPV Assay Reagent Pack (confezione di reagenti per BD Onclarity HPV Assay) contiene:
Provette BD Onclarity HPV G1 PCR, 2 x 96: ogni provetta PCR G1 contiene circa 32,5 pmol di oligonucleotidi, sonde
di rilevamento marcate con un agente fluorescente da 20 pmol, 80 nmol di dNTP e 0,52 unità di DNA polimerasi con
stabilizzanti e tamponi.
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Provette BD Onclarity HPV G2 PCR, 2 x 96: ogni provetta PCR G2 contiene circa 42,5 pmol di oligonucleotidi, sonde
di rilevamento marcate con un agente fluorescente da 30 pmol, 80 nmol di dNTP e 0,52 unità di DNA polimerasi con
stabilizzanti e tamponi.
Provette BD Onclarity HPV G3 PCR, 2 x 96: ogni provetta PCR G3 contiene circa 42,5 pmol di oligonucleotidi, sonde
di rilevamento marcate con un agente fluorescente da 25 pmol, 80 nmol di dNTP e 0,52 unità di DNA polimerasi con
stabilizzanti e tamponi.
N.B. Ciascuna busta contiene un sacchetto di essiccante.
Control Set for the BD Onclarity HPV Assay (set di controlli per BD Onclarity HPV Assay): 24 provette per il controllo
positivo BD Onclarity HPV contenenti circa 14.430 copie di plasmide HPV 16 linearizzato, 8.325 copie di plasmide HPV
18 linearizzato, 8.418 copie di plasmide HPV 56 linearizzato e 3.885 copie di plasmide contenente una sequenza di
geni della beta-globina umana nell’acido nucleico carrier e 24 provette per il controllo negativo BD Onclarity HPV
contenenti solo acido nucleico carrier. Le concentrazioni dell’acido nucleico carrier e dei plasmidi sono determinate
mediante spettrofotometro.
BD Onclarity HPV Liquid Based Cytology Specimen (LBC) Diluent Tube (provette di diluente per campioni citologici in
fase liquida (LBC) BD Onclarity HPV): 400 provette, ciascuna contenente circa 1,7 mL di tampone con sale, detergente
e conservante.
BD FOX PCR Extraction Tube (provette di estrazione PCR BD FOX): 48 strisce di 8 provette, ciascuna contenente circa
10 mg di ossido di ferro in una pellicola dissolvibile
BD Viper PCR Extraction Reagent Trough with Piercing Tool (contenitore di reagente di estrazione PCR BD Viper con
strumento di perforazione): ciascun contenitore di reagente di estrazione a 5 cavità contiene circa 16,5 mL di acido
legante, 72,5 mL di tampone di lavaggio, 25,4 mL di tampone di eluizione, 19,4 mL di tampone di neutralizzazione con
conservante e 15,5 mL di soluzione di neutralizzazione rifiuti.
STRUMENTO, ATTREZZATURA E MATERIALI D’USO E CONSUMO
Materiali forniti – BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit, strumento BD Viper LT, BD Viper LT Instrument Plate,
BD Viper LT Pipette Tip, BD Viper LT Solid Waste Liner, BD Viper LT System PCR Tube/Tray Kit, BD Viper LT System PCR
Accessory Kit, BD Viper Pre-warm Heater, BD Viper LT Specimen Rack, BD Viper Neutralization Pouch, provette di campioni
e tappi da utilizzare con il sistema BD Viper (modalità di estrazione), BD ProbeTec Chlamydia trachomatis/Neisseria
gonorrhoeae (CT/GC) Amplified DNA Assay Endocervical Specimen Collection and DRY TRANSPORT Kit.
Materiali necessari ma non forniti – Guanti in nitrile, pipette di spostamento, puntali anti-aerosol in polipropilene in
grado di dispensare 0,5 ± 0,05 mL, vortex, ipoclorito di sodio allo 0,5% (v/v), ipoclorito di sodio all’1% (v/v), perossido
d’idrogeno al 3% (p/v), alcool isopropilico, acqua priva di nucleasi per biologia molecolare.
Requisiti di preparazione e conservazione – Il BD Onclarity HPV LBC Diluent (diluente LBC per BD Onclarity HPV) e il
BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent (diluente per spazzole cervicali BD Onclarity HPV) devono essere conservati
a 2 – 25 °C. Tutti gli altri reagenti possono essere conservati a 2 – 33 °C. Le confezioni di reagenti ancora sigillate
sono stabili fino alla loro data di scadenza. Una volta aperta la busta, le provette PCR sono stabili per 4 settimane, se
opportunamente sigillate, o fino alla data di scadenza, a seconda di quale delle due condizioni si verifica prima. Non
congelare.
AVVERTENZE E PRECAUZIONI
1. Per uso diagnostico in vitro.
2. I campioni clinici possono contenere microrganismi patogeni, inclusi i virus dell’epatite e dell’immunodeficienza
umana. Manipolare tutti i materiali e gli articoli contaminati con sangue e altri fluidi biologici in conformità alle
norme dell’istituto e alle “Precauzioni standard”4-7. Per ulteriori avvertenze, precauzioni e note specifiche relative
al sistema BD Viper LT, consultare il relativo Manuale d’uso del sistema BD Viper LT.
Campione:
3. Per i campioni di citologia in fase liquida, utilizzare solo le provette di diluente BD Onclarity HPV LBC.
4. Per i campioni ottenuti con spazzola cervicale, utilizzare solo il BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit.
5. Per ottenere prestazioni ottimali, il BD Onclarity HPV Assay richiede una tecnica corretta di raccolta, manipolazione
e trasporto dei campioni.
6. Per ridurre sanguinamenti inutili, non ruotare eccessivamente la spazzola cervicale durante la raccolta del campione.
7. Ciascun campione inviato al laboratorio deve essere correttamente etichettato.
8. Durante la rottura dell’asta della spazzola cervicale, evitare accuratamente di spargere, versare o formare aerosol.
Evitare la contaminazione della testina della spazzola cervicale.
9. Evitare accuratamente la contaminazione crociata durante le fasi di trattamento del campione. Assicurarsi
che i contenitori dei campioni non entrino a contatto tra loro e gettare i materiali usati senza passare sopra i
contenitori aperti. Se i guanti vengono a contatto con i campioni, cambiarli per evitare la contaminazione crociata.
10. Un riempimento insufficiente o eccessivo con il campione LBC della provetta di diluente BD Onclarity HPV LBC
può compromettere i risultati del test. Un riempimento eccessivo delle provette potrebbe determinare anche una
fuoriuscita di liquidi nel caricatore BD Viper LT causando la contaminazione.
11. I campioni cervicali devono essere raccolti e testati prima della data di scadenza della provetta di diluente
BD Onclarity HPV LBC o della provetta di BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent.
12. Usare solo puntali per pipette anti-aerosol in polipropilene per trasferire i campioni nelle provette di diluente
BD Onclarity HPV LBC.
Test/Reagente:
13. I controlli positivi e negativi per BD Onclarity HPV devono essere pre-riscaldati entro 24 ore dall’idratazione.
14. Sul sistema BD Viper LT utilizzare solo provette di campioni e di controlli con tappi perforabili. Non rimuovere i
tappi perforabili prima dell’utilizzo dello strumento. Accertarsi di sostituire i tappi forati con nuovi tappi perforabili
prima dell’utilizzo dello strumento.
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15. Non scambiare o mescolare i reagenti provenienti da kit con numeri di lotto diversi.
16. Non analizzare la provetta di BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent, se è pervenuta al laboratorio senza la
spazzola, in quanto il test potrebbe dar luogo ad un risultato falso negativo.
17. Con il sistema BD Viper LT utilizzare solo puntali per pipette BD Viper LT forniti da BD.
18. BD Viper PCR Extraction Reagent Trough with Piercing Tool:
PERICOLO
H314 Provoca gravi ustioni e gravi lesioni oculari. H302 Nocivo se ingerito.
P260 Non respirare la polvere/i fumi/i gas/la nebbia/i vapori/gli aerosol. P280 Indossare guanti/indumenti
protettivi/Proteggere gli occhi/il viso. P303/361/353 IN CASO DI CONTATTO CON LA PELLE (o con i capelli): togliersi
di dosso immediatamente tutti gli indumenti contaminati. Sciacquare la pelle/fare una doccia. P304/340 IN CASO
DI INALAZIONE: trasportare l’infortunato all’aria aperta e mantenerlo a riposo in una posizione che favorisca
la respirazione. P405 Conservare sotto chiave. P501 Smaltire il prodotto/recipiente in conformità alle normative
locali/regionali/nazionali/internazionali.
19. Sulle provette PCR con il sistema BD Viper LT utilizzare solo i BD Viper LT Clear Plate Sealer (sigillanti trasparenti
per piastre BD Viper LT).
20. Una volta aperte, le buste di reagenti che contengono provette PCR non usate DEVONO essere richiuse con
attenzione. Prima di richiudere le buste dei reagenti, assicurarsi che contengano l’essiccante.
21. Prima di rimuovere la piastra dal sistema BD Viper LT, le provette PCR DEVONO essere opportunamente sigillate
con i BD Viper LT Clear Plate Sealer. La chiusura a tenuta garantisce una reazione chiusa per l’amplificazione e la
determinazione e si rende necessaria per evitare la contaminazione dello strumento e dell’area di lavoro da parte
dei prodotti dell’amplificazione. Non rimuovere mai il materiale sigillante dalle provette PCR.
22. Per evitare di contaminare l’ambiente di lavoro con i prodotti dell’amplificazione, usare le buste per rifiuti incluse
nel BD Viper LT PCR Accessory Kit (kit di accessori PCR per sistema BD Viper LT) per smaltire le provette PCR già
sottoposte a test. Prima dello smaltimento, assicurarsi che le buste siano ben chiuse.
23. Sebbene non siano richiesti ambienti di lavoro dedicati in quanto la configurazione del BD Viper LT riduce la
possibilità di contaminazioni da amplicon nell’area di analisi, è comunque necessario prendere ulteriori precauzioni
per evitare qualsiasi contaminazione, in particolare quella dei campioni durante la manipolazione.
24. CAMBIARE I GUANTI se sono venuti a contatto con i campioni o se appaiono bagnati, per evitare la contaminazione
di altri campioni. Cambiare i guanti prima di lasciare l’area di lavoro e al momento di entrarvi.
25. In caso di contaminazione, fare riferimento al Manuale d’uso del sistema BD Viper LT per istruzioni relative alla
pulizia.
26. Qualora si verifichino situazioni insolite, come un versamento nello strumento BD Viper LT o una contaminazione
da DNA impossibile da eliminare con i detergenti, contattare il rappresentante BD di zona.
RACCOLTA E TRASPORTO DEI CAMPIONI
I campioni cervicali che possono essere testati con il BD Onclarity HPV Assay includono BD Onclarity HPV Cervical Brush
Collection Kit, BD SurePath Preservative Fluid (utilizzando un’aliquota che viene rimossa prima o dopo il trattamento con
il BD SurePath Pap test) e PreservCyt Solution (utilizzando un’aliquota che viene rimossa prima o dopo il trattamento con
il ThinPrep Pap test).
Per le spedizioni nazionali (USA) ed internazionali, i campioni devono essere etichettati in conformità alle norme
regionali, nazionali e internazionali relative al trasporto di campioni clinici e agenti eziologici/sostanze infettive. Durante
il trasporto occorre rispettare le temperature di conservazione e i tempi stabiliti.
RACCOLTA DI CAMPIONI SU SPAZZOLA CERVICALE
1. Inserire la BD Onclarity HPV Cervical Brush (spazzola cervicale per BD Onclarity HPV) nell’endocervice in modo
che solo le setole nella parte più bassa siano esposte nel canale. Ruotare lentamente di ¼ – ½ di giro in una sola
direzione. Per ridurre sanguinamenti inutili, non ruotare eccessivamente la spazzola.
2. Rimuovere il tappo dalla provetta di BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent e posizionare immediatamente la
spazzola sul fondo della provetta.
3. Spezzare con attenzione l’asta in corrispondenza della linea indicata. Evitare di schizzare il contenuto.
4. Richiudere saldamente la provetta.
CONSERVAZIONE E TRASPORTO DEI CAMPIONI SU SPAZZOLA CERVICALE
I campioni su spazzola cervicale nelle provette di BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent devono essere conservati e
trasportati al laboratorio e/o al centro di analisi entro 30 giorni dalla raccolta se conservati a 2 – 30 °C o entro 30 giorni
dalla raccolta se conservati congelati a -20 °C. I campioni non devono essere conservati e trasportati oltre la data di
scadenza della provetta di diluente per spazzola cervicale.
RACCOLTA DEI CAMPIONI LBC
I campioni BD SurePath o PreservCyt devono essere raccolti utilizzando spazzolini endocervicali o una combinazione
spazzola/spatola (vedere gli inserti allegati ai prodotti BD SurePath o PreservCyt). Una volta raccolti, i campioni BD SurePath
o PreservCyt possono essere conservati e trasportati nei flaconi originali fino a 30 giorni a 2 – 30 °C o fino a 30 giorni
se conservati congelati a -20 °C prima di trasferirli nelle provette di diluente per campioni BD Onclarity HPV LBC.
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CONSERVAZIONE E TRASPORTO DEI CAMPIONI LBC
Trasferimento dei campioni LBC nelle provette di diluente BD Onclarity HPV LBC – Prima o dopo la
rimozione di un’aliquota per il trattamento per il test BD SurePath o ThinPrep.
Un’aliquota di 0,5 mL di campione BD SurePath o PreservCyt viene trasferita manualmente dal flacone originale
nella provetta di diluente per campioni BD Onclarity HPV LBC prima o dopo il trattamento per il BD SurePath Pap
test o ThinPrep Pap test. Indossare guanti per maneggiare la provetta di diluente per campioni BD Onclarity HPV
LBC e il flacone del campione BD SurePath o PreservCyt. Se i guanti vengono a contatto con i campioni, cambiarli
immediatamente per impedire la contaminazione di altri campioni.
Trasferimento dei campioni BD SurePath prima o dopo il trattamento per il test BD SurePath
N.B. Fare riferimento al foglietto illustrativo di BD PrepStain Slide Processor o BD Totalys SlidePrep per istruzioni su come
rimuovere un’aliquota dal flacone del campione BD SurePath prima di eseguire il Pap test in fase liquida BD SurePath.
N.B. Maneggiare un campione alla volta per il trattamento.
1. Etichettare una provetta di diluente BD Onclarity HPV LBC con i dati identificativi del paziente.
2. Rimuovere il tappo dalla provetta di diluente BD Onclarity HPV LBC.
3. Per garantire una miscela omogenea, agitare con vortex il flacone del campione BD SurePath per 10 – 20 secondi.
4. Usando un puntale anti-aerosol, trasferire velocemente (entro un minuto dalla miscelazione con vortex) 0,5 mL dal
flacone del campione alla provetta di diluente BD Onclarity HPV LBC.
5. Eliminare il puntale della pipetta.
N.B. Usare un puntale della pipetta diverso per ogni campione.
6. Avvitare bene il tappo sulla provetta di diluente BD Onclarity HPV LBC.
7. Capovolgere la provetta di diluente BD Onclarity HPV LBC 3 – 4 volte per assicurarsi che il campione e il diluente
siano mescolati accuratamente.
Trasferimento dei campioni PreservCyt prima o dopo il trattamento per il ThinPrep Pap test
N.B. Fare riferimento all’addendum del Manuale d’uso del sistema ThinPrep 2000/3000 per istruzioni su come
rimuovere un’aliquota dal flacone del campione PreservCyt prima di eseguire il test ThinPrep.
N.B. Maneggiare un campione alla volta per il trattamento.
1. Etichettare una provetta di diluente BD Onclarity HPV LBC con i dati identificativi del paziente.
2. Rimuovere il tappo dalla provetta di diluente BD Onclarity HPV LBC.
3. Per garantire una miscela omogenea, agitare con vortex il flacone del campione PreservCyt a velocità elevata per
8 – 12 secondi.
4. Usando un puntale anti-aerosol, trasferire immediatamente 0,5 mL dal flacone del campione alla provetta di
diluente BD Onclarity HPV LBC.
5. Eliminare il puntale della pipetta.
N.B. Usare un puntale della pipetta diverso per ogni campione.
6. Avvitare bene il tappo sulla provetta di diluente BD Onclarity HPV LBC.
7. Capovolgere la provetta di diluente BD Onclarity HPV LBC 3 – 4 volte per assicurarsi che il campione e il diluente
siano mescolati accuratamente.
Conservazione e trasporto dei campioni trasferiti nelle provette di diluente BD HPV LBC
Dopo il trasferimento manuale in una provetta di diluente BD Onclarity HPV LBC, il campione diluito può essere
conservato fino a 15 giorni a 2 – 30 °C o fino a 30 giorni se conservato a -20 °C.
PROCEDURA DI TRATTAMENTO PER TUTTI I CAMPIONI
N.B. In caso di campioni congelati, assicurarsi che siano scongelati completamente a temperatura ambiente e mescolarli
capovolgendoli prima di procedere.
1. Utilizzando il Tube Layout Report (Report della disposizione delle provette), posizionare i campioni nell’ordine
stabilito nel BD Viper LT Specimen Rack (rack per campioni BD Viper LT) e bloccarli in sede.
2. I campioni sono pronti per essere pre-riscaldati.
3. Cambiare i guanti prima di continuare per evitare contaminazioni.
PREPARAZIONE DEL CONTROLLO DI QUALITÀ
1. Rimuovere il tappo di un controllo negativo per BD Onclarity HPV e di una provetta di diluente BD Onclarity HPV LBC.
2. Versare l’intero contenuto della provetta di diluente BD Onclarity HPV LBC nel controllo negativo per BD Onclarity HPV.
3. Riapplicare il tappo sul controllo negativo per BD Onclarity HPV reidratato. Riapplicare il tappo e smaltire la
provetta di diluente BD Onclarity HPV LBC vuota.
4. Rimuovere il tappo di un controllo positivo per BD Onclarity HPV e di una provetta di diluente BD Onclarity HPV LBC.
5. Versare l’intero contenuto della provetta di diluente BD Onclarity HPV LBC nel controllo positivo per BD Onclarity HPV.
6. Riapplicare il tappo sul controllo positivo per BD Onclarity HPV reidratato. Riapplicare il tappo e smaltire la provetta
di diluente BD Onclarity HPV LBC vuota.
7. Utilizzando il Tube Layout Report (Report della disposizione delle provette), disporre il controllo negativo per
BD Onclarity HPV reidratato nella posizione appropriata nel BD Viper LT Specimen Rack.
8. Utilizzando il Tube Layout Report (Report della disposizione delle provette), disporre il controllo positivo per
BD Onclarity HPV reidratato nella posizione appropriata nel BD Viper LT Specimen Rack.
9. I controlli sono pronti per essere pre-riscaldati con i campioni.
N.B. I controlli devono essere pre-riscaldati entro 24 ore dall’idratazione.
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PROCEDURA DI PRE-RISCALDAMENTO
N.B. La procedura di pre-riscaldamento deve essere applicata a tutti i campioni per garantire che la matrice del campione
sia omogenea prima del caricamento sul sistema BD Viper LT. Il mancato pre-riscaldamento dei campioni potrebbe avere
un effetto negativo sui risultati del BD Onclarity HPV Assay e/o sul sistema BD Viper LT.
N.B. I campioni refrigerati o congelati devono essere scongelati completamente a temperatura ambiente prima del
pre-riscaldamento.
1. Inserire il BD Viper LT Specimen Rack nel BD Pre-warm Heater e selezionare il protocollo di pre-riscaldamento per il
BD Onclarity HPV Assay sullo strumento BD Viper LT.
2.Il BD Pre-warm Heater pre-riscalda automaticamente i campioni e i controlli in base al protocollo di pre-riscaldamento
per il BD Onclarity HPV Assay.
3. Al termine del protocollo di pre-riscaldamento per il BD Onclarity HPV Assay, rimuovere il rack dal termoblocco e
caricarlo nello strumento BD Viper LT.
4. Per l’analisi di campioni e controlli, fare riferimento alla sezione Procedura del test.
5. Dopo il pre-riscaldamento, i campioni possono essere conservati fino a 7 giorni a 2 – 30 °C o fino a 30 giorni a -20 °C
senza ulteriore pre-riscaldamento prima di eseguire il test sul sistema BD Viper LT.
6. Dopo il pre-riscaldamento, i controlli possono essere conservati fino a 24 h a 2 – 30 °C senza ulteriore pre-riscaldamento
prima di eseguire il test sul sistema BD Viper LT.
PROCEDURA DEL TEST
Per le istruzioni specifiche relative al funzionamento e alla manutenzione dei componenti del sistema, fare riferimento
al Manuale d’uso del sistema BD Viper LT. È stato riscontrato che temperature di 18 – 27 °C con umidità relativa del
20 – 85% costituiscono condizioni ambientali ottimali per il dosaggio HPV.
CONTROLLO DI QUALITÀ
Le procedure per il controllo di qualità devono essere effettuate in conformità con le norme vigenti e/o i requisiti di
accreditamento e la prassi di controllo di qualità del laboratorio specifico. Fare riferimento alle linee guida CLSI e alle
norme CLIA in materia per una corretta esecuzione delle procedure relative al controllo di qualità.
Il Control Set for the BD Onclarity HPV Assay viene fornito separatamente. Includere un controllo positivo e un
controllo negativo in ogni ciclo di test e in ogni kit di reagenti con un nuovo numero di lotto. Posizionare i controlli
secondo il Manuale d’uso del sistema BD Viper LT. Il controllo positivo per HPV monitora esclusivamente l’inefficacia
dei reagenti. Il controllo negativo per HPV monitora la contaminazione del reagente e/o dell’ambiente. Ulteriori test
di controllo possono essere eseguiti in conformità alle linee guida o ai requisiti delle normative vigenti o degli enti di
accreditamento.
Informazioni generali su CQ per il sistema BD Viper LT:
La posizione delle provette PCR è indicata in una schermata della disposizione delle piastre con codifica a colori sul
monitor LCD. Il simbolo più (+) all’interno della provetta indica il campione CQ positivo. Il simbolo meno (-) all’interno
della provetta indica il campione CQ negativo. È necessario registrare una coppia CQ per ogni numero di lotto del kit
di reagenti. Se le coppie CQ non sono state registrate correttamente, viene visualizzata una finestra di messaggio che
impedisce di salvare il rack e di procedere con l’esecuzione fino al completamento. È possibile registrare provette CQ
aggiuntive (opzionali). Tali provette vengono testate come campioni normali e non influiscono sullo stato valido/non
valido dell’esecuzione. Per istruzioni, fare riferimento al Manuale d’uso del sistema BD Viper LT.
N.B. I BD Onclarity HPV Control (controlli per BD Onclarity HPV) devono essere idratati manualmente prima di caricarli
nel BD Viper LT Specimen Rack.
Interpretazione dei risultati del controllo di qualità:
Per la validità dei risultati dei campioni prelevati dai pazienti, l’analisi del controllo negativo per BD Onclarity HPV
e del controllo positivo per BD Onclarity HPV deve risultare rispettivamente positiva e negativa. In caso contrario,
l’esecuzione non viene considerata valida e lo strumento non include i risultati nel referto del paziente. Se uno dei
controlli non fornisce i risultati attesi, ripetere l’intera esecuzione usando un nuovo set di controlli, nuove provette per
estrazione, un nuovo contenitore per reagenti di estrazione e nuove provette PCR. Se il problema persiste, contattare
il rappresentante BD di zona per ulteriori informazioni.
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Tabella 1: Interpretazione dei risultati del controllo di qualità
Tipo di controllo
Simbolo in Tube Result Report
(Report dei risultati della provetta)
Controllo positivo per BD Onclarity HPV
OK
Disposizione CQ
CQ superato
Controllo positivo per BD Onclarity HPV
CQ non superato
Controllo positivo per BD Onclarity HPV
CQ non superato
Controllo positivo per BD Onclarity HPV
CQ non superato
Controllo negativo per BD Onclarity HPV
OK
CQ superato
Controllo negativo per BD Onclarity HPV
CQ non superato
Controllo negativo per BD Onclarity HPV
CQ non superato
Controllo negativo per BD Onclarity HPV
CQ non superato
Fare riferimento alla sezione Interpretazioni dei risultati del test per una descrizione dei simboli presenti nel Tube
Result Report (Report dei risultati della provetta).
INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI DEL TEST
Il BD Onclarity HPV Assay utilizza la reazione a catena della polimerasi in tempo reale per rilevare la presenza del
papillomavirus umano (HPV) nei campioni clinici. Tutti i calcoli vengono eseguiti automaticamente dal software BD Viper
LT. La presenza o l’assenza di DNA HPV clinicamente rilevante è determinata dal ciclo PCR (CT) in cui il segnale supera
una soglia prestabilita. Il test estrae, amplifica e rileva un frammento del gene della beta-globina umana come un
controllo interno per valutare il trattamento, l’estrazione e l’amplificazione del campione e indicare la presenza degli
inibitori PCR. Se il segnale specifico per HPV è superiore alla soglia di un ciclo, il controllo interno viene utilizzato
dall’algoritmo nell’interpretazione del risultato. Se il segnale specifico per HPV è inferiore o uguale alla soglia di un
ciclo, il controllo interno viene ignorato dall’algoritmo.
Per i campioni HPV, un risultato “HR” (High Risk, alto rischio) (la combinazione di tutti i genotipi) viene visualizzato
nel Tube Results Report (Report dei risultati della provetta). Un simbolo positivo in questa colonna indica che uno o
più genotipi rilevabili dal test HPV presentano un risultato positivo. La colonna “GT” viene utilizzata per refertare i
risultati per i genotipi non disponibili nel paese. Questi risultati non possono essere acquistati.
Genotipi specifici e genotipi combinati vengono mostrati nelle colonne. Se i risultati per un genotipo sono stati acquistati
vengono refertati come spiegato di seguito. Se i risultati dei genotipi non sono stati configurati per l’acquisto automatico
vengono nascosti dall’icona a forma di “chiave”.
Lo strumento può essere configurato in modo da acquistare/refertare genotipi specifici al termine dell’esecuzione. Per
istruzioni sull’autorizzazione della refertazione automatica dei genotipi, vedere il Manuale d’uso del sistema BD Viper LT.
Se i risultati dei controlli del test sono diversi da quelli attesi, i risultati dei pazienti non vengono refertati. Per i valori
di controllo attesi, vedere la sezione Controllo di qualità. I risultati inclusi nel referto vengono determinati nel modo
seguente.
Tabella 2: Interpretazione dei risultati del test per genotipo HPV ad alto rischio per il BD Onclarity HPV
Assay
Risultato HPV ad alto
rischio
HR
HR
Interpretazione
Risultato
Positivo per i tipi di HPV ad alto rischio
HPV HR positivo
Negativo per i tipi di HPV ad alto rischio
HPV HR negativo
DNA HPV, se presente, non è individuabile
Errore del controllo interno
DNA HPV, se presente, non è individuabile
Errore trasferimento di estrazione
DNA HPV, se presente, non è individuabile
Errore livello di liquido
DNA HPV, se presente, non è individuabile
Errore
53
Tabella 3: Interpretazione dei risultati del test per genotipo HPV specifico per il BD Onclarity HPV Assay
Risultato genotipo HPV
16
16
18
18
45
Interpretazione
Risultato
Positivo per HPV tipo 16
HPV tipo 16 positivo
Negativo per HPV tipo 16
HPV tipo 16 negativo
Positivo per HPV tipo 18
HPV tipo 18 positivo
Negativo per HPV tipo 18
HPV tipo 18 negativo
Positivo per HPV tipo 45
HPV tipo 45 positivo
Negativo per HPV tipo 45
HPV tipo 45 negativo
45
P1
P1
31
31
P2
P2
51
51
52
52
P3
P3
Positivo per HPV tipi 56, 59 e/o 66
HPV tipi 56, 59 e/o 66 positivo
Negativo per HPV tipi 56, 59 e/o 66
HPV tipi 56, 59 e/o 66 negativo
Positivo per HPV tipi 35, 39 e/o 68
HPV tipi 35, 39 e/o 68 positivo
Negativo per HPV tipi 35, 39 e/o 68
HPV tipi 35, 39 e/o 68 negativo
GT
Risultato(i) genotipo HPV positivo non
disponibile(i) nel paese
Risultato(i) genotipo HPV positivo
limitato(i)
Risultato(i) genotipo HPV negativo non
disponibile(i) nel paese
Risultato genotipo HPV disponibile per
l’acquisto
Risultato(i) genotipo HPV negativo
limitato(i)
GT
--
Positivo per HPV tipi 33 e/o 58
HPV tipi 33 e/o 58 positivo
Negativo per HPV tipi 33 e/o 58
HPV tipi 33 e/o 58 negativo
Positivo per HPV tipo 31
HPV tipo 31 positivo
Negativo per HPV tipo 31
HPV tipo 31 negativo
Positivo per HPV tipo 51
HPV tipo 51 positivo
Negativo per HPV tipo 51
HPV tipo 51 negativo
Positivo per HPV tipo 52
HPV tipo 52 positivo
Negativo per HPV tipo 52
HPV tipo 52 negativo
Risultato genotipo HPV non disponibile
per l’acquisto
Risultato genotipo bloccato
Risultato HPV negativo, errore
controllo interno, errore livello di
liquido o errore trasferimento di
estrazione
Monitoraggio della presenza di contaminazione da DNA
Almeno una volta al mese, effettuare la seguente procedura di test per individuare l’eventuale presenza di
contaminazione da DNA sulle superfici dell’area di lavoro e delle attrezzature. Questo monitoraggio dell’ambiente
è indispensabile per individuare la contaminazione prima che insorgano problemi.
1. Per ogni area da analizzare, utilizzare un tampone di raccolta pulito contenuto nel BD ProbeTec Chlamydia
trachomatis/Neisseria gonorrhoeae (CT/GC) Amplified DNA Assay Endocervical Specimen Collection and DRY
TRANSPORT Kit.
2. Versare una quantità di acqua priva di nucleasi per biologia molecolare in un piccolo contenitore pulito.
3. Immergere il tampone nell’acqua priva di nucleasi per biologia molecolare e pulire la prima area con un movimento
ampio.
4. Rimuovere il tappo di una provetta di diluente BD Onclarity HPV LBC e inserire il tampone nel diluente. Miscelare
ruotando il tampone nel BD Onclarity HPV Diluent per 5 – 10 secondi.
5. Premere il tampone lungo le pareti interne della provetta in modo da far scorrere il liquido sul fondo.
6. Rimuovere con cura il tampone dalla provetta di diluente BD Onclarity HPV LBC per evitare schizzi. Eliminare il
tampone.
7. Richiudere saldamente la provetta di diluente BD Onclarity HPV LBC con il tappo perforabile nero.
8. Ripetere questo passaggio per ciascuna area da testare.
9. Una volta raccolti e premuti tutti i tamponi, sottoporli al processo di pre-riscaldamento, quindi seguire la procedura
del test.
Per ulteriori informazioni sul monitoraggio dell’ambiente e sulle procedure di pulizia, consultare il Manuale d’uso del
sistema BD Viper LT. Se un evento di contaminazione persiste, contattare il rappresentante BD di zona per ulteriori
informazioni.
LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA
1. Per fornire prestazioni ottimali, il test richiede una tecnica corretta di raccolta e trattamento dei campioni. Fare
riferimento alle sezioni relative alla raccolta e al trasporto dei campioni incluse in questo foglietto illustrativo.
2. Un risultato negativo non esclude la possibilità di infezione, in quanto i risultati del test possono essere condizionati
da errori di raccolta del campione, errori tecnici, scambio dei campioni o dalla presenza nel campione di un numero
di organismi inferiore alla soglia di sensibilità del test.
54
3.Il BD Onclarity HPV Assay fornisce risultati qualitativi.
4.Il BD Onclarity HPV Assay deve essere usato esclusivamente da personale che abbia ricevuto una preparazione
adeguata per effettuare la procedura del test e utilizzare il sistema BD Viper LT.
CARATTERISTICHE PRESTAZIONALI
I campioni su BD Onclarity HPV Cervical Brush, i campioni BD SurePath e/o i campioni PreservCyt sono stati raccolti da
836 donne conformi al protocollo per cui è stato richiesto un follow-up a causa di Pap test anomalo o infezione da HPV
o donne che si sono rivolte a una clinica per una visita di routine in due centri clinici situati in luoghi geografici diversi
in Europa. Da ogni soggetto arruolato sono stati raccolti due campioni nel seguente ordine: un campione BD SurePath
(Sito A) o un campione PreservCyt (Sito B) e un campione su BD Onclarity HPV Cervical Brush (trasferito in una provetta
di BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent). Per ogni fiala citologica raccolta, sono stati aliquotati 0,5 mL in una provetta
di diluente BD Onclarity HPV LBC. I risultati citologici per DNA HPV (digene Hybrid Capture 2 (hc2) High-Risk HPV DNA
Test) e i risultati del Roche LINEAR ARRAY HPV Genotyping Test (RLA) erano disponibili per la maggior parte dei campioni.
I risultati istologici erano disponibili per la gran parte dei soggetti che si sono rivolti a una clinica per patologie ad alto
rischio.
Ogni sito ha inserito anche campioni residuali (BD SurePath o PreservCyt) con risultati citologici, risultati per DNA
HPV (digene Hybrid Capture 2 High-Risk HPV DNA Test), risultati del Roche LINEAR ARRAY HPV Genotyping Test e,
dove applicabile, risultati istologici. Per ogni campione incluso, sono stati aliquotati 0,5 mL in una provetta di diluente
BD Onclarity HPV LBC. Sono stati inseriti 510 campioni retrospettivi conformi, con risultati istologici disponibili per
234 donne.
Tutti i campioni sono stati analizzati con il sistema BD Viper LT secondo il foglietto illustrativo allegato alla confezione
del test e al manuale d’uso. Per ogni tipo di terreno, sono state calcolate la sensibilità e la specificità per il rilevamento
della patologia, definita come (1) CIN2 (Cervical Intraepithelial Neoplasia, neoplasia intraepiteliale cervicale) o risultato
istologico superiore oppure (2) CIN3 o risultato istologico superiore. L’analisi finale dei dati comprende i risultati del
BD Onclarity HPV Assay relativi a 472 campioni BD SurePath, 361 campioni PreservCyt e un totale di 515 campioni su
BD Onclarity HPV Cervical Brush: 247 campioni su BD Onclarity HPV Cervical Brush (nel BD Onclarity HPV Cervical Brush
Diluent) per il Sito A e 268 campioni su BD Onclarity HPV Cervical Brush (nel BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent)
per il Sito B. Le stime delle prestazioni per il rilevamento della patologia cervicale di grado elevato con il BD Onclarity
HPV Assay e il test hc2 sono riportate nelle tabelle 4 e 5 per i BD SurePath media (terreni BD SurePath), nelle tabelle 8 e
9 per i PreservCyt Media (terreni PreservCyt) e nelle tabelle 12 e 13 per i campioni su BD Onclarity HPV Cervical Brush.
I risultati del BD Onclarity HPV Assay sono stati inoltre confrontati con i risultati per DNA HPV derivanti dal digene
Hybrid Capture 2 High-Risk HPV DNA Test e dal Roche LINEAR ARRAY HPV Genotyping Test (comparatore composito).
Un risultato positivo dai test hc2 e RLA (ad alto rischio) viene definito come positivo per il comparatore composito,
mentre un risultato negativo viene definito come negativo per il comparatore composito. Quando i due test generano
risultati diversi (o non erano disponibili risultati per entrambi i test), il risultato del comparatore composito viene
considerato irrisolto. La percentuale di concordanza positiva, negativa e complessiva è stata calcolata per ogni tipo di
terreno rispetto al comparatore composito. L’analisi finale dei dati comprende i risultati del BD Onclarity HPV Assay e
del comparatore composito (indipendentemente dallo stato istologico) relativi a 670 campioni BD SurePath e 674 campioni
PreservCyt. (Tabelle 6 e 10)
Il rischio assoluto della patologia (CIN2+ e CIN3+) nella popolazione in studio per ogni tipo di terreno è stato calcolato
per ciascun genotipo e gruppo di genotipi nel BD Onclarity HPV Assay. I rischi assoluti vengono calcolati quando il
genotipo (o il gruppo di genotipi) è presente da solo e/o in presenza di altri genotipi. Viene riportata una tabella del
rischio assoluto per ogni tipo di terreno. Ciascun terreno è stato raccolto solo in un sito, quindi si possono prevedere
differenze nelle percentuali di positività a HPV e al genotipo correlate alla variabilità della popolazione. (Tabelle 7 e 11)
Prestazioni cliniche dei campioni BD SurePath
Tabella 4: Prestazioni del BD Onclarity HPV Assay con i BD SurePath Media rispetto ai risultati istologici
(CIN2+)
BD Onclarity HPV Assay
Stima
Test DNA HPV hc2
Intervallo di confidenza
95%
Stima
Intervallo di confidenza
95%
Sensibilità
97,9% (190/194)
(94,8%, 99,2%)
98,4% (190/193)
(95,5%, 99,5%)
Specificità
22,7% (63/278)
(18,1%, 27,9%)
17,0% (47/277)
(13,0%, 21,8%)
Tabella 5: Prestazioni del BD Onclarity HPV Assay con i BD SurePath Media rispetto ai risultati istologici
(CIN3+)
BD Onclarity HPV Assay
Test DNA HPV hc2
Stima
Intervallo di confidenza
95%
Stima
Intervallo di confidenza
95%
Sensibilità
97,7% (126/129)
(93,4%, 99,2%)
98,4% (126/128)
(94,5%, 99,6%)
Specificità
18,7% (64/343)
(14,9%, 23,1%)
14,0% (48/342)
(10,8%, 18,1%)
55
Tabella 6: Prestazioni del BD Onclarity HPV Assay con i BD SurePath Media rispetto al comparatore
composito
Risultato comparatore
composito
BD Onclarity
Positivo Negativo
HPV Assay
Irrisolto*
Totale
Positivo
532
6
27
565
Negativo
8
50
47
105
Totale
540
56
74
670
Percentuale di
concordanza
positiva
Percentuale di
concordanza
negativa
Percentuale di
concordanza
complessiva
(intervallo di
confidenza
95%)
(intervallo di
confidenza
95%)
(intervallo di
confidenza
95%)
98,5%
(97,1%, 99,2%)
89,3%
(78,5%, 95,0%)
97,7%
(96,1%, 98,6%)
*I risultati di hc2 e RLA forniscono risultati diversi o non erano disponibili risultati per entrambi i test.
Tabella 7: Rischio assoluto di CIN2+ e CIN3+ per i genotipi nel BD Onclarity HPV Assay con i BD SurePath
Media
Genotipo
BD Onclarity
HPV Assay
Infezione dovuta a
uno o più genotipi
Infezione dovuta a un
singolo genotipo o a
un gruppo di genotipi
Infezione dovuta a
uno o più genotipi
Infezione dovuta a un
singolo genotipo o a
un gruppo di genotipi
Rischio Intervallo di Rischio Intervallo di Rischio Intervallo di Rischio Intervallo di
assoluto confidenza assoluto confidenza assoluto confidenza assoluto confidenza
95%
95%
95%
95%
CIN2+
CIN2+
CIN3+
CIN3+
HPV16
63,9%
(99/155)
(56,1%,
71,0%)
64,9%
(48/74)
(53,5%,
74,8%)
43,9%
(68/155)
(36,3%,
51,7%)
47,3%
(35/74)
(36,3%,
58,5%)
HPV18
50,0%
(24/48)
(36,4%,
63,6%)
50,0%
(7/14)
(26,8%,
73,2%)
43,8%
(21/48)
(30,7%,
57,7%)
42,9%
(6/14)
(21,4%,
67,4%)
HPV45
46,7%
(21/45)
(32,9%,
60,9%)
23,5%
(4/17)
(9,6%,
47,3%)
31,1%
(14/45)
(19,5%,
45,7%)
17,6%
(3/17)
(6,2%,
41,0%)
HPV33/58
49,4%
(42/85)
(39,0%,
59,8%)
47,1%
(16/34)
(31,5%,
63,3%)
31,8%
(27/85)
(22,8%,
42,3%)
23,5%
(8/34)
(12,4%,
40,0%)
HPV31
64,2%
(52/81)
(53,3%,
73,8%)
72,7%
(16/22)
(51,8%,
86,8%)
40,7%
(33/81)
(30,7%,
51,6%)
50,0%
(11/22)
(30,7%,
69,3%)
HPV56/59/66
25,5%
(25/98)
(17,9%,
35,0%)
0,0%
(0/29)
(0,0%,
11,7%)
13,3%
(13/98)
(7,9%,
21,4%)
0,0%
(0/29)
(0,0%,
11,7%)
HPV51
41,7%
(15/36)
(27,1%,
57,8%)
25,0%
(2/8)
(7,1%,
59,1%)
25,0%
(9/36)
(13,8%,
41,1%)
12,5%
(1/8)
(2,2%,
47,1%)
HPV52
35,1%
(20/57)
(24,0%,
48,1%)
33,3%
(4/12)
(13,8%,
60,9%)
19,3%
(11/57)
(11,1%,
31,3%)
16,7%
(2/12)
(4,7%,
44,8%)
HPV35/39/68
36,0%
(27/75)
(26,1%,
47,3%)
33,3%
(7/21)
(17,2%,
54,6%)
17,3%
(13/75)
(10,4%,
27,4%)
19,0%
(4/21)
(7,7%,
40,0%)
Prestazioni cliniche dei campioni PreservCyt
Tabella 8: Prestazioni del BD Onclarity HPV Assay con i PreservCyt Media rispetto ai risultati istologici
(CIN2+)
BD Onclarity HPV Assay
Test DNA HPV hc2
Stima
Intervallo di confidenza 95%
Stima
Intervallo di confidenza 95%
Sensibilità
94,7% (160/169)
(90,2%, 97,2%)
97,0% (160/165)
(93,1%, 98,7%)
Specificità
50,5% (97/192)
(43,5%, 57,5%)
40,8% (75/184)
(33,9%, 48,0%)
Tabella 9: Prestazioni del BD Onclarity HPV Assay con i PreservCyt Media rispetto ai risultati istologici
(CIN3+)
BD Onclarity HPV Assay
Test DNA HPV hc2
Stima
Intervallo di confidenza 95%
Stima
Intervallo di confidenza 95%
Sensibilità
94,4% (85/90)
(87,6%, 97,6%)
97,7% (85/87)
(92,0%, 99,4%)
Specificità
37,3% (101/271)
(31,7%, 43,2%)
29,8% (78/262)
(24,6%, 35,6%)
56
Tabella 10: Prestazioni del BD Onclarity HPV Assay con i PreservCyt Media rispetto al comparatore composito
Risultato comparatore
composito
BD Onclarity
Positivo Negativo
HPV Assay
Irrisolto*
Percentuale di
concordanza
negativa
Percentuale di
concordanza
complessiva
(intervallo di
confidenza 95%)
(intervallo di
confidenza
95%)
(intervallo
di confidenza
95%)
96,1%
(93,0%, 97,9%)
98,7%
(96,9%, 99,4%)
97,6%
(96,1%, 98,5%)
Percentuale di
concordanza
positiva
Totale
Positivo
246
5
18
269
Negativo
10
366
29
405
Totale
256
371
47
674
* I risultati di hc2 e RLA forniscono risultati diversi o non erano disponibili risultati per entrambi i test.
Tabella 11: Rischio assoluto di CIN2+ e CIN3+ per i genotipi nel BD Onclarity HPV Assay con i PreservCyt
Media
Genotipo
BD Onclarity
HPV Assa
HPV 16
HPV 18
HPV 45
HPV 33/58
HPV 31
HPV
56/59/66
HPV 51
HPV 52
HPV
35/39/68
Infezione dovuta a
uno o più genotipi
Infezione dovuta a un
singolo genotipo o a
un gruppo di genotipi
Rischio Intervallo di Rischio
assoluto confidenza assoluto
95%
CIN2+
CIN2+
77,1%
(84/109)
50,0%
(12/24)
50,0%
(6/12)
70,0%
(28/40)
67,7%
(42/62)
34,0%
(18/53)
48,0%
(12/25)
73,9%
(17/23)
38,5%
(10/26)
(68,3%,
84,0%)
(31,4%,
68,6%)
(25,4%,
74,6%)
(54,6%,
81,9%)
(55,4%,
78,0%)
(22,7%,
47,4%)
(30,0%,
66,5%)
(53,5%,
87,5%)
(22,4%,
57,5%)
81,4%
(57/70)
45,5%
(5/11)
25,0%
(1/4)
75,0%
(15/20)
71,0%
(22/31)
11,1%
(2/18)
27,3%
(3/11)
85,7%
(6/7)
40,0%
(2/5)
Intervallo di
confidenza
95%
(70,8%,
88,8%)
(21,3%,
72,0%)
(4,6%,
69,9%)
(53,1%,
88,8%)
(53,4%,
83,9%)
(3,1%,
32,8%)
(9,7%,
56,6%)
(48,7%,
97,4%)
(11,8%,
76,9%)
57
Infezione dovuta a
uno o più genotipi
Rischio Intervallo di
assoluto confidenza
95%
CIN3+
44,0%
(48/109)
29,2%
(7/24)
16,7%
(2/12)
35,0%
(14/40)
30,6%
(19/62)
9,4%
(5/53)
16,0%
(4/25)
26,1%
(6/23)
15,4%
(4/26)
(35,1%,
53,4%)
(14,9%,
49,2%)
(4,7%,
44,8%)
(22,1%,
50,5%)
(20,6%,
43,0%)
(4,1%,
20,3%)
(6,4%,
34,7%)
(12,5%,
46,5%)
(6,1%,
33,5%)
Infezione dovuta a un
singolo genotipo o a
un gruppo di genotipi
Rischio
assoluto
CIN3+
Intervallo di
confidenza
95%
50,0%
(35/70)
18,2%
(2/11)
0,0
(0/4)
50,0%
(10/20)
41,9%
(13/31)
0,0%
(0/18)
18,2%
(2/11)
42,9%
(3/7)
20,0%
(1/5)
(38,6%,
61,4%)
(5,1%,
47,7%)
(0,0%,
49,0%)
(29,9%,
70,1%)
(26,4%,
59,2%)
(0,0%,
17,6%)
(5,1%,
47,7%)
(15,8%,
75,0%)
(3,6%,
62,4%)
Prestazioni cliniche dei campioni su BD Onclarity HPV Cervical Brush
Tabella 12: Prestazioni del BD Onclarity HPV Assay con la BD Onclarity HPV Cervical Brush rispetto ai
risultati istologici (CIN2+)
BD Onclarity HPV Assay
Stima
Stima
Intervallo di
confidenza 95%
Sensibilità
97,2% (104/107)
(92,1%, 99,0%)
99,1% (106/107)
(94,9%, 99,8%)
Sensibilità
17,9% (25/140)
(12,4%, 25,0%)
21,4% (30/140)
(15,4%, 28,9%)
Sensibilità
100,0% (121/121)
(96,9%, 100,0%)
97,5% (116/119)
(92,8%, 99,1%)
Sensibilità
37,4% (55/147)
(30,0%, 45,5%)
43,0% (61/142)
(35,1%, 51,2%)
Sito
A
B
Test DNA HPV hc2
Intervallo di
confidenza 95%
Tabella 13: Prestazioni del BD Onclarity HPV Assay con la BD Onclarity HPV Cervical Brush rispetto ai
risultati istologici (CIN3+)
BD Onclarity HPV Assay
Intervallo di
confidenza 95%
Stima
Intervallo di
confidenza 95%
Sensibilità
97,3% (72/74)
Sensibilità
15,0% (26/173)
(90,7%, 99,3%)
98,6% (73/74)
(92,7%, 99,8%)
(10,5%, 21,1%)
17,3% (30/173)
Sensibilità
(12,4%, 23,7%)
100,0% (60/60)
(94,0%, 100,0%)
98,3% (57/58)
Sensibilità
(90,9%, 99,7%)
26,4% (55/208)
(20,9%, 32,8%)
31,0% (63/203)
(25,1%, 37,7%)
Sito
A
B
Test DNA HPV hc2
Stima
Studi analitici
Sensibilità analitica al cut-off clinico:
Il LOD (Limits of Detection, limite di rilevamento) al cut-off clinico HPV è stato determinato per il BD Onclarity HPV Assay
utilizzando le linee cellulari HPV positive, ovvero SiHa (HPV 16), HeLa (HPV 18) e MS751 (HPV 45) e DNA plasmidico
clonato contenente le sequenze per i seguenti genotipi HPV: HPV 31, 33, 35, 39, 51, 52, 56, 58, 59, 66 e 68 in BD SurePath
Preservative Fluid, PreservCyt Solution e BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent contenenti la linea cellulare HPV negativa
(C33A). Le linee cellulari HPV sono state testate singolarmente, mentre i plasmidi HPV sono stati verificati insieme in
tre gruppi: 1) HPV 31, 33, 51, 52 e 59; 2) HPV 56, 58, 68 e 3) HPV 35 e 66. Un minimo di quarantacinque repliche di
ciascuno dei sei livelli bersaglio per le linee cellulari HPV e venti repliche di ciascuno dei sei livelli bersaglio di plasmidi
HPV sono stati testati in almeno tre lotti di reagenti e minimo tre sistemi BD Viper LT. Il LOD è il livello di DNA HPV nel
campione non diluito che presenta risultati positivi superiori al cut-off clinico almeno il 95% delle volte. Il valore LOD
massimo per ciascuno dei genotipi HPV e dei terreni viene descritto nella tabella 14.
Tabella 14: Sensibilità analitica
Bersaglio
BD SurePath Media
(intervallo di
confidenza 95%)
PreservCyt Media
(intervallo di
confidenza 95%)
BD Onclarity HPV
Cervical Brush Diluent
(intervallo di
confidenza 5%)
Cellule SiHa (HPV 16)/mL
1.584 (1.276 – 1.962)
1.835 (1.426 – 2.358)
137 (131 – 144)
Cellule HeLa (HPV 18)/mL
915 (739 – 1.131)
1.786 (1.175 – 2.715)
51 (46 – 56)
Cellule MS751 (HPV 45)/mL
3.793 (2.944 – 4.888)
5.425 (4.167 – 7.066)
305 (284 – 343)
Copie HPV 31/mL
3.652 (3.159 – 3.868)
4.118 (3.898 – 4.228)
692 (650 – 817)
Copie HPV 33/mL
7.326 (6.578 – 8.932)
8.272 (7.946 – 8.743)
1.376 (1.272 – 1.451)
Copie HPV 35/mL
6.820 (6.477 – 7.282)
7.282 (6.895 – 7.674)
1.552 (1.317 – 1.780)
Copie HPV 39/mL
7.894 (7.115 – 8.193)
8.272 (7.810 – 9.398)
1.531 (1.419 – 1.685)
Copie HPV 51/mL
6.697 (5.786 – 7.097)
5.909 (5.553 – 6.824)
1.229 (1.155 – 1.353)
Copie HPV 52/mL
3.582 (3.414 – 4.184)
4.184 (3.740 – 4.761)
833 (744 – 934)
Copie HPV 56/mL
4.976 (4.140 – 5.698)
4.774 (4.479 – 5.997)
836 (737 – 911)
Copie HPV 58/mL
10.094 (9.403 – 11.180)
11.488 (8.989 – 12.360)
2.990 (2.656 – 7.819)
Copie HPV 59/mL
4.400 (4.145 – 5.069)
4.374 (4.105 – 5482)
772 (722 – 899)
Copie HPV 66/mL
3.793 (3.621 – 4.030)
4.462 (4.008 – 4844)
701 (646 – 767)
Copie HPV 68/mL
10.415 (9.799 – 11.642)
10.481 (9.816 – 12.082)
2.079 (1.995 – 2.125)
58
Reattività crociata:
Un pannello di batteri, lieviti e virus coltivati, insieme a DNA plasmidico clonato contenente sequenze bersaglio di HPV
ad alto e a basso rischio, è stato utilizzato per valutare la specificità analitica del BD Onclarity HPV Assay sul sistema
BD Viper LT. Ogni componente caratterizzato da potenziale reattività crociata è stato testato singolarmente in BD SurePath
Preservative Fluid e PreservCyt Solution contenenti una linea cellulare HPV negativa (C33A). I microrganismi vengono
descritti nelle tabelle 15 e 16. Il BD Onclarity HPV Assay non ha prodotto reazioni crociate con i microrganismi analizzati.
Tabella 15: Microrganismi testati per la specificità analitica
Batteri*
Virus**
Actinomyces israelii
Adenovirus, tipo 5
Atopobium vaginae
EBV-1, ceppo B95-8
Bacteroides fragilis
HCMV. Ceppo AD169
Bacteroides ureolyticus
HIV-1
Bifidobacterium adolescentis
HSV1
Bifidobacterium brevi
HSV2
Bifidobacterium longum ssp. longum
HPV ad alto rischio***
Chlamydia trachomatis
HPV 16
Clostridium perfringens
HPV 18
Corynebacterium genitalium
HPV 31
Enterobacter cloacae ssp. cloacae
HPV 33
Enterococcus faecalis
HPV 35
Enterococcus faecium
HPV 39
Escherichia coli
HPV 45
Fusobacterium nucleatum ssp. nucleatum
HPV 51
Gardnerella vaginalis
HPV 52
Klebsiella pneumonia ssp. ozaenae
HPV 56
Lactobacillus acidophilus
HPV 58
Mycobacterium smegmatis
HPV 59
Mycoplasma genitalium
HPV 66
Neisseria gonorrhoeae
HPV 68
Peptostreptococcus anaerobius
Prevotella bivia
Prevotella disiens
Proteus mirabilis
Proteus vulgaris
Providencia stuartii
Pseudomonas aeruginosa
Staphylococcus aureus
Staphylococcus epidermidis
Streptococcus agalactiae
Streptococcus pyogenes
Ureaplasma urealyticum
Lieviti/Protozoi****
Candida albicans
Trichomonas vaginalis
* Batteri testati a circa 1,0 x 107 CFU/mL eccetto i seguenti: Chlamydia trachomatis (1,0 x 107 EB/mL), Mycobacterium
smegmatis (2,5 x 106 CFU/mL) e Ureaplasma urealyticum (8,0 x 106 CFU/mL).
** Virus testati a 1,0 x 106 VP/mL.
*** DNA plasmidico HPV ad alto rischio testato a 1,0 x 106 copie/mL.
**** Lieviti (Candida albicans) testati a circa 1,0 x 107 CFU/mL; protozoi (Trichomonas vaginalis) testati a circa
1,4 x 106 CFU/mL.
59
Tabella 16: Plasmidi HPV a basso rischio testati per la specificità analitica
HPV 6
HPV 69
HPV 11
HPV 70
HPV 26
HPV 73
HPV 30
HPV 82
HPV 34
HPV 97
HPV 53
HPV c85
HPV 67
*DNA plasmidico HPV a basso rischio testato a 1,0 x 106 copie/mL.
Sostanze interferenti:
Il potenziale di interferenza nel BD Onclarity HPV Assay sul sistema BD Viper LT è stato determinato con sostanze
esogene ed endogene che possono essere presenti nei campioni cervicali clinici. I campioni HPV negativi e HPV positivi
pianificati (addizionati con le cellule SiHa, HeLa e MS751 a 3 x LOD) sono stati testati in presenza e in assenza di ciascuna
potenziale sostanza interferente. Le sostanze utilizzate in questi studi vengono descritte nella tabella 17. Le concentrazioni
rappresentano il livello massimo di sostanza che non causa interferenze nel BD Onclarity HPV Assay.
Tabella 17: Potenziali sostanze interferenti
Potenziale sostanza
interferente
BD Onclarity HPV
Cervical Brush
Diluent
Concentrazione
testata
Lubrificante vaginale KY
10% (p/v)
6% (p/v)
10% (w/v)
Pellicola contraccettiva
vaginale VCF
3% (w/v)
10% (w/v)
10% (w/v)
Schiuma contraccettiva
vaginale VCF
10% (w/v)
10% (w/v)
10% (w/v)
Gel contraccettivo Conceptrol
1% (w/v)
10% (w/v)
10% (w/v)
BD SurePath Media
PreservCyt Media
Concentrazione
testata
Concentrazione testata
Monistat 3*
2% (w/v)
2% (w/v)
1,8% (w/v)
Clotrimazolo 7
10% (w/v)
10% (w/v)
10% (w/v)
Tioconazolo Vagistat-1
2% (w/v)
2% (w/v)
2% (w/v)
Crema vaginale a base di
clindamicina
9% (w/v)
10% (w/v)
10% (w/v)
Lavanda vaginale Summer’s Eve
10% (v/v)
10% (v/v)
10% (v/v)
Crema Zovirax (aciclovir)
10% (w/v)
8% (w/v)
10% (w/v)
Gel Vandazole (gel vaginale a
base di metronidazolo, 0,75%)
10% (w/v)
10% (w/v)
10% (w/v)
Deodorante Summer’s Eve
2% (w/v)
3% (w/v)
2% (w/v)
Mucina bovina
10% (v/v)
10% (v/v)
10% (v/v)
Progesterone
20 ng/mL
20 ng/mL
20 ng/mL
Estradiolo
1,2 ng/mL
1,2 ng/mL
1,2 ng/mL
Sangue intero
3% (v/v)
5% (v/v)
5% (v/v)
Leucociti
1x106
1x106
cellule/mL
cellule/mL
1x106 cellule/mL
Sperma
10% (v/v)
10% (v/v)
10% (v/v)
Lavaggio a base di acido
acetico**
5% (v/v)
Sangue + Lavaggio a base di
acido acetico
5% sangue (v/v)
2,5% lavaggio a base di
acido acetico (v/v)
*Concentrazioni superiori ai valori elencati hanno causato errori nel livello di liquido durante l’estrazione sul sistema
BD Viper LT.
**Il lavaggio a base di acido acetico è costituito da 1 parte di acido acetico glaciale e 9 parti di soluzione CytoLyt.
60
Interferenza dei bersagli competitivi:
Il potenziale di inibizione del rilevamento HPV dovuto a un bersaglio presente a un livello elevato e un altro bersaglio
presente a bassi livelli durante un’infezione mista è stato valutato nel BD Onclarity HPV Assay. Le cellule SiHa, HeLa
e MS751 sono state testate singolarmente o insieme a 3 x LOD in presenza o in assenza di bersagli HPV competitivi a
1,0 x 106 copie/mL in BD SurePath Preservative Fluid, PreservCyt Solution e BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent
contenenti una linea cellulare HPV negativa (C33A) (tabella 18).
Tabella 18: Interferenza dei bersagli competitivi
Tipo di provetta del test
HPV
Bersagli cellulari
HPV singoli a
3 x LOD
Plasmidi HPV a
1 x 106 copie/mL
Rilevamento bersaglio
cellulare HPV in presenza
o assenza di genotipi
concorrenti (plasmidi
HPV)
SiHa (HPV 16)
HPV 18 + HPV 45
Sì
Genotipi G1 con bersagli
co-amplificati G1
HeLa (HPV 18)
HPV 16 + HPV 45
Sì
HPV 45 (MS751)
HPV 16 + HPV 18
Sì
Genotipi G1 con bersagli
co-amplificati G2
SiHa + HeLa + MS751
HPV 31 + HPV 33 +
HPV 56 + HPV 58 +
HPV 59 + HPV 66
Sì
Genotipi G1 con bersagli
co-amplificati G3
SiHa + HeLa + MS751
HPV 35 + HPV 39 +
HPV 51+ HPV 52 +
HPV 68
Sì
Riproducibilità:
La riproducibilità del BD Onclarity HPV Assay è stata valutata con lo strumento BD Viper LT utilizzando un pannello di
quattro membri costituito da campioni negativi, con alta negatività, bassa positività e moderata positività. I membri
positivi del pannello erano formati da cellule SiHa, HeLa and MS751 addizionate insieme nei pool di campioni clinici
BD SurePath HPV negativi e BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent contenente una linea cellulare HPV negativa
(C33A). Il pannello è stato testato all’interno di una distribuzione uniforme di tre lotti di reagenti e tre strumenti
nell’arco di 12 giorni. I dati sono riassunti nella tabella 19.
61
Tabella 19: Riepilogo dei dati di riproducibilità per il BD Onclarity HPV Assay sul sistema BD Viper LT
Inter-série
Linea
Terreno cellulare
(genotipo)
SurePath
SiHa
(HPV 16)
HeLa
(HPV 18)
MS-751
(HPV 45)
Diluente per spazzola cervicale
SiHa
(HPV 16)
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
32
100 %
(218/218)
(98,27 % –
100 %)
36,29
0,09
0,25
0,59
1,63
0,62
1,71
Bassa pos
205
94,91 %
(205/216)
(91,11 % –
97,13 %)
33,63
0,26
0,78
0,33
0,97
0,43
1,27
Mod pos
615
100 %
(216/216)
(98,25 % –
100 %)
31,80
0,16
0,51
0,18
0,56
0,25
0,79
0
100 %
(214/214)
(98,24 % –
100 %)
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
13
99,07 %
(214/216)
(96,69 % –
99,75 %)
35,69
0,10
0,29
0,78
2,18
0,80
2,23
Bassa pos
76
99,08 %
(216/218)
(96,72 % –
99,75 %)
33,34
0,15
0,44
0,25
0,76
0,30
0,91
Mod pos
228
99,54 %
(215/216)
(97,42 % –
99,92 %)
32,07
0,24
0,73
0,25
0,78
0,37
1,16
0
100 %
(214/214)
(98,24 % –
100 %)
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
59
100 %
(216/216)
(98,25 % –
100 %)
36,54
0,22
0,61
0,62
1,68
0,66
1,81
Bassa pos
457
99,54 %
(215/216)
(97,42 % –
99,92 %)
33,22
0,16
0,48
0,25
0,75
0,32
0,95
Mod pos
1.371
100 %
(218/218)
(98,27 % –
100 %)
31,74
0,14
0,43
0,21
0,67
0,27
0,84
Concentrazione
% corretta
cellule/mL
Nég
0
Alta neg
342
Bassa pos
1.582
Mod pos
4.746
Nég
0
Alta neg
102
Bassa pos
914
Mod pos
2.742
Nég
0
Alta neg
395
Bassa pos
3.793
Mod pos
11.378
Nég
0
Alta neg
Alta neg
Nég
MS-751
(HPV 45)
Total
100 %
(216/216)
97,69 %
(211/216)
100 %
(216/216)
100 %
(216/216)
100 %
(216/216)
98,61 %
(213/216)
99,54 %
(215/216)
100 %
(216/216)
100 %
(216/216)
100 %
(216/216)
100 %
(216/216)
99,54 %
(215/216)
100 %
(214/214)
Livello
pannello
Nég
HeLa
(HPV 18)
Intra-série
Intervallo di
confidenza
95%
(98,25 % –
100 %)
(94,7 % –
99,01 %)
(100 % –
98,25 %)
(100 % –
98,25 %)
(98,25 % –
100 %)
(96 % –
99,53 %)
(97,42 % –
99,92 %)
(100 % –
98,25 %)
(98,25 % –
100 %)
(98,25 % –
100 %)
(100 % –
98,25 %)
(97,42 % –
99,92 %)
(98,24 % –
100 %)
Alta neg
CT
media
SD
%CV
SD
%CV
SD
%CV
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
35,28
0,16
0,46
0,54
1,52
0,57
1,62
32,31
0,16
0,50
0,22
0,69
0,30
0,92
31,07
0,22
0,69
0,22
0,71
0,35
1,11
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
35,89
0,24
0,68
0,75
2,09
0,85
2,37
32,70
0,16
0,50
0,30
0,92
0,37
1,14
30,68
0,13
0,43
0,22
0,72
0,30
0,98
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
35,77
0,00
0,00
0,52
1,45
0,55
1,53
32,71
0,20
0,60
0,26
0,80
0,36
1,10
31,33
0,18
0,57
0,35
1,10
0,41
1,31
Contaminazione crociata:
È stato condotto uno studio per valutare il rischio della produzione di un risultato falso positivo nella stessa esecuzione
(contaminazione crociata all’interno dell’esecuzione) o in un’esecuzione successiva (contaminazione residua tra le
esecuzioni) sul sistema BD Viper LT. È stata eseguita un’esecuzione al giorno per cinque giorni su ciascuno dei tre
strumenti, con un totale di 675 repliche del test. Ogni esecuzione era costituita da campioni in BD SurePath Preservative
Fluid o PreservCyt Solution contenenti una linea cellulare HPV negativa (C33A) con e senza cellule SiHa addizionati
a 1,0 x 105 cellule/mL e disposti in un pattern a scacchiera. Il tasso complessivo di contaminazione con BD SurePath
Preservative Fluid e PreservCyt Solution era pari a 0,00%.
Stabilità dei campioni non diluiti (in fiala):
Sono stati condotti studi analitici per supportare i dati di stabilità di conservazione per campioni cervicali puri. I campioni
in BD SurePath Preservative Fluid, PreservCyt Solution e BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent contenenti una linea
cellulare HPV negativa (C33A) sono stati addizionati con le cellule SiHa a 3 x LOD e conservati a 2 – 8 °C, 30 °C e -20 °C
in diversi punti temporali. A ogni punto temporale, i campioni sono stati rimossi dalla conservazione e testati con il
BD Onclarity HPV Assay nel sistema BD Viper LT. Sono state generate ventiquattro repliche del test per ogni condizione
(tipo di campione/temperatura/durata). La stabilità è stata raggiunta per 30 giorni nell’intervallo 2 – 30 °C e a -20 °C.
Stabilità dei campioni diluiti:
Sono stati condotti studi analitici per supportare i dati di stabilità di conservazione per campioni cervicali diluiti. I
campioni in BD SurePath Preservative Fluid e PreservCyt Solution contenenti una linea cellulare HPV negativa (C33A)
62
sono stati addizionati con le cellule SiHa a 3 X LOD, diluiti con il BD HPV LBC Diluent, quindi conservati a 2 – 8 °C, 30 °C
e -20 °C in diversi punti temporali. A ogni punto temporale, i campioni sono stati rimossi dalla conservazione e
testati con il BD Onclarity HPV Assay nel sistema BD Viper LT. Sono state generate ventiquattro repliche del test per
ogni condizione (tipo di campione/temperatura/durata). La stabilità è stata raggiunta per 15 giorni nell’intervallo
2 – 30 °C e per 30 giorni a -20 °C.
Stabilità dei campioni successiva al pre-riscaldamento:
Sono stati condotti studi analitici per supportare i dati di stabilità di conservazione per campioni cervicali diluiti dopo il
pre-riscaldamento. I campioni in BD SurePath Preservative Fluid, PreservCyt Solution e BD Onclarity HPV Cervical Brush
Diluent contenenti una linea cellulare HPV negativa (C33A) sono stati addizionati con le cellule SiHa a 3 x LOD, diluiti
con il BD Onclarity HPV LBC Diluent, quindi pre-riscaldati con il BD Viper LT Pre-warm Heater. I campioni trattati sono
stati conservati nell’intervallo 2 – 8 °C, a 30 °C e -20 °C in diversi punti temporali. A ogni punto temporale, i campioni
sono stati rimossi dalla conservazione e testati con il BD Onclarity HPV Assay nel sistema BD Viper LT. Sono state generate
ventiquattro repliche del test per ogni condizione (tipo di campione/temperatura/durata). La stabilità è stata raggiunta
per 7 giorni nell’intervallo 2 – 30 °C e per 30 giorni a -20 °C.
INTERPRETAZIONE DELLE TABELLE
Simboli e abbreviazioni
Simboli
(+) (-) #
%
positivo
negativo
numero
percentuale
Abbreviazioni
ASCUS
Atypical squamous cells of undetermined significance (cellule squamose atipiche di significato non
determinato)
cfu
Colony Forming Units (unità formanti colonie)
IC Intervallo di confidenza
CIN
Cervical Intraepithelial Neoplasia (neoplasia intraepiteliale cervicale)
CV Coefficiente di variazione
HPV Human Papillomavirus (papillomavirus umano)
HR High Risk (alto rischio)
LBC
Liquid-Based Cytology (citologia in fase liquida)
n
numero
NA
Non applicabile
NEGNegativo
NPA Negative Percent Agreement (percentuale di concordanza negativa)
PBS
Phosphate Buffered Saline (soluzione fisiologica tamponata con fosfato)
PCR
Polymerase Chain Reaction (reazione a catena della polimerasi)
POSPositivo
PPA Positive Percent Agreement (percentuale di concordanza positiva)
CQ
Controllo di qualità
DS Deviazione standard
DISPONIBILITÀ
Sono inoltre disponibili i seguenti prodotti BD Onclarity e BD Viper su BD Viper LT:
N. di cat. Descrizione
442946 BD Onclarity HPV Assay Reagent Pack, 192 test
441993 Control Set for the BD Onclarity HPV Assay, 24 provette positive e 24 provette negative
442841 BD Viper PCR Extraction Reagent Trough with Piercing Tool, 12 contenitori per reagente di estrazione
441992 BD FOX PCR Extraction Tubes, 384 provette
441354 BD Viper System Neutralization Pouch, 12 sacchetti
442840
BD Onclarity HPV Liquid Based Cytology Specimen (LBC) Diluent Tubes, 400
441991 BD Onclarity HPV Assay Cervical Brush Collection Kit, 100
442957 BD Viper LT System PCR Tube/Tray Kit
443430 Key Card for the BD Viper LT System
440476
BD ProbeTec Chlamydia trachomatis/Neisseria gonorrhoeae (CT/GC) Amplified DNA Assay Endocervical
Specimen Collection and DRY TRANSPORT Kit
441996 BD Viper LT Pipette Tips, 3840
441995 BD Viper LT Solid Waste Liners, 80
442950 BD Pre-warm Heater
442967 BD Viper LT System PCR Accessory kit
442839 BD Viper LT System
BIBLIOGRAFIA : Vedere “References” nel testo inglese.
63
 Onclarity HPV Assay
Español
USO PREVISTO
BD Onclarity HPV Assay (Análisis HPV BD Onclarity) es una prueba de ADN amplificado para la detección cualitativo
de tipos de papilomavirus humano (HPV) de alto riesgo. El análisis detecta todos los tipos de HPV de alto riesgo (16, 18,
31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, y 68) y proporciona la capacidad de genotipar seis tipos de alto riesgo (HPV 16,
18, 31, 45, 51 y 52). Las muestras de cuello uterino que se analizan con BD Onclarity HPV Assay incluyen BD Onclarity
HPV Cervical Brush Collection Kit (Kit de recogida mediante cepillo cervical HPV BD Onclarity), BD SurePath
Preservative Fluid (Líquido conservante BD SurePath) y PreservCyt Solution (Solución PreservCyt) (utilizando una
alícuota que se retira antes o después del procesamiento para las pruebas de Papanicolau BD SurePath o ThinPrep).
BD Onclarity HPV Assay se realiza con el BD Viper LT System.
RESUMEN Y EXPLICACIÓN
El papilomavirus humano (HPV) es el virus de transmisión sexual más común en el mundo. El 50 % de las personas
sexualmente activas del mundo tienen HPV genital en algún momento de sus vidas. A menudo, las personas no saben
que están infectadas y no toman precauciones para evitar la transmisión del virus a otras personas. Existen más de
40 tipos de HPV que pueden infectar el tracto gh enital1. En muchos casos, las infecciones por HPV son transitorias,
ya que el cuerpo es capaz de eliminar el virus por sí solo. No obstante, en algunos casos el virus es persistente
y provoca que las células normales se vuelvan anómalas, lo cual da lugar a un cáncer. Estos tipos de HPV oncogénicos
están clasificados como de alto riesgo e incluyen HPV 16 y 18. Otros tipos se consideran de bajo riesgo, puesto que
no parecen causar cáncer. Según los datos de la Organización Mundial de la Salud (OMS), el HPV es la segunda causa
principal de mortalidad femenina por cáncer, con unas 250.000 muertes aproximadamente al año. Solo en Europa,
la enfermedad provoca unas 15.000 muertes al año2. Se estima que cerca del 70 % de los cánceres de cuello uterino se
deben a los tipos de HPV 16 y 183.
Actualmente, las pruebas de Papanicolau pueden informar a los médicos si existen cambios en las células del cuello
uterino. Si las células son anómalas, se puede realizar una prueba para determinar si los cambios en las células del
cuello uterino se deben a una cepa de HPV que pueda dar lugar a un cáncer de cuello uterino. No todos los análisis
moleculares pueden distinguir entre los distintos tipos de HPV.
Cuando se utiliza con BD Viper LT System, BD Onclarity HPV Assay es un análisis de ADN amplificado para la
detección cualitativa de los tipos de alto riesgo de papilomavirus humano (HPV). El análisis detecta los tipos de HPV
16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 y 68, y permite identificar simultáneamente los tipos de alto riesgo 16,
18, 31, 45, 51, 52 y otros genotipos de alto riesgo informados por grupo de genotipos (P1: 33/58; P2: 56/59/66; P3:
35/39/68). Las muestras del cuello uterino que se pueden analizar con BD Onclarity HPV Assay incluyen BD SurePath
Preservative Fluid (utilizando una alícuota que se retira antes o después de procesar la prueba de Papanicolau BD
SurePath), PreservCyt Solution (utilizando una alícuota que se retira antes o después de procesar la prueba de
Papanicolau PreservCyt) y BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit.
PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO
BD Onclarity Human Papillomavirus (HPV) Assay está diseñado para usarlo con BD SurePath Preservative Fluid
(utilizando una alícuota que se retira antes o después de procesar la prueba de Papanicolau BD SurePath), PreservCyt
Solution (utilizando una alícuota que se retira antes o después de procesar la prueba de Papanicolau PreservCyt)
y BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit, los reactivos aplicables, BD Viper LT System y BD FOX Extraction.
Las muestras se someten a una fase de precalentamiento en el BD Pre-warm Heater (Bloque térmico de calentamiento
BD) con el fin de homogeneizar la matriz, lisar las células y liberar el ADN adecuado para extraerlo y amplificarlo.
Después de que se enfrían, las muestras se cargan en BD Viper LT System, que ejecuta a continuación todos los pasos
del proceso de extracción y amplificación del AND diana, sin que sea necesaria ninguna otra intervención del usuario.
La muestra se transfiere a un tubo de extracción que contiene partículas de óxido férrico en una película soluble.
Después, se añade un ácido para reducir el pH e inducir la carga positiva del óxido férrico que, como consecuencia,
se une al ADN con carga negativa. Seguidamente, las partículas y el ADN ligado son atraídos hacia los laterales del
tubo de extracción mediante imanes y la muestra tratada se aspira y se desecha. A continuación, se lavan las partículas
y se añade un tampón de elución de pH elevado para eluir el ADN purificado. Finalmente, se utiliza un tampón de
neutralización para ajustar el pH del eluato hasta el valor óptimo para amplificación del ADN. BD Onclarity HPV
Assay se basa en la amplificación y detección simultáneas de ADN diana utilizando cebadores de amplificación y
sondas detectoras marcadas con fluorescencia utilizando la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo
real. Los reactivos están deshidratados en tres tubos (G1, G2 y G3) aptos para detectar los 14 genotipos del HPV y un
control interno derivado de la muestra que consiste en un fragmento de ADN del gen de la beta globina humana.
Cada uno de los tubos contiene los cebadores de amplificación, sondas de detección marcadas con fluorescencia,
ADN polimerasa, nucleótidos y otros reactivos necesarios para la amplificación de los análisis respectivos. BD Viper LT
System pipetea una parte de la solución de ADN purificado de cada tubo de extracción en los tres tubos BD Onclarity
HPV PCR (G1, G2 y G3) que, a continuación, se sellan para evitar contaminaciones. La presencia o ausencia del ADN del
HPV se determina mediante el ciclo de PCR, en el cual la señal supera un umbral establecido previamente. Además,
el análisis extrae, amplifica y detecta un fragmento del gen de la beta globina humana como control interno para
evaluar el procesamiento, la extracción y la amplificación de la muestra.
REACTIVOS Y MATERIALES SUMINISTRADOS:
Cada BD Onclarity HPV Assay Reagent Pack (Paquete de reactivos para BD Onclarity HPV Assay) contiene:
Tubos BD Onclarity HPV G1 PCR, 2 x 96: cada tubo de PCR G1 contiene aproximadamente 32,5 pmol de
oligonucleótidos, 20 pmol de sondas de detección marcadas con fluorescencia, 80 nmol de dNTP y 0,52 unidades
de ADN polimerasa con estabilizantes y otros componentes de tampón.
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Tubos BD Onclarity HPV G2 PCR, 2 x 96: cada tubo PCR G2 contiene aproximadamente 42,5 pmol de
oligonucleótidos, 30 pmol de sondas de detección marcadas con fluorescencia, 80 nmol de dNTP y 0,52 unidades
de ADN polimerasa con estabilizantes y otros componentes de tampón.
Tubos BD Onclarity HPV G3 PCR, 2 x 96: cada tubo de PCR G3 contiene aproximadamente 42,5 pmol de
oligonucleótidos, 25 pmol de sondas de detección marcadas con fluorescencia, 80 nmol de dNTP y 0,52 unidades
de ADN polimerasa con estabilizantes y otros componentes de tampón.
NOTA: CADA BOLSA CONTIENE UNA BOLSA CON SECANTE.
Control Set for the BD Onclarity HPV Assay (Juego de controles para BD Onclarity HPV Assay): 24 BD Onclarity
HPV Positive Control Tubes (tubos de control positivo de HPV BD Onclarity) que contienen aproximadamente 14.430
copias de plásmidos linealizados HPV 16, 8.325 copias de plásmidos linealizados HPV 18, 8.418 copias de plásmidos
linealizados HPV 56 y 3.885 copias de un plásmido que contiene una secuencia de gen de la beta globina humana en
un ácido nucleico portador, y 24 BD Onclarity HPV Negative Control Tubes (tubos de control negativo de HPV BD
Onclarity) que contienen ácido nucleico portador únicamente. Las concentraciones del ácido nucleico portador y los
plásmidos se determina mediante espectrofotometría.
BD Onclarity HPV Liquid Based Cytology Specimen (LBC) Diluent Tubes (Tubos de diluyente para BD Onclarity HPV LBC):
400 tubos. Cada uno de ellos contiene aproximadamente 1,7 mL de tampón con sal, detergente y conservante.
BD FOX PCR Extraction Tubes (Tubos de extracción): 48 tiras de 8 tubos, cada uno de ellos con 10 mg
aproximadamente de óxido de hierro en una película soluble.
BD Viper PCR Extraction Reagent Trough with Piercing Tool (Cubeta de reactivo de extracción con herramienta de
perforación): cada cubeta de reactivo de extracción de 5 cavidades contiene aproximadamente 16,5 mL de ácido de
fijación, 72,5 mL de tampón de lavado, 25,4 mL de tampón de elución, 19,4 mL de tampón de neutralización con
conservante y 15,5 mL de solución de neutralización de residuos.
INSTRUMENTO, EQUIPO Y MATERIALES
Materiales suministrados: BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit, BD Viper LT Instrument, BD Viper LT
Instrument Plates, BD Viper LT Pipette Tips, BD Viper LT Solid Waste Liners, BD Viper LT System PCR Tube/Tray Kit,
BD Viper LT System PCR Accessory Kit (Kit de accesorios), BD Viper Pre-warm Heater, BD Viper LT Specimen Rack
(Gradilla de muestras), BD Viper Neutralization Pouches (Bolsas de neutralización), tubos de muestras y tapones para
usar en BD Viper System (modo de extracción), BD ProbeTec Chlamydia trachomatis/Neisseria gonorrhoeae (CT/GC)
Amplified DNA Assay Endocervical Specimen Collection and DRY TRANSPORT Kit.
Materiales necesarios pero no suministrados: Guantes de nitrilo, pipetas de desplazamiento, puntas resistentes a los
aerosoles de polipropileno para 0,5 ± 0,05 mL, agitador vórtex, hipoclorito sódico 0,5 % (v/v), hipoclorito sódico 1 % (v/v),
peróxido de hidrógeno 3 % (p/v), alcohol isopropílico, agua libre de nucleasas de grado para biología molecular.
Requisitos de conservación y manipulación: Los diluyentes BD Onclarity HPV LBC Diluent y BD Onclarity HPV Cervical
Brush Diluent se deben almacenar a 2 – 25 °C. Todos los demás reactivos pueden almacenarse a una temperatura
de 2 – 33 °C. Los juegos de reactivos sin abrir son estables hasta la fecha de caducidad. Una vez abierta una bolsa,
los tubos de PCR son estables durante 4 semanas si se cierran de manera apropiada o hasta la fecha de caducidad,
lo que suceda antes. No congelar.
ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
1. Para uso diagnóstico in vitro.
2. En las muestras clínicas puede haber microorganismos patógenos, como los virus de la hepatitis y el virus de la
inmunodeficiencia humana. Para la manipulación de todos los elementos contaminados con sangre u otros líquidos
corporales deben seguirse las “Precauciones estándar”4-7 y las directrices del centro. Para conocer las advertencias,
precauciones y notas adicionales específicas de BD Viper LT, consultar el Manual del usuario del sistema BD Viper LT.
Muestras:
3. Para las muestras de citología en líquido, utilice únicamente tubos de diluyente BD Onclarity HPV LBC.
4. Para muestras de cepillo cervical, utilice solo el BD Onclarity HPV Cervical Brush Collection Kit.
5. Para lograr un rendimiento óptimo del BD Onclarity HPV Assay es necesario realizar una recogida, una
manipulación y un transporte correctos de las muestras.
6. Para reducir hemorragias innecesarias, no gire el cepillo cervical más de lo necesario durante la recogida de muestras.
7. Cada muestra debe entregarse al laboratorio correctamente identificada mediante una etiqueta.
8. Al romper el vástago del cepillo cervical, tenga cuidado de evitar salpicaduras o derrames y de generar aerosoles.
Evite la contaminación del cabezal del cepillo cervical.
9. Durante la manipulación de las muestras, es preciso extremar las precauciones para evitar la contaminación
cruzada. Es preciso asegurarse de que los recipientes de muestras no entran en contacto unos con otros y de que
los materiales utilizados se desechan sin pasarlos por encima de otros recipientes abiertos. Si los guantes entran en
contacto con muestras, deben reemplazarse para evitar la contaminación cruzada.
10. Si se dispensa una cantidad excesiva o insuficiente de muestra de LBC en el tubo de diluyente BD Onclarity HPV
LBC, esto puede afectar al funcionamiento del análisis. Además, dispensar un volumen excesivo puede provocar
que el líquido se derrame sobre la superficie del sistema BD Viper LT, lo que a su vez puede causar contaminación.
11. Las muestras cervicales se deben recoger y analizar antes de la fecha de caducidad del tubo de diluyente BD
Onclarity HPV LBC o del tubo de diluyente BD Onclarity HPV Cervical Brush.
12. Utilizar únicamente puntas de pipeta de polipropileno resistentes a aerosoles para transferir muestras a los tubos
de diluyente BD Onclarity HPV LBC.
Análisis/reactivo:
13. Los controles positivos y negativos de BD Onclarity HPV se deben templar con 24 horas de antelación antes de
hidratarlos.
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14. En el sistema BD Viper LT, utilizar exclusivamente tubos de muestra y de control con tapón perforable. No quitar
los tapones perforables antes de poner en marcha el instrumento. Asegurarse de sustituir los tapones ya
perforados por nuevos tapones perforables antes de utilizar el instrumento.
15. No intercambiar ni mezclar reactivos de equipos que tengan números de lote diferentes.
16. No analizar el tubo de diluyente BD Onclarity HPV Cervical Brush si se recibe en el laboratorio sin el cepillo
correspondiente. De hacerlo, podría producirse un resultado falso negativo del análisis.
17. Utilizar exclusivamente las puntas de pipeta BD Viper LT tal como las suministra BD con el sistema BD Viper LT.
18. BD Viper PCR Extraction Reagent Trough with Piercing Tool
PELIGRO
H314 Provoca quemaduras graves y lesiones oculares graves. H302 Nocivo en caso de ingestión.
P260 No respirar el polvo/el humo/el gas/la niebla/los vapores/el aerosol. P280 Llevar guantes/prendas/gafas/
máscara de protección. P303/361/353 EN CASO DE CONTACTO CON LA PIEL (o el pelo): Quitarse inmediatamente
las prendas contaminadas. Aclararse la piel con agua/ducharse. P304/340 EN CASO DE INHALACIÓN: Transportar
a la víctima al exterior y mantenerla en reposo en una posición confortable para respirar. P405 Guardar bajo
llave. P501 Eliminar el contenido/el recipiente de conformidad con las normativas locales, regionales, nacionales
e internacionales.
19. Utilizar exclusivamente BD Viper Clear Plate Sealers (cierres herméticos transparentes de placas BD Viper LT) en
los tubos de PCR con BD Viper LT System.
20. Las bolsas de reactivos que contengan tubos de PCR sin utilizar, SE DEBEN volver a cerrar herméticamente después
de abrirlas. Es preciso verificar la presencia de un agente deshidratante antes de volver a cerrar herméticamente
las bolsas de reactivos.
21. Los tubos de PCR SE DEBEN sellar correctamente con BD Viper LT Clear Plate Sealers antes de sacar la placa de BD
Viper LT System. El cierre hermético garantiza una reacción cerrada para amplificación y detección y es necesario
para evitar la contaminación del instrumento y del área de trabajo con productos de amplificación. No retirar el
material de cierre hermético de los tubos de PCR en ningún momento.
22. Para evitar la contaminación del entorno de trabajo con productos de amplificación, deben utilizarse las bolsas de
desechos suministradas con el BD Viper LT System PCR Accessory Kit (Kit de accesorios para PCR de BD Viper LT
System) para desechar los tubos de PCR analizados. Antes de desechar las bolsas es preciso asegurarse de que están
correctamente cerradas.
23. Aunque no se requieren áreas de trabajo específicas, ya que el diseño del BD Viper LT reduce la posibilidad de
contaminación con productos de amplificación en el entorno de análisis, es preciso observar otras precauciones para
controlar la contaminación, especialmente para evitar la contaminación de las muestras durante su procesamiento.
24. Si los guantes entran en contacto con muestras o parecen estar húmedos, ES PRECISO SUSTITUIRLOS para evitar la
contaminación de otras muestras. Los guantes deben cambiarse antes de salir del área de trabajo y al entrar en ella.
25. En caso de contaminación, consulte las instrucciones de limpieza en el Manual del usuario de BD Viper LT System.
26. Póngase en contacto con el representante local de BD en caso de que se produzca una situación inusual, como
un derrame en el instrumento BD Viper LT o contaminación por ADN que no pueda eliminarse mediante los
procedimientos de limpieza.
RECOGIDA Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS
Las muestras del cuello uterino que se pueden analizar con BD Onclarity HPV Assay incluyen BD Onclarity HPV
Cervical Brush Collection Kit, BD SurePath Preservative Fluid (utilizando una alícuota que se retira antes o después de
procesar la prueba de Papanicolau BD SurePath) y PreservCyt Solution (utilizando una alícuota que se retira antes o
después de procesar la prueba de Papanicolau ThinPrep).
Para los envíos dentro de Estados Unidos e internacionales, las muestras deben etiquetarse en cumplimiento de la normativa
estatal, federal e internacional aplicable al transporte de muestras clínicas y agentes etiológicos/sustancias infecciosas.
Durante el transporte, deberán mantenerse las condiciones de tiempo y temperatura aplicables al almacenamiento.
RECOGIDA DE MUESTRAS DE CEPILLO CERVICAL
1. Insertar el BD Onclarity HPV Cervical Brush en el endocérvix hasta que solo las cerdas del extremo inferior queden
visibles en el orificio cervical externo. Girar lentamente de ¼ a ½ vuelta en un sentido. Para reducir hemorragias
innecesarias, no gire el cepillo más de lo necesario.
2. Quitar el tapón del tubo de diluyente BD Onclarity HPV Cervical Brush e introducir inmediatamente el cepillo en
la parte inferior del tubo.
3. Romper con cuidado el vástago por la línea indicada. Evitar salpicaduras del contenido.
4. Volver a cerrar con fuerza el tubo.
ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE DE MUESTRAS DE CEPILLO CERVICAL
Las muestras de cepillo cervical en tubos de diluyente BD Onclarity HPV Cervical Brush deben almacenarse y transportarse
al laboratorio o centro de análisis en el plazo de 30 días tras la recogida en caso de que se hayan mantenido a 2 – 30 °C, o en
el plazo de 30 días tras la recogida si se han mantenido congeladas a -20 °C. Nunca se deberá realizar el almacenamiento y el
transporte de las muestras después de la fecha de caducidad del tubo de diluyente para cepillo cervical.
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RECOGIDA DE MUESTRAS LBC
Las muestras de BD SurePath o PreservCyt deben recogerse con una escoba endocervical o una combinación de
cepillo y espátula, tal y como se describe en el correspondiente prospecto BD SurePath o PreservCyt. Una vez
recogidas, las muestras de BD SurePath o PreservCyt se pueden conservar y transportar en los frascos originales a
2 – 30 °C durante 30 días O 30 días si se congelan a -20 °C antes de la transferencia a los tubos de BD Onclarity HPV
LBC Specimen Diluent (tubos de dilución de muestras de BD Onclarity HPV LBC).
ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS LBC
Transferencia de la muestra a los tubos de diluyente BD Onclarity HPV LBC: antes o después de eliminar
una alícuota para procesar mediante las pruebas BD SurePath o ThinPrep.
Antes de procesar cualquier prueba de Papanicolau BD SurePath o ThinPrep, se debe transferir manualmente una parte
alícuota de 0,5 mL de la muestra BD SurePath o PreservCyt del vial original al tubo de dilución de muestras BD Onclarity
HPV LBC. Usar guantes para manipular el tubo de dilución de muestras BD Onclarity HPV LBC y el vial de muestras
BD SurePath o PreservCyt. Si los guantes entran en contacto con la muestra, cámbielos inmediatamente para evitar que
se contaminen otras muestras.
Transferencia de muestras BD SurePath antes o después de procesarlas para realizar la prueba BD SurePath
NOTA: Refer to the BD PrepStain™ Slide Processor or BD Totalys™ SlidePrep Product Insert for instructions on
removing an aliquot from the BD SurePath specimen vial prior to performing the BD SurePath liquid-based Pap test.
NOTA: procese una muestra cada vez.
1. Etiquete un tubo de diluyente BD Onclarity HPV LBC con los datos de identificación de la paciente.
2. Retire el tapón del tubo de diluyente BD Onclarity HPV LBC.
3. Para garantizar una mezcla homogénea, agite en vórtex el frasco de la muestra BD SurePath durante 10 – 20
segundos.
4. Utilizando una punta resistente a aerosoles, transfiera rápidamente 0,5 mL del frasco de la muestra al tubo de
diluyente BD Onclarity HPV LBC antes de que transcurra un minuto después de agitarla.
5. Deseche la punta de la pipeta.
NOTA: hay que utilizar una punta de pipeta distinta para cada muestra.
6. Ajuste bien el tapón en el tubo de diluyente BD Onclarity HPV LBC.
7. Invierta el tubo de diluyente BD Onclarity HPV LBC 3 – 4 veces para asegurarse de que la muestra y el diluyente se
mezclan bien.
Transferencia de muestras PreservCyt antes o después de procesarlas para realizar la prueba de
Papanicolaou ThinPrep
NOTA: en el Apéndice del Manual del operador del sistema ThinPrep 2000/3000 encontrará instrucciones para retirar
una parte alícuota del frasco de muestras PreservCyt antes de realizar la prueba ThinPrep.
NOTA: procese una muestra cada vez.
1. Etiquete un tubo de diluyente BD Onclarity HPV LBC con los datos de identificación de la paciente.
2. Retire el tapón del tubo de diluyente BD Onclarity HPV LBC.
3. Para garantizar una mezcla homogénea, agite en vórtex el frasco de la muestra PreservCyt a alta velocidad
durante 8 – 12 segundos.
4. Utilizando una punta resistente a aerosoles, transfiera inmediatamente 0,5 mL del frasco de la muestra al tubo de
diluyente BD Onclarity HPV LBC.
5. Deseche la punta de la pipeta.
NOTA: hay que utilizar una punta de pipeta distinta para cada muestra.
6. Ajuste bien el tapón en el tubo de diluyente BD Onclarity HPV LBC.
7. Invierta el tubo de diluyente BD Onclarity HPV LBC 3 – 4 veces para asegurarse de que la muestra y el diluyente se
mezclan bien.
Almacenamiento y transporte de muestras transferidas a los tubos de dilución de muestras BD HPV LBC
Después de la transferencia manual al tubo de diluyente BD Onclarity HPV LBC, la muestra diluida se puede almacenar a
2 – 30 °C durante hasta 15 días, o hasta 30 días si se almacena a -20 °C.
PROCEDIMIENTO DE PROCESAMIENTO PARA TODAS LAS MUESTRAS
NOTA: si las muestras estaban congeladas, es preciso verificar que están completamente descongeladas y mezcladas
por inversión antes de iniciar el procedimiento.
1. Con la ayuda del Tube Layout Report (Informe de disposición de los tubos), coloque las muestras en orden en la
gradilla de muestras BD Viper LT Specimen Rack y fije su posición.
2. Las muestras ya están listas para ser precalentadas.
3. Deben cambiarse los guantes antes de continuar para evitar la contaminación.
PREPARACIÓN DE LOS CONTROLES DE CALIDAD
1. Quite el tapón de un BD Onclarity HPV Negative Control y de un tubo de diluyente BD Onclarity HPV LBC.
2. Vierta la totalidad del contenido del tubo de diluyente BD Onclarity HPV LBC en el BD Onclarity HPV Negative
Control.
3. Vuelva a tapar el BD Onclarity HPV Negative Control rehidratado. Vuelva a tapar el tubo de diluyente
BD Onclarity HPV LBC vacío y deséchelo.
4. Quite el tapón de un BD Onclarity HPV Positive Control y de un tubo de diluyente BD Onclarity HPV LBC.
5. Vierta la totalidad del contenido del tubo de diluyente BD Onclarity HPV LBC en el BD Onclarity HPV Positive
Control.
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6. Vuelva a tapar el BD Onclarity HPV Positive Control rehidratado. Vuelva a tapar el tubo de diluyente
BD Onclarity HPV LBC vacío y deséchelo.
7. Con la ayuda del Tube Layout Report (Informe de disposición de los tubos), coloque el BD Onclarity HPV Negative
Control rehidratado en la posición correspondiente de la gradilla de muestras BD Viper LT Specimen Rack.
8. Con la ayuda del informe de disposición de los tubos, coloque el BD Onclarity HPV Positive Control rehidratado
en la posición correspondiente de la gradilla de muestras BD Viper LT Specimen Rack.
9. Ahora, los controles están listos para ser precalentados junto a las muestras.
NOTA: Los controles se deben precalentar durante las 24 horas de la hidratación.
PROCEDIMIENTO DE PRECALENTAMIENTO
NOTA: el procedimiento de precalentamiento debe aplicarse una sola vez a todas las muestras para garantizar la
homogeneidad de la matriz de las muestras antes de cargarlas en el sistema BD Viper LT. El hecho de no precalentar
las muestras puede afectar negativamente al rendimiento de BD Onclarity HPV Assay o de BD Viper LT System.
NOTA: las muestras refrigeradas o congeladas deben templarse totalmente a temperatura ambiente antes de
proceder a precalentarlas.
1. Inserte la gradilla de muestras BD Viper LT Specimen Rack en el bloque térmico de precalentamiento BD
Pre-warm Heater y seleccione el protocolo de precalentamiento de BD Onclarity HPV Assay en el instrumento
BD Viper LT.
2.El BD Pre-warm Heater precalentará automáticamente las muestras y los controles conforme al protocolo de
precalentamiento de BD Onclarity HPV Assay.
3. Una vez que se haya completado el protocolo de precalentamiento de BD Onclarity HPV Assay, quite la gradilla
del bloque térmico y cárguela en el instrumento BD Viper LT.
4. Consulte la sección Procedimiento de análisis para analizar las muestras y los controles.
5. Una vez precalentadas, las muestras pueden conservarse durante hasta 7 días a 2 – 30 °C o durante hasta 30 días
a –20 °C sin necesidad de precalentarlas de nuevo antes del análisis en BD Viper LT System.
6. Después del precalentamiento, los controles se pueden conservar durante hasta 24 h a 2 – 30 °C sin necesidad de
ningún precalentamiento adicional en el BD Viper LT System.
PROCEDIMIENTO DE ANÁLISIS
Consulte el manual del usuario de BD Viper LT System para obtener instrucciones específicas sobre la utilización y el
mantenimiento de los componentes del sistema. Se comprobó que las condiciones ambientales óptimas para el análisis
de HPV 18 - 27 °C con una humedad relativa del 20 - 85 %.
CONTROL DE CALIDAD
El control de calidad debe llevarse a cabo de conformidad con la normativa local y/o nacional aplicable, los requisitos
de los organismos de acreditación y los procedimientos estándar de control de calidad del laboratorio. Se recomienda
consultar las instrucciones pertinentes del CLSI y la normativa de la CLIA para obtener información acerca de las
prácticas adecuadas de control de calidad.
El Control Set for the BD Onclarity HPV Assay se suministra por separado. En cada serie de análisis y para cada nuevo
número de lote de kit de reactivos debe incluirse un control positivo y un control negativo. Los controles deben colocarse
según se indica en el manual del usuario del BD Viper LT System. El control positivo HPV únicamente un posible fallo
sustancial del reactivo. El control negativo de HPV controla la contaminación por reactivos y la contaminación ambiental.
Además, es posible analizar controles adicionales según las directrices o los requisitos establecidos por la normativa local
y/o nacional aplicable o por los organismos de acreditación competentes.
Información general de control de calidad de BD Viper LT System:
La ubicación de los tubos de PCR se muestra en el monitor LCD, en una pantalla que refleja la disposición de las placas
mediante un código de colores. El símbolo más (+) en un tubo indica que se trata de una muestra de control de calidad
positiva. A su vez, el símbolo menos (-) en un tubo indica que se trata de una muestra de control de calidad negativa.
Debe registrarse un par para control de calidad por cada número de lote de kit de reactivos. Si el par de controles de
calidad no se ha registrado correctamente, aparece una cuadro de mensaje que impide al usuario guardar la gradilla
y proseguir con el procesamiento mientras no se haya completado este paso. Es posible registrar tubos adicionales
(opcionales) para control de calidad. Estos tubos se analizan como muestras normales y no afectan al estado Pasó/Fallido
de la serie. Consulte las instrucciones en el Manual del usuario de BD Viper LT System.
NOTA: Los controles de HPV BD Onclarity deben hidratarse manualmente antes de cargarlos en la gradilla para
muestras BD Viper LT Specimen Rack.
Interpretación de los resultados de los controles de calidad:
Los controles BD Onclarity HPV Positive Control y BD Onclarity HPV Negative Control deben dar un resultado de
análisis positivo y negativo respectivamente para poder obtener resultados del paciente. Si los controles no presentan
el comportamiento previsto, la serie de análisis se considera no válida y el instrumento no genera un informe de
los resultados del paciente. Si uno de los dos controles no ofrece los resultados previstos, repita la serie completa
utilizando un juego de controles, tubos de extracción, una cubeta de reactivo de extracción y tubos de PCR nuevos.
Si el problema no se resuelve, póngase en contacto con su representante local de BD para obtener más información.
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Tabla 1: Interpretación de los resultados de los controles de calidad
Tipo de control
BD Onclarity HPV Positive Control
Símbolo del Tube Result Report
(Informe de resultados de los
tubos)
OK
esultado del control de calidad
(QC)
QC correcto
BD Onclarity HPV Positive Control
QC incorrecto
BD Onclarity HPV Positive Control
QC incorrecto
BD Onclarity HPV Positive Control
QC incorrecto
BD Onclarity HPV Negative Control
OK
QC correcto
BD Onclarity HPV Negative Control
QC incorrecto
BD Onclarity HPV Negative Control
QC incorrecto
BD Onclarity HPV Negative Control
QC incorrecto
Consulte la sección Interpretación de los resultados para obtener una descripción de los diversos símbolos del Tube
Result Report (Informe de resultados de los tubos).
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS DEL ANÁLISIS
BD Onclarity HPV Assay utiliza la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real para detectar la presencia
del papilomavirus humano (HPV) en muestras clínicas. El software de BD Viper LT realiza todos los cálculos
automáticamente. La presencia o ausencia del ADN del HPV clínicamente relevante se determina mediante el ciclo
de PCR (Ct), en el cual la señal supera un umbral establecido previamente. El análisis extrae, amplifica y detecta un
fragmento del gen de la beta globina humana como control interno para evaluar el procesamiento, la extracción y la
amplificación de la muestra, así como para indicar la presencia de inhibidores de la PCR. A su vez, si la señal específica
de HPV es mayor que un umbral de ciclo, el algoritmo utiliza el control interno para interpretar el resultado. Si la señal
específica de HPV es menor o igual que un umbral de ciclo, el algoritmo ignora el control interno.
Para muestras con HPV, aparece un resultado “HR” (combinación de todos los genotipos) en el Tube Results Report
(Informe de resultados de los tubos). Un símbolo positivo en esta columna indica que uno o más de los genotipos
de HPV que el análisis es capaz de detectar da un resultado positivo. La columna “GT” se utiliza para informar de
resultados de genotipos que no están disponibles en su región. Estos resultados no se pueden adquirir.
Los genotipos específicos y los genotipos combinados aparecen en columnas. Si se han comprado los resultados de un
genotipo, los resultados se indican en el informe tal como se describe a continuación. Si hay algún resultado de algún
genotipo que no se haya configurado para compra automática, estos resultados aparecen enmascarados con un icono
de “llave”.
El instrumento se puede configurar para comprar/informar de genotipos específicos después de completar la serie.
Consulte las instrucciones para autorizar el informe de genotipado automático en el Manual del usuario de BD Viper
LT System.
Si los controles del análisis no ofrecen los resultados previstos, no se obtienen resultados del paciente. Consulte la
sección Control de calidad para conocer los valores de control previstos. Los resultados comunicados se determinan de
la siguiente manera.
Tabla 2: Interpretación de los resultados de las pruebas de genotipo de HPV para HPV de alto riesgo con
BD Onclarity HPV Assay
Resultado de HPV de
alto riesgo
HR
HR
Interpretación
Resultado
Positivo para tipos de HPV de alto riesgo
Positivo HPV AR
Negativo para tipos de HPV de alto riesgo
Negativo HPV AR
No es posible detectar ADN de HPV, si lo hay
Fallo en el control interno
No es posible detectar ADN de HPV, si lo hay
Fallo de transferencia de extracción
No es posible detectar ADN de HPV, si lo hay
Fallo de nivel de líquido
No es posible detectar ADN de HPV, si lo hay
Error
69
Tabla 3: Interpretación de los resultados de las pruebas de genotipo de HPV específico con BD Onclarity
HPV Assay
Resultado del genotipo
de HPV
16
16
18
18
45
45
P1
P1
31
31
P2
P2
51
51
52
52
P3
P3
GT
GT
--
Interpretación
Resultado
Negativo para HPV tipo 16
Positivo para HPV tipo 16
Negativo para HPV tipo 16
Negativo para HPV tipo 16
Negativo para HPV tipo 18
Positivo para HPV tipo 18
Negativo para HPV tipo 18
Negativo para HPV tipo 18
Negativo para HPV tipo 45
Positivo para HPV tipo 45
Negativo para HPV tipo 45
Negativo para HPV tipo 45
Positivo para HPV tipos 33 y/o 58
Positivo para HPV tipo 33 y/o 58
Negativo para HPV tipos 33 y/o 58
Negativo para HPV tipo 33 y/o 58
Negativo para HPV tipo 31
Positivo para HPV tipo 31
Negativo para HPV tipo 31
Negativo para HPV tipo 31
Positivo para HPV tipos 56, 59 y/o 66
Positivo para HPV tipo 56, 59 y/o 66
Negativo para HPV tipos 56, 59 y/o 66
Negativo para HPV tipo 56, 59 y/o 66
Negativo para HPV tipo 51
Positivo para HPV tipo 51
Negativo para HPV tipo 51
Negativo para HPV tipo 51
Negativo para HPV tipo 52
Positivo para HPV tipo 52
Negativo para HPV tipo 52
Negativo para HPV tipo 52
Positivo para HPV tipos 35, 39 y/o 68
Positivo para HPV tipo 35, 39 y/o 68
Negativo para HPV tipos 35, 39 y/o 68
Negativo para HPV tipo 35, 39 y/o 68
Resultados positivos de genotipo de HPV no
disponibles en su región
Resultados negativos de genotipo de HPV no
disponibles en su región
El resultado del genotipo de HPV está
disponible para la compra
Resultados positivos de genotipo de
HPV restringido
Resultados negativos de genotipo de
HPV restringido
El resultado del genotipo de HPV no está
disponible para la compra
El resultado del genotipo está bloqueado
Resultado negativo para, fallo del control
interno, fallo del nivel de líquido o fallo
en la transferencia de extracción
Control de la presencia de contaminación por ADN
Al menos una vez al mes, debe realizarse el siguiente procedimiento de análisis para verificar que tanto el área de
trabajo como las superficies de los equipos no están contaminadas por ADN. El control ambiental es esencial para
detectar la posible contaminación antes de que se produzca un problema.
1. En cada zona que se vaya a analizar, utilice una torunda de recogida limpia de BD ProbeTec Chlamydia trachomatis/
Neisseria gonorrhoeae (CT/GC) Amplified DNA Assay Endocervical Specimen Collection and DRY TRANSPORT kit.
2. Vierta un poco de agua libre de nucleasas de grado para biología molecular en un recipiente limpio pequeño.
3. Sumerja la torunda en el agua libre de nucleasa de grado para biología molecular y frote primero la zona con un
movimiento amplio de barrido.
4. Quite el tapón de un tubo de diluyente BD Onclarity HPV LBC e inserte la torunda en el diluyente. Mezcle
girando la torunda en el tubo de diluyente BD Onclarity HPV durante 5 – 10 s.
5. Exprima la torunda en la pared interior del tubo de forma que el líquido discurra hacia la parte inferior del tubo.
6. Extraiga con cuidado la torunda del tubo de diluyente BD Onclarity HPV para evitar salpicaduras. Desechar la torunda.
7. Vuelva a tapar firmemente el tubo de diluyente BD Onclarity HPV LBC con el tapón perforable negro.
8. Repita el proceso para cada área que desee analizar.
9. Una vez que haya recogido y escurrido todas las torundas, procéselas siguiendo sucesivamente los procedimientos
de precalentamiento y de análisis.
Consulte el Manual del usuario de BD Viper LT System para obtener más información sobre el control ambiental
y los procedimientos de limpieza. Si un acontecimiento de contaminación no desaparece, póngase en contacto con el
representante local de BD para obtener información adicional.
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
1. El rendimiento óptimo del análisis requiere una recogida y una preparación apropiadas de las muestras. Consulte
la sección “Recogida y transporte de las muestras” de este prospecto.
2. Un resultado negativo del análisis no excluye la posibilidad de infección, ya que los resultados del análisis pueden
verse afectados por una recogida inadecuada de la muestra, errores técnicos, la mezcla de muestras o el número
de microorganismos presentes en la muestra, que puede ser inferior al límite de sensibilidad del análisis.
3. BD Onclarity HPV Assay proporciona resultados cualitativos.
70
4. El uso de los análisis BD Onclarity HPV Assay está limitado a personal debidamente formado en el procedimiento
de análisis y el uso de BD Viper LT System.
CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO
Se recogieron muestras de BD Onclarity HPV Cervical Brush, BD SurePath o PreservCyt de 836 mujeres que cumplían
con el protocolo y que se remitieron para seguimiento debido a pruebas de Papanicolau anómalas o infección por HPV,
o bien mujeres que acudieron a una clínica para realizar controles rutinarios en dos centros clínicos geográficamente
distintos situados en Europa. De cada sujeto participante se recogieron dos muestras en el orden siguiente: una muestra
BD SurePath (centro A) o una muestra PreservCyt (centro B) y una muestra BD Onclarity HPV Cervical Brush (transportada
en un tubo de diluyente BD Onclarity HPV Cervical Brush). De cada vial de citología recogido, se introdujo una alícuota
de 0,5 mL en un tubo de diluyente BD Onclarity HPV LBC. Para la mayoría de las muestras se dispuso de resultados
de citología, ADN de HPV DNA (digene Hybrid Capture 2 (hc2) High-Risk HPV DNA Test) y Roche LINEAR ARRAY HPV
Genotyping Test (RLA). De la mayoría de sujetos que acudieron a una clínica de alto riesgo, se dispuso de resultados de
histología.
Cada centro también aportó muestras residuales (BD SurePath o PreservCyt) con resultados asociados de citología,
resultados de ADN de HPV (digene Hybrid Capture 2 High-Risk HPV DNA Test), resultados de Roche LINEAR ARRAY HPV
Genotyping Test y, en caso que fuesen pertinentes, resultados de histología. De cada muestra participante, se introdujo
una alícuota de 0,5 mL en un tubo de diluyente BD Onclarity HPV LBC. Se incorporaron 510 muestras que cumplían con
los requisitos, con resultados de histología disponibles para 234 mujeres.
Todas las muestras se analizaron en BD Viper LT System conforme a las instrucciones del prospecto del envase del
análisis y del manual del usuario. Para cada tipo de medio, se calcularon la sensibilidad clínica y la especificidad de la
detección de la enfermedad, que se definió como (1) neoplasia intraepitelial cervical (CIN2) o resultado histológico
mayor o (2) neoplasia intraepitelial cervical (CIN3) o resultado histológico mayor. El análisis de los datos finales incluye
resultados de BD Onclarity HPV Assay de 472 muestras BD SurePath, 361 muestras PreservCyt y 515 muestras en total
de BD Onclarity HPV Cervical Brush: 247 muestras de BD Onclarity HPV Cervical Brush (en BD Onclarity HPV Cervical
Brush Diluent) del centro A y 268 muestras de BD Onclarity HPV Cervical Brush (en BD Onclarity HPV Cervical Brush
Diluent) del centro B. Las estimaciones de rendimiento para la detección de enfermedad cervical de alto grado mediante
los análisis BD Onclarity HPV Assay y hc2 Assay se presentan en las Tablas 4 y 5 para medios BD SurePath, en las Tablas
8 y 9 para medios PreservCyt y en las Tablas 12 y 13 para las muestras de BD Onclarity HPV Cervical Brush.
Los resultados de BD Onclarity HPV Assay también se compararon con resultados de ADN de HPV obtenidos mediante
los análisis Hybrid Capture 2 High-Risk HPV DNA Test y Roche LINEAR ARRAY HPV Genotyping Test (comparador
compuesto). Un resultado positivo mediante los análisis hc2 y RLA (alto riesgo) se define como resultado positivo del
comparador compuesto, un resultado negativo de ambos análisis hc2 y RLA (alto riesgo) se define como negativo del
comparador compuesto, y si los dos análisis divergen (o no se disponen de resultados para ambos análisis), el resultado
del comparador compuesto se considera no resuelto. Para cada tipo de medio se calculó el porcentaje de acuerdo
positivo, negativo y global frente al comparador compuesto. El análisis de los datos finales incluye resultados de
BD Onclarity HPV Assay y del comparador compuesto (independientemente del estado de la histología) procedentes de
670 muestras BD SurePath y 674 muestras PreservCyt. (Tablas 6 y 10)
El riesgo absoluto de enfermedad (CIN2+ y CIN3+) en la población de estudio para cada tipo de medio se calculó para
cada genotipo o grupo de genotipos en el BD Onclarity HPV Assay. Los riesgos absolutos se calculan cuando el genotipo
(o grupo de genotipos) está presente, solo o en presencia de otros genotipos. Para cada tipo de medio se muestra una
tabla de riesgo absoluto. Cada medio solo se recogió en un centro. Por consiguiente, se pueden esperar variaciones en
las tasas de positividad por HPV y por genotipo debido a variaciones en la población. (Tablas 7 y 11)
Rendimiento clínico en muestras de BD SurePath
Tabla 4: Rendimiento de BD Onclarity HPV Assay con medio BD SurePath comparado con los resultados
histológicos (CIN2+)
BD Onclarity HPV Assay
Estimación
hc2 HPV DNA Test
Intervalo de confianza 95%
Estimación
Intervalo de confianza 95%
Sensibilidad
97,9 % (190/194)
(94,8 %, 99,2 %)
98,4 % (190/193)
(95,5 %, 99,5 %)
Especificidad
22,7 % (63/278)
(18,1 %, 27,9 %)
17,0 % (47/277)
(13,0 %, 21,8 %)
Tabla 5: Rendimiento de BD Onclarity HPV Assay con medio BD SurePath comparado con los resultados
histológicos (CIN3+)
BD Onclarity HPV Assay
hc2 HPV DNA Test
Estimación
Intervalo de confianza 95%
Estimación
Intervalo de confianza 95%
Sensibilidad
97,7% (126/129)
(93,4 %, 99,2 %)
98,4 % (126/128)
(94,5 %, 99,6 %)
Especificidad
18,7% (64/343)
(14,9 %, 23,1 %)
14,0 % (48/342)
(10,8 %, 18,1 %)
71
Tabla 6: Rendimiento de BD Onclarity HPV Assay con medio BD SurePath comparado con el comparador
compuesto
Resultado del comparador
compuesto
BD
Onclarity
HPV Assay
Positivo
Negativo
No
resuelto*
Total
Positivo
532
6
27
565
Negativo
8
50
47
105
Total
540
56
74
670
Concordancia
porcentual
positiva
(Intervalo de
confianza del
95 %)
Concordancia
porcentual
negativa
(Intervalo de
confianza del
95 %)
Concordancia
porcentual
global
(Intervalo de
confianza del
95 %)
98,5 %
(97,1 %, 99,2 %)
89,3 %
(78,5 %, 95,0 %)
97,7 %
(96,1 %, 98,6 %)
*Los resultados de hc2 y RLA no coinciden o bien no están disponibles ambos análisis.
Tabla 7: Riesgo absoluto de CIN2+ y CIN3+ para los genotipos de BD Onclarity HPV Assay en medio
BD SurePath
Genotipo
de BD
Onclarity
HPV Assay
Infección debida a
uno o más genotipos
Infección debida a
un solo genotipo o
grupo de genotipos
Infección debida a
uno o más genotipos
Infección debida a
un solo genotipo o
grupo de genotipos
Riesgo
absoluto
CIN2+
Intervalo de
confianza
95 %
Riesgo Intervalo de Riesgo Intervalo de Riesgo Intervalo de
absoluto
confianza absoluto confianza absoluto confianza
95 %
95 %
95 %
CIN2+
CIN3+
CIN3+
HPV16
63,9 %
(99/155)
(56,1 %,
71,0 %)
64,9 %
(48/74)
(53,5 %,
74,8 %)
43,9 %
(68/155)
(36,3 %,
51,7 %)
47,3 %
(35/74)
(36,3 %,
58,5 %)
HPV18
50,0 %
(24/48)
(36,4 %,
63,6 %)
50,0 %
(7/14)
(26,8 %,
73,2 %)
43,8 %
(21/48)
(30,7 %,
57,7 %)
42,9 %
(6/14)
(21,4 %,
67,4 %)
HPV45
46,7 %
(21/45)
(32,9 %,
60,9 %)
23,5 %
(4/17)
(9,6 %,
47,3 %)
31,1 %
(14/45)
(19,5 %,
45,7 %)
17,6 %
(3/17)
(6,2 %,
41,0 %)
HPV33/58
49,4 %
(42/85)
(39,0 %,
59,8 %)
47,1 %
(16/34)
(31,5 %,
63,3 %)
31,8 %
(27/85)
(22,8 %,
42,3 %)
23,5 %
(8/34)
(12,4 %,
40,0 %)
HPV31
64,2 %
(52/81)
(53,3 %,
73,8 %)
72,7 %
(16/22)
(51,8 %,
86,8 %)
40,7 %
(33/81)
(30,7 %,
51,6 %)
50,0 %
(11/22)
(30,7 %,
69,3 %)
HPV56/59/66
25,5 %
(25/98)
(17,9 %,
35,0 %)
0,0 %
(0/29)
(0,0 %,
11,7 %)
13,3 %
(13/98)
(7,9 %,
21,4 %)
0,0 %
(0/29)
(0,0 %,
11,7 %)
HPV51
41,7 %
(15/36)
(27,1 %,
57,8 %)
25,0 %
(2/8)
(7,1 %,
59,1 %)
25,0 %
(9/36)
(13,8 %,
41,1 %)
12,5 %
(1/8)
(2,2 %,
47,1 %)
HPV52
35,1 %
(20/57)
(24,0 %,
48,1 %)
33,3 %
(4/12)
(13,8 %,
60,9 %)
19,3 %
(11/57)
(11,1 %,
31,3 %)
16,7 %
(2/12)
(4,7 %,
44,8 %)
HPV35/39/68
36,0 %
(27/75)
(26,1 %,
47,3 %)
33,3 %
(7/21)
(17,2 %,
54,6 %)
17,3 %
(13/75)
(10,4 %,
27,4 %)
19,0 %
(4/21)
(7,7 %,
40,0 %)
Rendimiento clínico en muestras PreservCyt
Tabla 8: Rendimiento de BD Onclarity HPV Assay con medio PreservCyt comparado con los resultados
histológicos (CIN2+)
BD Onclarity HPV Assay
hc2 HPV DNA Test
Estimación
Intervalo de confianza 95 %
Estimación
Intervalo de confianza 95 %
Sensibilidad
94,7 % (160/169)
(90,2 %, 97,2 %)
97,0 % (160/165)
(93,1 %, 98,7 %)
Especificidad
50,5 % (97/192)
(43,5 %, 57,5 %)
40,8 % (75/184)
(33,9 %, 48,0 %)
Tabla 9: Rendimiento de BD Onclarity HPV Assay con medio PreservCyt comparado con los resultados
histológicos (CIN3+)
BD Onclarity HPV Assay
hc2 HPV DNA Test
Estimación
Intervalo de confianza 95 %
Estimación
Intervalo de confianza 95 %
Sensibilidad
94,4 % (85/90)
(87,6 %, 97,6 %)
97,7 % (85/87)
(92,0 %, 99,4 %)
Especificidad
37,3 % (101/271)
(31,7 %, 43,2 %)
29,8 % (78/262)
(24,6 %, 35,6 %)
72
Tabla 10: Rendimiento de BD Onclarity HPV Assay con medio PreservCyt comparado con el comparador
compuesto
Resultado del comparador
compuesto
BD
Onclarity
HPV Assay
Positivo
Negativo
No
resuelto*
Total
Positivo
246
5
18
269
Negativo
10
366
29
405
Total
256
371
47
674
Concordancia
porcentual
positiva
(Intervalo de
confianza del
95 %)
Concordancia
porcentual
negativa
(Intervalo de
confianza del
95 %)
Concordancia
porcentual
global
(Intervalo de
confianza del
95 %)
96,1 %
(93,0 %, 97,9 %)
98,7 %
(96,9 %, 99,4 %)
97,6 %
(96,1 %, 98,5 %)
* Los resultados de hc2 y RLA no coinciden o bien no están disponibles ambos análisis.
Tabla 11: Riesgo absoluto de CIN2+ y CIN3+ para los genotipos de BD Onclarity HPV Assay en medio
PreservCyt
Genotipo
de BD
Onclarity
HPV Assay
HPV 16
HPV 18
HPV 45
HPV 33/58
HPV 31
HPV
56/59/66
HPV 51
HPV 52
HPV
35/39/68
Infección debida a
uno o más genotipos
Infección debida a
un solo genotipo o
grupo de genotipos
Infección debida a
uno o más genotipos
Infección debida a
un solo genotipo o
grupo de genotipos
Riesgo Intervalo de Riesgo Intervalo de Riesgo Intervalo de Riesgo Intervalo de
absoluto confianza
absoluto
absoluto confianza
confianza absoluto
confianza
95 %
95 %
95 %
95 %
CIN2+
CIN2+
CIN3+
CIN3+
77,1 %
(84/109)
50,0 %
(12/24)
50,0 %
(6/12)
70,0 %
(28/40)
67,7 %
(42/62)
34,0 %
(18/53)
48,0 %
(12/25)
73,9 %
(17/23)
38,5 %
(10/26)
(68,3 %,
84,0 %)
(31,4 %,
68,6 %)
(25,4 %,
74,6 %)
(54,6 %,
81,9 %)
(55,4 %,
78,0 %)
(22,7 %,
47,4 %)
(30,0 %,
66,5 %)
(53,5 %,
87,5 %)
(22,4 %,
57,5 %)
81,4 %
(57/70)
45,5 %
(5/11)
25,0 %
(1/4)
75,0 %
(15/20)
71,0 %
(22/31)
11,1 %
(2/18)
27,3 %
(3/11)
85,7 %
(6/7)
40,0 %
(2/5)
(70,8 %,
88,8 %)
(21,3 %,
72,0 %)
(4,6 %,
69,9 %)
(53,1 %,
88,8 %)
(53,4 %,
83,9 %)
(3,1 %,
32,8 %)
(9,7 %,
56,6 %)
(48,7 %,
97,4 %)
(11,8 %,
76,9 %)
44,0 %
(48/109)
29,2 %
(7/24)
16,7 %
(2/12)
35,0 %
(14/40)
30,6 %
(19/62)
9,4 %
(5/53)
16,0 %
(4/25)
26,1 %
(6/23)
15,4 %
(4/26)
(35,1 %,
53,4 %)
(14,9 %,
49,2 %)
(4,7 %,
44,8 %)
(22,1 %,
50,5 %)
(20,6 %,
43,0 %)
(4,1 %,
20,3 %)
(6,4 %,
34,7 %)
(12,5 %,
46,5 %)
(6,1 %,
33,5 %)
50,0 %
(35/70)
18,2 %
(2/11)
0,0
(0/4)
50,0 %
(10/20)
41,9 %
(13/31)
0,0 %
(0/18)
18,2 %
(2/11)
42,9 %
(3/7)
20,0 %
(1/5)
(38,6 %,
61,4 %)
(5,1 %,
47,7 %)
(0,0 %,
49,0 %)
(29,9 %,
70,1 %)
(26,4 %,
59,2 %)
(0,0 %,
17,6 %)
(5,1 %,
47,7 %)
(15,8 %,
75,0 %)
(3,6 %,
62,4 %)
Rendimiento en muestras de BD Onclarity HPV Cervical Brush
Tabla 12: Rendimiento de BD Onclarity HPV Assay con BD Onclarity HPV Cervical Brush comparado con
resultados de histología (CIN2+)
BD Onclarity HPV Assay
Centro
A
B
hc2 HPV DNA Test
Estimación
Intervalo de
confianza 95 %
Estimación
Intervalo de
confianza 95 %
Sensibilidad
97,2 % (104/107)
(92,1 %, 99,0 %)
99,1 % (106/107)
(94,9 %, 99,8 %)
Especificidad
17,9 % (25/140)
(12,4 %, 25,0 %)
21,4 % (30/140)
(15,4 %, 28,9 %)
Sensibilidad
100,0 % (121/121)
(96,9 %, 100,0 %)
97,5 % (116/119)
(92,8 %, 99,1 %)
Especificidad
37,4 % (55/147)
(30,0 %, 45,5 %)
43,0 % (61/142)
(35,1 %, 51,2 %)
73
Tabla 13: Rendimiento de BD Onclarity HPV Assay con BD Onclarity HPV Cervical Brush comparado con
resultados de histología (CIN3+)
BD Onclarity HPV Assay
Estimación
Intervalo de
confianza 95 %
Sensibilidad
97,3 % (72/74)
Especificidad
15,0 % (26/173)
Sensibilidad
Especificidad
Centro
A
B
hc2 HPV DNA Test
Estimación
Intervalo de
confianza 95 %
(90,7 %, 99,3 %)
98,6 % (73/74)
(92,7 %, 99,8 %)
(10,5 %, 21,1 %)
17,3 % (30/173)
(12,4 %, 23,7 %)
100,0 % (60/60)
(94,0 %, 100,0 %)
98,3 % (57/58)
(90,9 %, 99,7 %)
26,4 % (55/208)
(20,9 %, 32,8 %)
31,0 % (63/203)
(25,1 %, 37,7 %)
Estudios analíticos
Sensibilidad analítica en el valor límite clínico:
El límite de detección (LdD) en el valor límite clínico de HPV se determinó para BD Onclarity HPV Assay utilizando
estirpes celulares positivas por HPV: SiHa (HPV 16), HeLa (HPV 18) y MS751 (HPV 45) y ADN de plásmidos clonados
con las secuencias de los genotipos de HPV siguientes: HPV 31, 33, 35, 39, 51, 52, 56, 58, 59, 66 y 68 en BD SurePath
Preservative Fluid, PreservCyt Solution y BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent con una estirpe celular negativa
por HPV (C33A). Las estirpes celulares con HPV se analizaron individualmente, mientras que los plásmidos de HPV se
analizaron colectivamente en tres grupos: 1) HPV 31, 33, 51, 52 y 59; 2) HPV 56, 58, 68 y 3) HPV 35 y 66. Se analizaron
como mínimo cuarenta y cinco réplicas de cada uno de los seis niveles diana para los plásmidos de HPV con un mínimo
de tres lotes de reactivos y un mínimo de tres equipos BD Viper LT System. El LdD es el nivel de ADN de HPV en la
muestra sin diluir que da resultados positivos por encima del valor límite clínico por lo menos un 95 % de las veces.
El valor máximo de LdD para cada uno de los genotipos de HPV y medios se describe en la Tabla 14.
Tabla 14: Sensibilidad analítica
Diana
Medio BD SurePath
(Intervalo de confianza
95 %)
Medio PreservCyt
(Intervalo de confianza
95 %)
BD Onclarity HPV Cervical
Brush Diluent
(Intervalo de confianza
95 %)
SiHa (HPV 16) células/mL
1584 (1276 – 1962)
1835 (1426 – 2358)
137 (131 – 144)
HeLa (HPV 18) células/mL
915 (739 – 1131)
1786 (1175 – 2715)
51 (46 – 56)
MS751 (HPV 45) células/mL
3793 (2944 – 4888)
5425 (4167 – 7066)
305 (284 – 343)
HPV 31 copias/mL
3652 (3159 – 3868)
4118 (3898 – 4228)
692 (650 – 817)
HPV 33 copias/mL
7326 (6578 – 8932)
8272 (7946 – 8743)
1376 (1272 – 1451)
HPV 35 copias/mL
6820 (6477 – 7282)
7282 (6895 – 7674)
1552 (1317 – 1780)
HPV 39 copias/mL
7894 (7115 – 8193)
8272 (7810 – 9398)
1531 (1419 – 1685)
HPV 51 copias/mL
6697 (5786 – 7097)
5909 (5553 – 6824)
1229 (1155 – 1353)
HPV 52 copias/mL
3582 (3414 – 4184)
4184 (3740 – 4761)
833 (744 – 934)
HPV 56 copias/mL
4976 (4140 – 5698)
4774 (4479 – 5997)
836 (737 – 911)
HPV 58 copias/mL
10094 (9403 – 11180)
11488 (8989 – 12360)
2990 (2656 – 7819)
HPV 59 copias/mL
4400 (4145 – 5069)
4374 (4105 – 5482)
772 (722 – 899)
HPV 66 copias/mL
3793 (3621 – 4030)
4462 (4008 – 4844)
701 (646 – 767)
HPV 68 copias/mL
10415 (9799 – 11642)
10481 (9816 – 12082)
2079 (1995 – 2125)
Reactividad cruzada:
Se utilizó un panel de bacterias, levaduras y virus cultivados junto con ADN de plásmido con secuencias de diana
de HPV de alto riesgo y bajo riesgo con el fin de evaluar la especificidad analítica de BD Onclarity HPV Assay en
BD Viper LT System. Cada candidato a reacciones cruzadas se analizó individualmente en BD SurePath Preservative
Fluid y PreservCyt Solution con una estirpe celular negativa por HPV (C33A). Los microorganismos se describen en las
Tablas 15 y 16. BD Onclarity HPV Assay no sufrió reacciones cruzadas con ninguno de los microorganismos probados.
74
Tabla 15: Microorganismos analizados para especificidad analítica
Bacterias*
Virus**
Actinomyces israelii
Adenovirus, tipo 5
Atopobium vaginae
EBV-1, cepa B95-8
Bacteroides fragilis
HCMV. Cepa AD169
Bacteroides ureolyticus
VIH-1
Bifidobacterium adolescentis
VHS1
Bifidobacterium brevi
VHS2
Bifidobacterium longum ssp. longum
HPV de alto riesgo***
Chlamydia trachomatis
HPV 16
Clostridium perfringens
HPV 18
Corynebacterium genitalium
HPV 31
Enterobacter cloacae ssp. cloacae
HPV 33
Enterococcus faecalis
HPV 35
Enterococcus faecium
HPV 39
Escherichia coli
HPV 45
Fusobacterium nucleatum ssp. nucleatum
HPV 51
Gardnerella vaginalis
HPV 52
Klebsiella pneumonia ssp. ozaenae
HPV 56
Lactobacillus acidophilus
HPV 58
Mycobacterium smegmatis
HPV 59
Mycoplasma genitalium
HPV 66
Neisseria gonorrhoeae
HPV 68
Peptostreptococcus anaerobius
Prevotella bivia
Prevotella disiens
Proteus mirabilis
Proteus vulgaris
Providencia stuartii
Pseudomonas aeruginosa
Staphylococcus aureus
Staphylococcus epidermidis
Streptococcus agalactiae
Streptococcus pyogenes
Ureaplasma urealyticum
Levaduras/Protozoos****
Candida albicans
Trichomonas vaginalis
* Bacterias probadas aproximadamente a 1,0 x 107 UFC/mL excepto para las siguientes: Chlamydia trachomatis
(1,0 x 107 CE/mL), Mycobacterium smegmatis (2,5 x 106 UFC/mL) y Ureaplasma urealyticum (8,0 x 106 UFC/mL).
** Virus probados a 1,0 x 106 VP/mL.
*** ADN de plásmido de HPV de alto riesgo probado a 1,0 x 106 copias/mL.
**** Levadura (Candida albicans) probada a aproximadamente 1,0 x 107 UFC/mL; Protozoos (Trichomonas vaginalis)
probados a aproximadamente 1,4 x 106 UFC/mL.
Tabla 16: Plásmidos de HPV de bajo riesgo probados para determinar la especificidad analítica
HPV 6
HPV 69
HPV 11
HPV 70
HPV 26
HPV 73
HPV 30
HPV 82
HPV 34
HPV 97
HPV 53
HPV c85
HPV 67
*ADN de plásmido de HPV de bajo riesgo probado a 1,0 x 106 copias/mL.
75
Sustancias causantes de interferencias:
Las posibilidades de interferencia en el BD Onclarity HPV Assay en BD Viper LT System se determinaron frente a
sustancias exógenas y endógenas que pueden estar presentes en muestras clínicas de cuello uterino. Muestras elaboradas
negativas por HPV y positivas por HPV (inoculadas al mismo tiempo con células SiHa, HeLa y MS751 a 3 x LdD) se
analizaron en presencia o ausencia de cada una de las sustancias con posibilidades de interferencias. Las sustancias
empleadas en estos estudios se describen en la Tabla 17. Las concentraciones representan el nivel máximo de la sustancia
que no dio lugar a ninguna interferencia en BD Onclarity HPV Assay.
Tabla 17: Sustancias con posibilidades de interferencia
Sustancia con posibilidades
de interferencia
BD Onclarity HPV
Cervical Brush Diluent
Concentración
probada
Lubricante vaginal KY
Medio BD SurePath
Medio PreservCyt
Concentración
probada
Concentración
probada
10 % (p/v)
6 % (p/v)
10 % (p/v)
3 % (p/v)
10 % (p/v)
10 % (p/v)
10 % (p/v)
10 % (p/v)
10 % (p/v)
Gel anticonceptivo Conceptrol
1 % (p/v)
10 % (p/v)
10 % (p/v)
Monistat 3*
2 % (p/v)
2 % (p/v)
1,8 % (p/v)
Clotrimazol 7
10 % (p/v)
10 % (p/v)
10 % (p/v)
Vagistat-1 Tioconazol
Película anticonceptiva vaginal
VCF
Espuma anticonceptiva vaginal
VCF
2 % (p/v)
2 % (p/v)
2 % (p/v)
Crema vaginal con
clindamicina
9 % (p/v)
10 % (p/v)
10 % (p/v)
Ducha Summer’s Eve
10 % (v/v)
10 % (v/v)
10 % (v/v)
Crema Zovirax (aciclovir)
10 % (p/v)
8 % (p/v)
10 % (p/v)
Vandazole Gel
(gel vaginal con metronidazol
0,75 %)
10 % (p/v)
10 % (p/v)
10 % (p/v)
Desodorante Summer’s Eve
2 % (p/v)
3 % (p/v)
2 % (p/v)
Mucina bovina
10 % (v/v)
10 % (v/v)
10 % (v/v)
Progesterona
20 ng/mL
20 ng/mL
20 ng/mL
Estradiol
1,2 ng/mL
1,2 ng/mL
1,2 ng/mL
Sangre completa
3 % (v/v)
5 % (v/v)
5 % (v/v)
Leucocitos
1x106
1x106
células/mL
células/mL
1x106 células/mL
Semen
10 % (v/v)
10 % (v/v)
10 % (v/v)
Preparación de lavado con
ácido acético**
5 % (v/v)
Sangre + preparación de
lavado con ácido acético
5 % sangre (v/v),
2,5 % preparación de lavado
con ácido acético (v/v)
** Las concentraciones mayores que las indicadas dieron lugar a fallos de nivel de líquido durante la extracción en
BD Viper LT System.
** La preparación de lavado con ácido acético consiste en 1 parte de ácido acético glacial: 9 partes de solución de CytoLyt.
Interferencia entre dianas en competencia:
Las posibilidades de inhibición de la detección de HPV debido a la presencia de una diana con un nivel mayor y otra
con niveles bajos durante una infección mixta se evaluaron en el BD Onclarity HPV Assay. Se analizaron células SiHa,
HeLa y MS751 individual o colectivamente a 3 x LdD en presencia o ausencia de dianas HPV en competencia a razón de
1,0 x 106 copias/mL en BD SurePath Preservative Fluid, PreservCyt Solution y BD Onclarity HPV Cervical Brush Diluent
con una estirpe celular negativa por HPV (C33A) (Tabla 18).
76
Tabla 18: Interferencia entre dianas en competencia
Dianas celulares
HPV individuales a
3 x LdD
Plásmidos HPV a
1 x 106 copias/mL
Detección de diana
celular HPV en presencia o
ausencia de genotipos en
competencia (plásmidos
HPV)
SiHa (HPV 16)
HPV 18 + HPV 45
Sí
HeLa (HPV 18)
HPV 16 + HPV 45
Sí
HPV 45 (MS751)
HPV 16 + HPV 18
Sí
Genotipos G1 con dianas
G2 co-amplificadas
SiHa + HeLa + MS751
HPV 31 + HPV 33 +
HPV 56 + HPV 58 +
HPV 59 + HPV 66
Sí
Genotipos G1 con dianas
G3 co-amplificadas
SiHa + HeLa + MS751
HPV 35 + HPV 39 +
HPV 51+ HPV 52 +
HPV 68
Sí
Tipo de tubo de ensayo
HPV
Genotipos G1 con dianas
G1 co-amplificadas
Reproducibilidad:
La reproducibilidad de BD Onclarity HPV Assay se evaluó en el equipo BD Viper LT utilizando un panel de cuatro miembros que
contenía muestras negativas, positivas altas, positivas bajas y positivas moderadas. Los miembros positivos del panel consistían
en células SiHa, HeLa y MS751 inoculadas conjuntamente en conjuntos de muestras clínicas BD SurePath y BD Onclarity HPV
Cervical Brush Diluent negativas por HPV que contenían una estirpe de células negativas por HPV (C33A). El panel se analizó con
una distribución de tres lotes de reactivos y tres instrumentos a lo largo de 12 días. Los datos se resumen en la Tabla 19.
77
Tabla 19: Resumen de los datos de reproducibilidad de BD Onclarity HPV Assay en BD Viper LT System
Medio
Estirpe
celular
(genotipo)
SurePath
SiHa
(HPV 16)
HeLa
(HPV 18)
MS-751
(HPV 45)
Nivel
del
panel
Concentración
células/
mL
Neg
0
Neg
alto
Pos
bajo
Pos
mod
1582
Neg
0
Neg
alto
Pos
bajo
Pos
mod
Cervical Brush Diluent
HeLa
(HPV 18)
102
914
2742
0
Neg
alto
Pos
bajo
Pos
mod
3793
395
11378
0
Neg
alto
Pos
bajo
Pos
mod
205
Neg
0
Neg
alto
Pos
bajo
Pos
mod
Neg
MS-751
(HPV 45)
4746
Neg
Neg
SiHa
(HPV 16)
342
Neg
alto
Pos
bajo
Pos
mod
32
615
13
76
228
0
59
457
1371
% correcto
Intervalo de
confianza
95 %
100 %
(216/216)
97,69 %
(211/216)
100 %
(216/216)
100 %
(216/216)
100 %
(216/216)
98,61 %
(213/216)
99,54 %
(215/216)
100 %
(216/216)
100 %
(216/216)
100 %
(216/216)
100 %
(216/216)
99,54 %
(215/216)
100 %
(214/214)
100 %
(218/218)
94,91 %
(205/216)
100 %
(216/216)
100 %
(214/214)
99,07 %
(214/216)
99,08 %
(216/218)
99,54 %
(215/216)
100 %
(214/214)
100 %
(216/216)
99,54 %
(215/216)
100 %
(218/218)
(98,25 % –
100 %)
(94,7 % –
99,01 %)
(100 % –
98,25 %)
(100 % –
98,25 %)
(98,25 % –
100 %)
(96 % –
99,53 %)
(97,42 % –
99,92 %)
(100 % –
98,25 %)
(98,25 % –
100 %)
(98,25 % –
100 %)
(100 % –
98,25 %)
(97,42 % –
99,92 %)
(98,24 % –
100 %)
(98,27 % –
100 %)
(91,11 % –
97,13 %)
(98,25 % –
100 %)
(98,24 % –
100 %)
(96,69 % –
99,75 %)
(96,72 % –
99,75 %)
(97,42 % –
99,92 %)
(98,24 % –
100 %)
(98,25 % –
100 %)
(97,42 % –
99,92 %)
(98,27 % –
100 %)
Entre series
Dentro de
la serie
Ct
medio
DE
% CV
DE
% CV
DE
% CV
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
35,28
0,16
0,46
0,54
1,52
0,57
1,62
32,31
0,16
0,50
0,22
0,69
0,30
0,92
31,07
0,22
0,69
0,22
0,71
0,35
1,11
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
35,89
0,24
0,68
0,75
2,09
0,85
2,37
32,70
0,16
0,50
0,30
0,92
0,37
1,14
30,68
0,13
0,43
0,22
0,72
0,30
0,98
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
35,77
0,00
0,00
0,52
1,45
0,55
1,53
32,71
0,20
0,60
0,26
0,80
0,36
1,10
31,33
0,18
0,57
0,35
1,10
0,41
1,31
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
36,29
0,09
0,25
0,59
1,63
0,62
1,71
33,63
0,26
0,78
0,33
0,97
0,43
1,27
31,80
0,16
0,51
0,18
0,56
0,25
0,79
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
35,69
0,10
0,29
0,78
2,18
0,80
2,23
33,34
0,15
0,44
0,25
0,76
0,30
0,91
32,07
0,24
0,73
0,25
0,78
0,37
1,16
NA
NA
NA
NA
NA
NA
NA
36,54
0,22
0,61
0,62
1,68
0,66
1,81
33,22
0,16
0,48
0,25
0,75
0,32
0,95
31,74
0,14
0,43
0,21
0,67
0,27
0,84
Total
Contaminación cruzada:
Se llevó a cabo un estudio con el objetivo de evaluar el riesgo de que se produjera un resultado falso positivo en una misma
serie (contaminación cruzada intraserie) o en una serie posterior (contaminación por arrastre entre series) en BD Viper LT
System. Se realizó una serie al día durante cinco días en cada uno de los tres instrumentos, con un total de 675 réplicas de
análisis. Cada serie consistió en muestras de BD SurePath Preservative Fluid o PreservCyt Solution con una estirpe celular
negativa por HPV (C33A) con y sin células SiHa inoculadas a razón de 1,0 x 105 células/mL organizadas en un patrón de tablero
de ajedrez alternado. La tasa de contaminación global con BD SurePath Preservative Fluid y PreservCyt Solution fue del
0,00 %.
Estabilidad de muestras puras (en vial):
Se realizaron estudios analíticos para respaldar las exigencias de almacenamiento de muestras de cuello uterino puras.
Se inocularon muestras de BD SurePath Preservative Fluid, PreservCyt Solution y BD Onclarity HPV Cervical Brush
Diluent que contenían una estirpe celular negativa por HPV (C33A), con células SiHa a una concentración 3 x LdD
y se almacenaron a 2 – 8 °C, 30 °C y -20 °C para determinar varios puntos en el tiempo. En cada uno de los momentos
definidos, las muestras se quitaron del lugar de almacenamiento y se analizaron con BD Onclarity HPV Assay en
BD Viper LT System. Se generaron 24 réplicas de cada conjunto de condiciones (tipo de muestra, temperatura
y duración de almacenamiento). Se consiguió la estabilidad durante 30 días a 2 – 30 °C y -20 °C.
Estabilidad de muestras diluidas:
Se realizaron estudios analíticos para respaldar las exigencias de almacenamiento de muestras de cuello uterino diluidas. Se inocularon
muestras de BD SurePath Preservative Fluid y PreservCyt Solution que contenían una estirpe celular negativa por HPV (C33A), con
células SiHa a una concentración 3 x LdD y, a continuación, se almacenaron a 2 – 8 °C, 30 °C y -20 °C para determinar varios puntos en
78
el tiempo. En cada uno de los momentos definidos, las muestras se quitaron del lugar de almacenamiento y se analizaron con
BD Onclarity HPV Assay en BD Viper LT System. Se generaron 24 réplicas de cada conjunto de condiciones (tipo de muestra,
temperatura y duración de almacenamiento). Se consiguió la estabilidad durante 15 días a 2 – 30 °C y durante 30 días a -20 °C.
Estabilidad de las muestras tras la fase de precalentamiento:
Se realizaron estudios analíticos para respaldar las exigencias de almacenamiento de muestras de cuello uterino después
del precalentamiento. Se inocularon muestras de BD SurePath Preservative Fluid, PreservCyt Solution y BD Onclarity
HPV Cervical Brush Diluent que contenían una estirpe celular negativa por HPV (C33A), con células a razón de 3 x LdD, se
diluyeron con BD Onclarity HPV LBC Diluent y, a continuación, se precalentaron con el bloque térmico de precalentamiento
BD Viper LT Pre-warm Heater. Las muestras procesadas se almacenaron a 2 – 8 °C, 30 °C y -20 °C para determinar varios
puntos en el tiempo. En cada uno de los momentos definidos, las muestras se quitaron del lugar de almacenamiento y se
analizaron con BD Onclarity HPV Assay en BD Viper LT System. Se generaron 24 réplicas de cada conjunto de condiciones
(tipo de muestra, temperatura y duración de almacenamiento). Se consiguió la estabilidad durante 7 días a 2 – 30 °C y
durante 30 días a -20 °C.
INTERPRETACIÓN DE LAS TABLAS
Símbolos y abreviaturas
Símbolos
(+) (-) #
%
positivo
negativo
número
porcentaje
Abreviaturas
ASCUS
Células escamosas atípicas de relevancia indeterminada
UFC
Unidades formadoras de colonias
IC Intervalo de confianza
CIN
Neoplasia intraepitelial de cuello uterino
CV Coeficiente de variación
HPV Papilomavirus humano
AR
Alto riesgo
LBC
Citología en líquido
n
Número
NA
No aplicable
NEGNegativo
NPA Concordancia porcentual negativa
PBS
Solución salina tamponada con fosfato
PCR
Reacción en cadena de la polimerasa
POSPositivo
PPA Concordancia porcentual positiva
QC
Control de calidad
DE Desviación estándar
DISPONIBILIDAD
También están disponibles los productos BD Onclarity y BD Viper siguientes para usar con BD Viper:
Nº de cat.
442946 441993 442841 441992 441354 442840
441991 442957 443430 440476
441996 441995 442950 442967 442839 Descripción
BD Onclarity HPV Assay Reagent Pack, 192 análisis
Control Set for the BD Onclarity HPV Assay, 24 tubos positivos y 24 tubos negativos
BD Viper PCR Extraction Reagent Trough with Piercing Tool, 12 cubetas de reactivo de extracción
BD FOX PCR Extraction Tubes, 384 tubos
BD Viper System Neutralization Pouch, 12 bolsas
BD Onclarity HPV Liquid Based Cytology Specimen (LBC) Diluent Tubes, 400
BD Onclarity HPV Assay Cervical Brush Collection Kit, 100
BD Viper LT System PCR Tube/Tray Kit
Tarjeta de claves para BD Viper LT System
BD ProbeTec Chlamydia trachomatis/Neisseria gonorrhoeae (CT/GC) Amplified DNA Assay Endocervical
Specimen Collection and DRY TRANSPORT Kit
BD Viper LT Pipette Tips, 3840
BD Viper LT Solid Waste Liners, 80
BD Pre-warm Heater
BD Viper LT System PCR Accessory kit
BD Viper LT System
REFERENCIAS: Ver “References” en el texto en inglés.
79


Manufacturer / Производител / Výrobce / Fabrikant / Hersteller / Κατασκευαστής / Fabricante / Tootja / Fabricant / Proizvođać
/ Gyártó / Fabbricante / Атқарушы / Gamintojas / Tilvirker / Producent / Producător / Производитель / Výrobca / Proizvođač /
Tillverkare / Üretici / Виробник
Use by / Използвайте до / Spotřebujte do / Brug før / Verwendbar bis / Χρήση έως / Usar antes de / Kasutada enne
/ Date de péremption / Upotrijebiti do / Felhasználhatóság dátuma / Usare entro / Дейін пайдалануға / Naudokite iki
/ Houdbaar tot / Brukes for / Stosować do / Prazo de validade / A se utiliza până la / Использовать до / Použite do /
Upotrebiti do / Använd före / Son kullanma tarihi / Використати до\line
YYYY-MM-DD / YYYY-MM (MM = end of month)
ГГГГ-ММ-ДД / ГГГГ-ММ (ММ = края на месеца)
RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = konec měsíce)
ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutning af måned)
JJJJ-MM-TT / JJJJ-MM (MM = Monatsende)
ΕΕΕΕ-MM-HH / ΕΕΕΕ-MM (MM = τέλος του μήνα)
AAAA-MM-DD / AAAA-MM (MM = fin del mes)
AAAA-KK-PP / AAAA-KK (KK = kuu lõpp)
AAAA-MM-JJ / AAAA-MM (MM = fin du mois)
GGGG-MM-DD / GGGG-MM (MM = kraj mjeseca)
ÉÉÉÉ-HH-NN / ÉÉÉÉ-HH (HH = hónap utolsó napja)
AAAA-MM-GG / AAAA-MM (MM = fine mese)
ЖЖЖЖ-АА-КК / ЖЖЖЖ-АА / (АА = айдың соңы)
MMMM-MM-DD / MMMM-MM (MM = mėnesio pabaiga)
JJJJ-MM-DD / JJJJ-MM (MM = einde maand)
ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutten av måneden)
RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = koniec miesiąca)
AAAA-MM-DD / AAAA-MM (MM = fim do mês)
AAAA-LL-ZZ / AAAA-LL (LL = sfârşitul lunii)
ГГГГ-ММ-ДД / ГГГГ-ММ (ММ = конец месяца)
RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = koniec mesiaca)
GGGG-MM-DD / GGGG-MM (MM = kraj meseca)
ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutet av månaden)
YYYY-AA-GG / YYYY-AA (AA = ayın sonu)
РРРР-MM-ДД / РРРР-MM (MM = кінець місяця)

Catalog number / Каталожен номер / Katalogové číslo / Katalognummer / Αριθμός καταλόγου / Número de catálogo /
Katalooginumber / Numéro catalogue / Kataloški broj / Katalógusszám / Numero di catalogo / Каталог нөмірі / Katalogo
numeris / Catalogus nummer / Numer katalogowy / Număr de catalog / Номер по каталогу / Katalógové číslo / Kataloški broj /
Katalog numarası / Номер за каталогом

Authorized Representative in the European Community / Оторизиран представител в Европейската общност /
Autorizovaný zástupce pro Evropském společenství / Autoriseret repræsentant i De Europæiske Fællesskaber / Autorisierter
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autorizado en la Comunidad Europea / Volitatud esindaja Euroopa Nõukogus / Représentant autorisé pour la Communauté
européenne / Autorizuirani predstavnik u Europskoj uniji / Meghatalmazott képviselő az Európai Közösségben /
Rappresentante autorizzato nella Comunità Europea / Европа қауымдастығындағы уәкілетті өкіл / Įgaliotasis atstovas
Europos Bendrijoje / Bevoegde vertegenwoordiger in de Europese Gemeenschap / Autorisert representant i EU / Autoryzowane
przedstawicielstwo we Wspólnocie Europejskiej / Representante autorizado na Comunidade Europeia / Reprezentantul autorizat
pentru Comunitatea Europeană / Уполномоченный представитель в Европейском сообществе / Autorizovaný zástupca v
Európskom spoločenstve / Autorizovano predstavništvo u Evropskoj uniji / Auktoriserad representant i Europeiska gemenskapen /
Avrupa Topluluğu Yetkili Temsilcisi / Уповноважений представник у країнах ЄС


In Vitro Diagnostic Medical Device / Медицински уред за диагностика ин витро / Lékařské zařízení určené pro
diagnostiku in vitro / In vitro diagnostisk medicinsk anordning / Medizinisches In-vitro-Diagnostikum / In vitro διαγνωστική
ιατρική συσκευή / Dispositivo médico para diagnóstico in vitro / In vitro diagnostika meditsiiniaparatuur / Dispositif médical
de diagnostic in vitro / Medicinska pomagala za In Vitro Dijagnostiku / In vitro diagnosztikai orvosi eszköz / Dispositivo
medicale per diagnostica in vitro / Жасанды жағдайда жүргізетін медициналық диагностика аспабы / In vitro diagnostikos
prietaisas / Medisch hulpmiddel voor in-vitro diagnostiek / In vitro diagnostisk medisinsk utstyr / Urządzenie medyczne
do diagnostyki in vitro / Dispositivo médico para diagnóstico in vitro / Dispozitiv medical pentru diagnostic in vitro /
Медицинский прибор для диагностики in vitro / Medicínska pomôcka na diagnostiku in vitro / Medicinski uređaj za in vitro
dijagnostiku / Medicinteknisk produkt för in vitro-diagnostik / İn Vitro Diyagnostik Tıbbi Cihaz / Медичний пристрій для
діагностики in vitro
Temperature limitation / Температурни ограничения / Teplotní omezení / Temperaturbegrænsning /
Temperaturbegrenzung / Περιορισμοί θερμοκρασίας / Limitación de temperatura / Temperatuuri piirang / Limites de
température / Dozvoljena temperatura / Hőmérsékleti határ / Limiti di temperatura / Температураны шектеу / Laikymo
temperatūra / Temperatuurlimiet / Temperaturbegrensning / Ograniczenie temperatury / Limites de temperatura / Limite de
temperatură / Ограничение температуры / Ohraničenie teploty / Ograničenje temperature / Temperaturgräns / Sıcaklık
sınırlaması / Обмеження температури

Batch Code (Lot) / Код на партидата / Kód (číslo) šarže / Batch-kode (lot) / Batch-Code (Charge) / Κωδικός παρτίδας
(παρτίδα) / Código de lote (lote) / Partii kood / Numéro de lot / Lot (kod) / Tétel száma (Lot) / Codice batch (lotto) /
Топтама коды / Partijos numeris (LOT) / Lot nummer / Batch-kode (parti) / Kod partii (seria) / Código do lote / Cod de
serie (Lot) / Код партии (лот) / Kód série (šarža) / Kod serije / Partinummer (Lot) / Parti Kodu (Lot) / Код партії

Contains sufficient for <n> tests / Съдържанието е достатъчно за <n> теста / Dostatečné množství pro <n> testů / Indeholder
tilstrækkeligt til <n> tests / Ausreichend für <n> Tests / Περιέχει επαρκή ποσότητα για <n> εξετάσεις / Contenido suficiente
para <n> pruebas / Küllaldane <n> testide jaoks / Contenu suffisant pour <n> tests / Sadržaj za <n> testova / <n> teszthez
elegendő / Contenuto sufficiente per <n> test / <п> тесттері үшін жеткілікті / Pakankamas kiekis atlikti <n> testų / Inhoud
voldoende voor "n" testen / Innholder tilstrekkelig til <n> tester / Zawiera ilość wystarczającą do <n> testów / Conteúdo suficiente
para <n> testes / Conţinut suficient pentru <n> teste / Достаточно для <n> тестов(а) / Obsah vystačí na <n> testov / Sadržaj
dovoljan za <n> testova / Innehåller tillräckligt för <n> analyser / <n> test için yeterli malzeme içerir / Вистачить для аналізів: <n>
80

Peel / Обелете / Otevřete zde / Åbn / Abziehen / Αποκολλήστε / Desprender / Koorida / Décoller / Otvoriti skini / Húzza
le / Staccare / Ұстіңгі қабатын алып таста / Plėšti čia / Schillen / Trekk av / Oderwać / Destacar / Se dezlipeşte /
Отклеить / Odtrhnite / Oljuštiti / Dra isär / Ayırma / Відклеїти

Consult Instructions for Use / Направете справка в инструкциите за употреба / Prostudujte pokyny k použití / Se
brugsanvisningen / Gebrauchsanweisung beachten / Συμβουλευτείτε τις οδηγίες χρήσης / Consultar las instrucciones
de uso / Lugeda kasutusjuhendit / Consulter la notice d'emploi / Koristi upute za upotrebu / Olvassa el a használati
utasítást / Consultare le istruzioni per l’uso / Пайдалану нұсқаулығымен танысып алыңыз / Skaitykite naudojimo
instrukcijas / Raadpleeg de gebruiksaanwijzing / Se i bruksanvisningen / Zobacz instrukcja użytkowania / Consultar as
instruções de utilização / Consultaţi instrucţiunile de utilizare / См. руководство по эксплуатации / Pozri Pokyny na
používanie / Pogledajte uputstvo za upotrebu / Se bruksanvisningen / Kullanım Talimatları’na başvurun / Див. інструкції з
використання
control / Положителен контрол / Pozitivní kontrola / Positiv kontrol / Positive Kontrolle / Θετικός μάρτυρας /
 Positive
Control positivo / Positiivne kontroll / Contrôle positif / Pozitivna kontrola / Pozitív kontroll / Controllo positivo / Оң бақылау /
Teigiama kontrolė / Positieve controle / Kontrola dodatnia / Controlo positivo / Control pozitiv / Положительный контроль /
Pozitif kontrol / Позитивний контроль




Negative control / Отрицателен контрол / Negativní kontrola / Negativ kontrol / Negative Kontrolle / Αρνητικός μάρτυρας / Control
negativo / Negatiivne kontroll / Contrôle négatif / Negativna kontrola / Negatív kontroll / Controllo negativo / Негативтік
бақылау / Neigiama kontrolė / Negatieve controle / Kontrola ujemna / Controlo negativo / Control negativ / Отрицательный
контроль / Negatif kontrol / Негативний контроль
Do not use if package damaged / Не използвайте, ако опаковката е повредена / Nepoužívejte, je-li obal poškozený /
Må ikke anvendes hvis emballagen er beskadiget / Inhal beschädigter Packungnicht verwenden / Μη χρησιμοποιείτε
εάν η συσκευασία έχει υποστεί ζημιά. / No usar si el paquete está dañado / Mitte kasutada, kui pakend on kahjustatud /
Ne pas l’utiliser si l’emballage est endommagé / Ne koristiti ako je oštećeno pakiranje / Ne használja, ha a csomagolás
sérült / Non usare se la confezione è danneggiata / Егер пакет бұзылған болса, пайдаланба / Jei pakuotė pažeista,
nenaudoti / Niet gebruiken indien de verpakking beschadigd is / Må ikke brukes hvis pakke er skadet / Nie używać,
jeśli opakowanie jest uszkodzone / Não usar se a embalagem estiver danificada / A nu se folosi dacă pachetul este deteriorat /
Не использовать при повреждении упаковки / Nepoužívajte, ak je obal poškodený / Ne koristite ako je pakovanje
oštećeno / Använd ej om förpackningen är skadad / Ambalaj hasar görmüşse kullanmayın / Не використовувати за
пошкодженої упаковки
Collection date / Дата на събиране / Datum odběru / Opsamlingsdato / Entnahmedatum / Ημερομηνία συλλογής /
Fecha de recogida / Kogumiskuupäev / Date de prélèvement / Dani prikupljanja / Mintavétel dátuma / Data di raccolta /
Жинаған тізбекүні / Paėmimo data / Verzameldatum / Dato prøvetaking / Data pobrania / Data de colheita / Data
colectării / Дата сбора / Dátum odberu / Datum prikupljanja / Uppsamlingsdatum / Toplama tarihi / Дата забору
Patient ID number / ИД номер на пациента / ID pacienta / Patientens ID-nummer / Patienten-ID / Αριθμός
αναγνώρισης ασθενούς / Número de ID del paciente / Patsiendi ID / No d'identification du patient / Identifikacijski
broj pacijenta / Beteg azonosító száma / Numero ID paziente / Пациенттің идентификациялық нөмірі / Paciento
identifikavimo numeris / Identificatienummer van de patiënt / Pasientens ID-nummer / Numer ID pacjenta / Número
da ID do doente / Număr ID pacient / Идентификационный номер пациента / Identifikačné číslo pacienta / ID broj
pacijenta / Patientnummer / Hasta kimlik numarası / Ідентифікатор пацієнта
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