Esigenze nutrizionali dei BML Esigenze nutrizionali di Oenococcus oeni Esigenze in azoto di Oenococcus oeni Nutrizione nei vini bianchi : Opti’ML BLANC Documento confidenziale per uso interno. La diffusione non è consentita senza l’autorizzazione scritta di Lallemand Inc. Esigenze nutrizionali di O.oeni Zuccheri Azoto Vitamine É necessario meno di 1g/L di glucosio In grado di usare : glucosio, fruttosio, arabinosio, trealosio .... alcuni polisaccaridi che O.oeni idrolizza Solo la forma organica: aminoacidi, peptidi. NO SALI DI AMMONIO Tiamina (B1), riboflavina (B2), acido nicotinico (B3), acido pantotenico (B5), Biotina (B8), acido folico (B9)... Sali & Minerali Mg, Mn, K, Na ... Documento confidenziale per uso interno. La diffusione non è consentita senza l’autorizzazione scritta di Lallemand Inc. Alcune pratiche enologiche che influenzano il contenuto di azoto • • • • • Varietà Maturazione delle uve Fertilizzazione azotata Chiarifica del mosto Scelta del ceppo di lievito: necessità azotata, velocità di autolisi • Pratiche post-fermentazione: chiarifica, filtrazione. Documento confidenziale per uso interno. La diffusione non è consentita senza l’autorizzazione scritta di Lallemand Inc. Nutrienti nel vino Zuccheri • Anche se gli esosi alla fine della FA sono molto bassi, le fonti di carbonio non sono mai limitanti (altre fonti disponibili: monosaccaridi, disaccaridi, polisaccaridi) Vitamine Sali & Minerali Azoto • Tutte le vitamine del groppo B sono presenti nel vino. Perciò, la mancanza di vitamine non è mai sospettata come causa della mancata crescita dei batteri. • Il vino è anche ricco di molti minerali che provengono dal suolo. Quindi la mancanza di minerali non sembra una causa in caso di FML difficili. Comunque,pochi dati sono disponibili riguardo le esigenze di minerali dei BML: • L’azoto è un fattore chiave nella nutrizione dei BML! Documento confidenziale per uso interno. La diffusione non è consentita senza l’autorizzazione scritta di Lallemand Inc. Esigenze nutrizionali dei BML Esigenze nutrizionali di Oenococcus oeni Esigenze in azoto di Oenococcus oeni Nutrizione nei vini bianchi : Opti’ML BLANC Documento confidenziale per uso interno. La diffusione non è consentita senza l’autorizzazione scritta di Lallemand Inc. Oenococcus oeni e aminoacidi Le esigenze in aminoacidi sono state determinate per 2 ceppi di MBR® usando la tecnica della singola omissione (tutti gli AA erano presenti nella soluzione di crescita tranne quello di cui si voleva verificare l’importanza) R1105 Ceppo SOUCHE di batterio A 120 100 60 r e Se G lu Ph l Ty r Va g ys C et Ar M As p Le u is Tr p Ile H Th r G ly n au cu Tyr Val Met Phe Iso Trp Ser Glu His Leu Thr Arg Asp Gly Cys 0 Pro 0 Lys 20 Ala 20 Ly s 40 a 40 80 o 60 Pr 80 Al % delta DO témoin 100 aucun % delta DO témoin R1101 Ceppo diSOUCHE batterio B 120 aa omis aa omis 8 a.a. essenziali 10 a.a. necessari • AA essenziali: crescita <20% se mancante • AA necessari: crescita compresa tra il 20 e l’80% se mancante • AA indifferenti: la crescita dei batteri non cambia se mancano nel mezzo di coltura 12 a.a. essenziali 4 a.a. necessari 2 a.a. indifferenti Remize F, Gaudin A, Kong Y, Guzzo J, Alexandre H, Krieger S, Guilloux-Benatier M. Oenococcus oeni preference for peptides: qualitative and quantitative analysis of nitrogen assimilation. Arch Microbiol. 185 (2006):459-469. Documento confidenziale per uso interno. La diffusione non è consentita senza l’autorizzazione scritta di Lallemand Inc. E per quanto riguarda i peptidi nel vino? • I peptidi rappresentano la maggior quantità dell’azoto totale nel vino, ma hanno sempre ricevuto una scarsa attenzione rispetto ad altri composti a causa della loro grande diversità e della difficoltà delle tecniche coinvolte nell’isolamento nel vino. (Feuillat et al. 1998) • Uno studio focalizzato sull’azoto legato nei vini spumanti ha indicato che questi peptidi derivano prevalentemente dal lievito (Moreno-Arribas et al. 1998) Documento confidenziale per uso interno. La diffusione non è consentita senza l’autorizzazione scritta di Lallemand Inc. Che cosa si conosce riguardo ad O.oeni e i peptidi? • É stata dimostrata la produzione di proteasi da parte di O.oeni (Manca de Nandra et al. 1997; Farias et al. 2000) • Nel genoma di ceppi di O.oeni sequenziati sono stati identificati dei geni putativi per il sistema proteolitico (Klaenhammer et al., 2002, Mills et al 2005) • É stato dimostrato che O.oeni può usare alcuni dipeptidi al posto di amino acidi liberi (Aredes Fernandez et al, 2004) • Alcune frazioni di peptidi sono risultate essere più stimolatorie degli aminoacidi per la crescita dei batteri (Remize et al. 2006) Documento confidenziale per uso interno. La diffusione non è consentita senza l’autorizzazione scritta di Lallemand Inc. Esigenze nutrizionali dei BML Esigenze nutrizionali di Oenococcus oeni Esigenze in azoto di Oenococcus oeni Nutrizione nei vini bianchi : Opti’ML BLANC Documento confidenziale per uso interno. La diffusione non è consentita senza l’autorizzazione scritta di Lallemand Inc. Impatto positivo dell’addizione di specifiche formulazioni di peptidi sulla crescita dei BML Bacteria growth - Chardonnay 2010 - Inoculated with selected strain pH=3.2; alcohol=12.9%; Tot SO2<25mg/L ; free SO2<5mg/L 1,20E+07 Bacteria (cfu/mL) 1,00E+07 8,00E+06 No nutrient addition 6,00E+06 Peptides - formule 1 Peptides - formule 2 4,00E+06 2,00E+06 0,00E+00 Days Documento confidenziale per uso interno. La diffusione non è consentita senza l’autorizzazione scritta di Lallemand Inc. Impatto positivo dell’addizione di specifiche formulazioni di peptidi sulla degradazione dell’acido malico Malic acid degradation - Chardonnay 2010 - Alpha MBR pH=3.2; alcohol=12.9%; Tot SO2<25mg/L ; free SO2<5mg/L 2,50 Malic acid (g/L) 2,00 1,50 No nutrient addition Peptides - formule 1 1,00 Peptides - formule 2 No bacteria addition 0,50 0,00 0 5 10 15 Days Documento confidenziale per uso interno. La diffusione non è consentita senza l’autorizzazione scritta di Lallemand Inc. Effetti positivo di specifici peptidi: non solo fonte di azoto… ma stimolatori della crescita batterica Studi recenti hanno dimostrato che la biodisponibilità di alcuni specifici peptidi favorisce la crescita dei batteri selezionati e la riduzione della durata della FML nelle vinificazioni in bianco : Vini bianchi e deficienze nutrizionali Chiarifiche, a volte eccessive, dei vini bianchi possono accentuare il rischio di carenze nutrizionali e perciò rallentare la velocità della FML, specialmente nel caso di assenza di aggiunte di nutrienti complessi durante la FA. Documento confidenziale per uso interno. La diffusione non è consentita senza l’autorizzazione scritta di Lallemand Inc. Risultati Lallemand R&D Malic acid degradation - Alpha strain Chardonnay Burgundy 2011- pH=3.2, ethanol=13%, Tot SO2<25mg/L Free SO2<5mg/L 3 2,5 Malic acid (g/L) 2 Opti'ML BLANC 1,5 Without nutrients Non inoculated 1 0,5 0 0 5 10 15 20 25 30 Time (days) Documento confidenziale per uso interno. La diffusione non è consentita senza l’autorizzazione scritta di Lallemand Inc. NUTRIENTE PER MIGLIORARE LA CINETICA DELLA FML NEI VINI BIANCHI E ROSATI BLEND di frazioni di lievito ricche in aminoacidi liberi e peptidi specifici, in grado di migliorare la crescita, la vitalità e l’attività dei nostri batteri selezionati specificatamente formulato per : • Compensare le carenze di aminoacidi e peptidi nei vini biachi e rosati • Ottenere una rapida crescita dei batteri selezionati nel vino • Ridurre la durata della FML Dose : 20g/hl – dissolvere in vino o acqua (10 volte) – Aggiungere al vino contemporaneamente ai batteri Uvaferm Alpha Packaging : 1 kg – box 10 x 1 kg Documento confidenziale per uso interno. La diffusione non è consentita senza l’autorizzazione scritta di Lallemand Inc.