Tecniche di preparazione e
conservazione degli emocomponenti
Bologna, 11/3/2006
Franco Verlicchi - Centro Trasfusionale Faenza/Lugo – AUSL Ravenna
Definizioni
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prodotti del sangue
gli emocomponenti e gli emoderivati
emocomponenti
i prodotti ricavati dal frazionamento del
sangue con mezzi fisici semplici o con aferesi
emoderivati
i farmaci plasmaderivati ovvero le specialità
medicinali estratte dall’emocomponente
plasma mediante processo di lavorazione
industriale
Legge 21/10/2005, n° 219: Nuova disciplina delle attività trasfusionali e
della produzione nazionale degli emoderivati
emocomponenti
i prodotti ricavati dal frazionamento del sangue con mezzi fisici
semplici o con aferesi
Sangue intero
Eritrociti
Leucociti
Piastrine
Plasma
Emocomponenti di 2° livello
•Terapia trasfusionale mirata
•Conservazione idonea di ciascun componente
Centrifugazione
+
filtrazione
Eritrociti
Leucociti
Piastrine
Plasma
•Quantità raccolta
•Emocomponenti non ottenibili da unità di sangue intero
Eritrociti Leucociti
Plasma
Piastrine
Centrifugazione
Plasma
Piastrine
2000 rpm 5-8 min
Centrifugazione
3500 rpm 15-20 min
Eritrociti
Plasma
Leucociti
Piastrine
Centrifugazione
Leucociti
Piastrine
Eritrociti
•Emazie concentrate
•Emazie concentrate private del buffy coat
•Emazie concentrate con aggiunta di soluzioni additive
•Emazie concentrate private del buffy-coat e risospese in soluzioni additive
•Emazie lavate
•Emazie leucodeplete
•Emazie irradiate
•Emazie congelate
•Concentrato di emazie da aferesi
Emazie concentrate
2-6 °C
Emazie concentrate private del buffy-coat
35 gg
Emazie concentrate con
aggiunta di soluzioni additive
2-6 °C
Emazie concentrate private del buffycoat e risospese in soluzioni additive
42 gg
Emazie lavate
PNH – deficit IgA
•Lavaggi con soluzione isotonica a 4 °C
•Proteine < 0.3 g/unità
2-6 °C
Conservare il minor tempo possibile
(<24 h se apertura del sistema)
Emazie leucodeplete
•Filtrazione - Leucociti < 1x106
Emazie irradiate
•25-50 Gy
2-6 °C
Stessa durata del prodotto corrispondente Irradiazione entro 14 gg dal prelievo
(<24 h se apertura del sistema)
Trasfusione entro 28 gg dal prelievo
Trasfusione entro 48 ore
dall’irradiazione in
neonati o iperpotassemia
Emazie leucodeplete
•Riduzione alloimmunizzazione
•Riduzione infezioni post-operatorie
•Riduzione reazioni trasfusionali non-emolitiche
•Riduzione GVHD
•Riduzione trasmissione patogeni (CMV, CJD)
•Riduzione mortalità post-operatoria (cardio-chirurgia)
•Riduzione ospedalizzazione
Emazie congelate
Glicerolo 15-20%
Glicerolo 40%
Entro 7 gg dalla raccolta
-60 -80 °C
Azoto liquido (-150 °C)
Fino a 10 anni
Scongelamento
Deglicerolizzazione
Utilizzare nel più breve tempo possibile
Leucociti
•Concentrato granulocitario da aferesi
•Cellule staminali emopoietiche periferiche
Concentrato granulocitario da aferesi
Authors’ conclusions: ‘Currently there
is inconclusive evidence from RCTs to
support or refute the generalized use
of granulocyte transfusion therapy in
the most common neutropenic patient
population’
Concentrato granulocitario da aferesi
•Mobilizzazione leucocitaria nel donatore (Steroidi o G-CSF)
Conservazione a 20-24°C per 24 h
Utilizzare nel più breve tempo possibile
Granulociti da sangue intero (buffy-coat):
•Utilizzati, prevalentemente in OE pediatrica, negli anni ‘80
•Abbandonati per inefficacia
Cellule staminali emopoietiche periferiche
Da aferesi
•Uso autologo o omologo
•Preparazione del paziente/donatore (mobilizzazione CD34)
• Ciclofosfamide 4 g /m2 (autologo)
• G-CSF s.c. per 4-5 gg
•1-2 procedure (2-3 ore) in giorni successivi
Congelamento in azoto liquido con crioprotettori
Conservazione a -80°C
Scongelamento a 37°C e impiego immediato
Cellule staminali emopoietiche periferiche
Da cordone ombelicale
•Facilità di prelievo
•Necessità meno stringente di HLA-matching
•Ridotta GVHD
•Minore rischio di rigetto (blando condizionamento)
•Ridotto numero di cellule CD34 (pazienti pediatrici)
•Espansione in vitro
Congelamento in azoto liquido con crioprotettori
Conservazione a -80°C
Scongelamento a 37°C e impiego immediato
Piastrine
•Concentrato piastrinico da aferesi
•Concentrato piastrinico da plasma-piastrinoaferesi
•Concentrato piastrinico da singola unità di sangue intero
•Concentrato piastrinico da pool di buffy-coat
•Concentrato piastrinico lavato
•Concentrato piastrinico irradiato
•Piastrine crioconservate (da aferesi)
•Gel piastrinico
Concentrato piastrinico da singola unità di sangue intero
Plasma
Centrifugazione
2000 rpm 5-8 min
Sangue intero
(20-24 °C)
Plasma
Piastrine
Centrifugazione
3500 rpm 15-20 min
Leucociti
Piastrine
Centrifugazione
Concentrato piastrinico da pool di buffy-coat
Leucociti
•Fino a 5 gg dal prelievo
•20-24 °C
•Agitazione continua
Eritrociti
Leucociti
Piastrine
Plasma
•Concentrato piastrinico lavato
•Concentrato piastrinico irradiato
•Come concentrati piastrinici
•Piastrine crioconservate (da aferesi)
•Congelamento entro 24 ore dal prelievo
•Crioprotettore (DMSO)
•Conservazione 1 anno a -80°C, 10 anni a -150°C
•Utilizzo immediato dopo scongelamento
•Gel piastrinico
Concentrato piastrinico da singola unità di sangue intero
Plasma
Centrifugazione
2000 rpm 5-8 min
Sangue intero
(20-24 °C)
Plasma
Piastrine
Centrifugazione
3500 rpm 15-20 min
Leucociti
Piastrine
Centrifugazione
Concentrato piastrinico da pool di buffy-coat
Leucociti
Gel piastrinico
Concentrato piastrinico da singola unità di sangue intero
•Autologo
•Quantità di sangue intero variabile (30-50 cc)
Aggiunta di calcio e trombina
•Elevato contenuto di fattori di crescita degli
α-granuli
•Favorisce i processi di riparazione tessutale
•Utilizzato in chirurgia maxillo-faciale,
ortopedia, trattamento ulcere cutanee
Utilizzare nel più breve tempo possibile
Plasma
•Plasma fresco congelato
•Crioprecipitato
•Plasma privo di crioprecipitato
•Colla di fibrina
PLASMADERIVATI
•Albumina e soluzioni di proteine plasmatiche
•Immunoglobuline
•Uso ev
•Specifiche anti-HBV
•Specifiche anti-tetano
•Fattori della coagulazione
Plasma fresco congelato
•Separato entro 6 ore (non oltre 18) dal prelievo
•Congelamento a -30° completato entro 1 ora
•Congelato entro 6 ore dal prelievo
•Tipo A (aferesi)
•Tipo B (scomposizione)
•Congelato tra 6 e 72 ore dal prelievo
•Tipo C (scomposizione)
•Albumina
•Immunoglobuline
•ATIII
•FVIII
•FIX
•Complesso protrombinico
Plasma fresco congelato
Utilizzo per uso clinico entro
•24 mesi se conservato ad almeno -25°C
•3 mesi se conservato tra -18°C e -25°C
•Scongelato a 30-37°C con idonea strumentazione
•Utilizzato nel più breve tempo possibile
•Entro 24 ore se conservato a 0-4°C
Plasma fresco congelato
•Scongelamento a 1-6°C
Crioprecipitato
FVIII, FXIII, vWF, fibrinogeno, fibronectina
Plasma privo di crioprecipitato (cryosupernatant)
vWF metalloproteasi (ADAMTS13)
Ricongelamento entro 1 ora
24 mesi se conservato ad almeno -25°C
3 mesi se conservato tra -18°C e -25°C
Utilizzato nel più breve tempo possibile
Entro 24 ore se conservato a 0-4°C
Colla di fibrina
•Crioprecipitato (autologo)
•Calcio + trombina
•Facilitazione della cicatrizzazione delle ferite chirurgiche
•Azione favorevole sull’emostasi
Utilizzato nel più breve tempo possibile
Congelamento
24 mesi se conservato ad almeno -25°C
3 mesi se conservato tra -18°C e -25°C
•Crioprecipitato
Gel criopiastrinico
•Piastrine congelate
•Calcio + trombina
Emoderivati (Plasmaderivati)
•Albumina e soluzioni di proteine plasmatiche
•Immunoglobuline
•Uso ev
•Specifiche anti-HBV
•Specifiche anti-tetano
•Fattori della coagulazione
•Metodiche di precipitazione/purificazione
•Metodi fisici (crioprecipitazione)
•Metodi fisico-chimici (etanolo - Cohn)
•Metodiche cromatografiche
•Gel-filtrazione
•Cromatografia a scambio ionico e interazione idrofobica
•Cromatografia ad affinità
Emoderivati (Plasmaderivati) – Riduzione rischio infettivo
•Quarantena
donazione
esami
Fase finestra
•Pathogen inactivation technology
Pathogen inactivation
•Trattamenti al calore
•Pastorizzazione
•Trattamento al vapore
•Dry heat
•Trattamenti sovente-detergente
•TriNButylPhosphate – Tryton X100
•Trattamento al vapore
•Dry heat
•Nanofiltrazione
•Trattamento al blu di metilene
•Amatosalene - UV
Pathogen inactivation
•Perdita di proteine
•Costo
•Tossicità sul ricevente
•Danno alle cellule
Eritrociti
•Alchilanti (S-303, PEN110)
•Riboflavina
Piastrine
•Psoralene - UV
•Riboflavina - UV