LIMING BIO
HERPES SIMPLEX VIRUS 1 E 2 ANTIGENE
Test Rapido StrongStep® per la rilevazione dell’Herpes 1 e 2 antigene in campioni cutanei.
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Solo per uso diagnostico in vitro
1. USO PREVISTO
20 Determinazioni
Il test rapido StrongStep® HSV 1 e 2 antigene è un test a lettura visiva
immunoenzimatico per la rilevazione qualitativa e presuntiva
dell’Herpes 1 e 2 antigene in campioni cutanei. Questo kit è destinato
ad essere utilizzato come ausilio nella diagnosi dell’infezione da HSV.
Durante il test, il campione, migrando attraverso la membrana per
capillarità, reagisce, creando una banda colorata in caso di positività.
Un’altra banda ci formerà nella zona C di controllo, ad indicare una
corretta procedura del test.
2. INTRODUZIONE
4. COMPONENTI DEL KIT
L'herpes simplex virus è una sottofamiglia di virus appartenente alla
famiglia Herpesviridae. HSV-1 e HSV-2 sono due virus dalla struttura
simile, infatti possiedono quasi gli stessi determinanti antigenici e un
alto grado di omologia nel DNA. La prima forma, notevolmente diffusa,
è responsabile della comparsa di vescicole febbrili caratteristiche che
di norma interessano la cute facciale (labbra, narici); è detto anche
herpes simplex labiale. Inizialmente, l'herpes labiale si manifesta con
un leggero pizzicore e un senso di calore su un punto arrossato del
labbro. Nel giro di poche ore, alcune vescicole ripiene di liquido
limpido, spesso dolorose, cominciano a svilupparsi nella stessa zona
del punto iniziale: ecco accertata la comparsa dell'herpes labiale.
Meno frequentemente, le vescicole possono formarsi sulla mucosa
nasale (in partic. sulla parte esterna od interna delle narici), sulle
guance o sul palato. Una volta terminato il processo infiammatorio, le
vescicole provocate dall'herpes labiale si asciugano e formano una
crosticina giallastra che scompare nel giro di 7-10 giorni, anche senza
alcun trattamento. Talvolta può persistere un piccolo segno o un alone
rosato. La comparsa dell'herpes labiale può conseguire ad uno stato di
malessere, a una febbre, all'inizio delle mestruazioni, a uno stress, ad
una intensa esposizione alla luce del sole o all'aver mangiato
particolari cibi (alcuni insaccati o formaggi). L'infezione provocata
dall'herpes labiale può ricomparire con facilità poiché il virus
sopravvive per tutta la vita all'interno delle cellule del ganglio del
nervo trigemino e, in particolari condizioni (stress, abbassamento delle
difese immunitarie, ecc..), può riattivarsi migrando tramite i nervi alla
cute. La seconda forma è un'infezione genitale, nota anche come
herpes genitalis. Entrambe si contraggono col contatto fisico e
sessuale.
Data la collocazione dei virioni nei gangli nervosi, dove possono
rimanere quiescenti per molto tempo, l'infezione erpetica ha
caratteristiche recidivanti in corrispondenza di eventi stressanti del
sistema immunitario e solitamente ricompare nella sede primaria; è
caratterizzata da un'area edematosa dove sono presenti grappoli di
vescicole sierose, si risolve in una decina di giorni. L'infezione da
herpes è contagiosa e può diffondersi agli organi genitali o agli occhi. Il
pericolo maggiore è la diffusione dell'herpes all'occhio o all'interno
della bocca. Studi sierologici indicano che 50 milioni di persone negli
Stati Uniti hanno un’infezione da HSV genitale. In Europa l’HSV-2 è
stato riscontrato nell’8-15% della popolazione. In Africa il tasso si
innalza fino al 40-50% ed è la principale causa di ulcere genitali.
Aumenta inoltre la possibilità di contrarre il virus HIV. I metodi elettivi
per la rilevazione dell’HSV, sono la fluorescenza ed il PCR, ma questi
metodi sono attualmente limitati nella pratica clinica poiché il costo
del test ed i requisiti di esperienza del personale tecnico ne limitano
l’uso. Esistono altri test in commercio utilizzati per rilevare il tipo di
anticorpo HSV specifico, ma questi test sierologici non sono in grado di
rilevare l’infezione primaria, ma vengono utilizzati per escludere
infezioni ricorrenti. Questo nuovo test HSV antigene differenzia
l’ulcera genitale da Herpes, da altre tipologie di ulcera, tipo la sifilide.
3. PRINCIPIO
Il Test Rapido StrongStep® HSV è stato progettato per rilevare
l’antigene HSV attraverso una interpretazione visiva. Sulla membrana
sono stati immobilizzati anticorpi monoclonali anti-Herpes Simplex.
20 test sigillati singolarmente.
2 flaconi di Tampone di estrazione da 10 ml.
20 tubi di estrazione.
2 workstation.
1 istruzioni per l’uso.
Controlli esterni Positivo e Negativo possono essere forniti su richiesta.
5. MATERIALE RICHIESTO MA NON FORNITO
Timer.
6. PRECAUZIONI
Solo per uso professionale ad esclusivo uso diagnostico in vitro.
Non utilizzare il test dopo la data di scadenza indicata sulla
confezione. Non utilizzare se l’involucro di alluminio contenente il
test è danneggiato. Non riutilizzare il test.
Questo kit contiene prodotti di origine animale per i quali è stato
certificata la provenienza e lo stato sanitario. Ciò non garantisce
totalmente l’assenza di agenti patogeni trasmissibili. E’ pertanto
consigliabile trattare questi prodotti come potenzialmente infetti e
maneggiarli osservando le normali misure di sicurezza, non ingerire,
non inalare.
Evitare la contaminazione incrociata dei campioni, utilizzando un nuovo
tubo di estrazione per ogni campione.
Leggere l’intera procedura con attenzione prima di eseguire qualsiasi
test.
Non mangiare, bere o fumare nell’area di manipolazione dei campioni.
Manipolare tutti i campioni come se contenessero agenti infettivi.
Osservare le dovute precauzioni contro i rischi microbiologici ed
utilizzare le procedure standard per lo smaltimento di campioni.
Indossare adeguati indumenti di protezione, guanti e occhiali
protettivi.
Non miscelare tra loro reagenti di lotti diversi.
Umidità e temperatura possono influire negativamente sui risultati.
Quando la procedura analitica è terminata, smaltire i tamponi dopo
averli autoclavati a 121°C per 20 minuti. In alternativa possono
essere trattati con ipoclorito di sodio allo 0,5% per un’ora prima
dello smaltimento. I materiali utilizzati devono essere smaltiti
secondo le leggi locali, statali o federali.
Non utilizzare spazzole per citologia in pazienti in stato di gravidanza.
7. CONSERVAZIONE E STABILITA’ DEL PRODOTTO
Il kit può essere conservato tra i 2-30°C fino alla data di scadenza
indicata sulla confezione.
Il test deve rimanere perfettamente sigillato nella sua confezione
prima dell’uso.
Non congelare.
Non utilizzare in caso di evidente contaminazione microbica.
8. PRELIEVO E CONSERVAZIONE DEL CAMPIONE
Una buona tecnica di campionamento è fondamentale per la
rilevazione ottimale di HSV in campioni clinici. I prelievi dovrebbero
essere eseguiti da personale qualificato. I tamponi dovrebbero
essere raccolti in modo da contenere quanto più materiale infetto
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possibile. Sono raccomandati tamponi sterili Dacron con stelo in
plastica o inox.
Raccomandare ai pazienti prima del prelievo, di non utilizzare creme,
unguenti, lozioni, ghiaccio o alcool. L’uso di queste sostanze prima
del prelievo riduce significativamente la resa virale.
Le ulcere devono essere strofinate vigorosamente con il tampone per
prelevare cellule infettate. Eventuali vescicole devono essere
attentamente aperte per fare assorbire il fluido sul tampone. Le
lesioni pustolose devono essere trattate come le vescicole.
Dopo il prelievo posizionare il tampone in una provetta pulita con tappo
a vite. I campioni possono essere conservati per 24 ore a
temperatura ambiente (15-30°C), una settimana a 4°C e non più di
sei mesi a -20°C.
9. ESECUZIONE DEL TEST
Portare i campioni, i reagenti e i controlli a temperatura ambiente prima
dell’uso (15-30°C).
1) Estrazione del campione: posizionare una provetta di estrazione del
campione sulla workstation. Aggiungere 15 gocce di tampone di
estrazione. Immergere il tampone nella provetta ed estrarre dopo 2
minuti. Durante l’estrazione, utilizzare un movimento circolare ed
esercitare una certa pressione su un lato della provetta. I campioni
estratti possono essere conservati a temperatura ambiente per 60
minuti senza influenzare il risultato del test HSV. Eliminare il
tampone da prelievo seguendo le linee guida per la manipolazione di
agenti infettivi.
2) Rimuovere il test dalla busta sigillata e posizionarlo su una superficie
pulita e piana. Etichettare il dispositivo con il nome o il numero del
paziente. Per ottenere un miglior risultato il test deve essere
eseguito entro 60 minuti.
3) Aggiungere 3 gocce di campione estratto (circa 100 µL.) nel pozzetto
(S) della card facendo attenzione a non creare bolle d’aria. Il
campione inizia subito a migrare attraverso la membrana.
4) Attendere la colorazione della banda (C). il risultato deve essere letto
entro 15 minuti. Non interpretare il risultato oltre i 20 minuti.
10. CONTROLLO QUALITA’
LIMING BIO
Il controllo procedurale interno è incluso sulla card. La banda colorata
che compare nella zona C è considerata come un controllo
procedurale interno positivo ed indica la corretta dispensazione del
campione in quantità sufficiente. I controlli procedurali esterni
possono essere forniti su richiesta e devono essere trattati come i
campioni.
11. LIMITI DEL TEST
1. L’utilizzo del test HSV antigene test rapido è per uso diagnostico in
vitro riservato ai professionisti, e deve essere utilizzato per la
rilevazione qualitativa dell’HSV. L’intensità di colore delle bande o la
loro larghezza non hanno alcun significato clinico.
2. L’individuazione di antigeni HSV dipende dal metodo di raccolta
campione, dall’età del paziente e dal numero di organismi presenti nel
campione.
3. La probabilità di rilevazione di HSV diminuisce nel tempo a seguito di
sviluppo di lesioni. La probabilità di isolamento virale, diminuisce man
mano che le ulcere guariscono. I campioni devono essere prelevati al
più presto possibile dopo la comparsa delle lesioni. Vi è una probabilità
del 90% di ottenere una coltura positiva quando il campione è
prelevato da una vescica o pustola fresca. La sensibilità diminuisce al
70% quando il campione è prelevato da un ulcera vecchia e scende al
27% in caso di prelievo su lesioni guarite.
4. Le prove sono state eseguite su campioni cutanei e tamponi genitali.
Non si dispongono ancora di dati clinici sufficienti per prove su liquido
cerebrospinale, tamponi oculari, urine e campioni respiratori.
5. Come per tutti i test diagnostici una diagnosi deve essere sempre
confermata da un medico.
12. CARATTERISTICHE DEL TEST
TABELLA: HSV antigene test rapido vs. PCR
10. INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI
POSITIVO: due bande colorate si formano sulla membrana. Una
nella zona C controllo ed una nella zona T test.
POSITIVO
Gli anticorpi utilizzati nel test HSV hanno dimostrato di rilevare tutti i
sierotipi di HSV. E’ stata studiata la reattività crociata con altri
organismi utilizzando sospensioni di 107 org/ml. I seguenti organismi
non stati rilevati utilizzando il test:
NEGATIVO: una sola banda colorata si forma sulla membrana nella
zona C controllo. Nessuna banda colorata si forma nella zona T test.
NEGATIVO
INVALIDO: nessuna colorazione nella zona C e T della card.
Colorazione soltanto della zona T test. In questo caso ripetere il test
con un nuovo dispositivo e se il problema persiste eliminare il kit e
contattare il proprio rivenditore locale.
NOTE:
1. L’intensità di colore nella zona T della card può variare a
2.
seconda della concentrazione dell’antigene HSV presente nel
campione. In ogni caso non è possibile con questo test
determinare un valore quantitativo.
La mancata colorazione della banda di controllo C può essere
dovuta ad un volume di campione insufficiente o all’utilizzo di
un test scaduto.
12. BIBLIOGRAFIE
1. Adam E. Glaser R, ed. Marcel Dekker Inc New York pp 1-55
2. Nahmias AJ and Josey WE(1976)Evans AS, ed J Wliiley and Sons,
London pp253-271
3. CDC. Morbid.Mortal. Weekly Rep. 34(suppl 3-s): 535, 1985.
4. ”The (herpes) helper(1984)” Palo Alto, CA 94302. Fall 1984 pp 7.
5. Waggoner-Fountain LA, Grossman LB. Herpes simplex virus. Pediatr
Rev 2004; 25:86–93.
6. Sexually Transimitted Diseases, A Practical Guide for Primary Care.
Anita L. Nelson, MD. Humana Press, 2006.
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GLOSSARIO DEI SIMBOLI
Attenzione,
consultare
N°determinazi
oni per kit
Fabbricante
Solo per uso
diagnostico in vitro
Usare entro
Non
riutilizzare
Conservare a 2-30°C
Numero del
lotto
REF Codice #
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