I TEST PER LA DIAGNOSI
SIEROLOGICA:
PASSATO, PRESENTE e FUTURO
Dr. Furio Parri,
Unità Operativa Sieroimmunologia Microbiologica e Virologica
Azienda Ospedaliera Careggi, Firenze
HBsAg: algoritmo impiegato
Procedura di routine (235 test/giorno)
Test in micropiastra
Organon Hepanostika
automazione,
cadenza analitica
Negativo
Refertare
Reattivo
Vidas
Negativo:
Ripetizione Organon
Negativo
Refertare
Positivo
Markers HBV
Positivo
Refertare
Caratteristiche dei test impiegati per la
determinazione di HBsAg
Organon Hepanostika EIA: Ab monoclonali di
cattura, antisiero policlonale di rilevazione,
qualitativo, positivi > 1 S/CO
 bioMérieux Vidas: Ab monoclonali di cattura,
antisiero monoclonale di rilevazione, qualitativo,
risposta a Index da 0,10 (soglia)
 Abbott Architect: anticorpi monoclonali di
cattura, antisiero policlonale di rilevazione;
quantitativo, soglia a 0,05 UI/mL

Valutazione Architect HBsAg:
schema operativo
 campioni non selezionati di routine analizzati in
doppio con Organon e Architect (schema precedente):
sensibilità, specificità
 analisi dei controlli nel tempo: riproducibilità
 repliche di campioni: riproducibilità
 diluizione di campioni positivi: linearità,
accuratezza
 pannello BBI PHA 807: linearità, accuratezza,
sensibilità
ARCHITECT HBsAg
confronto con EIA in routine
• Confronto su 1.405 campioni consecutivi
– Positivi concordanti:
– Negativi concordanti:
– Reattivi solo Architect:
– Reattivi solo Organon:
29
1.373
1
2
(2,06%)
(97,72%)
(0,07%)
(0,14%)
• Concordanza complessiva: 99,79%
Architect HBsAg
distribuzione dei risultati negativi
1 40 0
1331
1 20 0
1 00 0
80 0
N
60 0
aberranti
zona grigia
40 0
20 0
23
9
7
1
0 .0 0 5
0 .0 1 0
0 .0 1 5
0 .0 2 0
1
2
1
0 .0 3 0
0 .0 3 5
0 .0 4 0
0
0 .0 0 0
0 .0 2 5
U I/m L
0 .0 4 5
0 ,0 5
Organon HBsAg
distribuzione dei risultati negativi
3 50
3 00
2 50
2 00
N
304
1 50
229
1 00
154
50
2
3
7
21
aberranti - zona grigia
215
172
67
97
42
0
27 16
8
1
0 ,1 0 ,1 5 0 ,2 0 ,2 5 0 ,3 0 ,3 5 0 ,4 0 ,4 5 0 ,5 0 ,5 5 0 ,6 0 ,6 5 0 ,7 0 ,7 5 0 ,8 0 ,8 5 0 ,9 0 ,9 5
S /C O
1
Architect HBsAg
riproducibilità su campioni
1 77 ,0 7
50
45
40
35
30
UI/mL
25
15
CV%
18,27
20
13,96
13,22
11,93
10
6,46
3,82
5
0 ,11
0 ,24
0 ,56
2,15
1,44
0
1
2
3
4
5
6
Campioni analizzati in singolo per 5 sessioni in giorni diversi
Architect HBsAg:
linearità in diluizione
V id a s
(In d e x )
In te ro
P (> 2 5 0 . 0 0 0 )
10
P (2 7 . 8 8 0 )
20
P (1 4 . 1 0 0 )
P (7 . 4 9 )
40
P (6 . 9 2 6 )
P (6 . 4 6 )
80
P (3 . 7 3 8 )
P (5 . 0 4 )
30
P (7 . 1 7 )
25
160
P (1 . 9 4 2 )
P (3 . 4 1 )
320
P (0 . 9 5 7 )
P (1 . 8 7 )
640
P (0 . 4 7 2 )
P (1 . 0 1 )
12 80
P (0 . 2 4 7 )
P (0 . 6 1 )
25 60
P (0 . 1 2 6 )
P (0 . 3 0 )
51 20
P (0 . 0 5 2 )
P (0 . 1 7 )
1 0240
N (0 . 0 3 1 )
N (0 . 0 9 )
20
mL
(U I /m L )
Campione >250 UI/mL diluito1:10 e poi al raddoppio
H B sA g
Osservato
15
UI/
D il u iz io n i
H B sA g A r c h i te c t
Atteso
r = 1,00
10
5
0
0
5
10
15
UI/mL
20
25
30
Architect HBsAg:
linearità in diluizione
C am p i o n e preced en te: d ettag l io tra 0 e 7 U I /m L
8
7
6
UI/m L
5
O ss e rva to
4
A tte s o
3
r = 0,99
2
1
0
0
1
2
3
4
UI/m L
5
6
7
8
Vidas HBsAg:
linearità in diluizione
H B sA g A r c h i te c t
(U I /m L )
V id a s
(In d e x )
8
P (7 . 1 7 )
7
6
In te ro
P (> 2 5 0 . 0 0 0 )
10
P (2 7 . 8 8 0 )
20
P (1 4 . 1 0 0 )
P (7 . 4 9 )
40
P (6 . 9 2 6 )
P (6 . 4 6 )
80
P (3 . 7 3 8 )
P (5 . 0 4 )
160
P (1 . 9 4 2 )
P (3 . 4 1 )
320
P (0 . 9 5 7 )
P (1 . 8 7 )
640
P (0 . 4 7 2 )
P (1 . 0 1 )
12 80
P (0 . 2 4 7 )
P (0 . 6 1 )
25 60
P (0 . 1 2 6 )
P (0 . 3 0 )
51 20
P (0 . 0 5 2 )
P (0 . 1 7 )
1 0240
N (0 . 0 3 1 )
N (0 . 0 9 )
5
Index
D il u iz io n i
Campione >250 UI/mL diluito1:10 e poi al raddoppio
H B sA g
Osservato
4
Atteso
3
2
1
0
0
1
2
3
4
5
6
7
8
Vidas HBsAg:
linearità in diluizione
C am p i o n e preced en te: d ettag l io tra 0 e 2 U I /m L
4
In dex
3
O ss e rva to
2
A tte s o
r = 1,00
1
0
0
0 ,5
1
1 ,5
2
In d e x
2,5
3
3 ,5
4
Architect e Vidas HBsAg:
linearità in diluizione
Campione 2
Intero
10
20
40
80
160
320
640
1280
2560
5120
10240
20480
P(>250)
P (35.229)
P(15.493)
P (8.818)
P (4.196)
P (1.925)
P (1.027)
P (0.568)
P (0.302)
P (0.155)
P (0.070)
N (0.034)
Campione 3
P (7.13)
P
P
P
P
P
P
P
P
P
P
N
(7.60)
(6.80)
(5.53)
(3.86)
(2.27)
(1.23)
(0.68)
(0.37)
(0.17)
(0.10)
(0.06)
Intero
10
30
60
120
240
480
960
1920
3840
7680
15360
30720
61440
122880
P (>250)
P (>250)
P (93.448)
P (48.440)
P (23.502)
P (12.631)
P (5.960)
P (3.249)
P (1.671)
P (0.878)
P (0.429)
P (0.211)
P (0.111)
GZ (0.049)
N (0.022)
P (7.27)
P
P
P
P
P
P
P
P
P
P
P
N
(8.11)
(8.15)
(7.44)
(6.40)
(5.09)
(3.02)
(1.92)
(1.02)
(0.54)
(0.29)
(0.16)
(0.09)
Architect e Vidas HBsAg:
linearità in diluizione
Campione 4
Intero
2
4
8
16
32
64
P (>250)
P (141.065)
P (73.283)
P (41.666)
P (20.694)
P (10.296)
P (5.173)
Campione 5
P
P
P
P
P
P
P
(7.17)
(7.57)
(7.71)
(7.94)
(7.72)
(7.02)
(5.82)
Intero
2
4
8
16
32
64
P (>250)
P (>250)
P (>250)
P (>250)
P (>250)
P (>250)
P (141.776)
P
P
P
P
P
P
P
(6.81)
(7.16)
(7.24)
(7.13)
(7.18)
(7.38)
(7.56)
Pannello BBI PHA 907
ID c a m p . S o tto tip o
H B sA g
H B sAg
PEI
Arc h ite c t
V id a s
n g /m l
IU /m l
u n its /m l
(U I/m L)
(In d ex )
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
ad
ad
ad
ad
ad
ad
ad
ad
ad
ad
3,1
1,5
1
0,9
0,7
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0,89
0,43
0,28
0,23
0,17
0,13
0,12
0,08
0,05
0,02
0,75
0,4
0,27
0,21
0,16
0,12
0,1
0,08
0,05
0,03
0,636
0,314
0,263
0,178
0,152
0,117
0,085
0,058
0,045
0,013
1,54
0,78
0,57
0,41
0,32
0,28
0,25
0,19
0,13
0,07
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
ay
ay
ay
ay
ay
ay
ay
ay
ay
ay
2,6
1,3
0,9
0,8
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0,82
0,4
0,28
0,23
0,18
0,13
0,1
0,07
0,05
0,02
0,47
0,22
0,19
0,15
0,11
0,09
0,08
0,06
0,03
0,02
0,650
0,299
0,251
0,203
0,150
0,118
0,109
0,069
0,048
0,016
1,46
0,63
0,49
0,41
0,31
0,24
0,21
0,16
0,11
0,06
Architect HBsAg
pannello BBI PHA 907 - ad
16
14
s egn ale/c uto ff
12
10
V id as
A rchitect
8
0,05 UI/mL
6
4
2
0
1
2
3
4
5
6
Ca m p io n i
7
8
9
10
Architect HBsAg
pannello BBI PHA 907 - ay
16
14
seg nale/cuto ff
12
10
V id as
A rchitect
8
0,05 UI/mL
6
4
2
0
1
2
3
4
5
6
C a m p io n i
7
8
9
10
Media Index Vidas per classi di UI/mL Architect
8
7,554
7,371
7,269
media Index Vidas
7
6
7,152
5,364
5
4
3
2
1,266
1
0
0,05-2
2-10
11-50
51-100 101-250
A rchitect U I/mL
>250
HBsAg: correlazione Architect/Vidas
2
1 ,8
La correlazione è presente
solo per concentrazioni
di HBsAg comprese
entro le 2 UI/mL
Architect UI/mL
1 ,6
1 ,4
1 ,2
1
0 ,8
0 ,6
0 ,4
0 ,2
0
0
1
2
V id as Ind e x
3
4
Valutazione quantitativa
• Il test Architect HBsAg è quantitativo in
ragione di una calibrazione vs. standard
(unità internazionali)
• L’applicazione semiquantitativa del test
Vidas (valori di Index) è lineare fino a
circa 2 UI/mL
• Una differenza di segnale con Vidas è
attendibile solo per valori < 5
Conclusioni
• Il test Architect HBsAg si è rivelato almeno
equivalente ad altri test di screening come
sensibilità e specificità
• La riproducibilità è risultata molto buona
• La linearità di questo primo test quantitativo
per HBsAg è risultata eccellente nel “range”
dinamico (0,05-250 UI/mL)
• La potenziale utilità della determinazione
quantitativa verrà indagata con valutazioni
cliniche
Lo strumento Chorus
Dimensioni
H x L x P = 45cm x 66cm x 52 cm
Peso
45 chilogrammi
Fotometro multicanale
: 450, 610 e 650 nm
Modem interno per teleassistenza
Lettore di codice a barre
interno ed esterno
Connessione bidirezionale
ad host computer
Il Dispositivo IgG
•
•
•
•
•
•
•
1. Campione
2. Coniugato
3. Diluente campione
4. Substrato
5. Pozzetto non sensibilizzato
6. Pozzetto sensibilizzato
7. vuoto
Il Dispositivo IgM
•
•
•
•
•
•
•
1. Campione
2. Coniugato
3. Diluente campione/antigene
4. Substrato
5. Pozzetto non sensibilizzato
6. Pozzetto sensibilizzato
7. Antigene liofilo
Risultati preliminari Toxo IgM
• Analizzati 232 campioni
• Grado di concordanza 95,3%
• Campioni discordanti: 11
5 :Chorus positivi e VIDAS dubbi :
(risultato Chorus poco al disopra
di 1.2 - limite zona grigia)
2 :Chorus dubbi e VIDAS pos.debole
3 :Chorus dubbi e VIDAS negativi:
(risultato Chorus con indice 0.9)
CHORUS
V
I
D
A
S
Pos
Neg
Dubbi
Pos
31
0
2
Neg
0
187
3
Dubbi
5
1
3
1 :Chorus negativo e VIDAS dubbio
(risultato Chorus con indice 0.7 e Vidas 0.55-limite inferiore della zona grigia)
V.E.Q. SIEROIMMUNOLOGIA
Markers Epatite B
HBsAg
Risultato dichiarato: NEGATIVO
300
99.6%
256
250
200
150
89.8%
142
Negativi
Positivi
100
50
0
10.2%
16
0.4%
1
ciclo
ciclo
2000-01 2001-02
V.E.Q. SIEROIMMUNOLOGIA
Markers Epatite B
anti HBe
Risultato dichiarato: POSITIVO
94%
180
160
140
120
100
80
60
40
20
0
171
46.2% 53.8%
43 50
6%
11
Ciclo
Ciclo
2000-01 2001-02
Negativo
Positivo
V.E.Q. SIEROIMMUNOLOGIA
TPHA
Risultato dichiarato: POSITIVO 1:1280
93%
120
107
100
80
47.6% 47.6%
60 60
Negativo
Positivo
Dubbio
60
40
4.8%
20
6
1.8%
2
5.2%
6
0 0 0
0
Ciclo
2000-01
Ciclo
2001-02
V.E.Q. SIEROIMMUNOLOGIA
Sierologia per LUE
VDRL/RPR
Risultato dichiarato: POSITIVO a basso titolo
90.9%
190
200
180
160
140
120
61.8%
100 84
80
34.5%
60
47
6.7%
40
3.7%14
2.4%
20
5
5
0
Ciclo
Ciclo
2000-01 2001-02
Negativo
Positivo
Dubbio
IFA
Toxoplasmosi
Entamoeba
Leishmania
Malaria
Bartonella
Borrelia
Chlamyda pneumoniae
Coronavirus ass. SARS
Echinococco
Epstein Barr anti VCA
Legionella
Leptospira
Lue FTA abs
Rickettsia
West Nile
Cytomegalovirus **
HSV 1-2 **
Morbillo **
Parotite **
VZV **
** materiale: liquor