Laboratory aspects of IVM
DAL CANTO MARIABEATRICE
BIOGENESI
REPRODUCTIVE MEDICINE CENTER,
ISTITUTI CLINICI ZUCCHI
V. Zucchi, 24-Monza (Italy) tel/fax +39.39.8383314
B
Centro di Medicina
della Riproduzione
IOGENESI
PRE-ANTRAL FOLLICLE 2-5 mm
PROPHASE I
Cell diameter 80 µ m
Monolayer cumulus cells
ANTRAL FOLLICLE 5-12 mm
PROPHASE I
Cell diameter 110-120 µ m
Monolayer cumulus cells
Zona pellucida
Cytoplasmic maturation
Minimum follicular diameter
to produce a competent oocytes
is around 5 mm
B
Centro di Medicina
della Riproduzione
IOGENESI
OOCYTES MATURATION
LH
MPF
cAMP
FF-MAS
cAMP
granulosa
cell
cAMP
cAMP
cAMP
GVBD
2n
PROPHASE III
METAPHASE
B
Centro di Medicina
della Riproduzione
IOGENESI
DAY -1
DAY 0
DAY 1-2
IVF
I.V.M.
I.V.F.
...IVM REQUIRES FLEXIBILITY AND
ADJUSTMENTS ...
B
Centro di Medicina
della Riproduzione
IOGENESI
IN VITRO MATURATION
Oocytes Collection
TRANSVAGINAL US GUIDANCE
CRAFT VACUUM PUMP (pressure 80-90 mmHg)
ASPIRATION NEEDLE (Gynetics 4551E  17-G
single lumen)
SINGLE FLASK TO COLLECT OOCYTES
B
Centro di Medicina
della Riproduzione
IOGENESI
B
Centro di Medicina
della Riproduzione
IOGENESI
B
Centro di Medicina
della Riproduzione
IOGENESI
B
Centro di Medicina
della Riproduzione
IOGENESI
IN VITRO MATURATION
Oocytes Collection
DAY –1
Disposable Material
 Filter 0.70 μm
 Syringes
 Flask or tube
 Petri dishes
 Flushing Medium with
Heparin
 Maturation Medium
B
Centro di Medicina
della Riproduzione
IOGENESI
DAY -1
B
Centro
Centro di
di Medicina
Medicina
della
della Riproduzione
Riproduzione
IOGENESI
DAY -1
B
Centro di Medicina
della Riproduzione
IOGENESI
DAY -1
B
Centro di Medicina
Centro di Medicina
della Riproduzione
della Riproduzione
IOGENESI
IOGENESI
DAY -1
B
Centro di Medicina
Centro di Medicina
della Riproduzione
della Riproduzione
IOGENESI
IOGENESI
DAY - 1
B
Centro di Medicina
della Riproduzione
IOGENESI
IN VITRO MATURATION
Oocytes Collection
B
Centro di Medicina
della Riproduzione
IOGENESI
IN VITRO MATURATION
Biological Aspects
DAY –1
PICK UP
(8.30 am)
3 hrs INCUBATION
IN LAG MEDIUM
(09.00)
26 hrs INCUBATION
IN IVM MEDIUM
(12.00 am)
r-FSH 0.075 IU/ml
hCG 0.10 IU/ml
10% patient’s serum
B
Centro di Medicina
della Riproduzione
IOGENESI
IN VITRO MATURATION
Oocytes Classification
EXPANDED CUMULUS
FULL CUMULUS
SPARSE CUMULUS
NUDE
B
Centro di Medicina
della Riproduzione
IOGENESI
DAY -1
EXPANDED CUMULUS
Immature oocytes with
multilayer and slack
cumulus
B
Centro di Medicina
della Riproduzione
IOGENESI
DAY -1
FULL CUMULUS
Immature oocytes with
compact complete
cumulus
B
Centro
Centro di
di Medicina
Medicina
della
della Riproduzione
Riproduzione
IOGENESI
DAY -1
SPARSE CUMULUS
Immature oocytes with
partial cumulus
B
Centro
Centro di
di Medicina
Medicina
della
della Riproduzione
Riproduzione
IOGENESI
DAY -1
NUDE
Immature oocytes
without cumulus
ATRETIC
B
Centro di Medicina
della Riproduzione
IOGENESI
IN VITRO MATURATION
Biological Aspects
DAY 0
• Maturation control (3.00 pm)
 hyaluronidase 80 UI
• ICSI (4.00 pm)
B
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IOGENESI
DAY 0
B
Centro di Medicina
della Riproduzione
IOGENESI
IN VITRO MATURATION
Biological Aspects
DAY 1
• Fertilization
control
(8.30 am)
• Culture in multiwells
in ISM-1 Medium
B
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IOGENESI
IN VITRO MATURATION
Biological Aspects
DAY 2
• Embryo control
• Embryo transfer
No cleavage delay was observed
B
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della Riproduzione
IOGENESI
RESULTS
Natural IVM
n°
Cycles started
463
Oocytes retrieved
Full cumulus
Sparse cumulus
Nude + Atretic
1804
1455
207
142
Oocyte in culture
1662
%
80.6
11.4
8
Maturation rate
986/1662
59.3
Fertilization rate (2PN)
671/824
81.4
B
Centro di Medicina
della Riproduzione
IOGENESI
RESULTS
Natural IVM
n°
n° Embryos transferred
%
671
n° Emb. 0% fragmentation
287
42.7
n° Emb. 1-10% fragmentation
200
29.8
n° Emb. 11-20% fragmentation
78
11.6
n° Emb. 21-40% fragmentation
65
9.6
n° Emb. >41% fragmentation
41
6.3
B
Centro di Medicina
della Riproduzione
IOGENESI
3 topics
09.03.2004 A new Law regarding
ART was approved in Italy
...use no more than 3 oocytes for each
cycle so as to avoid to produce more than 3
embryos...
...all embryos obtained must be transferred
simultaneously with no selection....
... embryo cryopreservation is forbidden....
B
Centro di Medicina
della Riproduzione
IOGENESI
RESULTS
Natural IVM
n°
N° transfers
N° patients
N° tot embryos
n° embryos/transfer
361
289
671
1.8 ± 0.6
β-hCG positive test
Clinical pregnancies
PR/transfer
PR/patient
IR
60
54
54/361
54/289
58/671
%
14.9
18.6
8.6
B
Centro di Medicina
della Riproduzione
IOGENESI
IVM: the first choice in Italy
Pregnancy rate with standard IVM, ICSI and IVF-ET
in women ≤39 age (May 2004-September 2005)
n°
Transfers
n°
n° Clinical PR/transfer PR/patient
Patients Pregnancies
(%)
(%)
IVM
164
122
25
15.4
20.5
ICSI
455
407
78
17.1
19.2
FIVET
243
220
48
19.8
23.0
Dal Canto et Al., RBM Online Vol.13, N°2, August 2006
B
Centro di Medicina
della Riproduzione
IOGENESI
RESULTS IN SELECTED WOMEN
25,0%
20,0%
19,8%
14,7%
*
10,8%
15,0%
8,5%
10,0%
*
5,0%
0,0%
PR/transf
Implantation Rate
B
Centro di Medicina
della Riproduzione
IOGENESI
RESULTS IN SELECTED WOMEN
WITH “TOP QUALITY” EMBRYOS
29,1%
30,0%
19,8%
25,0%
20,0%
*
16,1%
14,7%
Series1
10,8%
15,0%
8,5%
Series2
*
Series3
10,0%
5,0%
0,0%
PR/transfer
Implantation Rate
* analysis performed on women <37 years
in which only “top embryos” were transferred
B
Centro di Medicina
della Riproduzione
IOGENESI
we are studing…
 New Maturation Medium
 Extended Culture up to
blastocyst Stage
 In-vitro matured
oocyte Cryopreservation
B
Centro di Medicina
della Riproduzione
IOGENESI
Centro di Medicina
della Riproduzione
BIOGENESI
Equipe Medica
Dr R. Fadini
Dr M. Mignini Renzini
Dr R. Comi
Dr G. Rangoni
Dr A. Villa
Dr M. Mastrolilli
Dr A. Epis
Equipe Biologica
Dr M.B. Dal Canto
Dr F. Brambillasca
Dr M. Crippa
Dr D. Fumagalli
Dr M. Lain
Dr. M. Merola
Sig.ra M. Majoli
Sig.ra A. Longoni
Segreteria
B
Centro di Medicina
della Riproduzione
Sig.ra C. Del Favero; Sig.ra P. Loreto; Sig.ra F. Rapisarda; Sig.ra F. FroioIOGENESI