Escherichia coli O157 :H7
Classificazione E. coli patogeni intestinali (LEVINE 1987)
GRUPPO
MALATTIA
ETEC
Diarrea neonatale; diarrea del viaggiatore
EHEC
Colite emorragica; sindrome emolitico - uremica
EPEC
Diarrea infantile
EIEC
Dissenteria
EAEC
Diarrea infantile
E. coli O157 :H7
CENNI STORICI
Epidemie colite emorragica (OREGON, MICHIGAN)
1982
1987
1° segnalazione europea c.e. (BELGIO)
1989-90
243 casi, acqua comunale (MISSOURI)
1993
500 casi in 4 stati U.S.A., tritato
“hamburger disease”
E. coli O157 :H7
BIOLOGIA
Attività biochimico-enzimatiche
POSITIVE
NEGATIVE
glucosio - saccarosio - raffinosio
sorbitolo - inositolo - adonitolo
ramnosio - arabinosio - melibiosio
malonato - urea - esculina
Indolo - LDC - ODC
H2S - ADH - TDA
ONPG
VP - citrato - ox
Incapacità crescita ≥ 44,5°C
Sorbitolo non fermentante
Non produce β - glucuronidasi
Batteriofago “AR1”
E. coli O157 :H7
ATTIVITÁ PATOGENA
Verotossine
QUADRI PATOLOGICI
Colite emorragica
Sindrome emolitico-uremica
Terapia antibiotica : controindicata
EPIDEMIOLOGIA
D.M.I. = 0,3 - 15 coli/gr
Serbatoio: bovini (suini,ovini,pollame)
Trasmissione: alimentare, contagio interumano
Segnalazioni: U.S.A., CANADA, GRAN BRETAGNA
E. coli O157 :H7
LABORATORIO
VEROTOSSINA
RICERCHE COLTURALI
SIERODIAGNOSI
E. coli O157 :H7
SCREENING
BRODI DI ARRICCHIMENTO
T.S.B. mod. EC mod.
TERRENI DI ISOLAMENTO
SMA (MUG/BCIG) SD-39
FARMER DAVIS
Terreno semisolido con sorbitolo e antisiero H7
IDENTIF. BIOCHIM. ENZIMAT.
API 20 E ORGANON TEKNICA (8)
BAXTER D. (Micro-SCAM:22)
IDENTIFICAZ. SIEROLOGICA
Latex (OXOID; PRO-LAB) antisieri
E. coli O157 :H7
METODICHE COLTURALI
AMPCORD DIPSTICK
PETRIFILM TM
(Camdem, NJ)
(3M St. Paul, MINN.)
presuntivo Ag
O157
(Arricchim. Preliminare)
bastoncini di plastica con Ab
policlonali O157 su membrane,
marcati con particelle colloidali
color oro
POSITIVITÁ
Comparsa di un
color rosso-porpora
Immunoblot
Ag O157
Campione + Br.arricchim.
37°C × 6-8h (agitazione)
IMMUNOFLUORESCENZA
DIRETTA
Anticorpi policlonali O157 marcati
con fluoresceina, utilizzati per la
ricerca dell’antigene
A) Anticorpi diretti
Immunofluoresc.
(Park et al.)
Piastre Petrifilm TM
42 °C × 18h
B)
Tecnica disc blot ELISA
Filtro epifluoresc.
E. coli O157 :H7
METODICHE COLTURALI
U.S.D.A. – F.S.I.S.
ISO-GRID
TEK TM ELISA
PETRIFIL TM modif.
(QA Life Sc, San Diego CA)
(ORGANON TEKN., Durham NC)
(3M, St. Paul MINN)
Presunt. ELISA (MAb)
Conf. SMA – MUG
Presunt. PETRIFILM TM
Conf. SMA – BCIG
Qualitativo
Quantitativo
5ml alim. (1:10)
Filtrare su HGMF
Semina su Ag SD-39
44,5°C × 24h
E.Coli O157:color rosa
Altri coli: color verde
CONFERMA
-biochimica
-sierologica
SENSIBILITÁ
2 coli / gr (carne)
10 coli / gr (altri)
Campione + TSB modif.
37°C × 16-18h (agitazione)
Test sandwich ELISA
0,1ml
SMA-MUG
37°C × 16-18h
CONFERMA
-Latex
-API 20E
-sieroagglutinazione
SENSIBILITÀ
0,2 coli / gr
Campione + Br.EC mod
25gr
225ml
37°C × 6-8h (agitazione)
Dil. 10-1 10-2 tamp.fosf.
Piastre TM 42 °C × 18h
Lett.Pres.:colonie grigiastre
su contesto nero
CONFERMA: SMA-BCIG
42°C overnight
-API 20E
-sieroagglutinazione
SENSIBILITÁ
0,7 coli / gr