Lezioni preparatorie per gli studenti 2 Stage presso il Life Learning Center di Bologna. A.S. 2004-05 la cellula batterica tecnica DNA ricombinante Il DNA delle procellule Nei batteri il programma viene parete registrato su di una lunga cellulare molecola di DNA, chiusa ad anello cromosoma batterico Nella cellula batterica possono essere presenti altri piccoli anelli di DNA che portano poche informazioni -geni- i plasmidi I plasmidi possono passare da una cellula batterica a un’altra trasformazione batterica plasmide cromosoma batterico Coniugazione batterica I batteri possono “connettersi” mediante un tubicino pilo- attraverso il quale uno dei due batteri, quello in grado di costruire il pilo, invia all’altro una copia di un tratto del suo DNA, in modo che il secondo acquisisca le informazioni registrate in esso Inserzione di un gene in un plasmide DNA -gene- da inserire nel plasmide plasmide Gene inserito in plasmide Gli enzimi di restrizione riconoscono una sequenza nucleotidica e tagliano il DNA “di sbieco”, in modo che il tratto estraneo di DNA, tagliato nello stesso modo, si possa inserire a baionetta. Un capo di una delle molecole di DNA (a catena singola) si complementa con un capo dell’altra molecola, sempre a catena singola tecnica DNA ricombinante Inserzione di un gene in un batterio 3- enzima ecoRI riconosce e taglia(restrizione) il DNA nelle sequenze ecoRI estremità adesive “a baionetta” 1- plasmide con gene per la resistenza a un antibiotico 2- Gene da inserire compreso tra specifiche DNA estraneo sequenze nucleotidiche gene ecoRI da inserire 4- il gene estraneo viene inserito nel plasmide DNA ricombinante 5- il plasmide viene inserito in cellule batteriche che si riproducono e danno un clone Cellula batterica Cromosoma batterico riproduzione 6- la coltura batterica viene trattata con l’antibiotico: solo i batteri che ospitano il DNA ricombinante sopravvivono clone Inserimento del gene per l’ insulina in un batterio Con la tecnica del DNA ricombinante si ottengono: Ormoni Insulina GH e antiGH enzima restrizione Gene umano inserzione gene Plasmide Anticorpi monoclonali enzimi vaccini DNA ricombinante inserzione plasmide in batterio Insulina umana Clonazione insulina umana Organizzazione del DNA Il DNA degli eucarioti è discontinuo In ogni gene si alternano tratti codificantiesoni Gene –DNA- e tratti non codificanti introni esoni Tutto il tratto DNA che corrisponde al gene viene ricopiato in RNA mRNA primitivo Nel citoplasma l’mRNA primitivo viene tagliato dagli enzimi di restrizione e i tratti corrispondenti agli esoni vengono uniti da enzimi ligasi Si ottiene mRNA da inviare ai ribosomi introni Sintesi RNA nel nucleo - enzimi di restrizione (“taglia”) - ligasi (“cuci”) mRNA maturo
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