Gravidanza e rischi genetici
• Storia famigliare NEGATIVA per patologie ereditarie,
cromosomopatie, malformazioni e ritardo mentale
• Età materna inferiore a 35 anni
– emocromo + sideremia (ev. HbA2, transferrina, ferritina)
– Rubeotest + Toxotest (IgG – IgM)
– assunzione di acido folico 3 mesi prima e dopo il
concepimento
– screening per basso rischio di cromosomopatie:
• Test integrato (12ma sett. traslucenza nucale + PAPP-A)
(16ma sett. 2° prelievo = triplo-test)
• Triplo-test (16ma sett.)
– Ecografia morfologica alla 20ma settimana
– Eventuale test OLA per fibrosi cistica
Test OLA per fibrosi cistica
• oltre 1000 mutazioni descritte nel gene CFTR
• 31 mutazioni sono presenti nel 75% dei casi
• delF508 è presente nel 50% dei casi
Oligonucleotide Ligation Assay :
Probabilità di :
essere portatori
avere un figlio affetto
per la popolazione generale
1:25
1:25 x 1:25 x 1:4 = 1 : 2.500
test OLA negativo
1:97
1:97 x 1:97 x 1:4 = 1 : 37.636
Test di Wald (triplo test)
aumento di
rischio per
Alfa-feto
proteina
Estriolo
libero
Gonadotropina
corionica
Non
informativo
Non
informativo
Trisomia 21
Trisomia 18
Difetti del
tubo neurale
score di rischio
da paragonare al rischio per età materna
Test di Wald (triplo test)
score di rischio
da paragonare al rischio per età materna
Range patologico > 1:350
Alfa-feto
proteina
Estriolo
libero
Gonadotropina
corionica
40.59 IU/ml 6.58 nmoli/L 27.07 IU/ml
Età gestazionale (ecografica): 16 sett – 3 giorni
Età materna al parto : 32 anni
Rischio Down per età : 1:690
Rischio Down al triplo test : 1:22.000
Protocolli di screening prenatale
Protocollo
Detection rate
False positive rate
Età materna + markers 2° trimestre
aFP + hCG
73 %
9.6 %
aFP + uE3 + hCG
78 %
7.8 %
aFP + uE3 + hCG + INH-A
82 %
6.9 %
NT
74 %
5.1 %
PAPP-A – free bhCG
75 %
8.6 %
NT - PAPP-A – free bhCG
86 %
4.2 %
Età materna + markers 1° trimestre
Età materna + markers 1°- 2° trimestre
PAPP-A
aFP + uE3 + hCG + INH-A
87 %
4.9 %
NT - PAPP-A
aFP + uE3 + hCG + INH-A
93 %
2.6 %
Test di Wald (triplo test)
Madre :
Data UM :
Triplo test :
14.03.1975
30.03.2002 (27 anni)
1:20
Cariotipo fetale :
46,XX add(20)(p13)
[ish: dup(20)(p13p11.2) or dup20(p11.2p13) wcp:20+]
Cariotipo genitori :
Madre 46, XX – Padre 46, XY
Oxford Medical Database
2 casi di bimbi affetti da duplicazione parziale del cromosoma 20p
26 casi di duplicazione totale del 20p.
Nei casi descritti era presente:
- ritardo mentale (nel 96% dei casi con duplicazione completa
e in uno dei due casi con duplicazione parziale: il secondo caso
era affetto da anencefalia-craniorachischisi)
- facies caratteristica nel 30-50% dei casi (faccia tonda, gote piene,
rime palpebrali deviate verso l’alto, occipite piatto, microcefalia e
mandibola piccola)
- ipotonia e strabismo (23%)
- cifosi, anomalie vertebrali e clinodattilia (19%)
- difetti del setto interventricolare e lassità articolare (15%)
- ernia inguinale o ombelicale e piede torto (11%)
- altre anomalie di sviluppo maggiori o minori erano presenti nel
4-7% dei casi.
Indicazioni alla diagnosi prenatale
• età materna > 35 anni (al momento del concepimento)
• rischio di trasmissione al feto di :
– un difetto genetico noto
– malattia genetica a spettro mutazionale limitato
– malattia genetica diagnosticabile con test biochimico
• rischio di anomalia cromosomica sbilanciata
• precedente gravidanza con anomalia cromosomica
de novo
• test di Wald positivo
• sospetto ecografico di patologia malformativa
geneticamente determinata (cromosomica)
Opzioni disponibili
• Amniocentesi
• Villocentesi
alla 16ma settimana
R. aborto: 0.5%
alla 10ma settimana
R. aborto: 1%
Nella scelta considerare : costi, impatto emotivo
% di mosaicismi
Interruzione di gravidanza per patologia
fetale: entro la 24 settimana
Tessuti fetali utili
per l’esame cromosomico
tipo tessuto
quantità
Cellule del liquido amniotico
15-20 ml
Villi coriali
10-15 mg
raccomandazioni
conserv. a temp. ambiente
Sangue fetale da cordocentesi
1 ml
Biopsie di tessuto fetale
.......
cons. a 4°, in siero mat. o AB
Materiale abortivo
.......
cute, cartilagine, (placenta)
Metodo di allestimento colture da
Liquido Amniotico
1°
1
4
2
5
3
6
2°
Strategia di analisi delle colture LA
( metodo in situ )
1
2
3
Si analizzano
al microscopio:
• almeno 3 colture distinte
4
5
6
• almeno 10 cloni in totale
• 1 mitosi “bella” per clone
mitosi
clone
Strategia di analisi delle colture LA
(metodo “in fiasca” + tripsinizzazione)
analisi mitosi su vetrini
(origine clonale perduta)
Mosaicismo di 1° livello (2,5-7,1%)
(aberrazione in vitro)
una sola
mitosi
aberrante
all’interno di
un unico
clone
normale
Mosaicismo di 2° livello (0,6-1,1%)
(mosaico placentare ? / aberr. in vitro ?)
un solo
clone
aberrante
una sola
cellula
“progenitrice”
aberrante
Mosaicismo 2° livello:
Cosa fare ?
(un solo clone anomalo / due o più mitosi da fiasca)
A) Se si tratta di:
• Aneuploidia dei cromosomi sessuali (45,X
47,XXX 47,XXY 47,XYY)
• Trisomia di solito letale (crom. 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 10, 11, 16, 17, 19)
• Monosomia
• Marker (ESAC)
• Riarrangiamento strutturale (bilanciato)
Esaminare altri 12 cloni da colture diverse
B) Se si tratta di:
• Trisomia compatibile con la vita (crom. 21, 18, 13)
• Riarrangiamento strutturale sbilanciato
Esaminare altri 24 cloni da colture diverse
(non contando la coltura contenente il clone anomalo)
Mosaicismo di 3° livello (0,1-0,3%)
( mosaico vero )
2 o più cloni, da 2 o più colture
L’esame del villo coriale
si esegue su 2 tessuti (A+B)
A ) esame diretto delle mitosi spontanee ( citotrofoblasto )
1. rimozione dei resti di decidua
2. incubazione 24 - 48 ore
3. esame cromosomico
B ) esame dopo coltura ( mesoderma / stroma villare )
1.
2.
3.
4.
frammentazione villo ripulito da decidua
collagenasi
coltura per 5-7 giorni
esame cromosomico
ESAME CROMOSOMICO da VILLI CORIALI
1,5% discrepanza dei risultati
citotrofoblasto
(esame diretto)
Anorm.
/ Mosaico
Anorm.
/ Mosaico
stroma villare
(coltura villo)
Normale
Normale
(CVS tot. = 92.246)
sangue fetale
%*
Normale
48 %
(100%)
Anorm. / Mosaico
“
“
Normale
Anorm. / Mosaico
16 %
7%
(70%)
Normale
“
Anorm. / Mosaico
“ /
“
Normale
Anorm. / Mosaico
25 %
4%
Normale
Normale
Anorm. / Mosaico
0%
Anorm. / Mosaico
“
“
* calcolata su 192 casi con esame crom. fetale noto (J.Hahnemann, EUCROMIC,
(30%)
(87%)
(13%)
Am.J.Med.Genet. 70:179, 1997)
padre