Dosaggio DRI® Serum Tox per salicilato
Per uso diagnostico in vitro
0977 (1 x 25 mL) Confezione di reattivi
0980 (1 x 5 mL, 1 x 2 mL) Set di calibratori
Uso previsto
Il dosaggio DRI® Serum Tox per salicilato è indicato per la determinazione quantitativa del
salicilato nel siero o nel plasma umani.
Sommario e spiegazione del metodo
I salicilati sono un gruppo di analgesici non assuefanti con proprietà antipiretiche,
antinfiammatorie e antireumatiche sull’uomo. L’ingestione accidentale di salicilati costituisce la
singola causa più comune di intossicazione da farmaci nei bambini di età prescolare.1,2 È stata
osservata tossicità anche nei pazienti in terapia cronica a base di salicilati. Dosi croniche di
salicilati generano una concentrazione terapeutica di circa 60 µg/mL. Nella terapia dell’artrite
reumatoide, si somministrano grandi dosi di salicilato per ottenere una concentrazione terapeutica
di salicilato di 150-300 µg/mL. Una concentrazione sierica di salicilato superiore a 300 µg/mL
è spesso associata a tossicità.3 Gravi effetti tossici si verificano quando la concentrazione
sierica raggiunge i 500 µg/mL.4 Il monitoraggio della concentrazione del salicilato può aiutare
il medico a valutare la gravità dell’intossicazione e determinare i provvedimenti adeguati ai fini
della disintossicazione.
Sono molte le tecniche disponibili per determinare le concentrazioni di salicilato nel siero, fra
cui la gascromatografia (GC), l’immunodosaggio enzimatico, la spettrofotometria e l’analisi in
immunofluorescenza.
Il dosaggio DRI Serum Tox per salicilato è un metodo spettrofotometrico con reagenti liquidi
pronti per l’uso. Il dosaggio misura l’intensità dell’assorbanza a 540 nm, una caratteristica di
un complesso ferrico formato dal salicilato con il nitrato ferrico in un mezzo acido.5 L’intensità
misurata a 540 nm è direttamente proporzionale alla concentrazione di salicilato nel campione
di siero.
Reagenti
Reagente per il dosaggio del salicilato: contiene 25 mL di nitrato ferrico in una soluzione acquosa
di acido nitrico.
Ulteriori materiali necessari (venduti separatamente)
Kit di calibratori per il dosaggio del salicilato: contiene 1 x 5 mL di calibratore negativo (tampone
Tris) e 1 x 2 mL di salicilato in concentrazione di 800 µg/mL in tampone Tris.
Avvertenze e precauzioni
Controllo di qualità e calibrazione
Una buona prassi di laboratorio prevede l’analisi di campioni di controllo allo scopo di garantire
le corrette prestazioni del dosaggio. In commercio sono disponibili svariati controlli per la
verifica della qualità di questo dosaggio. Assicurarsi che i risultati dei controlli rientrino
nel range prestabilito dal laboratorio. Creare una curva di calibrazione lineare a due punti
utilizzando il calibratore negativo (0 µg/mL) e il calibratore da 800 µg/mL. Ricalibrare lo strumento
quando si passa a un nuovo lotto di reagenti o quando i risultati dei controlli non rientrano nei
range prestabiliti. La concentrazione di salicilato nel campione viene determinata mediante
interpolazione del tasso enzimatico dalla curva di calibrazione lineare a due punti. Tutti i requisiti
di controllo della qualità vanno soddisfatti in conformità alle normative vigenti o ai requisiti per
l’accreditamento.
Risultati e valori attesi
Gli analizzatori chimico-clinici determinano automaticamente la concentrazione di salicilato nel
siero o nel plasma. Non è necessario manipolare ulteriormente i dati.
Il siero degli individui non sottoposti a terapia a base di salicilato non deve presentare tracce di
salicilato. Dosi croniche di salicilati generano normalmente un livello terapeutico di 60 µg/mL.
Quando i salicilati vengono utilizzati nella terapia dell’artrite reumatoide, il livello terapeutico
ottimale dovrebbe essere di 150-300 µg/mL.6
La gravità dell’intossicazione da salicilato ha una buona correlazione con i livelli di salicilato nel
siero. In base alla quantità di salicilato ingerita, il nomogramma di Done può aiutare il medico
a valutare la gravità dell’intossicazione e determinare i provvedimenti adeguati ai fini della
disintossicazione.7
Limitazioni
1. La sodio azide interferisce con il dosaggio e pertanto non va utilizzata per la raccolta dei
campioni.
2. L’emolisi può causare interferenza negativa nel dosaggio. L’emoglobina a livelli superiori
a 100 mg/dL causa interferenza significativa.
3. Il dosaggio è previsto per essere eseguito unicamente su siero o plasma umano, non su
sangue intero.
Caratteristiche di rendimento del test tipiche
I seguenti dati tipici sono stati ottenuti mediante un analizzatore chimico-clinico Hitachi 704.
Precisione
La precisione intra-analisi e tra analisi (valutata nel corso di tre settimane) è stata determinata
impiegando tre campioni di siero e ha dato i seguenti risultati.
Intra-analisi (n=20)
I componenti del reagente sono nocivi se ingeriti.
Non usare i reagenti scaduti.
Il reagente contiene acido nitrico diluito. L’acido nitrico è corrosivo. Indossare i guanti quando si
maneggia il reagente. Se il reagente viene a contatto con la cute o con gli occhi, lavare l’area con
acqua per almeno 15 minuti. Se l’arrossamento persiste, rivolgersi immediatamente a un medico.
Preparazione e conservazione dei reagenti
Campione
Mean ± SD
(μg/mL)
% CV
Tra Analisi (n=12)
Mean ± SD
(μg/mL)
% CV
01
49 ± 1,7
3,5
53 ± 3,5
6,6
02
194 ± 2,8
1,4
202 ± 7,6
3,7
03
785 ± 7,7
1,0
798 ± 29,0
3,7
I reagenti sono pronti per l’uso e pertanto non richiedono alcuna preparazione. Conservare a
temperatura ambiente i componenti del dosaggio. Il reagente può essere utilizzato fino alla data
di scadenza riportata sull’etichetta.
Sensibilità
La sensibilità, definita come la concentrazione più bassa differenziabile da 0 ng/mL con una
confidenza del 95%, è di 4,4 mg/dL (44 µg/mL).
Raccolta e trattamento del campione
Linearità
È stata eseguita una diluizione in serie del calibratore da 800 µg/mL con il calibratore negativo
per preparare soluzioni da 400, 200, 100 e 50 µg/mL. Queste soluzioni diluite sono state analizzate
con il presente dosaggio per rilevare la presenza di salicilato. L’analisi di regressione con un
coefficiente di correlazione di 0,999 è stata ottenuta tra le concentrazioni di salicilato attese e
quelle osservate.
L’immunodosaggio può essere eseguito su siero o plasma. Anticoagulanti come eparina, citrati,
ossalati ed EDTA non provocano interferenza con il dosaggio. I campioni di plasma prelevati
con tali anticoagulanti possono quindi essere utilizzati per l’analisi, sebbene sia preferibile
un campione di siero fresco. Per il prelievo o la conservazione del campione non utilizzare
sodio azide. Conservare il campione in frigorifero. È necessario fare il possibile per mantenere
i campioni pipettati privi di residui solidi. Trattare tutti i campioni di siero come se fossero
potenzialmente infettivi.
Procedura di analisi
Specificità
La reattività crociata percentuale (%) dei composti con struttura chimica simile a quella del
salicilato è stata determinata ad una concentrazione di 1000 µg/mL e ha dato i seguenti risultati.
Ai fini del presente immunodosaggio enzimatico omogeneo, è possibile utilizzare gli analizzatori
in grado di mantenere una temperatura costante, pipettare i campioni, miscelare i reagenti,
misurare l’assorbanza a 540 nm e regolare con precisione i tempi di reazione.
Composto
Prima di eseguire il dosaggio, consultare il foglio del protocollo applicativo specifico per
l’analizzatore in dotazione, contenente i parametri e/o ulteriori istruzioni per l’uso.
Concentrazione
Analizzata (μg/mL)
Reattività Crociata %
Acido acetilsalicilico
1000
91,8 %
Acido benzoico
1000
0,0 %
Acido gentisico*
1000
19,1 %
Acido salicilurico*
1000
38,9 %
Metilsalicilato
1000
1,0 %
Salicilammide
1000
68,2 %
*Metaboliti del salicilato.
I seguenti composti sono stati analizzati a concentrazioni fino a 1000 µg/mL e hanno prodotto
valori di reattività crociata inferiori al limite di rilevamento del dosaggio.
Caffeina
Clorpromazina
Destrometorfano (DXM)
Diidrossicodeinone
Efedrina
Etere guaiacol glicerico
Fenilbutazone
Fenobarbitale
Ibuprofene
Indometacina
Omatropina
Paracetamolo
Pirilamina
Propossifene
Non è stata rilevata interferenza con campioni lipemici e itterici con concentrazioni di colesterolo
e bilirubina rispettivamente fino a 400 mg/dL e 30 mg/dL.
Accuratezza e correlazione
Quarantasei campioni clinici di siero sono stati analizzati con il dosaggio DRI Serum Tox per
salicilato (y) e un dosaggio commerciale per salicilato (x). Si sono ottenuti una correlazione con
un’equazione di regressione lineare di y = 0,802 (x) + 11,8 e un coefficiente di correlazione (r)
pari a 0,999. La concentrazione media di salicilato nei campioni analizzati con il dosaggio DRI
è stata di 90,2 µg/mL con un intervallo compreso tra 0 µg/mL e 890 µg/mL. La concentrazione
media di salicilato nei campioni analizzati con il dosaggio commerciale per salicilato è stata di
97,6 µg/mL con un intervallo compreso tra 0 µg/mL e 1100 µg/mL.
Bibliografia
1.
2.
3.
4.
Andrews HB: Salicylate Poisoning. Am Fam Physician, 8:102 (1973).
Pierce AW: Salicylate Poisoning. Pediatrics, 54:342 (1974).
Proudfoot AT: Toxicity of Salicylates. Am J Med, 14:99 (1983).
Irey NS: Blood and Tissue Concentrations of Drugs Associated with Fatalities. Med Clin
North Am, 58:1093 (1974).
5. Natelson S: Microtechniques of Clinical Chemistry for the Routine Laboratory, 2nd ed.,
Springfield, Ill, Charles C. Thomas, Publisher, 1961.
6. Mongan E, Kelly P, Nies K, Porter WW and HE Pamlus: Tinnitus as An Indication of
Therapeutic Serum Salicy late Levels. JAMA, 226:142 (1973).
7. Dugandizc RM, Tierney MG, Dickinson GE, Dolan MC and McKnight DR. Evaluation of
the Validity of the Done Nomogram in the Management of Acute Salicylate Intoxication.
Ann Emerg Med 18: 1186 (1989).
Microgenics Corporation
46360 Fremont Blvd.
Fremont, CA 94538-6406 USA
Assistenza tecnica e assistenza
alla clientela negli USA:
1-800-232-3342
Per gli aggiornamenti del foglietto illustrativo, visitare:
www.thermoscientific.com
Altri Paesi:
Consultare il rappresentante Thermo Fisher Scientific di zona.
0988-4
2010 12
2
Microgenics GmbH
Spitalhofstrasse 94
D-94032 Passau Germany
Tel: +49 (0) 851-88 68 90
Fax: +49 (0) 851-88 68 910