RICKETTSIOSI ed
EHRLICHIOSI
EZIOLOGIA e
DIAGNOSI DI LABORATORIO
Dott.ssa Valentina Ebani
Dip. Patologia Animale, Profilassi e
Igiene degli Alimenti
Facoltà di Medicina Veterinaria
Università di Pisa
EZIOLOGIA
BATTERI


Gram negativi
Pleomorfi
Giemsa
Gimenez
coccoidi/elissoidali
Parassiti intracellulari obbligati
liberi nel citoplasma
(Rickettsie)
in vacuoli intracitoplasmatici
(Ehrlichie)
CELLULE BERSAGLIO
CELLULE EMATOPOIETICHE
CELLULE
MATURE O IMMATURE
ENDOTELIALI
Ehrlichie
Rickettsie
TRASMISSIONE TRAMITE VETTORI INVERTEBRATI
ZECCHE
PRECEDENTE CLASSIFICAZIONE
ORDINE RICKETTSIALES
• Famiglia RICKETTSIACEAE
Rickettsia
Tribù Rickettsieae
Genere
Tribù Ehrlichieae
Genere
Ehrlichia
Generi Coxiella Cowdria Neorickettsia
• Famiglia ANAPLASMATACEAE
Generi Anaplasma
Aegyptianella
Haemobartonella
Eperythrozoon
• Famiglia BARTONELLACEAE
Genere Bartonella
STUDI GENOMICI SU
•Gene 16S rRNA
•Gene groESL
•Geni che codificano per proteine di membrana
ATTUALE CLASSIFICAZIONE
ORDINE RICKETTSIALES
Famiglia RICKETTSIACEAE
Genere Rickettsia
Genere Orientia
Famiglia ANAPLASMATACEAE
Genere Anaplasma
Genere Ehrlichia
Genere Neorickettsia
Genere Wolbachia
Genere Cowdria
FAMIGLIA RICKETTSIACEAE
Rickettsia
TYPHUS GROUP
R. prowatzekii
R. typhi
R. canadensis
Orientia tsutsugamushi
SPOTTED FEVER
GROUP
R. rickettsii
R. conorii
R. felis
R. helvetica
R. akari
R. sibirica
entrata
moltiplicazione
rilascio
Rickettsia rickettsii
FEBBRE DELLE MONTAGNE ROCCIOSE
ROCKY MOUNTAIN SPOTTED FEVER (RMSF)
Ixodes ricinus
Rickettsia rickettsii
Rickettsia conorii
FEBBRE BOTTONOSA DEL MEDITERRANEO
Rhipicephalus sanguineus
Rickettsia felis
Rickettsia typhi
CANE
GATTO
Ctenocephalides felis
!?
FAMIGLIA ANAPLASMATACEAE
Anaplasma
A. phagocytophila
A. platys
A. marginale
A. bovis
Ehrlichia
E. canis
E. chaffeensis
E. ewingii
E. muris
E. ruminantium
Neorickettsia
N. risticii
N. sennetsu
N. helminthoeca
entrata
moltiplicazione
rilascio
Ehrlichia canis
EHRLICHIOSI MONOCITICA
“PANLEUCOPENIA TROPICALE CANINA”
Rhipicephalus sanguineus
MONOCITI
• Ehrlichia chaffeensis
EHRLICHIOSI MONOCITICA
MONOCITI
• Ehrlichia ewingii
EHRLICHIOSI GRANULOCITICA
GRANULOCITI
Anaplasma phagocytophila
“EHRLICHIOSI” GRANULOCITICA
Ixodes ricinus
Neorickettsia risticii
EHRLICHIA MONOCITICA
“POTOMAC HORSE FEVER”
MONOCITI
DIAGNOSI DI
LABORATORIO
DIAGNOSI INDIRETTA
• Immunofluorescenza indiretta
“gold standard”
Soglia di positività
• 1:40
• 1:64
Ehrlichie
Rickettsie
SIERO
• VANTAGGI:
Vetrini IFI per E.canis
A. phagocytophila
N. risticii
R. conorii
R. rickettsii
R. typhi
R. prowazekii
• SVANTAGGI:
Attrezzatura
Lettura
Dip. Patologia
Animale,
Profilassi e
Igiene degli
Alimenti - Pisa
ALTRI TEST SIEROLOGICI
E. canis
KIT COMMERCIALI
Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)
ANTIGENI
• whole cell
• Proteine ricombinanti (p30 p30-1)
• Proteina ricombinante (rMAP2)
SENSIBILITA’
KIT
Ridotta con titoli anticorpali 1:40 – 1:80
CANI CON EHRLICHIOSI IN FASE NON ACUTA
HANNO TITOLI ANTICORPALI BASSI
PROBLEMA CROSS-REAZIONI
NON CONFONDERE LE CROSS-REAZIONI
CON LE CO-INFEZIONI
Frequenti le co-infezioni legate allo stesso vettore
E. canis / R. conorii
A. phagocytophila / R. rickettsii
DIAGNOSI DIRETTA
Ehrlichiosi
• STRISCIO
polmone,
canis)
buffy coat
sangue da vasi capillari
aspirato tissutale da milza ,
linfonodi
(E.
ISOLAMENTO
• difficoltà di esecuzione
• linee cellulari diverse
• laboratorio di classe 3 (eccetto E. canis)
Su stipite isolato sono possibili studi spr di
ordine epidemiologico
DIAGNOSI MOLECOLARE
Sangue in EDTA
buffy coat
Tessuti
• Estrazione DNA
• Polymerase chain reaction
(PCR)
Utilizzo di primer diversi a seconda
dell’agente eziologico ricercato
Presso Dip. Patologia Animale, Profilassi e
Igiene degli Alimenti, Università di Pisa
E. canis
E. chaffeensis
A. phagocytophila
N. risticii
Rickettsia spp.
sequenziamento
CONCLUSIONI
• Diversi agenti responsabili di ehrlichiosi e
rickettsiosi nel CANE
• Sierologia mediante IFI
• Ausilio offerto da metodiche molecolari