La produzione di SPARC/Osteonectina da parte
dei macrofagi infiltranti il tumore favorisce la
metastatizzazione del carcinoma mammario
Emma Di Carlo*, Sabina Sangaletti**, Carlo Sorrentino*, Silvia
Gariboldi***, Cristiano Rumio***, Claudia Chiodoni**, Mario P.
Colombo**
* Università
“G. d’Annunzio”, Dipartimento di Oncologia e Neuroscienze, Sezione
di Anatomia Patologica, Chieti, Italia
** Istituto Nazionale dei Tumori, Dipartimento di Oncologia Sperimentale, Unità
di Immunoterapia e Terapia Genica, Milano, Italia
*** Università degli Studi di Milano, Dipartimento di Morfologia Umana, Milano,
Italia
Introduzione
Una neoplasia è costituita non solo da cellule tumorali
ma anche da tessuto connettivo e leucociti infiltranti.
Lo sviluppo del tumore e l’acquisizione della capacità
metastatica dipendono dall’interazione fra queste tre
componenti.
Introduzione
 Nell’interazione fra cellule e matrice extracellulare, svolge un
ruolo di primo piano la glicoproteina legante il calcio
denominata SPARC (Secreted Protein Acid Rich in Cysteine)
anche nota come Osteonectina.
 Lo SPARC è espresso durante lo sviluppo embrionale; negli
adulti viene prodotto durante i processi di riparazione e
rimodellamento del tessuto connettivo (cicatrizzazione,
crescita tumorale).
Obiettivi dello studio
 È stato recentemente osservato che alti livelli di SPARC,
nel carcinoma mammario, sono associati ad una
prognosi peggiore.
Scopo del nostro studio è indagare i meccanismi
che legano l’espressione di SPARC al processo di
crescita e progressione tumorale.
Metodi
Linea cellulare di carcinoma mammario 4T1
Inoculazione nel tessuto
adiposo mammario di:
Topi BALB/c
Topi SPARC KO
Topi BALB/c con midollo Topi SPARC KO con
midollo osseo BALB/c
osseo SPARC KO
Istologia / Immunoistochimica / Microscopia confocale /
Citofluorimetria / Saggi di migrazione sulle cellule tumorali in vitro
Risultati
Le cellule tumorali crescevano in maniera simile
nei topi BALB/c e negli SPARC KO.
Tuttavia i topi BALB/c sviluppavano un numero
maggiore di metastasi nei polmoni, nel fegato, nei
linfonodi e nell’encefalo.
Risultati
La colorazione tricromica secondo Masson mostra come nei
tumori provenienti dai topi BALB/c il tessuto connettivo sia
ben rappresentato e costituito da una robusta trama di fibre
collagene
BALB/c
SPARC KO
Risultati
L’impregnazione
argentica
dimostra
come
anche
la
componente reticolare risulti molto ben sviluppata nei tumori
provenienti dai topi BALB/c rispetto agli SPARC KO
BALB/c
SPARC KO
Risultati
L’immunoistochimica conferma la maggiore deposizione di fibre collagene e
di fibronectina nei tumori provenienti da topi BALB/c rispetto agli SPARC KO
Fibronectina
Collagene IV
BALB/c
SPARC KO
Risultati
La colorazione immunoistochimica mostra come nei tumori
sviluppati nei topi BALB/c vi sia una notevole espressione di
SPARC, che invece risulta assente nei topi SPARC KO.
BALB/c
SPARC KO
Risultati
I tumori provenienti dai topi SPARC KO in cui era
stato
trapiantato
midollo
osseo
BALB/c
presentavano produzione di SPARC all’interno della
massa neoplastica e caratteristiche morfologiche
identiche ai tumori provenienti dai topi BALB/c.
Quindi, la sorgente di SPARC era probabilmente
costituita da cellule di derivazione midollare.
Risultati
La doppia immunofluorescenza, visualizzata in microscopia
confocale, ha permesso di individuare nei macrofagi
infiltranti il tumore la principale sorgente di SPARC.
SPARC
Mac-1
(macrofagi)
Merge
Risultati
Saggi di migrazione in vitro hanno permesso di
stabilire che lo SPARC prodotto dai macrofagi era
capace di indurre la migrazione delle cellule 4T1 su
di un substrato di fibronectina.
Il silenziamento, mediante RNA-interference, del
gene per l’integrina b5 nelle cellule neoplatiche
bloccava la migrazione indotta dallo SPARC in vitro
e riduceva il numero delle metastasi in vivo.
Conclusioni
Lo SPARC prodotto dai macrofagi infiltranti il tumore:
 Induce la deposizione di matrice extracellulare
 Favorisce la disseminazione metastatica agendo
sulla migrazione cellulare mediata dalle integrine