ISTRUZIONI PER L'USO
TERRENI SU PIASTRA
PRONTI ALL'USO
PA-257018.02
Rev.: giugno 2003
BD Pseudomonas Agar P
USO PREVISTO
BD Pseudomonas Agar P (agar Pseudomonas P) è un terreno di coltura utilizzato per la
differenziazione della Pseudomonas aeruginosa da altre specie di Pseudomonas in base alla
produzione di piocianina.
PRINCIPI E SPIEGAZIONE DELLA PROCEDURA
Metodo microbiologico.
BD Pseudomonas Agar P, realizzato in base alla formulazione descritta da King, Ward e
Raney, viene modificato per soddisfare le specifiche USP.1,2
In BD Pseudomonas Agar P, il peptone Bacto fornisce il carbonio e l'azoto necessari alla
crescita del batterio. Esso aumenta la produzione di piocianina con l'aggiunta di cloruro di
magnesio e solfato di potassio, inibendo anche la formazione di fluoresceina. Entrambi i
pigmenti si diffondono dalle colonie di Pseudomonas nel terreno in cui avviene la crescita del
batterio. Alcuni ceppi di Pseudomonas elaborano entrambi i pigmenti, mentre altri elaborano
solo uno dei due. Su questo terreno di coltura, la Piocianina assume una colorazione blu. Il
glicerolo serve da fonte di energia, favorendo anche la produzione di piocianina.
L'agar Pseudomonas P è menzionato nel FDA Bacteriological Analytical Manual.3 Esso non va
utilizzato come terreno di isolamento per patogeni presenti in campioni clinici, ma può essere
usato per la differenziazione di isolati ottenuti da campioni clinici su altri terreni di coltura.
REAGENTI
BD Pseudomonas Agar P
Formula* per litro di acqua purificata
Peptone Bacto
20,0 g
Cloruro di magnesio
1,4
Solfato di potassio
10,0
Glicerolo
10,0
Agar Bacto
15,0
pH 7,0 ± 0,2
*Compensata e/o corretta per soddisfare i criteri di rendimento.
PRECAUZIONI
. Solo per uso professionale.
Non usare le piastre se presentano tracce di contaminazione microbica, alterazioni cromatiche,
essiccamento, fissurazioni o altri segni di deterioramento.
Per maneggiare i prodotti in condizioni asettiche, riconoscere i rischi biologici e smaltire i
prodotti usati, consultare le ISTRUZIONI GENERALI PER L'USO.
CONSERVAZIONE E VITA UTILE
Alla consegna, conservare le piastre al buio a 2 – 8 °C nella confezione originaria fino a
immediatamente prima dell'uso. Evitare congelamento e surriscaldamento. Le piastre possono
essere inoculate sino alla data di scadenza (v. l'etichetta sulla confezione) e incubate per i
tempi di incubazione raccomandati.
Le piastre prelevate dalle confezioni da 10 già aperte possono essere usate per una settimana
se conservate in luogo pulito a 2 – 8 °C.
CONTROLLO DI QUALITÀ A CURA DELL'UTENTE
Inoculare i campioni rappresentativi con i seguenti ceppi (per informazioni più dettagliate, v.
ISTRUZIONI GENERALI PER L'USO). Incubare le piastre a 35 ± 2 °C per 18 – 24 h. Controllare
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la crescita ed esaminare le colonie sotto una luce ultravioletta pari a 254 – 260 nm (lampada di
Wood).4
Ceppo per test
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 o
ATCC 9027
Burkholderia cepacia ATCC 25416
Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637
Escherichia coli ATCC 25922
Non inoculate
Risultati della crescita
Colonie verdazzurre, con pigmento verdastro
diffuso nel terreno circostante; fluorescenza
sotto la luce ultravioletta
Colonie dal beige al verde chiaro; nessun
pigmento; nessuna fluorescenza sotto la luce
ultravioletta
Colonie beige; nessun pigmento; nessuna
fluorescenza sotto la luce ultravioletta
Colonie beige; nessun pigmento; nessuna
fluorescenza sotto la luce ultravioletta
Color ambra da chiaro a medio, lievemente
opalescente
PROCEDURA
Materiali forniti
BD Pseudomonas Agar P (piastre impilate Stacker da 90 mm). Microbiologicamente
controllate.
Materiali non forniti
Terreni di coltura accessori, reagenti e apparecchiature di laboratorio necessarie.
Tipi di campioni
BD Pseudomonas Agar P non va utilizzato come terreno di isolamento della Pseudomonas
aeruginosa presente in campioni clinici, ma può essere usato per la differenziazione di isolati
ottenuti da campioni clinici o da materiali non clinici su altri terreni di coltura (v. anche
PRESTAZIONI METODOLOGICHE E LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA).
Procedura del test
1. Ottenere l'inoculo da una coltura pura di 18 – 24 h del ceppo per test.
2. Inoculare le piastre strisciando la superficie.
3. Incubare a 35 ± 2 °C per 18 – 24 h.
Risultati
Controllare la crescita ed esaminare le colonie sotto una luce ultravioletta pari a 254 – 260 nm
(lampada di Wood).4 Prestare particolare attenzione quando si utilizza l'illuminazione
ultravioletta, in quanto potrebbe avere un effetto battericida. Prima di collocare la coltura sotto la
luce ultravioletta, assicurarsi che si sia verificata una buona crescita. La diffusione di un
pigmento blu nell'agar indica un risultato positivo.
PRESTAZIONI METODOLOGICHE E LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA
BD Pseudomonas Agar P è un terreno di coltura standard utilizzato per la differenziazione
della Pseudomonas aeruginosa da altre specie di Pseudomonas e organismi correlati in base
alla produzione di piocianina. Esso non deve essere utilizzato come terreno di isolamento, ma
viene usato con colture pure di ceppi già isolati da materiali clinici e non clinici.2-4 Una modifica
selettiva di questo terreno è BD Pseudomonas Isolation Agar, che può essere utilizzato per
l'isolamento e la differenziazione.
Occasionalmente, è possibile rilevare in BD Pseudomonas Agar P una coltura di
Pseudomonas che produce nel terreno solo piccole quantità di pigmento. Quando ciò avviene,
sul terreno sarà visibile un colore verdazzurro. In questo caso, è possibile confermare la
presenza di piocianina attraverso un'estrazione con cloroformio (CHCl3).4
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La formazione di colonie non pigmentate non esclude completamente l'isolamento della
Pseudomonas aeruginosa. Di conseguenza, le colonie non pigmentate presenti su questo
terreno dovranno essere sottoposte a identificazione biochimica completa.5
Un ceppo di Pseudomonas che produce piocianina produce in genere anche fluoresceina. Di
conseguenza, esso dovrà essere differenziato con altri mezzi dalle altre specie di Pseudomonas
caratterizzate dalla semplice fluorescenza. La temperatura di incubazione può essere un fattore
determinante, in quanto la maggior parte degli altri ceppi fluorescenti non cresce a 35 °C, ma
solo a 25 – 30 °C.4
BIBLIOGRAFIA
1. King, E. O., M. K. Ward, and D. E. Raney. 1954. Two simple media for the demonstration of
pyocyanin and fluorescein. J. Lab. Clin. Med. 44:301.
2. The United States Pharmacopeia. 1995. The United States Pharmacopeia, 23rd ed. United
States Pharmacopeial Convention, Rockville, MD, USA.
3. Bacteriological Analytical Manual, 8th edition, Revision A. 1998. AOAC International,
Gaithersburg, MD, USA.
4. MacFaddin, J. F. 1985. Media for isolation-cultivation-identification- maintenance of medical
bacteria, vol. 1. Williams & Wilkins, Baltimore, MD, USA.
5. Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). 2003.
Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
CONFEZIONE/DISPONIBILITÀ
BD Pseudomonas Agar P
N. di cat. 257018
Terreni su piastra pronti all'uso, confezioni da 20
ULTERIORI INFORMAZIONI
Per ulteriori informazioni, rivolgersi al rappresentante BD di zona.
BD Diagnostic Systems
Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50
Fax: +49-62 21-30 52 16
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11 rue Aristide Bergès
38800 Le Pont de Claix/France
Tel: +33-476 68 3636 Fax: +33-476 68 3292
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Bacto is a trademark of Difco Laboratories, division of Becton, Dickinson and Company
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection
 2003 Becton, Dickinson and Company
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