Colonne Poroshell 120 Agilent per HPLC e UHPLC
Analisi LC efficaci, rapide
e affidabili
Colonne Poroshell 120 Agilent:
sfrutta al massimo LE POTENZIALITÀ
dei sistemi LC ed LC/MS del laboratorio
“Abbiamo scelto le colonne
Poroshell 120 per l'efficacia
delle prestazioni”
“Le colonne Poroshell 120
offrono con continuità,
prestazioni eccellenti
e rappresentano il nuovo
‘standard’ adottato dal
nostro laboratorio”
“Analizzo frequentemente
campioni complessi e con
le colonne Poroshell 120
risparmio moltissimo tempo”
“Poroshell 120 è la mia
colonna di riferimento”
Testimonianze degli utilizzatori
Poroshell 120
Le colonne Poroshell 120 offrono un'eccezionale efficienza nel caso delle analisi HPLC
standard e potenziano in misura significativa le prestazioni di qualsiasi strumento, sia dei
sistemi meno recenti da 400 bar sia dei nuovi sistemi UHPLC da 1.300 bar.
Queste colonne rappresentano l'ulteriore evoluzione della tecnologia introdotta con le colonne
Poroshell 300 e incrementano la produttività e la risoluzione per una gamma ancora più
ampia di piccole molecole e peptidi. Tra le funzionalità avanzate ricordiamo:
• Eccellente riproducibilità da lotto a lotto: le colonne Poroshell 120 sono realizzate con un
processo proprietario monofase basato su involucro poroso che riduce drasticamente le minime
differenze tra colonne e lotti
• Velocità e risoluzione paragonabili a quelle delle colonne con particelle di
dimensioni inferiori a 2 µm con una contropressione molto più bassa e netti miglioramenti
rispetto alle colonne da 5 μm, per un nuovo livello di flessibilità ed efficienza nelle prestazioni
HPLC e UHPLC
• Migliore forma dei picchi, in particolare a pH 6-7, per ottenere più rapidamente risultati
accurati
• Lunga durata della colonna: le colonne Poroshell 120 sono dotate di un frit standard da 2 µm
e resistono all'ostruzione anche in presenza di campioni sporchi
• Fino a DODICI fasi stazionarie, a seconda delle dimensioni delle particelle, tra
cui SB-C18 e SB-C8 per applicazioni a basso pH e Poroshell HPH-C18 e HPH-C8 per
applicazioni ad alto pH
• Semplice trasferimento del metodo alle fasi legate ZORBAX e all'interno della gamma
Poroshell 120, per la massima produttività da laboratorio a laboratorio, in tutto il mondo
• Precolonne UHPLC opzionali che riducono il costo operativo prolungando la durata delle
colonne Poroshell 120
• Scalabilità all'interno della gamma Poroshell 120 con colonne opzionali nelle
configurazioni da 4 μm e 2,7 μm per ottimizzare le prestazioni dei metodi
2
Sommario
Cosa contraddistingue le colonne Poroshell 120?
Gli esclusivi processi Agilent per la produzione di particelle a superficie porosa e fasi legate
sono i fattori che contribuiscono a ottenere eccellenti risultati Pagina 4
Un'ampia scelta di dimensioni delle particelle e fasi legate per
una selettività e scalabilità all'insegna della flessibilità
Le colonne Poroshell 120 da 4 μm e 2,7 μm sono scalabili dalle/alle fasi ZORBAX Pagina 6
Aumento della produttività dei sistemi HPLC
Ora puoi: prestazioni Fast LC a pressioni HPLC Pagina 16
Aumento della produttività dei sistemi LC ed LC/MS
Separazioni ad alta risoluzione e alta velocità con gli strumenti già presenti in laboratorio
Pagina 19
Incremento della flessibilità dei metodi UHPLC
Ora puoi eseguire separazioni estremamente rapide e ad alta efficienza nelle più svariate
condizioni di separazione Pagina 21
Semplice trasferimento del metodo
Risparmia tempo e denaro trasferendo i metodi dalle colonne da 5 μm o 3,5 μm alle colonne
Poroshell 120 Pagina 24
Soluzioni per far fronte ai problemi di risoluzione e scarsa
produttività
Le colonne Poroshell 120 ti permettono di affrontare con successo le sfide di tutti i giorni
Pagina 28
Nuove opzioni per proteine e peptidi
Maggiore rapidità nella mappatura dei peptidi e nelle separazioni di proteine con la tecnologia
Poroshell Pagina 31
Cromatografia liquida infinitamente superiore
Il nuovo sistema LC Agilent 1290 Infinity II Pagina 35
Specifiche e informazioni per gli ordini Pagina 36
Maggiori informazioni sulle colonne Poroshell 120 Agilent sono disponibili sul sito
agilent.com/chem/poroshell120
3
Alta efficienza CON CONTROPRESSIONI più basse
e comprovata uniformità da colonna a colonna
Le caratteristiche uniche delle colonne Poroshell 120
Una caratteristica chiave delle colonne Poroshell 120 Agilent è l'impaccamento della colonna con
microparticelle a superficie porosa.
Le colonne Poroshell 120 sono disponibili con particelle da 4 μm e 2,7 μm per permettere la
scalabilità delle prestazioni. Le particelle possiedono un nucleo solido in silice e un involucro
poroso. Questa configurazione unica offre gli stessi vantaggi in termini di prestazioni delle particelle
completamente porose più piccole, ma con valori di contropressione più bassi.
Completamente porosa
Agilent Poroshell 120 2,7 μm
1,8 μm
Agilent Poroshell 120 4 μm
0,5 μm
0,75 μm
1,7 μm
2,5 μm
Dimensioni dei pori
120 Å,
ideali per piccole
molecole
1,8 μm
2,7 μm
4 μm
Processo di produzione delle particelle Poroshell 120
Allo scopo di creare la colonna ottimale per le separazioni di piccole molecole, abbiamo rivoluzionato la nostra
tecnologia per particelle a superficie porosa. Nello specifico, abbiamo ridotto al minimo le fasi di produzione per
ottenere la massima riproducibilità tanto delle particelle quanto delle analisi cromatografiche.
FASE 1
Creazione del nucleo solido
FASE 3
Applicazione della fase legata
FASE 2
I nuclei Poroshell 120 possiedono una
superficie molto liscia e dimensioni uniformi
delle particelle; questi fattori contribuiscono
a restringere la distribuzione complessiva
delle dimensioni delle particelle. Di
conseguenza, l'impaccamento del letto
delle colonne è superiore e l'efficienza
più elevata rispetto alle particelle
completamente porose.
Agilent sta ampliando la propria gamma di
fasi stazionarie Poroshell 120 per allinearla
alla gamma ZORBAX, così da rendere
flessibile lo sviluppo dei metodi e garantire
la scalabilità.
4
Applicazione dell'involucro poroso
Agilent applica l'involucro poroso in
un'unica fase, analogamente al caso
della tecnica di coacervazione impiegata
nella produzione delle colonne ZORBAX
convenzionali. Questo esclusivo processo
monofase migliora le rese e la riproducibilità
da colonna a colonna rispetto ai processi di
produzione di altri fornitori.
Confronto delle distribuzioni
delle dimensioni tra particelle
completamente porose e
particelle Poroshell 120
ZORBAX RX SIL 1,8 µm
ZORBAX RX SIL 5,0 µm
3.000
2.000
1.000
0
-1,5
La misura standard della
distribuzione delle dimensioni
delle particelle è il rapporto 90/10,
che deve essere inferiore a 1,5
La distribuzione delle dimensioni è accettabile
per tutte le particelle completamente porose
ZORBAX (1,8 μm, 3,5 μm e 5,0 μm). Le
particelle Poroshell 120, tuttavia, possiedono
una distribuzione delle dimensioni
più stretta del 25%, che si traduce in un
miglioramento sostanziale dell'efficienza della
colonna.
Quanto più semplice il processo
di produzione, tanto più
omogenea la colonna
Un processo basato sull'applicazione
dell'involucro in un'unica fase consente di
creare una colonna con caratteristiche di
alta riproducibilità, come evidenziato dal
seguente confronto tra cinque lotti diversi.
La stretta distribuzione finale delle dimensioni delle
particelle è la conseguenza diretta della distribuzione iniziale
estremamente ridotta delle dimensioni dei nuclei. Ciò riduce
al minimo la diffusione e determina un'alta efficienza delle
colonne con particelle a superficie porosa.
ZORBAX RX SIL 3,5 µm
4.000
Numero
Il grafico dimostra che le colonne Poroshell
120 possiedono la più stretta distribuzione
finale delle dimensioni delle particelle,
conseguenza diretta della distribuzione
iniziale estremamente stretta delle
dimensioni dei nuclei.
Poroshell 120 2,7 µm
5.000
-1,0
-0,5
0,0
0,5
1,0
1,5 (µm)
Poroshell 120
(2,7 µm)
LN B10006
ZORBAX
1,8 µm
ZORBAX
3,5 µm
ZORBAX
5,0 µm
10%
2,40 µm
1,67 µm
3,07 µm
4,59 µm
90%
2,85 µm
2,45 µm
4,44 µm
6,21 µm
Rapporto 90%/10%
1,16
1,47
1,45
1,35
Prestazioni riproducibili da lotto a lotto, anno dopo anno
Le particelle Poroshell 120 sono realizzate con un processo di produzione proprietario per
particelle porose inventato da Agilent. Anziché ricorrere alla tradizionale tecnica multistrato,
le colonne Poroshell 120 sono prodotte utilizzando un processo di coacervazione in
un'unica fase che genera particelle finali più uniformi e migliora l'affidabilità dei risultati
cromatografici.
Poroshell 120 EC-C18, 3,0 x 100 mm, 2,7 µm
(codice 695975-902) da cinque lotti diversi
2010
mAU
B10015
100
50
0
1
2
3
4
mAU
B10018
100
50
0
1
2
3
4
mAU
150
100
50
0
min
B11041
1
2
3
4
mAU
150
100
50
0
min
B11256
1
2012
min
2
3
4
mAU
150
100
50
0
min
B12041
1
2
3
4
min
Maggiori informazioni sulle colonne Poroshell 120 Agilent sono disponibili sul sito
agilent.com/chem/poroshell120
5
Un'ampia scelta di fasi legate per
non rinunciare mai alla selettività
Le colonne Poroshell 120 sono prodotte nello stesso stabilimento dedicato
alla produzione della gamma di colonne Agilent ZORBAX all'avanguardia
nel settore. La chimica di legame impiegata nelle colonne Poroshell
120 riflette quella di tutte le colonne ZORBAX, agevolando quindi il
trasferimento del metodo e garantendo la scalabilità da
laboratorio a laboratorio, in tutto il mondo.
Ogni tipo di selettività necessaria per perfezionare
la separazione
Un'eccellente prima scelta
Poroshell 120 EC-C18 (USP L1) ed EC-C8 (USP L7)*
Questa fase stazionaria ad alte prestazioni assicura forma dei
picchi e risoluzione eccellenti per specie acide, basiche e neutre.
La fase stazionaria è molto simile alla fase ZORBAX Eclipse Plus
per semplificare la trasferibilità dei metodi.
Forma dei picchi, efficienza, risoluzione e durata utile eccezionali.
O
O
Suggerimento: inizia con una fase stazionaria C18 e passa alla fase C8 per
una ritenzione inferiore con un'ampia gamma di campioni.
O
O
O
O
N
HO
N
O
O
N
N
O
N
O
N
N
N
N
N
HO
O
N
O
H
HO
HO
N
O
O
N
O
O
O
N
O
HO
O
HO
O
O
O
HO
O
H3 C
N
O
O
O
O
OH
O
“I metodi possono essere convertiti facilmente dalle colonne
[ZORBAX] Eclipse Plus alle colonne Poroshell 120; nel nostro
laboratorio le utilizziamo con qualsiasi metodo.”
Testimonianze degli utilizzatori che lavorano nei laboratori
di tossicologia
6
N
N
“Vari metodi pubblicati da Agilent impiegano le colonne
Poroshell 120, cosa che facilita lo sviluppo di nuovi metodi.”
6
C
N
Poroshell 120 Phenyl-Hexyl (USP L11)*
Questa fase stazionaria offre selettività alternativa
per i gruppi fenilici ed è molto simile alla fase
ZORBAX Eclipse Plus Phenyl-Hexyl per semplificare il
trasferimento del metodo.
OH H
N
O
CH 3
CH3
H3CO
O
Poroshell 120 PFP (USP L43)*
H3C
O
Applicazioni a pH elevato
O
HO
CH
3
HO
O
F
O
O
O
O
N
H
H3C
H
HO
O
O
O
OH
F
S
Bonus-RP è una fase con gruppo
polare incorporato per migliorare la
forma dei picchi per i composti basici
a pH basso e intermedio. Questa
fase stazionaria è identica a ZORBAX
Bonus-RP.
HO H
O
HO
O
OH
Poroshell 120 Bonus-RP (USP L60)
O
O
HO
N
O
HO
La silice in questo riempimento speciale è stata modificata
O
tramite un processo proprietario per incrementare la stabilità a pH
elevato.
O
CH3
O
Poroshell HPH-C18 (USP L1) e HPH-C8 (USP L7)
CH
OH
F
Selettività alternativa per composti
alogenati e analiti polari.
O
OH H
N
CH3
O
OH H
N
OH
Poroshell 120 HILIC*
HO
Composta di silice non legata,
la colonna Poroshell 120 HILIC
trattiene e separa analiti polari di
HO
piccole dimensioni.
O
Applicazioni a pH basso
StableBond SB-C18 (USP L1) e SB-C8
(USP L7)
O
N
H
N
StableBond offre buone prestazioni con specie acide, basiche
e neutre e una durata utile superiore a basso pH. Inoltre queste
fasi stazionarie possono essere trasferite facilmente dalle fasi
ZORBAX SB-C18 e ZORBAX SB-C8.
O
Poroshell 120 EC-CN (USP L10)
Simile a ZORBAX Eclipse XDB-CN, questa fase
ciano semplifica il trasferimento del metodo.
Poroshell 120 SB-Aq
Questa fase proprietaria fornisce una selettività
alternativa ed è ideale per composti polari e in
condizioni con alto contenuto d’acqua. La fase
stazionaria è identica a ZORBAX SB-Aq.
HO
O O
OH
OH
O
OH
H
HO
H
N
H3C
OH
H
HCl
CH 3
OH O
HO
O
HO
OH
O
OH
OH
OH
OH
* Ora disponibile con particelle di dimensioni pari a 4 μm e 2,7 μm.
Visita agilent.com/chem/discoverporoshell per accedere a video, note applicative e altro ancora oppure per effettuare un ordine
7
7
CH3
CH3
La differenza di selettività tra le
colonne Poroshell 120 EC-C18
e Poroshell 120 SB-C18 Agilent
permette di ottimizzare le
separazioni
Poroshell 120 SB-C18, 3,0 x 100 mm, 2,7 µm
(codice 685975-302)
5
1
0,95
0,9
0,85
0,8
0,75
0,7
0,65
Fase mobile: 35% H2O, 65% CH3CN
Flusso: 1 mL/min
Temperatura: 4
0,5
0,45
0,4
0,35
30 ºC
0,3
Acquisizione MS: Dynamic MRM
AnalitiIone
Fragmentor
precursore
Anandamide
(AEA) 348 135
Palmitoiletanolamide
(PEA) 300
135
2-arachidonoilglicerolo (2-AG) 379 135
Oleoiletanolamide
(OEA) 326 135
Sorgente MS:
Temp. gas: Flusso di gas: Nebulizzatore:
Capillare:
0,6
0,55
350 ºC
12 L/min
40 psi
4.000 V
Analiti:
1. Anandamide (AEA)
2. 2-arachidonoilglicerolo
3. Impurezza
4. Palmitoiletanolamide (PEA)
5. Oleoiletanolamide (OEA)
0,25
0,2
2
0,15
0,1
0,05
3
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
1,6
1,8
2
2,2
2,4
2,6
2,8
3
3,2
3,4
3,6
3,8
4
Conteggi (%) vs. tempo di acquisizione (min)
4,2
4,4
4,6
4,8
5
5,2
5,4
5,6
5,8
6
6,2
6,4
6,6
6,8
Poroshell 120 EC-C18, 3,0 x 100 mm, 2,7 µm
(codice 695975-302)
1
5
0,95
0,9
0,85
0,8
0,75
0,7
0,65
0,6
0,55
0,5
4
0,45
0,4
0,35
0,3
0,25
2
0,2
0,15
3
0,1
0,05
300
0
250
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
1,6
1,8
2
2,2
2,4
2,6
2,8
3
3,2
3,4
3,6
3,8
4
Conteggi (%) vs. tempo di acquisizione (min)
4,2
4,4
4,6
4,8
5
5,2
5,4
5,6
5,8
6
200
150
100
La ritenzione più bassa della
colonna Poroshell 120 EC-C8
Agilent accelera l'analisi dei
composti non polari
Fase mobile:
60% CH3CN, 40% H2O
Flusso:
0,85 mL/min
Temperatura:
26 ºC
Rivelazione:
254 nm
Analiti:2 µL di campione di controllo RRLC
(codice 5188-6529), alchilfenoni
50
0
Poroshell
120 EC-C8, 3,0 x 50 mm, 2,7 µm
0,5
1
1,5
(codice 699975-306)
2
2,5
3
3,5
2
2,5
3
3,5
300
250
200
150
100
50
0
0,5
1
1,5
Poroshell 120 EC-C18, 3,0 x 50 mm, 2,7 µm
(codice 699975-302)
300
250
200
150
100
50
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
300
250
200
150
100
8
50
0
0,5
6,2
6,4
6,6
6,8
L'ampia scelta di dimensioni delle particelle
consente di selezionare quella ideale per lo
sviluppo di metodi
Semplice sostituzione
istantanea per i metodi LC
tradizionali esistenti con
particelle da 5 μm
Analisi in gradiente di una miscela di fenoli a 1,5 mL/min
ZORBAX Eclipse Plus C18 5 µm
mAU
200
100
Colonne: Tutte le colonne sono 4,6 x 100 mm
0
Flusso: 0,4 mL/min
Temperatura: 25 °C
Rivelazione: 260 nm
Analiti: Miscela di fenoli
Gradiente: 40-80% MeOH/14 min
6
8
10
12
min
4
6
8
10
12
min
4
6
8
10
12
min
6
8
10
12
min
Poroshell 120 EC-C18 4 µm
100
0
2
Poroshell 120 EC-C18 2,7 µm
mAU
200
100
0
2
ZORBAX Eclipse Plus C18 1,8 µm
mAU
200
100
0
2
4
Analisi in gradiente di una miscela di fenoli scalato a flussi compresi tra 0,5 e 3,5 mL/min
600
90,00
80,00
500
70,00
Capacità di picco
A: H2O + acido formico 0,1%
B: MeOH + acido formico 0,1%
4
mAU
200
Strumento:
LC Agilent 1260 Infinity, bypass di
regolatore di impulsi e colonna di
miscelazione
Fase mobile: 2
60,00
Pressione (bar)
Questa separazione di una miscela di fenoli
dimostra la scalabilità della selettività nel
passaggio dalle colonne Eclipse Plus C18
da 5 μm alle colonne Poroshell 120 da
4 μm e 2,7 μm, oltre a evidenziare un netto
miglioramento delle prestazioni in termini
di capacità di picchi. Infine, la colonna da
4 μm è caratterizzata da incrementi minimi
di contropressione rispetto alle colonne
esistenti da 5 μm, mentre nel caso della
colonna da 2,7 μm la contropressione è
significativamente più bassa rispetto alle
colonne con particelle di dimensioni inferiori
a 2 μm.
50,00
40,00
30,00
20,00
300
200
100
10,00
0,00
400
0
1
2
Flusso (mL/min)
3
4
0
0
1
2
Flusso (mL/min)
3
Poroshell 120 EC-C18 4 µm
Poroshell 120 EC-C18 2,7 µm
ZORBAX Eclipse Plus C18 1,8 µm
ZORBAX Eclipse Plus C18 5 µm
4
Maggiori informazioni sulle colonne Poroshell 120 Agilent sono disponibili sul sito
agilent.com/chem/poroshell120
9
Metodi di screening ad alte prestazioni
con le colonne Poroshell HPH-C18 e HPH-C8
Un efficace processo di sviluppo di metodi è essenziale per garantire stabilità, affidabilità e lunga
durata dei metodi. Poiché ritenzione e selettività dei composti ionizzabili (quali acidi e basi)
possono variare significativamente al variare del pH, una prassi ormai consolidata prevede
il ricorso ad analisi a pH basso, intermedio ed elevato nel corso dello sviluppo di metodi.
Le colonne Poroshell HPH-C18 e HPH-C8 sono realizzate modificando chimicamente le
particelle Poroshell mediante una tecnologia proprietaria che consente di ottenere un'alta stabilità
a vari valori di pH. Ciò significa che puoi utilizzare la gamma di colonne Poroshell 120 per ogni
esigenza di sviluppo di metodi Fast LC, indipendentemente dal pH della fase mobile.
Separazioni affidabili al variare del pH
Nell'esempio che segue un metodo a pH basso, intermedio ed elevato consente di separare la stessa miscela
di specie acide, basiche e neutre. La massima risoluzione per tutti i composti è stata ottenuta in condizioni di pH
più alto e, pertanto, un pH elevato è la scelta ottimale per l'ulteriore sviluppo del metodo.
2
7
5
1
3
0
0,5
1
6
4
1,5
2
2,5
2
1
3
0
0,5
2
3
7
5
8
pH 3, 10 mM NH4 HCO 2
3,5
pH 4,8, 10 mM NH4 CH3 CO 2
6
4
1
1,5
2
2,5
3
7
1
3,5
pH 10, 10 mM NH4 HCO 3
8
6
3
0
5
4
0,5
Analiti:
1. Procainamide
2. Caffeina
3. Acido acetilsalicilico
4. Prodotto di degradazione
dell'esanofenone
8
1
1,5
2
5. Dipiridamolo
6. Diltiazem
7. Diflunisal
8. Esanofenone
10
2,5
3
3,5
Eccellente stabilità a pH elevato
Puoi fare affidamento sulle fasi stazionarie Poroshell HPH per ottenere prestazioni uniformi e un'eccezionale
durata utile, anche in caso di utilizzo di fasi mobili a pH elevato. Nell'esempio che segue sono state eseguite
2.000 iniezioni per la separazione di una miscela contenente composti acidi, basici e neutri in condizioni
di pH estremo (pH 10) su una colonna Poroshell HPH-C18 Agilent e su una colonna non Agilent per pH
elevato. È evidente la perdita di risoluzione della colonna non Agilent tra la nortriptilina e l’eptanofenone
mentre, al contrario, la colonna Poroshell HPH-C18 non rileva alcuna perdita di risoluzione.
Colonna: Agilent Poroshell HPH-C18, 2,1 x 50 mm, 2,7 µm (codice 699775-702)
1
2
1,5
3
2
7
4
5
2,5
3
Iniezione 1
6
3,5
4,5 min
4
Iniezione 500
1,5
2
2,5
3
3,5
4,5 min
4
Iniezione 1.000
1,5
2
2,5
3
3,5
4,5 min
4
Iniezione 2.000
1,5
2
2,5
3
Strumento: Sistema LC binario Agilent serie 1260 Infinity Flusso: Fase mobile: A: b icarbonato di ammonio 10 mM
a pH 10,0 in acqua B: acetonitrile
3,5
4,5 min
4
0,4 mL/min
Gradiente: Tempo
0
5
5,1
Analiti:
1. Salicilato di metile
2. Acido 4-cloro cinnamico
3. Acetofenone
4. Chinino
5. Nortriptilina
6. Eptanofenone
7. Amitriptilina
%B
5
95
5
Colonna per separazioni a pH elevato di altro fornitore 2,1 x 50 mm, 3 µm
2
3
1
1,5
Iniezione 1
4
2
2,5
5
3
4
3,5
7
6
4,5
min
Iniezione 500
1,5
2
2,5
3
4
3,5
4,5
min
Iniezione 1.000
1,5
2
2,5
3
4
3,5
4,5
min
Iniezione 2.000
1,5
2
2,5
3
4
3,5
11
4,5
min
Ottimizza ogni separazione
con un'ampia scelta di fasi ortogonali
La selettività è lo strumento più potente per l'ottimizzazione delle separazioni HPLC. Grazie alla sua
eccezionale flessibilità, la colonna Poroshell 120 EC-C18 è la scelta ideale per iniziare lo sviluppo di
metodi. Tuttavia, qualora si debbano trattare analiti complessi, nella gamma di colonne Poroshell 120 sono
disponibili molti altri tipi di fasi stazionarie.
Per esempio, le colonne Poroshell 120 PFP sono progettate con un legante pentafluorofenil, che
permette di utilizzare un meccanismo di separazione ortogonale con le tradizionali colonne a fase inversa.1
Mirate specificamente ai meccanismi di ritenzione polare, le fasi PFP consentono di separare gli analiti in
base a lievi differenze di struttura, sostituzione e accesso sterico ai gruppi polari. La selettività risultante nei
confronti di isomeri di posizione, composti alogenati e analiti polari è particolarmente utile nel caso delle
analisi di miscele complesse e prodotti farmaceutici basati su piccole molecole.
Analisi comparativa di FANS
Questa separazione è stata eseguita con quattro fasi stazionarie Poroshell 120 e acetonitrile. Ciascuna analisi ha
richiesto solo cinque minuti. Soltanto la colonna Poroshell 120 PFP ha permesso di risolvere tutti i composti, sebbene
l'eluizione dei composti sia avvenuta nello stesso ordine con la colonna Poroshell 120 EC-C18 e con la colonna
Poroshell 120 Phenyl-Hexyl. L'ordine di eluizione delle colonne PFP e Bonus-RP è molto simile, fatta eccezione per gli
ultimi due picchi.
400
300
400
200
300
100
200
0
100
0
0
0
1,5
2
2,5
1
1,5
2
2,5
1
0
4
3
1
0,5
2
1
0,5
1
1,5
2
0
0,5
11
1,5
2
2
1
75
7
8
6
8
3
4
3 7
3 7
4
2,5
3
2,5
3
2
6
3
2
0
5
4
3
0,5
3
5,9
5,9
Poroshell 120 PFP
9
9
3,5
4
3,5
4
6
Poroshell 120 EC-C18
8
6
8
3,5
3,5
4
4
4,7 5,6
9
4,7 5,6
9
8
8
3
0
0,5
0
0,5
400
300
400
200
300
100
200
0
100
2
0
400
300
400
200
300
100
200
0
100
2
1
0
400
300
400
200
300
100
200
0
100
1
1
1
1,5
2
1
1,5
2
1
2,5
2
2,5
2
3
3
3
3,5
4
3
3,5
4
5,6
4 95,6
7
9
4
7
8
Poroshell 120 Phenyl-Hexyl
8
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
4
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
4
Colonne: Poroshell 120 PFP, 4,6 x 50 mm, 2,7 µm (codice 699975-408)
Poroshell 120 EC-C18, 4,6 x 50 mm, 2,7 µm (codice 699975-902)
Poroshell 120 Bonus-RP, 4,6 x 50 mm, 2,7 µm (codice 699968-901)
Poroshell 120 Phenyl-Hexyl, 4,6 x 50 mm, 2,7 µm (codice 699975-912)
Strumento: Sistema LC binario Agilent serie 1260 Infinity
Fase mobile:
A: NH4HCO2 20 mM, pH 3,0 B: acetonitrile
Poroshell 120 Bonus-RP
Analiti::
1. APAP
2. Fenacetina
Rivelazione: UV, 254 nm
3. Piroxicam
Gradiente: Tempo % organica 4. Tolmetina
5. Ketoprofene
0
8
6. Naprossene
6
100
7. Sulindac
7
100
8. Diclofenac
9. Difunisal
8
8
Flusso: 2 mL/min
1.“Fluorinated HPLC Phases: Looking Beyond C18 for Reverse-Phase HPLC” M. Przybyciel, LCGC Europe 19(1) pagg. 19-28, 2006.
12
Selettività: lo strumento più potente per l'ottimizzazione delle separazioni HPLC
Isomeri di posizione (15 composti)
Fase mobile A: acqua (acido acetico 0,1%); B: acetonitrile
Analiti::
1. 3,4 dimetossifenolo
2. 2,6 dimetossifenolo
3. 3,5 dimetossifenolo
4. 2,6 difluorofenolo
5. 2,4 difluorofenolo
6. 2,3 difluorofenolo
7. 3,4 difluorofenolo
8.Prodotto di degradazione del
2,6 dimetossifenolo
Tempo%B
015
1330
1530
1615
9. 3,5 dimetilfenolo
10.2,6 dimetilfenolo
11. 2,6 diclorofenolo
12.4 cloro 3 metil fenolo
13.4 cloro 2 metil fenolo
14.3,4 diclorofenolo
15.3,5 diclorofenolo
Flusso: 2 mL/min
Rivelazione: 270 nm
Dimensioni
della colonna: 4,6 x 150 mm
mAU
300
1
7
2
250
3 4
200
1
150
1
2
2
4 3
100
1
50
3,4
5
5
7,8
6
7
6
7
3 4
6
13
10
12
11
11 10
9
8,9 10
5
2
8 9
6
8
12
11
9
12
14
Poroshell 120 PFP
15
13
14
Poroshell 120 EC-C18
15
13
Poroshell 120 Phenyl-Hexyl
15
14
13
10
11
12
14
15
Poroshell 120 EC-C8
0
2
4
6
8
10
12
14
16 min
Questa separazione dimostra i vantaggi delle caratteristiche chimiche della fase stazionaria PFP. 15 isomeri di posizione sono stati
analizzati utilizzando quattro diverse fasi stazionarie; è evidente come la fase PFP offra la migliore risoluzione.
Maggiori informazioni sulle colonne Poroshell 120 Agilent sono disponibili sul sito
agilent.com/chem/poroshell120
13
Analisi di betabloccanti: confronto tra fasi stazionarie Poroshell 120
Questa separazione complessa evidenzia come differenze di selettività producano differenze nei
risultati. Nel complesso, la fase stazionaria Bonus-RP ha permesso di ottenere la migliore risoluzione
e la migliore forma dei picchi, in particolare nel caso del nadololo, che compare come picco suddiviso
con le fasi C18 e Phenyl-Hexyl.
mAU
2
300
1
200
100
3
6
5
4
7
Poroshell 120 Bonus-RP
0
-100
0
2
4
6
8
10
12
min
mAU
2
300
200
1
100
5
3
0
-100
0
2
4
mAU
6
8
200
1
100
3
0
2
4
mAU
6
8
2
300
100
10
1
0
3
4
6
Poroshell 120 Phenyl-Hexyl
12
min
6
5
4
0
200
7
2
300
-100
4
Poroshell 120 EC-C18
7
10
12
6
5
min
Poroshell 120 SB-C18
7
-100
Colonne: Poroshell 120 Bonus-RP, 2,1 x 100 mm, 2,7 µm (codice 695768-901)
Poroshell 120 Phenyl-Hexyl, 2,1 x 100 mm, 2,7 µm (codice 695775-912)
Poroshell 120 EC-C18, 2,1 x 100 mm, 2,7 µm (codice 695775-902)
Poroshell 120 SB-C18, 2,1 x 100 mm, 2,7 µm (codice 685775-902)
Flusso: 0,4 mL/min
Analiti:
1. Atenololo 5. Acebutololo
2. Pindololo 6. Propranololo
Rivelazione: 260 nm
3. Nadololo
7. Alprenololo
Gradiente: Da 10% B a 30% B/12 min 4. Metoprololo
Temperatura: 40 °C
Strumento: Sistema LC binario Agilent serie 1260 Infinity
Fase mobile: A: NH4HCO2 10 mM, pH 3,8
B: MeOH
14
Anche le colonne Poroshell 120 da 4 µm
offrono la flessibilità associata a un'ampia
varietà di fasi stazionarie. La disponibilità
di cinque diverse fasi stazionarie consente
di selezionare quella ideale per sfruttare
le interazioni chiave con gli analiti, per
esempio le interazioni pi greco-pi greco
illustrate nell'esempio che segue relativo a
una separazione di steroidi.
Test isocratico
Analiti:
1.Triamcinolone
2.Prednisolone
3.Corticosterone
4.Estradiolo
Rivelazione:
220, 4 nm
5.DES
6.Dienestrolo
7.Deossicorticosterone
4,5,7
6
1
2
2
4
6
min
8
6
1
2
2
Poroshell 120 EC-C18 4 µm
3
mAU
150
125
100
75
50
25
0
1,2 mL/min
Temperatura: 25 ºC
Fase mobile:64% MeCN o metanolo
36% acqua con acido acetico 0,1%
mAU
250
200
150
100
50
0
Flusso:
Colonna:Poroshell 120 C18 o Phenyl-Hexyl,
4,6 x 150 mm, 4 µm
3 4
4
7
5
6
8
Poroshell 120 Phenyl-Hexyl 4 µm
min
Separazione di steroidi su fasi stazionarie Poroshell 120 EC-C18 da 4 µm e Poroshell 120 Phenyl-Hexyl da 4 µm. È evidente la migliore
risoluzione ottenuta con la colonna Poroshell 120 Phenyl-Hexyl grazie alle interazioni pi greco-pi greco tra gli analiti e la fase stazionaria.
Maggiori informazioni sulle colonne Poroshell 120 Agilent sono disponibili sul sito
agilent.com/chem/poroshell120
15
Prestazioni Fast LC/UHPLC con un sistema HPLC
standard? Ora sono una realtà con le colonne
Poroshell 120 Agilent!
Con le colonne Poroshell 120 è possibile ottenere un'efficienza pari o superiore
al 90% dell'efficienza prevista per una colonna Fast LC/UHPLC con particelle
di dimensioni inferiori a 2 μm, ma con valori di pressione tipici dell'HPLC
(inferiori a 400 bar).
La possibilità di eseguire separazioni rapide a basse pressioni con colonne da 4 μm
e da 2,7 μm permette di migliorare drasticamente la produttività del laboratorio.
Ora puoi analizzare un maggior numero di campioni in tempi più stretti, utilizzando
i sistemi HPLC già presenti in laboratorio, come illustrato negli esempi che seguono.
Inoltre potrai trasferire facilmente il metodo al sistema LC Agilent Serie 1200
Infinity che preferisci, per aumentare ancor di più la produttività.
Fase mobile: 60% acetonitrile,
40% acqua
Flusso:
0,58 mL/min
Volume di iniezione: 4 µL
2,223
0,826
5
9,753
6,273
4,132
2,816
1,518
2,016
← N = 25.053, press. = 182 bar
2,5
7,5
10
>90% dell'efficienza della colonna da 1,8 µm
26 ºC
Eclipse Plus C18, 3,0 x 100 mm, 1,8 µm
(codice 959964-302)
0,865
← N = 27.295, press. = 386 bar
2,5
5
16
7,5
13,041
8,21 8
5,281
3,494
2,705
2,418
1,756
Preparazione
del campione:Campione di controllo RRLC
(codice 5188-6529) con aggiunta
di 50 µL di tiourea 2 mg/mL
in acqua: acetonitrile (65:35)
1,275
Rivelazione:Seg. DAD = 254, 4 nm
Rif. = 360, 100 nm
0,649
Temperatura: 1,148
L'efficienza della colonna Poroshell 120 per un
campione di alchilfenoni neutri è >90% rispetto
all'efficienza della colonna da 1,8 μm. La
pressione nella colonna Poroshell 120, inoltre,
è circa la metà della pressione nella colonna
da 1,8 μm.
Poroshell 120 EC-C18, 3,0 x 100 mm, 2,7 µm
(codice 695975-302)
0,646
Efficienza UHPLC a pressione
più bassa
10
12,5
min
Scegli le colonne Poroshell 120
Agilent per analisi HPLC ad alta
efficienza
In questa analisi dei componenti di una
bevanda analcolica la colonna Poroshell
120 ha permesso di ottenere:
► Efficienza >90% rispetto a quella di una
colonna con particelle di dimensioni
inferiori a 2 μm
► Efficienza doppia rispetto alla colonna
da 3,5 μm
► Pressione inferiore a 400 bar, mentre
la pressione è superiore a 400 bar nel
caso della colonna con particelle di
dimensioni inferiori a 2 μm
La bassa contropressione ottenuta
con la fase mobile a base di metanolo
è particolarmente significativa in quanto
il metanolo genera una contropressione
più elevata rispetto all'acetonitrile.
Colonna:
3,0 x 100 mm, 2,7 µm
Fase mobile:A: 65% di acido formico 0,2%
B: 35% metanolo, condizioni
isocratiche
Flusso:
0,5 mL/min
Poroshell 120 EC-C18, 3,0 x 100 mm, 2,7 µm
(codice 695975-302)
mAU
300
N = 23.283
200
100
mAU
0
300
200
1
2
P = 314 bar
3
4
5
6
min
4
5
6
min
6
min
100
mAU
0
ZORBAX
RRHT Eclipse Plus C18, 3,0 x 100 mm, 1,8 µm
300
200
1
2
3
(codice
959964-302)
200
100
300
mAU
100
0
mAU
0
300
200
N = 25.364
3
P = 456 bar
1
2
4
5
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
7
min
6
7
min
5
5
6
6
7
7
min
6
100
mAU
mAU
300
0
250
200
200
100
150
100
500
mAU
0
250
200
150
Page100
7
mAU
50
0
250
ZORBAX Rapid Resolution
Eclipse
Plus C18, 3,0
x 100 mm, 3,5
µm
1
2
3
4
1
2
3
4
(codice 959961-302)
200
150
Page100
7
50
0
Page 7
N = 11.896 P = 153 bar
1
2
3
4
5
6
7
min
1
2
3
4
5
6
7
min
Analiti:
1. Saccarina
2. Caffeina
3. Acido p-idrossibenzoico
4. Aspartame
5. Acido deidroacetico
6. Acido benzoico
Volume di iniezione: 1 µL
Temperatura: 26 °C
Rivelazione: UV, 220 nm
min
Maggiori informazioni sulle colonne Poroshell 120 Agilent sono disponibili sul sito
agilent.com/chem/poroshell120
17
Perché utilizzare una
precolonna?
L'esempio qui riportato riguarda un test
accelerato della durata utile eseguito
utilizzando una miscela acqua:similac
300:1 con 0,1 mg di sulfacloropiridazina e
sulfametossazolo.
Fase mobile: A: acido formico 0,1% in acqua
B: acetonitrile
Flusso: 0,65 mL/min
Gradiente: 10% B costante per 2 min,
rampa fino a 45% B in 2 min
Volume di iniezione: 10 µL
Temperatura: 23 °C
Rivelazione: Seg. = 254, 4 nm;
Rif. = disattivato
Strumento: Serie 1200 Infinity
Larghezza del picco (min)
0,04
Larghezza del picco (min) Larghezza del picco (min)
L'installazione di una precolonna meno
costosa, in particolare nel caso delle analisi
di campioni sporchi, previene i danni
provocati dal particolato e dal materiale
fortemente adsorbito. In linea di principio è
necessario sostituire la precolonna quando il
numero di piatti, la pressione o la risoluzione
variano in misura superiore al 10%. La
necessità di procedere alla sostituzione,
tuttavia, deve essere determinata in base
alla specifica applicazione.
Senza precolonna:
Danneggiamento della colonna analitica già dopo 80 iniezioni.
Larghezza del picco (min)
In breve, le precolonne permettono di
risparmiare denaro poiché prolungano
la durata utile della colonna analitica.
0,03
0,02
Sostituire la colonna analitica
0,01
0,04
0
0,03 0
20
40
60
80
100
120
140
100
120
140
N. iniezione
0,02
0,01
0,04
0,030
0,02
0
20
Con precolonna:
40
60
80
N. iniezione
La precolonna si danneggia dopo 80 iniezioni ma l'integrità della
colonna analitica è preservata.
Sostituire solo la
precolonna
meno costosa
0,01
0,04
0
0,03
0
20
40
60
80
100
120
140
120
140
N. iniezione
0,02
Sulfacloropiridazina
Sulfametossazolo
0,01
0
0
20
40
60
80
100
N. iniezione
Sulfacloropiridazina
Preparazione
del campione: 100 mL acqua + 0,333 mL
similac + 1 mL di
sulfacloropiridazina e
sulfametossazolo 0,1 mg/mL
Le colonne Agilent Fast Guard mantengono inalterata la
velocità delle applicazioni FAST LC
Le colonne Agilent Fast Guard per UHPLC sono robuste e affidabili a pressioni
elevate, oltre ad essere completamente compatibili con le colonne Agilent Fast
LC e UHPLC. Inoltre possono essere installate senza utilizzare alcun attrezzo
speciale.
Guarda il video per scoprire come è facile installare
le colonne Agilent Fast Guard: agilent.com/chem/poroshell120
18
Sulfametossazolo
Una scelta sicura per analisi LC/MS ed
LC/MS/MS ad alta risoluzione
Le colonne Poroshell 120 Agilent permettono di sfruttare al massimo le potenzialità
dei sistemi LC/MS ed LC/MS/MS. Lo strato esterno poroso e il nucleo solido
limitano la distanza di diffusione e migliorano la velocità di separazione, mentre
la grande omogeneità delle dimensioni delle particelle aumenta efficienza
e risoluzione. Gli ulteriori vantaggi includono:
• Risoluzione rapida ed efficiente di composti isobarici chiave
• Risoluzione superiore di picchi che eluiscono a distanza ravvicinata
• Maggior numero di composti risolti in un'unica analisi
• Miglioramento nell’ accuratezza e nell’ identificazione LC/MS
•Frit standard da 2 µm resistente all'ostruzione anche in presenza di
campioni sporchi
Separazione LC/MS/MS di
colesterolo e altri steroli con
colonne Poroshell 120 EC-C18
Analiti:
1.Calcifediolo
2.Desmosterolo
3.5-colesten-3-one
4.Latosterolo
5.Colesterolo
6.Campesterolo
7.Stigmasterolo
8.Colestanolo
9.Sitosterolo
È stata ottenuta una risoluzione adeguata
anche per il rapporto colesterolo:latosterolo
2.000:1. Si tratta di un aspetto cruciale
per una quantificazione efficace poiché
i due composti possiedono lo stesso peso
molecolare.
Colonna:
Poroshell 120 EC-C18,
3,0 x 100 mm, 2,7 µm
(codice 695975-302)
Fase mobile:
80% acetonitrile,
20% metanolo
Flusso:
0,6 mL/min
Volume di
iniezione:
2 µL
Temperatura:
20 °C
Rivelazione:
APCI, ioni positivi
Maggiori informazioni sulle colonne Poroshell 120 Agilent sono disponibili sul sito
agilent.com/chem/poroshell120
19
Separazione 1D di vitamina D2/D3
su colonna Agilent Poroshell 120
EC-C18
La colonna Poroshell 120 consente un'analisi
LC/MS/MS molto rapida della vitamina
D2/D3 nel plasma. Le condizioni isocratiche
sono state variate per confrontare la velocità di
separazione con la risoluzione cromatografica.
Colonna:
Poroshell 120 EC-C18,
2,1 x 50 mm, 2,7 µm
(codice 699775-902)
Fase mobile: A: H2O + acido formico 0,1%
B: MeOH + acido
formico 0,1%
Flusso:
0,5 mL/min
Volume di iniezione: 10 μL
Temperatura: 50 °C
Temp.
autocampionatore: 5 °C
Lavaggio dell'ago: Porta di lavaggio (50:25:25,
IPA: MeOH:H2O) 5
Analisi isocratica: A: 20%, B: 80%
Tempo di analisi:
5 min
x104
1,9
1,8
1,7
1,6
1,5
1,4
1,3
1,2
1,1
1
0,9
0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
85% MeOH
3 min
0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1 1,1 1,2 1,3 1,4 1,5 1,6 1,7 1,8 1,9 2 2,1 2,2 2,3 2,4 2,5 2,6 2,7 2,8 2,9 3
Conteggi vs. tempo di acquisizione (min)
x103
7,5
7
6,5
6
5,5
5
4,5
4
3,5
3
2,5
2
1,5
1
0,5
* 2,007
1
Vitamina D3 25-OH
80% MeOH
5 min
Vitamina D2 25-OH
0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1 1,1 1,2 1,3 1,4 1,5 1,6 1,7 1,8 1,9 2 2,1 2,2 2,3 2,4 2,5 2,6 2,7 2,8 2,9 3
Conteggi vs. tempo di acquisizione (min)
Prestazioni efficaci, anche
dopo 3.000 iniezioni
Questo test conferma la straordinaria durata
delle colonne Poroshell 120 ed evidenzia
il degrado minimo nelle prestazioni anche
dopo 3.000 iniezioni. La stabilità è espressa
in termini di uniformità dei tempi di
ritenzione (%RSD).
Analita
%RSD
(RT)
Analita
%RSD
(RT)
Analita
%RSD
(RT)
Morfina
0,7
Meperidina
0,4
Triazolam
0
Codeina
0,4
Zolpidem
0,3
Naltrexone
0,1
Idrocodone
0,4
Fentanile
0,1
Clordiazepossido
0,1
MDMA
0,3
EDDP
0,1
Desmetil diazepam
0,1
Norfentanyl
0,2
Nitrazepam
0,1
Cocaetilene
0,2
Eroina
0,2
Propossifina
0,1
11-nor-9-carbossi-delta-9-THC
0
Metilfenidato
0,2
Buprenorfina
0,3
20
Le colonne Poroshell 120 Agilent permettono di
incrementare la flessibilità dei metodi UHPLC
Poiché il limite di pressione delle colonne Poroshell 120 è pari a 600 bar, è
possibile impiegarle con i metodi UHPLC, inclusi quelli con colonne molto
lunghe, velocità di flusso più alte e solventi viscosi.
Colonna Poroshell 120 EC-C18
Agilent per separazioni UHPLC
rapide
In questo esempio è illustrata una
separazione rapida in cui è utilizzata una
fase mobile che genera contropressioni più
elevate. Il cromatogramma in alto è stato
ottenuto con una colonna di diametro
interno pari a 3,0 mm, una velocità di flusso
di 0,5 mL/min e una pressione inferiore
a 400 bar: si tratta del caso tipico di una
separazione LC.
Nonostante la rapidità della separazione in
alto (conclusa in poco meno di 6 minuti),
i cromatogrammi al centro e in basso
dimostrano che incrementando la velocità
di flusso è possibile ridurre i tempi di analisi
a meno di 3 minuti. Con queste analisi
più rapide la pressione aumenta fino a
valori compresi tra 400 e 560 bar. Scopri la
flessibilità delle opzioni di aggiornamento LC
Agilent Serie 1200 Infinity che ti permettono
di sfruttare le funzionalità UHPLC.
Velocità di flusso = 0,5 mL/min,
P = 300 bar, NBA = 24.597
300
P = 300 bar, NBA
200
100
0
2
4
6
Velocità di flusso = 0,75 mL/min,
P = 433 bar
300
200
P = 433 bar
100
0
2
4
Velocità di flusso = 1,0 mL/min,
P = 559 bar
200
100
P = 559 bar
0
2
4 min
È possibile utilizzare solventi a carattere maggiormente viscoso, come il metanolo, a pressioni HPLC
o UHPLC. viscous solvents like methanol can be used
More
Analiti:
Poroshell 120 pressures.
EC-C18
atColonna:
HPLC or UHPLC
1. Saccarina
Page 14
3,0 x 100 mm, 2,7 µm
(codice 695975-302)
Fase mobile:A: 65% di acido formico 0,2%
B: 5% metanolo, condizioni
isocratiche
Flusso:
2.
3.
4.
5.
6.
Caffeina
Acido p-idrossibenzoico
Aspartame
Acido deidroacetico
Acido benzoico
vedere i cromatogrammi
Volume di iniezione: 1 µL
Temperatura:
26 ºC
Rivelazione:Seg. = 220, 4 nm,
Rif. = disattivato
Maggiori informazioni sulle colonne Poroshell 120 Agilent sono disponibili sul sito
agilent.com/chem/poroshell120
21
Confronto della separazione EPA
8330 su colonne corte e lunghe
Agilent Poroshell 120 per HPLC e
UHPLC
20
15
10
5
0
-5
La flessibilità della gamma Poroshell 120
consente di scegliere colonne più lunghe
per incrementare la risoluzione. In questo
esempio, all'aumentare della lunghezza
della colonna, la risoluzione migliora e la
pressione aumenta (fino a valori UHPLC per
la colonna più lunga).
Poiché uno dei vantaggi delle colonne
Poroshell 120 è la bassa contropressione, è
possibile collegare varie colonne in serie per
ottenere la più alta capacità di separazione
per unità di tempo. Ciò permette di
migliorare la separazione di campioni
complessi.
N. picco
Composto
Piatti
k’
2
Acetofenone
114.120
0,29
3
Benzene
109.931
0,46
4
Toluene
114.800
0,65
2
4
6
8
10
12
14
25
20
15
10
5
0
-5
-10
2
4
6
8
10
12
14
18
min
16
18
min
Lunghezza 150 mm
P = 568 bar
Numero di serie USCFW01049, lotto
B10022
mAU
40
30
.
20
10
16
Lunghezza 100 mm
P = 358 bar
Numero di serie USCFX01069, lotto
B10034
mAU
È possibile notare che è la lunghezza della
colonna, anziché il lotto di materiale di
impaccamento della colonna, a incidere
sulla risoluzione, a dimostrazione della
riproducibilità delle prestazioni delle colonne
Poroshell 120.
Le colonne Poroshell 120 Agilent
collegate in serie offrono la
massima efficienza a valori di
pressione HPLC e UHPLC
Lunghezza 50 mm
P = 235 bar
Numero di serie USCFZ01017, lotto B10016
mAU
25
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
min
Il giusto equilibrio tra lunghezza della colonna, risoluzione e tempo di analisi è un aspetto importante per ogni
separazione.
Colonna: Poroshell 120 EC-C18, 2,7 µm
Fase mobile: 25% metanolo, 75% acqua
Flusso: 1 mL/min
Temperatura: 44 ºC
mAU
17,5
15
mAU
12,5
17,5
10
15
7,5
12,5
mAU
105
17,5
2,5
7,5
150
5
12,5
2,5
10
0
7,5
5
2,5
0
mAU
17,5
15
mAU
12,5
17,5
10
15
7,5
12,5
mAU
105
17,5
2,5
7,5
150
5
12,5
2,5
10
0
7,5
5
2,5
mAU
0
17,5
15
mAU
12,5
17,5
10
15
7,5
12,5
mAU
105
17,5
2,5
7,5
150
5
12,5
2,5
10
0
7,5
5
2,5
0
3 Poroshell 120 Columns in Series – 4.6 x 150 mm, 2.7µm
3 Poroshell
120EC-C18
Columns
in mm,
Series
4.6 x693975-902)
150 mm, in2.7µm
Tre colonne
Poroshell 120
, 4,6 x 150
2,7 µm–(codice
serie
assicurano un'efficienza estremamente elevata.
3 Poroshell 120 Columns in Series – 4.6 x 150 mm, 2.7µm
0
Velocità di flusso: 1 mL/min
N ~ 83.000 (picco 4)
Pressione max: 316 bar
1
2
3
4
5
6
min
0
1
2
3
4
5
6
min
0
1
2
3
4
5
6
min
Velocità di flusso: 1,5 mL/min
N ~ 103.000 (picco 4)
Pressione max: 478 bar
0
1
2
3
4
5
6
min
0
1
2
3
4
5
6
min
3
4
5
6
min
0
Velocità di flusso: 1,8 mL/min
1
2 (picco 4)
N
~ 115.000
Pressione max: 573 bar
Massima efficienza
a 1,8 mL/min
0
1
2
3
4
5
6
min
0
1
2
3
4
5
6
min
0
1
2
3
4
5
6
min
22
Analisi rapida su colonna
Poroshell 120 EC-C18 Agilent
di 11 composti presenti negli
analgesici
In questo esempio è stata utilizzata
un'alta velocità di flusso per accelerare la
separazione di 11 analgesici d'uso comune
su una colonna Poroshell 120.
4
600
500
Pressione massima 540 bar
400
1
300
5
200
2,3
7
6
100
10
9
11
8
0
0
1
2
3
Colonna:Poroshell 120 EC-C18,
4,6 x 100 mm, 2,7 µm
(codice 695975-902)
Fase mobile:A: acqua + acido formico 0,1%
B: acetonitrile
Flusso:
3,5 mL/min
Volume di iniezione: 5 µL
Temperatura:
40 °C
Rivelazione:DAD, 254 nm
4
5
6
7
Analiti:
1. Acetaminofene
2. Caffeina
3. 2-acetamidofenolo
4. Acetamide
5. Fenacetina
6. Sulindac
7. Piroxicam
8. Tolmetina
9. Ketoprofene
10. Diflusinal
11. Diflunisal
Sistemi LC sempre alle massime prestazioni
con i prodotti di consumo A-Line Agilent
Molti più modi di incrementare la produttività grazie a:
• Convenienza
• Semplicità
• Maggiore efficienza
Maggiori informazioni:
agilent.com/chem/A-Line
Maggiori informazioni sulle colonne Poroshell 120 Agilent sono disponibili sul sito
agilent.com/chem/poroshell120
23
Trasferimento del metodo
all'insegna della semplicità
Molti metodi sviluppati su colonne C18 da 5 µm più lunghe possono essere
trasferiti in modo rapido e semplice alle colonne Poroshell 120, in particolare
ai modelli Poroshell 120 da 4 µm di recente introduzione. Le nuove modifiche
apportate ai regolamenti USP rendono più facile il trasferimento di metodi
tradizionali a tecnologie più recenti, quali le colonne Poroshell 120 Agilent.
Ciò permette agli operatori di cromatografia di migliorare significativamente la
produttività e ridurre i costi.
È opportuno sottolineare che entrambe
le separazioni sono state eseguite su uno
strumento Agilent serie 1100 meno recente,
a dimostrazione del fatto che è possibile
trasferire anche metodi in gradiente pur
mantenendo la pressione a valori inferiori
a 400 bar.
20.687
29.290
23.076
20.687
29.290
16.151
16.435
15.248
15.248
12.674
16.151
16.435
12.674
11.596
20
11.116
9.712
110 bar
23.076
40
0
110 bar
Colonna:ZORBAX Eclipse Plus C18, Tempo%B
0 8
4,6 x 250 mm, 5 µm
33
33
(codice 959990-902)
35
33
Flusso: 1 mL/min
11.116
60
20
9.712
80
40
5
10
15
20
25
30 min
5
10
15
20
25
30 min
0
Tempo%B
0 8
12 33
13,233
Flusso:
mAU
0
5.450
4.558
4.558
5.450
3.867
5.920
4.437
1000
50
7.037
2.311
2.606
2.311
5.920
4.437
150
50
325 bar
3.867
200
100
2.606
250
150
325 bar
2.189
250
200
mAU
1 mL/min
7.037
Colonna:Poroshell 120 EC-C18,
4,6 x 100 mm, 2,7 µm
(codice 695975-902)
1.719
È possibile notare che le due separazioni
sono identiche. Tuttavia, il cromatogramma
in basso è stato ottenuto in poco più di
7 minuti mentre quello in alto ha richiesto
30 minuti, il che rappresenta un eccellente
miglioramento di produttività.
80
mAU
100
60
2.189
In questo esempio un metodo complesso
è stato trasferito da una colonna ZORBAX
Eclipse Plus C18 da 250 mm, 5 μm a una
colonna Poroshell 120 EC-C18 da 100 mm.
Non è stata modificata alcuna condizione,
fatta eccezione per la durata del gradiente
che è stata regolata per la colonna più
corta.
mAU
100
1.719
Trasferimento di metodi tra
colonne ZORBAX e Poroshell 120
Agilent mirato alla scalabilità o al
risparmio di tempo
11.596
Nelle pagine che seguono è mostrato come è possibile ripetere cinque
separazioni, metodi USP inclusi, su colonne Poroshell 120 completandole
a una velocità 3-5 volte superiore rispetto a quella ottenibile su colonne
da 5 μm.
5
Analiti:
1.Sulfadiazina
2.Sulfatiazolo
3.Sulfapiridina
4.Sulfamerazina
5.Sulfametazina
6.Sulfametazolo
7.Sulfametossipiridazina
5
8.Sulfacloropiridazina
9.Sulfametossazolo
10.Sulfadimetossina
24
min
Fase mobile:
A: acido formico
min0,1% in acqua
B: a cido formico 0,1% in acetonitrile
La nuova colonna Poroshell 120 Agilent da 4 μm
L'ultima novità introdotta nella piattaforma Poroshell 120 è una
soluzione scalabile a disposizione di coloro che eseguono analisi
cromatografiche e sviluppano metodi. Questo efficace ampliamento
della piattaforma, che interessa inizialmente le fasi stazionarie
EC-C18, EC-C8, Phenyl-Hexyl, PFP e HILIC, permette di acquisire
familiarità con le soluzioni della gamma Poroshell 120 in modo
rapido e con la semplicità assicurata dalla sostituzione istantanea
Metodo USP per compresse di
naprossene: analisi 4,5 volte più
veloce su colonne Poroshell 120
Agilent a pressioni HPLC
Questa separazione di naprossene dimostra
come sia semplice convertire un metodo sulle
colonne Poroshell 120 senza modificare la
velocità di flusso o la fase mobile.
Nel primo cromatogramma è mostrata
un'analisi USP eseguita su una colonna
ZORBAX Eclipse Plus C18 di Agilent: i picchi
sono ben definiti, l'efficienza è pari a tre volte
quella necessaria e la risoluzione è ~14.
Nel secondo e terzo cromatogramma le
colonne Poroshell 120 EC-C18 da 4 μm
(150 mm e 100 mm), integrate con semplicità
1
nel metodo originale, offrono una maggiore
efficienza e velocità rispetto a quest'ultimo.
Inoltre, poiché la pressione è soltanto 165 bar
per la colonna da 150 mm e 98 bar per la
colonna da 100 mm, questo metodo isocratico
è particolarmente adatto a un'analisi HPLC.
Nel quarto cromatogramma la colonna
Poroshell 120 EC-C18 da 2,7 μm (100 mm)
migliora l'efficienza e la risoluzione a una
velocità quasi doppia rispetto al metodo
originale. Anche la colonna Poroshell 120
EC-C18 (50 mm), nel quinto cromatogramma,
soddisfa i requisiti di efficienza e risoluzione ma
a una velocità 4,5 volte superiore rispetto alla
colonna da 5 μm.
dei metodi. La pressione in colonna è ridotta del 50% rispetto alle
colonne Poroshell 120 da 2,7 μm, mentre l'efficienza è quasi doppia
rispetto alle tradizionali colonne completamente porose da 5 μm.
Gli operatori che eseguono analisi cromatografiche e necessitano di
aumenti moderati delle prestazioni possono integrare con facilità nei
propri metodi le colonne Poroshell 120 da 4 μm.
Requisiti del metodo per l'adeguatezza del sistema: N > 4.000, Rs > 11,5
mAu
60
50
40
30
20
10
0
N = 10.639
95 bar
0
1
2
3
4
6
5
7
N = 19.054
165 bar
0
1
2
3
4
6
5
8
N = 13.186
98 bar
0
1
2
3
4
Velocità doppia
N = 21.046
mAu
30
25
N = 20.676
20
6
5
15
10
5
min
Poroshell 120,
4,6 x 150 mm [L1], 4 µm
(codice 693970-902)
L/dp = 37.500
7
Velocità doppia, stessa contropressione
mAu
60
50
40
30
20
10
0
9
8
Efficienza doppia
mAu
60
50
40
30
20
10
0
ZORBAX Eclipse Plus C18,
4,6 x 150 mm, 5 µm
Colonna conforme alle
prescrizioni USP
(codice 959993-902)
L/dp = 30.000
9
min
Poroshell 120,
4,6 x 100 mm [L1], 4 µm
(codice 695970-902)
L/dp = 25.000
7
8
9
Poroshell 120 EC-C18,
4,6 x 100 mm (L1), 2,7 µm
(codice 695975-902)
iniezione di 13,67 µL
Rs = 17,0
P = 238 bar
0
1
2
3
4
5
3
4
5
Velocità 4,5x superiore
mAu
30
N = 11.281
25
N = 12.051
20
15
10
5
0
1
2
6
7
6
7
Poroshell 120 EC-C18,
4,6 x 50 mm (L1), 2,7 µm
(codice 699975-902)
iniezione di 6,7 µL
Rs = 12,6
P = 133 bar
min
La colonna Poroshell 120 è una soluzione eccellente per eseguire più rapidamente i metodi a pressioni HPLC.
Fase mobile:MeCN:H2O:acido acetico 50:49:1
Velocità di flusso: 1,2 mL/min
Guarda il video per scoprire come trasferire un metodo sviluppato per
il naprossene alle colonne Poroshell 120 e ottimizzare il sistema LC per
ottenere i migliori risultati.
Visita il sito agilent.com/chem/poroshell120video
25
Campione:
1. Naprossene
2. Butirrofenone
min
Analisi rapida a bassa
pressione
In questo esempio un metodo di analisi
sviluppato per 11 additivi non nutritivi
presenti in alimenti e bevande è stato
trasferito da una colonna ZORBAX
Eclipse Plus C18 da 5 μm a una colonna
Poroshell 120 EC-C18, diminuendo il
tempo di analisi da oltre 13 minuti a meno
di 3 minuti. La riduzione nel consumo
di solvente è stata superiore a 80%
mentre la risoluzione della coppia critica è
migliorata passando da 1,8 a 3,0.
ZORBAX Eclipse Plus, 5 µm, Pmax = 120 bar
Fase mobile: Flusso: Temperatura: Gradiente: mAU
200
mAU
Coppia critica
150
200
Coppia critica
100
150
0
50
2
4
6
8
2
Poroshell
120 EC-C18,
2,7 µm4
140
6
8
0
10
12
10
12
min
min
Fase mobile: A: acetato di ammonio 20 mM, pH 4,80
B: acetonitrile
Flusso: 0,851 mL/min
Temperatura: 30 °C
min14% B a to, rampa fino a 52% B in 2,1 min
• Tempo di analisi ridottoGradiente:
da 13,1 a 2,6
120
100
80
mAU
60
40
40
• Tempo post-analisi ridotto da 7 a 1,8 min
• Riduzione del consumo di solvente e fase mobile di oltre l'80%
• Risoluzione della coppia critica migliorata da 1,79 a 3,01 su Poroshell 120
Coppia critica
20
200
0
In questo esempio un metodo USP
della durata di 10 minuti sviluppato per
l'analisi di compresse di simvastatina è
stato facilmente trasferito a una colonna
Poroshell 120, ottenendo i risultati con
una velocità 5x superiore. È importante
sottolineare la riduzione pari al 70%
nella lunghezza della colonna, ottenuta
sostituendo una colonna da 250 mm
con una colonna Poroshell 120 EC-C18
da 75 mm, un'operazione comunque
considerata un aggiustamento del
metodo.
La fase stazionaria Poroshell 120 EC-C18
è simile ad altre fasi USP L1 e, pertanto,
si ottengono risultati analoghi ma a una
velocità più alta.
Rs 1,79
50
100
mAU
Analisi più rapida di simvastatina
su colonna Poroshell 120
A: acetato di ammonio 20 mM, pH 4,80
B: acetonitrile
1 mL/min
30 °C
14% B a to, rampa fino a 52% B in 12,0 min
2
4
6
1
2
min
Rs 3,01
8
10
12
min
ZORBAX Eclipse Plus C18, 4,6 x 250 mm, 5 µm (codice 959990-902)
Fase mobile:65% CH3CN,
35% NaH2PO4 3,9 g/L, pH 4,5
40
40
35
35
30
30
25
25
20
20
15
15
10
10
5
5
0
0
6
Flusso:1,5 mL/min per la colonna da 5 µm
2,8 mL/min per la colonna Poroshell 120 da 2,7 µm
Temperatura:
45 ºC
Rivelazione:
Seg. DAD = 238, 8
Rif. = 360, 100 nm
2
2
4
4
6
6
8
8
9,907
9,907
10
10
Poroshell 120 EC-C18, 4,6 x 75 mm, 2,7 µm (codice 697975-902)
40
40
35
35
30
30
25
25
20
20
15
15
10
10
5
5
0
0
1,457
1,457
Requisito USP
2
2
26
5 µm
(1,5 mL/min)
2,7 µm
(2,8 mL/min)
TR
n/d
9,907
1,457
k’
> 3,0
5,962
5,122
N
> 4.500
16.939
14.439
Tf
< 2,0
1,09
1,10
Separazione di morfina e
metaboliti con una colonna
Poroshell 120 HILIC
Sempre più laboratori utilizzano la tecnica
HILIC nelle fasi iniziali di ricerca e sviluppo di
farmaci per svariati motivi:
• Ottenere la compatibilità con le tecniche MS
• Migliorare la ritenzione di composti polari e
dei loro prodotti di degradazione ancora più
polari
Poroshell 120 HILIC, 2,1 x 100 mm, 2,7 µm (codice 695775-901)
2
x10
1
0,9
0,8
1
2
0,7
0,6
0,5
1
0,4
0,3
0,2
4
0,1
0
3
0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1
• Incrementare la sensibilità LC/MS
1,1 1,2 1,3 1,4 1,5 1,6 1,7 1,8 1,9 2 2,1 2,2 2,3 2,4 2,5 2,6 2,7 2,8 2,9
Conteggi (%) vs. tempo di acquisizione (min)
La separazione della morfina e dei suoi metaboliti
è un esempio di metodo HILIC LC/MS rapido ed
efficiente. In questo esempio è possibile notare
come tali composti polari vengano completamente
risolti in meno di 2 minuti su una colonna Poroshell
120 HILIC, con forma dei picchi ed efficienza
eccellenti. Nel caso di un metodo a fase inversa
ad alto contenuto acquoso la ritenzione sarebbe
limitata.
Analisi di vitamina B e composti
correlati su una colonna
Poroshell 120 HILIC, 2,1 x 100
mm, 2,7 µm
La tecnica HILIC elimina la necessità di
impiegare reagenti per coppia ionica, quali
l'acido esansolfonico in genere utilizzato
nelle fasi mobili per la separazione di
vitamine B. Questa tecnica, inoltre, migliora
la ritenzione e la compatibilità LC/MS.
Analiti:
1. Normorfina
2. Morfina
3. M6G
4. M3G
Fase mobile: A: NH4HCO2 100 mM, pH 3,2
B: acetonitrile: NH4HCO2 100 mM, pH 3,2 (9:1)
Flusso: 0,8 mL/min
Temperatura: 25 °C
Pressione: Da 270 a 505 bar
Sistema: Tempo%B
0 100
0,44100
1,9355
LC 1290 Infinity e
LC/MS 6410 a triplo quadrupolo
Poroshell 120 HILIC, 2,1 x 100 mm, 2,7 µm (codice 695775-901)
2
x10
1
0,95
1
2
0,9
0,85
0,8
0,75
0,7
0,65
0,6
0,55
0,5
0,45
0,4
0,35
0,3
4
0,25
0,2
0,15
0,1
0,05
0
1
3
0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 0,45 0,5 0,55 0,6 0,65 0,7 0,75 0,8 0,85 0,9 0,95 1 1,05 1,1 1,15 1,2 1,25 1,3 1,35 1,4 1,45 1,5 1,55 1,6 1,65 1,7 1,75 1,8 1,85 1,9
Conteggi (%) vs. tempo di acquisizione (min)
Analiti:
1. Acido 4-amminobenzoico
2. Nicotinamide
3.Riboflavina
4. Acido nicotinico
Fase mobile: Flusso: Temperatura: Pressione: Acetonitrile: NH4HCO2 100 mM, pH 3,2 (9:1)
0,7 mL/min
25 °C
240 bar
Sistema: LC 1290 Infinity e
LC/MS 6410 a triplo quadrupolo
Maggiori informazioni sulle colonne Poroshell 120 Agilent sono disponibili sul sito
agilent.com/chem/poroshell120
27
Colonne Poroshell 120 Agilent:
soluzioni efficaci ai problemi di tutti i giorni
Un frit da 2 μm sull'ingresso della colonna è efficace anche con
i campioni più sporchi
Le particelle di dimensioni inferiori a 2 μm offrono vantaggi significativi in termini di velocità
e risoluzione ma risentono di problemi di ostruzione in presenza di campioni sporchi in quanto
sull'ingresso della colonna è necessario montare un frit da 0,5 µm. Le colonne Poroshell 120
permettono di risolvere questa difficoltà grazie all'uso di un frit standard da 2 μm resistente
alle ostruzioni provocate da campioni sporchi, incluso plasma non filtrato.
Il caricamento di campioni basici su colonne Poroshell 120
è paragonabile al caso delle colonne con particelle di dimensioni
inferiori a 2 µm
Le particelle non porose di piccole dimensioni possiedono un'area superficiale ridotta per
l'interazione con il campione, che ne limita la capacità di caricamento. Le particelle delle
colonne Poroshell 120, tuttavia, sono progettate con un'area superficiale più ampia per una
maggiore capacità di caricamento del campione. In pratica la capacità di caricamento delle
colonne Poroshell 120 è paragonabile a quella delle colonne da 1,8 μm, anche nel caso dei
composti basici più complessi.
La forma dei picchi necessaria per la massima accuratezza dei risultati
Le colonne Poroshell 120 permettono di ottenere un'eccezionale forma dei picchi, in
particolare a valori di pH tra 6 e 7, rispetto ad altre colonne con particelle a superficie porosa.
Semplice ottimizzazione dei sistemi LC Agilent serie 1100 e 1200
Infinity per le colonne Poroshell 120
Grazie alle loro specifiche proprietà, le colonne Poroshell 120 sono la scelta ideale per la
maggior parte degli strumenti per HPLC e UHPLC, incluso il nuovo sistema 1290 Infinity II.
Nel caso dei sistemi LC serie 1100 e 1200 Infinity, è sufficiente apportare modifiche minime
alla configurazione (per esempio velocità di flusso, lunghezza e diametro interno dei tubi
di collegamento, volume della cella di flusso e impostazione della larghezza del picco del
rivelatore) per ottenere risultati superiori a pressioni più basse e con una maggiore efficienza.
28
Diflusinal in plasma
200.000
400
380
180.000
360
340
160.000
320
300
140.000
280
260
120.000
240
220
100.000
200
180
160
120
100
80
60
40
20
0
Colonna:Poroshell 120 EC-C18,
3,0 x 50 mm, 2,7 µm
(codice 699975-302)
Tempo%B
0 20
0,5
90
0,6
90
1,1
20
2,5
20
Solvente A: acqua con acido
trifluoroacetico 0,1%
Solvente B:MeCN con acido
trifluoroacetico 0,08%
Velocità di
flusso: iniezione di 1 µL a 1 mL/min
140
1
1.001
501
1.501
2.001
Efficienza (N)
Anche in presenza di campioni “sporchi”,
per esempio plasma non filtrato, le
colonne Poroshell 120 sono estremamente
resistenti alle ostruzioni. In questo
esempio il campione è stato sottoposto a
precipitazione delle proteine ma non è stato
centrifugato né filtrato. Anche in queste
condizioni, non è stato registrato alcun
aumento di pressione, neppure dopo 2.500
iniezioni.
Diflunisal in plasma
Pressione
Grazie al frit da 2 µm le colonne
Poroshell 120 Agilent sono
resistenti alle ostruzioni
Press. finale
Piatti
80.000
60.000
40.000
20.000
0
2.501
Iniezioni
Volume di
iniezione:Iniezioni da 1 µL
Campione: Plasma precipitato:
2 parti plasma, 7 parti
acqua:MeCN 20:80 con acido formico
0,1% e 1 parte diflunisal
10 µg/mL in acqua:MeCN 50:50
(concentrazione finale diflunisal
1 µg/mL); sottoposto ad agitazione e
lasciato riposare per 10 minuti
Non centrifugato né filtrato
Strumento:
RRLC (SL) 1200 Infinity
Caricamento di nortriptilina
Caricamento del campione
paragonabile al caso delle
particelle completamente porose
La capacità di caricamento su queste
colonne è evidente, a dimostrazione
dell'affidabilità delle colonne Poroshell
120 per le separazioni di specie basiche.
Poroshell 120 EC-C18,
3,0 x 100 mm, 2,7 µm
(USCFX01084)
(codice 695975-302)
0,6
ZORBAX Eclipse Plus C18,
3,0 x 100 mm, 1,8 µm
(USUYB01454)
(codice 959964-902)
0,5
Larghezza del picco
In questo esempio la nortriptilina (un
composto basico) è stata caricata su diverse
colonne Agilent. È possibile notare che
la capacità di caricamento della colonna
Poroshell 120 da 2,7 μm è identica a quella
della colonna da 1,8 μm, mentre nel caso
della colonna da 3,5 μm la larghezza del
picco iniziale è più ampia con possibili
conseguenze negative sulla risoluzione.
0,7
0,4
ZORBAX Eclipse Plus C18,
3,0 x 100 mm, 3,5 µm
(USUXV01418)
(codice 959961-902)
0,3
0,2
0,1
0
0,0002
0,002
0,02
Concentrazione di nortriptilina (mg/mL)
0,2
80% di tampone Na2HPO4 25 mM, pH 3,0,
20% acetonitrile
Temperatura: 30 ºC
Rivelazione: 205 nm
Maggiori informazioni sulle colonne Poroshell 120 Agilent sono disponibili sul sito
agilent.com/chem/poroshell120
29
Le colonne Poroshell 120 Agilent
migliorano la forma dei picchi e i
risultati con i composti basici
Questo ulteriore esempio di separazione di
composti basici dimostra che per l'analisi di
analiti complessi le colonne Poroshell 120
garantiscono prestazioni superiori rispetto ai
prodotti di altri fornitori.
Poroshell 120
Tf = 1,48
80
60
40
Altro fornitore P
Tf = 4,78
Altro fornitore S
Tf = 2,68
20
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
Colonna:Poroshell 120 EC-C18,
4,6 x 50 mm, 2,7 µm
(codice 699975-902)
Temperatura:
0,777
5,942
2,767
3,061
2,454
0
N=6.900, Tf =3,74
10
15
20
25
0,793
5
7,087
3,103
3,544
600
35
N=12.300, Tf =2,95
k’=6,11, N=16.300
200
30
Altro fornitore S
4,6 x 150 mm
800
400
24 °C
Altro fornitore T
4,6 x 150 mm
k’=5,95, N=17.060
3,239
200
0,902
1,093
400
1,8
Campione:Iniezione di 2 µL di
amitriptilina 250 µg/mL,
uracile 50 µg/mL in H2O:CH3CN (9:1)
1,5 mL/min
800
600
1,6
Rivelatore:DAD, 254 nm, cella di flusso da 2 µL
Fase mobile:40% Na2HPO4 20 mM
pH 7, 60% acetonitrile
Flusso:
1,4
0
10
15
20
25
0,940
5
200
9,536
5,039
600
4,179
35
Poroshell 120 EC-C18, 4 µm
4,6 x 150 mm (codice 693970-902)
800
400
30
N=15.400, Tf =1,21
k’=8,56, N=16.000
0
5
10
Colonna:Poroshell 120 EC-C18,
4,6 x 150 mm, 4 µm
Fase mobile:40% K 2HPO4/ KH2PO4 20 mM
pH 7, 60% metanolo
Flusso:
1,2 mL/min
15
20
25
Analiti:
1. UraciIe
2. Propranololo
3. Butilparabene
4. Dipropilftalato
5. Amitriptilina
30
30
35
Separazioni rapide e affidabili
di proteine e peptidi
La tecnologia Poroshell di Agilent è una soluzione eccellente per la
separazione e la caratterizzazione di biomolecole complesse, incluse
proteine sia intatte sia digerite. Le colonne Agilent AdvanceBio
RP-mAb sono appositamente progettate per le complesse esigenze
della caratterizzazione di anticorpi monoclonali. Per la mappatura dei
peptidi nella digestione proteica si consiglia l'utilizzo delle colonne
AdvanceBio Peptide Mapping, pre-testate con una complessa
miscela di peptidi per garantire prestazioni ottimali nelle applicazioni
di mappatura dei peptidi.
Separazione di anticorpi
monoclonali ad alta velocità
e alta risoluzione
Colonna:
Le biomolecole di grandi dimensioni,
quali gli anticorpi monoclonali, in genere
vengono separate lentamente per ridurre
la possibilità di allargamento dei picchi
tipica di questi analiti con bassa velocità
di diffusione. Nel caso della tecnologia
Poroshell impiegata nelle colonne
AdvanceBio RP-mAb, tuttavia, la riduzione
della distanza di diffusione rende possibili
velocità di flusso più elevate e gradienti più
ripidi, anche su sistemi da 600 bar.
L'ampio diametro dei pori, pari a 450 Å, nello
strato sottile permette il completo accesso alla
fase legata da parte delle grandi molecole
di anticorpi monoclonali, garantendo quindi
risultati cromatografici ottimali. La gamma di
robuste fasi legate (C4, SB-C8 e un'esclusiva
fase difenilica), ideate per le separazioni
di anticorpi monoclonali, rende disponibile
un intervallo di selettività che permette di
ottimizzare la risoluzione.
AdvanceBio RP-mAb C4
2,1 x 100 mm, 3,5 µm (codice 795775-904)
Rivelatore:
UV, 254 nm
Fase mobile:
Gradiente:
10-58% B in 4 min, lavaggio 1 min
A: acido trifluoroacetico 0,1% in acqua:IPA (98:2) a 95% B, riequilibrazione 1 min a
B: IPA:acetonitrile:fase mobile A (70:20:10)
10% B
Flusso:
1,0 mL/min
Temperatura:
80 °C
Campione:Iniezione di 5 µL di Herceptin
ricombinante umanizzato variante
IgG1 intatta di Creative Biolabs
(1 mg/mL)
Caratterizzazione in meno di 2 minuti
mAU
140
mAU
12
120
10
8
6
100
4
2
0
80
-2
-4
60
1,3
1,4
1,5
1,6
1,7
1,8
1,9
2
2,1
2,2
40
20
0
1,3
1,4
1,5
1,6
1,7
1,8
1,9
2
2,1
2,2
La gamma di biocolonne Agilent è una delle più ampie sul mercato
e include le colonne AdvanceBio che consentono di incrementare
l'accuratezza e la produttività delle bioseparazioni. Maggiori
informazioni sono disponibili sul sito
agilent.com/chem/advancebio
31
BioConfirm Molecular Feature
Extractor della mappatura
peptidica con tripsina di mAb
Stratagene
Tramite l'utilizzo di BioConfirm Molecular
Feature Extractor è stato possibile
dimostrare una copertura della sequenza
pari al 100% sia per le catene leggere
che per quelle pesanti dello stesso
anticorpo monoclonale.
Parametri strumentali Q-TOF
Sorgente: ESI positiva
Temperatura del gas:
325 ºC
Gas di essiccamento:
10 L/min
Nebulizzatore:
40 psi
Vcap:
4.000 V
Fragmentor:
150 V
Skimmer:
65 V
RF ottapolo 1:
750 V
MS:
4 Hz
Range di acquisizione:
200-3200 m/z
Massa di
riferimento: 922,009798
Modalità di acq.:Modalità con range dinamico esteso (2 GHz)
Analisi di insulina:
trasferimento da una colonna
ZORBAX StableBond da 1,8 μm
a una colonna Poroshell 120 per
una maggiore efficienza
La colonna Poroshell 120 SB-C18 ha
permesso di raddoppiare l'efficienza rispetto
alla colonna ZORBAX RRHD SB-C18 80 Å
grazie ai pori di maggiori dimensioni e alla
diffusione più rapida nei pori da 120 Å. Le
colonne Poroshell 120 sono ideali per una
piccola proteina come l'insulina o altri peptidi
e offrono un'efficienza più alta a pressioni più
basse.
x106
4,8
4,6
4,4
4,2
4
3,8
3,6
3,4
3,2
3
2,8
2,6
2,4
2,2
2
1,8
1,6
1,4
1,2
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
Conteggi vs. tempo di acquisizione (min)
Colonna:Poroshell 120 EC-C18,
3,0 x 150 mm, 2,7 µm
(codice 683975-302)
Rivelazione: Q-TOF, ESI positiva
Gradiente: Vedere la tabella
Fase mobile:
A: acqua, acido formico 0,1%
B: acetonitrile, acido formico 0,1%
Flusso:
0,3 mL/min
Temperatura: 40 °C
Tempo%B
0 2
3 2
13 45
15 65
Tempo%B
15,190
17 90
18 2
ZORBAX SB-C18, 4,6 x 100 mm, 1,8 µm (codice 828975-902)
mAU
mAU
500
500
400
400
300
300
200
200
100
1000
0 5
5
1
1
N1 = 5.215
N = 5.215
Tf11 = 1,4
Tf1 = 1,4
7,5
7,5
10
10
1. Insulina porcina
2. Desamido-insulina A-21
N2 = 6.691
N = 6.691
N22 = 1,2
N2 = 1,2 2
2
12,5
12,5
15
15
255 bar
255 bar
17,5
17,5
20 min
20 min
Poroshell 120 SB-C18, 4,6 x 100 mm, 2,7 µm (codice 685975-902)
mAU
mAU
600
500
600
400
500
300
400
200
300
100
200
1000
0 5
5
N1 = 10.860
N = 10.860
Tf11 = 1,1
Tf1 = 1,1
7,5
7,5
10
10
mAU
mAU
600
500
600
400
500
300
400
200
300
100
200
1000
0
mAU
mAU
600
500
600
400
500
300
400
200
300
100
200
12,5
12,5
1
1
N1 = 7.854
N = 7.854
Tf11 = 1,4
Tf1 = 1,4
5
5
7,5
7,5
32
10
10
N1 = 9.768
N = 9.768
Tf11 = 1,0
Tf1 = 1,0
12,5
12,5
1
1
1
1
N2 = 12.370
N = 12.370
Tf22 = 1,0
Tf2 = 1,0
15
15
17,5
17,5
N2 = 9.434
N = 9.434
Tf22 = 1,1
Tf2 = 1,1
2
2
15
15
N2 = 10.710
N = 10.710
Tf22 = 1,0
2
Tf = 1,0
2
2
190 bar
190 bar
20 min
20 min
237 bar
237 bar
17,5
17,5
20 min
20 min
198 bar
198 bar
Mappatura peptidica di un EPO
biosimilare
Nel cromatogramma in alto è mostrata
una mappatura peptidica di un EPO a
glicosilazione elevata da un biosimilare.
È possibile notare l'eccellente risoluzione
ottenuta per i piccoli frammenti peptidici
tramite rivelazione UV. Nel cromatogramma
in basso è mostrata la stessa separazione
tramite spettrometria di massa per
determinare la copertura della sequenza
(100%). La rivelazione UV è impiegata
per il confronto delle mappature
peptidiche, mentre la tecnica MS è ideale
per l'identificazione di modificazioni e
sostituzioni di amminoacidi. Pertanto è
possibile utilizzare la colonna AdvanceBio
Peptide Mapping per confermare l'identità
delle proteine e identificare eventuali
modificazioni post-traduzionali.
300
250
200
150
100
50
0
0
5
10
15
Colonna: A
dvanceBio Peptide Mapping,
2,1 x 250 mm, 2,7 µm
(codice 651750-902)
Flusso: 0,4 mL/min
Iniezione: 5 µL (2,0 mg/mL)
Temp: 55 ºC
Rivelazione: 220 nm
20
25
30
Gradiente: A: acqua (acido formico 0,1%);
B: acetonitrile (acido formico 0,1%),
0-28 min, 3-45% B;
28-33 min, 45-60% B;
33-34 min, 60-95% B
x106
6,5
6
5,5
5
4,5
4
3,5
3
2,5
2
1,5
1
12,155
Cpd 1: 12,155
0,5
0
11
11,5
12
12,5
13
13,5
14
14,5
15
15,5
16
16,5
17
17,5
18
18,5
19
19,5
20
20,5
Conteggi vs. tempo di acquisizione (min)
21
21,5
22
22,5
23
23,5
24
24,5
25
25,5
26
26,5
27
27,5
Digerito EPO, LC/MS TOF
Copertura della sequenza pari al 100% ottenuta con il software MassHunter Workstation
Le colonne Agilent AdvanceBio Peptide Mapping offrono gli stessi vantaggi Fast LC
delle colonne Poroshell 120 e sono testate per lotto utilizzando una specifica miscela di peptidi
per confermarne l'adeguatezza e la riproducibilità. La gamma AdvanceBio Peptide Mapping
include la nuova opzione di lunghezza pari a 250 mm che permette di ottenere la massima
risoluzione delle mappature peptidiche più complesse.
Maggiori informazioni sono disponibili sul sito agilent.com/chem/advancebio
oppure richiedendo la pubblicazione n. 5991-1696EN.
Maggiori informazioni sulle colonne Poroshell 120 Agilent sono disponibili sul sito
agilent.com/chem/poroshell120
33
Qual è la colonna Fast LC più adatta alle tue analisi?
Agilent offre la più ampia gamma di colonne Fast LC, tra cui i modelli Poroshell 120, ZORBAX Rapid Resolution High Definition (RRHD) da 1,8
µm (stabili fino a 1.200 bar) e ZORBAX Rapid Resolution High Throughput (RRHT) da 1,8 µm (stabili fino a 600 bar). Le fasi stazionarie legate
di tutte queste colonne sono simili tra loro per garantire la scalabilità. Grazie all'ampia scelta di opzioni, si avrà la flessibilità necessaria per
creare metodi ottimali per qualsiasi esigenza.
Strumentazione nel laboratorio
Consiglio Agilent
Logica
Strumenti sia UHPLC (>1.000 bar) sia
HPLC (per esempio sistema LC Agilent
1290 Infinity ed LC Agilent 1260 Infinity,
600 bar)
1. Poroshell 120, 4 μm e 2,7 μm
2. ZORBAX RRHD 1,8 µm
La colonna Poroshell 120 è semplice da utilizzare con entrambe le
tipologie di strumenti. Con la colonna ZORBAX RRHD puoi semplificare
l'ottimizzazione delle funzionalità del sistema LC 1290 Infinity per
l'UHPLC.
Solo strumenti HPLC da 400-600 bar: LC
Agilent Serie 1200 Infinity, Agilent 1100
(400 bar) così come sistemi LC 1220
Infinity o LC 1260 Infinity (600 bar)
1. Poroshell 120, 4 μm e 2,7 μm
2. ZORBAX Eclipse Plus 3,5 µm e 5 µm
Con le colonne Poroshell 120 da 4 μm e 2,7 μm puoi migliorare le
prestazioni degli strumenti da 400 bar meno recenti, oltre che ottenere
prestazioni ancora più elevate dai nuovi strumenti UHPLC da 600 bar.
Nel caso di metodi consolidati non trasferibili, la colonna ZORBAX
Eclipse Plus permette di ottenere eccellenti prestazioni e un'eccezionale
forma dei picchi.
Un insieme di strumenti UHPLC (sistema
LC Agilent 1290 Infinity, altri strumenti
da >1.000 bar) e alcuni strumenti HPLC
(per esempio appartenenti alla serie
1200 Infinity)
1. ZORBAX RRHD 1,8 µm
2. Poroshell 120, 2,7 µm
La colonna ZORBAX RRHD permette di ottenere prestazioni ottimali
con ciascuno di questi strumenti. La colonna Poroshell 120 può essere
utilizzata con gli strumenti da 600 bar per ottimizzarne le prestazioni.
Vuoi ottenere risultati eccellenti dalle
tue analisi?
Inizia preparando al meglio il campione
Riduci al minimo la necessità di ripetere le analisi e le interferenze
che possono compromettere la separazione, la rivelazione e la
quantificazione. La gamma di prodotti Agilent per la preparazione
del campione combina prodotti innovativi, produzione all'avanguardia
e rigorosi processi di monitoraggio del controllo qualità per garantire
risultati affidabili e uniformi.
agilent.com/chem/samplepreparation
34
Prestazioni UHPLC infinitamente superiori e metodi in
cromatografia convenzionale altamente affidabili
I modelli LC Agilent Serie 1200 Infinity sono la soluzione giusta se
sei alla ricerca di un efficiente sistema LC per l'analisi di routine o di
un avanzato sistema LC/MS ad alta risoluzione.
Combinati con le colonne Poroshell 120, i sistemi LC serie
1200 Infinity offrono risoluzione e sensibilità di livello superiore,
potenziando al tempo stesso la capacità di separazione. Inoltre,
semplificano il trasferimento dei metodi tra sistemi diversi, senza
necessità di ripetere le fasi di sviluppo o validazione.
Infinitamente più
conveniente
Infinitamente più
affidabile
Infinitamente più
LC
LC
LC
potente
Scopri perché la serie 1200 Infinity di
Agilent è infinitamente migliore sul sito
agilent.com/chem/infinity
1220
Infinity
1260
Infinity
1290
Infinity II
Maggiori informazioni sulle colonne Poroshell 120 Agilent sono disponibili sul sito
agilent.com/chem/poroshell120
35
Specifiche e informazioni per gli ordini
Colonne Poroshell 120 da 4 µm Agilent
Precolonne per colonne da 4 µm
NOVIT
À
Dimensioni
(mm)
EC-C18
EC-C8
PFP
Phenyl-Hexyl
HILIC
Dimensioni (mm)
EC-C18
4,6 x 250
4,6 x 150
4,6 x 100
4,6 x 50
3,0 x 250
3,0 x 150
3,0 x 100
3,0 x 50
2,1 x 250
2,1 x 150
2,1 x 100
2,1 x 50
690970-902
693970-902
695970-902
699970-902
690970-302
693970-302
695970-302
699970-302
650750-902
693770-902
695770-902
699770-902
690970-906
693970-906
695970-906
699970-906
690970-306
693970-306
695970-306
699970-306
650750-906
693770-906
695770-906
699770-906
690970-408
693970-408
695970-408
699970-408
690970-308
693970-308
695970-308
699970-308
650750-408
693770-408
695770-408
699770-408
690970-912
693970-912
695970-912
699970-912
690970-312
693970-312
695970-312
699970-312
650750-912
693770-912
695770-912
699770-912
690970-901
693970-901
695970-901
699970-901
690970-301
693970-301
695970-301
699970-301
650750-901
693770-901
695770-901
699770-901
4,6 x 5
3,0 x 5
2,1 x 5
820750-916
NOVIT
À
823750-916
821725-916
ALTO p
H
Colonne Poroshell 120 da 2,7 µm Agilent
Dimensioni (mm)
EC-C18
EC-C8
SB-C18
SB-C8
NOVITÀ HPH-C18
NOVITÀ HPH-C8
4,6 x 150
4,6 x 100
4,6 x 75
4,6 x 50
4,6 x 30
3,0 x 150
3,0 x 100
3,0 x 75
3,0 x 50
3,0 x 30
2,1 x 150
2,1 x 100
2,1 x 75
2,1 x 50
2,1 x 30
693975-902
695975-902
697975-902
699975-902
691975-902
693975-302
695975-302
697975-302
699975-302
691975-302
693775-902
695775-902
697775-902
699775-902
691775-902
693975-906
695975-906
697975-906
699975-906
691975-906
693975-306
695975-306
697975-306
699975-306
691975-306
693775-906
695775-906
697775-906
699775-906
691775-906
683975-902
685975-902
687975-902
689975-902
681975-902
683975-302
685975-302
687975-302
689975-302
681975-302
683775-902
685775-902
687775-902
689775-902
681775-902
683975-906
685975-906
693975-702
695975-702
693975-706
695975-706
689975-906
699975-702
699975-706
683975-306
685975-306
693975-502
695975-502
693975-506
695975-506
689975-306
699975-502
699975-506
683775-906
685775-906
693775-702
695775-702
693775-706
695775-706
689775-906
699775-702
699775-706
36
Colonne Poroshell 120 da 2,7 µm Agilent (continua)
Dimensioni (mm)
Phenyl-Hexyl
SB-Aq
Bonus-RP
HILIC
EC-CN
NOVITÀ PFP
4,6 x 150
4,6 x 100
4,6 x 50
3,0 x 150
3,0 x 100
3,0 x 50
2,1 x 150
2,1 x 100
2,1 x 50
693975-912
695975-912
699975-912
693975-312
695975-312
699975-312
693775-912
695775-912
699775-912
683975-914
685975-914
689975-914
683975-314
685975-314
689975-314
683775-914
685775-914
689775-914
693968-901
695968-901
699968-901
693968-301
695968-301
699968-301
693768-901
695768-901
699768-901
693975-901
695975-901
699975-901
693975-301
695975-301
699975-301
693775-901
695775-901
699775-901
693975-905
695975-905
699975-905
693975-305
695975-305
699975-305
693775-905
695775-905
699775-905
693975-408
695975-408
699975-408
693975-308
695975-308
699975-308
693775-408
695775-408
699775-408
Nota: il limite di pressione delle colonne Poroshell 120 è pari a 600 bar/9.000 psi.
Fast Guard per UHPLC Agilent Poroshell 120
Dimensioni
(mm)
EC-C18
EC-C8
SB-C18
Phenyl-Hexyl
Novità PFP
HPH-C18
4,6 x 5
820750-911
820750-913
820750-912
820750-914
820750-915
820750-921
3,0 x 5
823750-911
823750-913
823750-912
823750-914
823750-915
823750-921
2,1 x 5
821725-911
821725-913
821725-912
821725-914
821725-915
821725-921
Dimensioni
(mm)
HPH-C8
SB-C8
SB-Aq
Bonus-RP
HILIC
EC-CN
4,6 x 5
820750-922
820750-923
820750-924
820750-925
820750-926
820750-927
3,0 x 5
823750-922
823750-923
823750-924
823750-925
823750-926
823750-927
2,1 x 5
821725-922
821725-923
821725-924
821725-925
821725-926
821725-927
Nota: sono fornite 3 unità/confezione.
Specifiche delle fasi legate Poroshell 120 Agilent
Dimensioni dei
pori
Limiti di
temperatura
Intervallo pH
Con endcapping
Carico di
carbonio
Area
superficiale
EC-C18
120 Å
60 ºC
2,0-8,0
Doppio
10%
130 m2 /g
EC-C8
120 Å
60 ºC
2,0-8,0
Doppio
5%
130 m2 /g
SB-C18
120 Å
90 ºC
1,0-8,0
No
9%
130 m2 /g
SB-C8
120 Å
80 ºC
1,0-8,0
No
5,5%
130 m2 /g
HPH-C18
100 Å
60 ºC
3,0-11,0
Doppio
Proprietaria
95 m2 /g
HPH-C8
100 Å
60 ºC
3,0-11,0
Doppio
Proprietaria
95 m /g
Phenyl-Hexyl
120 Å
60 ºC
2,0-8,0
Doppio
9%
130 m2 /g
SB-Aq
120 Å
80 ºC
1,0-8,0
No
Proprietaria
130 m2 /g
Bonus-RP
120 Å
60 ºC
2,0-9,0
Triplo
9,5%
130 m2 /g
HILIC
120 Å
60 ºC
0,0-8,0
No
n/d
130 m2 /g
EC-CN
120 Å
60 ºC
2,0-8,0
Doppio
3,5%
130 m2 /g
PFP
120 Å
60 ºC
2,0-8,0
Sì
5,1%
130 m2 /g
Fase legata
Le specifiche fanno riferimento a valori tipici.
37
2
Fasi stazionarie esclusive
incrementano la stabilità
ad alto pH
Colonne Poroshell 300 da 5 μm Agilent
Descrizione
Dimensioni
(mm)
300SB-C18
300SB-C8
300SB-C3
300Extend-C18
Narrow Bore
2,1 x 75
660750-902
660750-906
660750-909
670750-902
MicroBore
1,0 x 75
661750-902
661750-906
661750-909
671750-902
Capillare
0,5 x 75
Precolonna a cartuccia, 4/confezione
2,1 x 12,5
5065-4468
Kit hardware per precolonna
Precolonna MicroBore, 3/confezione
1,0 x 17
821075-920
821075-918
821075-924
820888-901
820888-901
820888-901
5185-5968
5185-5968
5185-5968
5185-5968
Nota: il limite di pressione operativa delle colonne Poroshell 300 è pari a 400 bar/6.000 psi.
Specifiche delle fasi legate Poroshell 300 Agilent
Fase legata
Dimensioni dei pori
Limiti di temperatura
Intervallo pH
Con endcapping
Poroshell 300SB-C18, C8, C3
300 Å
90 ºC
1,0-8,0
No
2,0-11,0
Sì
Poroshell 300Extend
40 °C a pH >8
300 Å
60 °C a pH <8
Le specifiche fanno riferimento a valori tipici.
Colonne Agilent AdvanceBio RP-mAb
Colonne Agilent AdvanceBio Peptide Mapping
Descrizione
Codice
Descrizione
Codice
C4, 4,6 x 150 mm, 3,5 μm
793975-904
4,6 x 150 mm, 2,7 μm
653950-902
C4, 4,6 x 100 mm, 3,5 μm
795975-904
3,0 x 150 mm, 2,7 μm
653950-302
C4, 4,6 x 50 mm, 3,5 μm
799975-904
2,1 x 250 mm, 2,7 μm
651750-902
C4, 2,1 x 150 mm, 3,5 μm
793775-904
2,1 x 150 mm, 2,7 μm
653750-902
C4, 2,1 x 100 mm, 3,5 μm
795775-904
2,1 x 100 mm, 2,7 μm
655750-902
C4, 2,1 x 75 mm, 3,5 μm
797775-904
Fast Guard da 4,6 mm*
850750-911
C4, 2,1 x 50 mm, 3,5 μm
799775-904
Fast Guard da 3,0 mm*
853750-911
SB-C8, 4,6 x 150 mm, 3,5 μm
783975-906
Fast Guard da 2,1 mm*
851725-911
SB-C8, 4,6 x 100 mm, 3,5 μm
785975-906
SB-C8, 4,6 x 50 mm, 3,5 μm
789975-906
SB-C8, 2,1 x 150 mm, 3,5 μm
783775-906
SB-C8, 2,1 x 100 mm, 3,5 μm
785775-906
SB-C8, 2,1 x 75 mm, 3,5 μm
787775-906
SB-C8, 2,1 x 50 mm, 3,5 μm
789775-906
Difenile, 4,6 x 150 mm, 3,5 μm
793975-944
Difenile, 4,6 x 100 mm, 3,5 μm
795975-944
Difenile, 4,6 x 50 mm, 3,5 μm
799975-944
Difenile, 2,1 x 150 mm, 3,5 μm
793775-944
Difenile, 2,1 x 100 mm, 3,5 μm
795775-944
Difenile, 2,1 x 75 mm, 3,5 μm
797775-944
Difenile, 2,1 x 50 mm, 3,5 μm
799775-944
*Fast Guard prolunga la durata utile della colonna senza rallentare la separazione o incidere
negativamente sulla risoluzione.
Specifiche Agilent AdvanceBio Peptide Mapping
Fase legata
Dimensioni
dei pori
Limiti di
temperatura
Intervallo
pH*
Con
endcapping
C18
120 Å
60 ºC
2,0-8,0
Doppio
Le specifiche fanno riferimento soltanto a valori tipici.
Specifiche Agilent AdvanceBio RP-mAb
Fase legata
Dimensioni dei pori
Limiti di temperatura
Intervallo pH*
Con endcapping
AdvanceBio RP-mAb C4
450 Å
90 ºC
1,0-8,0
Sì
AdvanceBio RP-mAb SB-C8
450 Å
90 ºC
1,0-8,0
No
AdvanceBio RP-mAb difenilico
450 Å
90 ºC
1,0-8,0
Sì
Le specifiche fanno riferimento a valori tipici.
*L e colonne sono progettate per l'uso ottimale a basso pH. A pH 6-8, la massima stabilità della colonna per tutte le colonne a base di silice si ottiene operando a temperature <40 °C e utilizzando
basse concentrazioni di tampone nell'intervallo 0,01-0,02 M.
38
Colonne per oligonucleotidi Agilent AdvanceBio
Descrizione
Codice
2,1 x 50 mm, 2,7 µm
659750-702
2,1 x 100 mm, 2,7 µm
655750-702
2,1 x 150 mm, 2,7 µm
653750-702
Fast Guard da 2,1 mm
821725-921
4,6 x 50 mm, 2,7 µm
659950-702
4,6 x 100 mm, 2,7 µm
655950-702
4,6 x 150 mm, 2,7 µm
653950-702
Fast Guard da 4,6 mm
820750-921
Standard di risoluzione degli oligonucleotidi
5190-9028
Standard di frammenti oligonucleotidici
5190-9029
Specifiche delle colonne per oligonucleotidi Agilent AdvanceBio
Fase legata
Dimensioni dei
pori
Limiti di
temperatura
Intervallo pH*
Con
endcapping
C18
100 Å
65 ºC
3,0-11,0
Doppio
Innovazione Agilent: la prima colonna per LC con particelle a superficie porosa stabile a pH elevati per l'analisi di oligonucleotidi
Colonne Agilent AdvanceBio Glycan Mapping
Descrizione
Codice
4,6 x 250 mm, 2,7 μm
680975-913
4,6 x 150 mm, 2,7 μm
683975-913
4,6 x 100 mm, 2,7 μm
685975-913
2,1 x 250 mm, 2,7 μm
651750-913
2,1 x 150 mm, 2,7 μm
683775-913
2,1 x 100 mm, 2,7 μm
685775-913
2,1 mm, 2,7 μm, Fast Guard
821725-906
Specifiche Agilent AdvanceBio Glycan Mapping
Fase legata
Diametro interno
(mm)
Dimensioni delle
particelle (µm)
Con endcapping
Intervallo di pH
Temperatura
operativa
Limite di
pressione
Amide HILIC
2,1 e 4,6
1,8, completamente porose
No
2-7
60 °C
1.200 bar
Amide HILIC
2,1 e 4,6
2,7, superficie porosa
No
2-7
60 °C
600 bar
Maggiori informazioni sulle colonne Poroshell 120 Agilent sono disponibili sul sito
agilent.com/chem/poroshell120
39
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© Agilent Technologies, Inc., 2015
Stampato negli Stati Uniti, 21 agosto 2015
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