ISOLAMENTO DI UN NUOVO GENE
(Tangerina) ESPRESSO NEL
TESTICOLO DI RATTO:
LOCALIZZAZIONE SPAZIALE E
TEMPORALE
La Spermatogenesi

Fase Proliferativa o
Spermatogoniale

Meiosi

Spermioistogenesi
Organizzazione del testicolo nei vertebrati

Ampollare (Anamni)

Cistica (Anfibi Anuri)

Tubulare (Rettili, Mammiferi, Uccelli)
Organizzazione ampollare
Organizzazione cistica
Organizzazione tubulare
Studio della spermatogenesi
ANFIBI
MAMMIFERI
RETTILI
Nuovi markers dell’attività testicolare
Prima evidenza della presenza dei recettori Mel1 e
H9 per la melatonina nel testicolo di ratto adulto.

88% di omologia tra la sequenza del
prodotto della PCR ottenuto dal cDNA di
testicolo di ratto e la sequenza dell’mRNA
della Tangerina A (tang-A) di topo
Scopo degli esperimenti

Indagare la presenza della tangerina nel testicolo di ratti
in età prepuberale e adulta e studiarne il profilo di
espressione
Tangerina

Mus musculus
Tre isoforme dovute a splicing alterativo
•
tang-A
di 5705nt
•
tang-B
di 3179nt
•
tang-C
di 2834nt
Splicing alternativo
5’-UTR
Sequenza codificante
5’-
3’-UTR
-3’ tang-A
1349nt
2526nt
5’-
-3’ tang-B
1349nt
5’-
2860nt
-3’ tang-C
Analisi della sequenza amminoacidica
predetta dalla sequenza nucleotidica di
tang-A

Analisi incrociata con due diversi software (DAS e TMpred)
per indagare sull’eventuale presenza di domini
transmembrana
Analisi della sequenza amminoacidica
predetta dalla sequenza nucleotidica di
tang-A

Rappresentazione lineare computerizzata della
proteina
28 S
18 S
12 mesi
6 mesi
1 mese
2 settimane

Localizzazione del
gene Tangerina sul
braccio lungo del
cromosoma 1 di
ratto
Oligonucleotidi per PCR


TangA(1): 5’-caaagaacacttggacccaag-3’
TangA(2): 5’-cacttgtgccttattcaggctg-3’

TangBC(1):5’-cgctcaggttccacttcga-3’

TangBC(2): 5’-gtgatgcagacaccacggtag-3’
T.M. 62°C
LUNGH. 21cb
tang-A
460cb
tang-B
700cb
tang-C
450cb
T.M. 62°C
LUNGH. 22cb
T.M. 62°C
LUNGH. 19cb
T.M. 61,5°C
LUNGH. 21cb
tang-A
460 cb

tang-B
700 cb
tang-C
450 cb
GAPDH
500 cb
Analisi dei prodotti di
RT-PCR nel testicolo di
ratto agli stadi di
sviluppo
presi
in
esame
Ibridazione
dei
prodotti di PCR
ottenuti con gli
oligo per tang-A
e GAPDH con
cDNA marcato di
tang-A e GAPDH
12 mesi
6 mesi
3 mesi
2 settimane

460cb
GAPDH
460cb
tang-A
12 mesi
6 mesi
3 mesi
2 settimane
700cb

460cb
GAPDH
700cb
460cb
tang-C
Ibridazione
dei
prodotti di PCR
ottenuti con gli
oligo per tang-C
e GAPDH con
cDNA marcato di
tang-C e GAPDH

Ibridazione in situ con cRNA antisenso di
tang-C su sezioni di testicolo di ratto adulto
Conclusioni

Prima evidenza dei trascritti della Tangerina nel testicolo di ratto

Presenza delle isoforme tang-A e tang-C e assenza di tang-B


Andamento crescente dei livelli di espressione di tang-A durante lo
sviluppo mentre restano costanti quelli di tang-C
Localizzazione cellulare degli mRNA della Tangerina a livello dei
spermatociti e dei spermatidi