“La lumaca nel
piatto:chi va piano va
sano e va lontano
IL SECRETO DI LUMACA: ANALISI
MICROBIOLOGICHE A COMPLEMENTO
DELL’INDAGINE CHIMICA
Cherasco 26 Settembre 2014
Dr. Claudio Trapella; Dipartimento di Scienze Chimiche e Farmaceutiche
Università degli Studi di Ferrara
ESTRAZIONE
L’estrazione meccanica della bava di lumaca è stata effettuata grazie alla collaborazione con
l’azienda agricola COLOGNESI di Gualdo in provincia di Ferrara che detiene il brevetto
della macchina per l’estrazione.
L’estrazione avviene attraverso uno stimolo chimico (NaCl) e grazie alla temperatura
dell’acqua, le lumache non subiscono quindi nessun maltrattamento (% soppravvivenza
98%) .
STORIA E SCOPERTA
STUDIO CONDOTTO NEL 2010
EFFETTO ANTIRUGHE
CARATTERIZZAZIONE
La caratterizzazione dell’estratto di lumaca per la vendita alle industrie cosmetiche o alimentari
viene effettuata su 3 livelli per garantire un prodotto di elevata qualità:
1.Caratterizzazione dell’estratto secco quindi % di sostanza secca all’interno del secreto.
L’analisi di spettrofotometria infrarossa permette quindi di valutare la presenza di proteine
all’interno dell’estratto.
2.Analisi dei metalli pesanti attraverso spettrofotometria di Assorbimento Atomico per
valutare i metalli “buoni” (Na, K, Ca, Mg, Cu, Zn) e quelli “cattivi” (Cr, Pb, Ni).
3.Analisi Microbiologica del campione appena estratto per valutare la carica batterica totale
Sull’estratto di bava di lumaca, quali sofisticazioni
possibili?
CARATTERIZZAZIONE CHIMICA
ALLANTOINA
ACIDO
GLICOLICO
PRIMA EVIDENZA IN LETTERATURA DELL’USO
DELLA SPETTROFOTOMETRIA INFRAROSSA
CARATTERIZZAZIONE CHIMICA
SPETTROFOTOMETRO ALL’INFRAROSSO
IL MUCO DI LUMACA ESSENDO UN COMPOSTO NATURALE PRESENTA
UN’ELEVATA COMPLESSITA’. LE SUE PROPRIETA’ FARMACOLOGICHE NON
SONO RICONDUCIBILI ESCLUSIVAMENTE ALLA SUA COMPOSIZIONE CHIMICA
E AMMINOACIDICA.
CARATTERIZZAZIONE CHIMICA
DIFFERENZE TRA SPECIE
HELIX ASPERSA MULLER
%SS= 6.7%
HELIX ASPERSA
MAXIMA
%SS= 6.0%
HELIX POMATIA
%SS= 4.8%
ANALISI INFRAROSSA DEL MUCO TOTALE DI HELIX ASPERSA
ANALISI DEI METALLI PESANTI
A. HELIX ASPERSA MULLER
B. HELIX ASPERSA MAXIMA
C.HELIX POMATIA
Conc. Metalli nella carne
Metallo Concentrazione
minimo Valore massimo
Valore
Valore medio
Calcio
mg/100
Fosforo
““
Magnesio
““
Potassio
““
Sodio
““
Rame
““
Ferro
““
Manganese ““
Zinco
““
499
186
62
164
109
48
35
3
15
Prof. Bracchi, Prof Novelli. Università di Parma
297
155
42
101
47
5
18
2
12
957
216
95
201
201
173
55
4
22
AZOTO TOTALE E PROTEINE TOTALI CON IL METODO DEL KJELDHAL
Analisi elementare
Summarize Results
Date :
1/23/2013
Method Name :
default
Method Filename :
Default.mth
Group No : 1
Element %
Sample Name
Nitrogen
15:55:41
Carbon
Hydrogen
Sulphur
SNAIL1
0,488440126
2,296150923
0,321308196
0,244194999
SNAIL2
0,480161518
2,264023066
0,374696225
0,247604698
SNAIL3
0,457833827
2,175116062
0,385799468
0,243340284
SNAIL4
0,475547046
2,259398937
0,361756295
0,245468855
SNAIL5
0,486850172
2,337282658
0,377795458
0,249659687
TRE CAMPIONI DI BAVA DI LUMACA PURA
Sample 1
1.09gr azoto
6.81gr proteine
Sample 2
1.56gr azoto
9.77gr proteine
sample 3
1.49gr azoto
9.30gr proteine
Kjeldahl come metodo di analisi
Proteine= N totX 6.25
TRE CAMPIONI DI BAVA DI LUMACA ADULTERATI
Sample A: 800mg bava 200mg BSA
Sample B: 800mg bava 200mg NH4Cl
Sample C: 1000mg bava
2.64gr N tot 16.5gr Proteine
5.42gr N tot 33.8gr Proteine
1.56gr azoto 9.77gr proteine
Spettro infrarosso di bava di lumaca con aggiunta di BSA
Spettro infrarosso di bava di lumaca con aggiunta di NH4Cl
ANALISI MICROBIOLOGICHE
VALUTAZIONE CARICA BATTERICA
Semina di 100ul a conc 100ug\ul ( 1mg in tot) su:
TSA (carica batterica tot)
Mannitol Salt Agar ( Stafiloccocchi)
McConkey ( Coliformi)
Sabouraud + Cloramfenicolo ( Miceti)
RISULTATI:
Carica batterica totale pari a 4 x 10^-2 CFU\mg con presenza di soli Bacilli gram
positivi
GRAM SU TSA
GRAM MANNITOL SALT AGAR
100ul BAVA (10mg) in un ml finale
CURVA DI CRESCITA BATTERICA
E.Coli
P.Aeruginosa
1.15
NT
BAVA
NT
BAVA
1.10
Fold increase
Fold increase
3
2
1
1.05
RALLENTAMENTO
CRESCITA DEI
GRAM NEGATIVI
1.00
0.95
0.90
0
0.85
0
20
40
60
80
0
20
40
MIN
2.0
1.5
1.0
0.5
3
2
1
0
0.0
40
MIN
60
80
1.4
NT
BAVA
Fold increase
NT
BAVA
Fold increase
2.5
Fold increase
C.Albicans
4
20
80
S.Mutants
S.Aureus
0
60
MIN
NT
BAVA
1.2
1.0
0.8
0.6
0
20
40
MIN
60
80
0
20
40
MIN
60
80
DETERMINAZIONE MIC (minima concentrazione inibente)
% inhibition
80
60
g/u
l
25u
3.1
g/u
l
5u
ul
g/u
l
6.2
E.Coli
S.Aureus
P.Aeruginosa
C.Albicans
12
.5u
100
25
ug/
50
ug/
ul
Coltura per 24h in 100ul totali (1x10^4 batteri) con diluizioni seriali di bava
E.coli
S.Aureus
40
C.Albicans
20
25
ug
/u
l
12
,5
ug
/u
l
6,
25
ug
/u
l
3,
12
5u
g/
ul
50
ug
/u
l
0
P.Aeruginosa
Alla concentrazione di 50ug/ul tutti e 4 i microrganismi vengono inibiti nella crescita, in
particolare i gram negativi. Questi ultimi sono leggermente inibiti anche alla concentrazione
di 25ug\ul.
P.Aeruginosa, E. Coli: Garm –
Staphylococcus. Aureus Gram +
C albicans Fungo
ANALISI MICROBIOLOGICHE
CONCLUSIONI:
1. LA BAVA LIOFILIZZATA NON CONTIENE UNA CARICA BATTERICA POTENZIALMENTE NOCIVA
IL PROCESSO DI LIOFILIZZAZIONE GARANTISCE UNA BUONA PUREZZA MICROBIOLOGICA
2. IL PREPARATO MOSTRA ATTIVITA’ BATTERIOSTATICA SOPRATTUTTO SUI GRAM NEGATIVI
E.COLI E P.AERUGINOSA SONO INIBITE GIA’ ALLA CONCENTRAZIONE DI 25ug/ul
PROSPETTIVE
1. Analisi più dettagliata (Proteomica) dei componenti di Helix
Aspersa Muller per identificare le proprietà biologiche associate
ai vari componenti.
2. Valutazione delle possibili frodi sul prodotto attraverso
l’analisi infrarossa associata all’analisi dell’azoto totale e
dell’acido glicolico e dell’allantoina via HPLC.
3. Collaborazione con l’Azienda ospedaliera di Ferrara, il
Tecnopolo per le Scienze della Vita e aziende biomedicali
della RER per un progetto di messa a punto di garze e teli
medicati per le ustioni e le piaghe da decubito (POR-FESR
2014-2020).