Citogenetica I
La citogenetica e` lo studio dei fenomeni genetici attraverso l’analisi citologica dei
cromosomi al microscopio.
Ferguson-Smith
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Cariotipi a confronto
1-3 gruppo A
4-5 gruppo B
X-6-12 gruppo C
13-15 gruppo D
19-20 gruppo F
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16-18 gruppo E
Y-21-22 gruppo G
G-bande
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Selezione delle
metafasi
 Ottima
ma…..
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Selezione delle metafasi
 Puo’
essere
anche cosi’...
Cromosomi non
ben riconoscibili,
difficili anche da
contare.
Scartare! (potendo)
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Selezione delle metafasi
 .. O cosi’
 Troppo contratti
pero’ si puo’ usare
per contarli.
Scartare! (potendo)
By NA
Selezione delle metafasi
Sufficiente
 Si possono contare
Puo’ essere utile per
analizzare i cromosomi
non sovrapposti
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Selezione delle metafasi
Discreta
 Si possono
contare, e anche
se ci sono alcune
sovrapposizioni,
si possono
analizzare
By NA
Selezione delle metafasi
 Buona
 Si possono
contare, e anche
se ci sono alcune
sovrapposizioni,
la morfologia dei
cromosomi e’
buona
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Come si fa il cariotipo?
1. SI CONTANO I CROMOSOMI : IMPORTANTE PER
SOSPETTARE LA PRESENZA DI ALTERAZIONI NEL NUMERO
CROMOSOMICO
2. SI APPAIANO GLI OMOLOGHI PER SIMILARITA’
3. SI METTONO IN ORDINE SECONDO LA CONVENZIONE
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Fare il cariotipo
46
10
9
11
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16
Cariotipo ordinato
CARIOTIPO IN QM (indicare il bandeggio)
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Diagramma
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Diagramma
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Terminologia
46,XX - cariotipo normale Femminile
46,XY - cariotipo normale Maschile
Questo modo di scrivere ci da’ due informazioni:
- numero totale dei cromosomi (46)
- sesso dell’organismo
47,XY,+21
Maschio con 47 cromosomi (invece di 46)
ed un cromosoma 21 in piu’ (sindrome di Down)
46,XX,del(14)(q23)
46,XY,dup(14)(q22q25)
46,XX,r(7)(p22q36)
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del=delezione
dup= duplicazione
r=ring (cromosoma ad anello)
FISH
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cromosoma
sul vetrino
FISH
sintesi di una sonda complementare
marcata con un fluorocromo
denaturazione
doppia elica
di DNA
AT C G G TATC C TA
TAGG C ATAG G AT
AT C G G TATC C TA
TAGG C ATAG G AT
AT C G G TATC C TA
TAGG C ATAG G AT
A
denaturazione
AT C G G TATC C TA
TAGG C ATAG G AT
TAGG C ATAG G AT
ibridazione della sonda sui
cromosomi denaturati
sul vetrino
AT C G G TATC C TA
TAGG C ATAG G AT
osservazione
del vetrino
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Principio della fluorescenza
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FISH : microscopio a fluorescenza


Osservazione
al microscopio
filtro di emissione
filtro di eccitazione
Lampada a vapori
di mercurio
CCD camera


Elaborazione al
computer
obiettivo/
condensatore
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fotografia
FISH: metafase in DAPI
Cromosomi
1. denaturati
2. colorati con DAPI
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FISH: segnali
Sonde puntiformi
fluorescenti
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FISH: merge
Sovrapposizione
dell’immagine della
sonda sull’immagine
del DAPI
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SONDE PER FISH
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DAPI
WCP
MERGE
SONDA
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DAPI
PCP
MERGE
SONDA
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COIBRIDAZIONI
2 SONDE PUNTIFORMI
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3 SONDE PUNTIFORMI
Duplicazione braccio corto del cromosoma Y
crom Y
normale
Yp duplicato
Alfoide crom Y
46X -Y + mar(dupYp)
Individuo di sesso maschile azospermico
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SRY
Inversione pericentrica:4(inv)
liquido amniotico
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4
inv(4)
Traslocazione 1/15 in diagnosi prenatale
1
Sangue periferico madre
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1/15
15/1
15
46,XY,der(1)t(1;15)(1pter,
15q23)mat
Prelievo di villi coriali
ishder(1)t(1p;15q)(p36.3
3;q24.2)mat
(pcp1p36;pcp15q)
Traslocazione(3/22)
3 3/22 22/3 22
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Traslocazione 5/11
Sangue periferico padre
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Liquido amniotico
Traslocazione 5/11
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5
5/11
11/5
11
insinv6/7
6 6del
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7/6
y
isocromosoma 21
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21 isodic21