• MICROSCOPIA
Alterazioni morfologiche
• AUTOMAZIONE
ANISOCITOSI
Microcitosi - Macrocitosi
Anisocitosi
Poichilocitosi
ANISOCROMIA
Inclusi eritrocitari
Ipocromia - Ipercromia
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LA DIAGNOSTICA SI ARTICOLA QUINDI IN SENSO
PRETTAMENTE DIFFERRENZIALE
PARAMETRI Più FREQUENTEMENTE USATI:
RBC HB HCT MCV MCH MCHC Reticolociti
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Anni ‘80 - primi ‘90
Citometria a flusso:
Volume del GR e concentrazione dell’Hb
(RDW e HDW):
orientamento diagnostico e monitoraggio
terapeutico delle anemie (D’Onofrio G, Zini G et
al. Arch Pathol Lab Med 1992)
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Hgb e Volume cellulari
Diagnosi Anemia
Monitoraggio Anemia
Doppia emoglobina
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Informazioni accurate
Più informazioni
Basso review rate
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Analisi RBC
Macro
Y asse: Volumi
X asse: densità celllulare
120fl
60fl
Micro
Hgb.conc.
28g/dl
Ipo
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41g/dl
Iper
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Analisi RBC
Normal
Iron Deficiency Anemia (IDA)
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β-Thalassemia Trait
Sickle Cell Anemia
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Analisi RBC
Reticolocitosi
Anemia sideropenica
Trait
Beta thalass.
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Anemia sideropenica
Quadro ematologico
Hb ridotta
MCH ridotto
MCHC ridotto
CHr ridotto
HDW aumentato (anisocromia)
% Hypo aumentata
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Thalassemia o Anemia mediterranea
Forma omozigote
Thalassemia Major o Morbo di Cooley
se i genitori sono entrambi portatori della malattia
Forma eterozigote
Thalassemia minor
Thalassemia minima
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Thalassemia o Anemia mediterranea
Thalassemia Major
quadro ematologico
ridotto numero di globuli rossi (~ 3.000.000)
riduzione drastica dell’ Hb (< 8 g/dL)
notevole aumento dell’ Hb F (~ 100%)
MCV molto ridotto
RDW molto aumentato (spiccata anisopoichilocitosi)
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Thalassemia o Anemia mediterranea
Thalassemia Minor
forma eterozigote
quadro ematologico
MCV ridotto
Hb ridotta
Hb A2 aumentata
In questo tipo di anemia microcitica, l’ RDW è di norma
basso,e l’istogramma presenta una base ristretta, in quanto la
popolazione eritrocitaria, pur essendo microcitica, è molto
omogenea,ad indicare la natura genetica della patologia
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• MCV = 66 fL; M/H ratio = 2.05
• Absence of Iron Deficiency (ß-Thalassemia trait)
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LA DIAGNOSI DI PORTATORE DI TRATTO TALASSEMICO
PUÒ ESSERE MOLTO FACILE PER I QUADRI CLASSICI MA
MOLTO COMPLESSA IN SITUAZIONI ATIPICHE (δ
βTALASSEMIE, αTALASSEMIE, TALASSEMIE SILENTI…)
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1973
1977
1979
1983
1984
1987
1987
1988
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Mentzer
MCV/RBC
Srivastava MCH/RBC
Fraser
[MCV-(5xHb)-RBC-3.4]
Shine & Lal MCV2 x MCH/1000
England
MCV-5 x HGB-RBC
Bessman
RDW/MCV
Makris
(MCV/RDW)/(MPV/PDW)
Fossat
RDW/HDW
Ricerca
RDW/RBC
Green
(MCV2xRDW-cv)/(Hbx100)
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1990
D’Onofrio
%MICRO/%HYPO
1991
Bruno
0,096MCV + 0,415RDW-cv – 0,139RBC
Danise
%HYPO/%MICRO
Colarco
[+0,216*RBC+0,117*CHCM-0.029*MCV]
Telmissani
MDHL=(MCH x RBC)/MCV
Vicinanza
DIBTT1 e DIBTT2
Rocco
CHDW
1993
2002
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Citometria a flusso:
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Volume e concentrazione dell’Hb (eritrociti e
reticolociti).
I parametri reticolocitari sono indicatori precoci nel
monitoraggio dell’eritropoiesi midollare
(trapianti di midollo, IRC in terapia con rHuEPO, monitoraggio
terapia marziale, autotrasfusioni, sferocitosi, anemia megaloblastica,
anemia del prematuro, neoplasie, malattie croniche: AIDS, artrite
reumatoide)
Brugnara et al. Crit Rev Clin Lab Sci 2000;
Mcdougall et al. Nephrol Dial Transplant 1998;
Alan E. Mast et al. Blood 2002;
Thomas C et al. Clin Chem 2002;
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High Angle (5-15 degrees)
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Best practice guideline for carrier identification and
prenatal diagnosis of hemoglobinopaties
J.Traeger-Synodinos, J.M.Old, M.Petrou, R.Galanello
March 2002
“Screening”
Screening uso di tests biochimici semplici in
determinate condizioni.
“Diagnosi definitiva”
definitiva uso di metodi di
caratterizzazione del DNA o altre proteine
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The Importance and Challenge of Automatic Disease
Pre-Classification
• Automatic disease pre-classification has a great potential as
a practical tool to aid patient diagnosis
• This pre-classification may alert the medical staff to sample
abnormality and would lead to rapid confirmatory testing
– Potentially leading to earlier diagnosis, more effective treatment
– Screening endemic populations at reduced cost
• Challenges
– Legal, financial, ‘medico-cultural’ issues
– Physician acceptance
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β-Thalassemia
Accuracy of ADVIA 120 + Neural Network
100%
71%
N=31
N=4
α2
α1
γ
δ
X
β
α2
α1
γ
δ
α2
α1
γ
δ
β
α2
α1
γ
δ
β-Thalassemia Heterozygote
X
X
β
β
β-Thalassemia Homozygote
IDA Combined With Hemoglobinopathy and Normal
Accuracy of ADVIA 120 + Neural Network
100%
100%
98%
83%
82%
N=17
N=17
N=17
N=49
N=176
IDA
IDA +
α-Thalassemia-1
IDA +
β-Thalassemia
Trait
IDA +
Hemoglobin E
Trait
Normal
,
-
• The European Neural Network Group (ENNG) was
established in January 2003
• 12 sites in four countries agreed to participate in the
ENNG (samples > 2.200)
• Goal was to collect sufficient ADVIA 120 CBC/Diff/Retic
data to develop a neural network-based expert system for
RBC disorders
– Based on successful Thailand study
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Se
Setutti
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glielementi
elementidi
diun
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esameemocromocitometrico
emocromocitometricovengono
vengono
considerati
consideratinel
nelcontesto
contestoclinico,
clinico,possono
possonofornire
fornireuna
unaguida
guida
indispensabile
indispensabilealle
allepossibili
possibilicause
causedell’anemia
dell’anemiadel
delpaziente
pazienteed
eduna
una
guida
guidaalla
allarichiesta
richiestadei
deitest
testper
perlaladiagnosi
diagnosidefinitiva.
definitiva.
IItest
testnon
nonnecessari
necessarinon
nonsolo
soloaggiungono
aggiungonodelle
dellespese,
spese,ma
mapossono
possono
condurre
condurreaadelle
dellediagnosi
diagnosisbagliate
sbagliateed
edin
inalcuni
alcunicasi
casiad
adinappropriati
inappropriati
trattamenti.
trattamenti.
Ralph
RalphCarmel
Carmel
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