GENETIC TEST: analisi molecolare su striscia
(cod. AC019 - 25 test)
Risultato
in sole 4 ore
Reagenti
in formato
pronto uso
- Primo test su striscia
- domanda di brevetto
n°. MI2003A001627
GENETIC TEST
Analisi genetica per evidenziare
la suscettibilità/resistenza alla scrapie
negli ovini
Analisi singola
per differenti
mutazioni
Possibile
automazione
del test
- Bossers A,de Vries R,Smits M.A."Susceptibility of Sheep for Scrapie as Assessed by In vitro Conversion of Nine Naturally Occuring Variants of PrP" Journal
of Virology,Feb 2000 pp 1407-1414
- Vaccari G., Petraroli R., Agrimi U., Eleni C., Perfetti M.G., Di Bari A., Morelli L., Busani L., Ligios C., Nonno R., Di Guardo G., “ PrP genotype in Sarda breed
sheep and its relevance to scrapie infection” Archives of Virology; 2001,146; 2029-2037.
- Hunter N,Goldmann W,Marshall E,O'Neill G"Sheep and goats:natural and experimental TSEs and factors influencing incidence of disease" Arch. Virol. Suppl. 2000;(16):181-8
-Hunter N,Moore L,Hosie BD,Dingwall WS,Greig A."Association between natural scrapie and PrP genotype in a flock of Suffolk sheep in Scotland" Vet.Rec.
1997 Jan 18; 140 (3): 59-63
- Acutis P.L.,Riina M.V.,Caramelli M " Sorveglianza attiva per la Scrapie: Analisi genetica per gli ovini" Progresso Veterinario n°5 - maggio 2002
- Normative europee : - Regolamento (CE) n° 260/2003 della commissione del 12 Febbraio 2003 ;
- Decisione della commissione 100/2003/CE del 13 Febbraio 2003
Bibliografia
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Indagine molecolare dei codoni 136, 154 e 171
del gene della proteina prionica associati alla scrapie
GENETIC TEST: analisi molecolare su striscia
(cod. AC019 - 25 test)
INTRODUZIONE
RIVELAZIONE
Lo scrapie è una malattia appartenente alla famiglia delle
Encefalopatie Spongiformi Trasmissibili (TSE) o malattie da prioni e
risulta molto diffusa fra le greggi europee. L’insorgenza della malattia
è influenzata anche dalla predisposizione genetica degli ovini.
Il test, tramite tecniche di biologia molecolare, consente di
identificare i polimorfismi associati al gene che codifica la proteina
prionica. La manifestazione della malattia è associata agli alleli
VRQ e ARQ mentre l’allele ARR è associato ad una naturale
resistenza alla scrapie.
- Analisi dell’amplificato mediante
ibridazione inversa su striscia.
3’
Amplificato
5’
DNA-probe
Principio e procedura
Il test si basa sulla indagine delle seguenti mutazioni
A136V, R154H, Q171R, Q171H, attraverso le suddette fasi
ESTRAZIONE DEL DNA
Strip di nitrocellulosa
- DNA estratto da campioni di sangue
(in EDTA) fresco o congelato o da
spot su carta assorbente.
RISULTATI
AMPLIFICAZIONE IN VITRO
Mix Pronto uso
+
DNA - polimerasi
- Amplificazione in multiplex delle
sequenze del gene che codifica per la
proteina prionica (Prp).
DNA target
Marker Line rossa
Controllo di rivelazione
A136V
A136V
wild type
mutato
R154H
R154H
wild type
mutato
Q171R
Q171R
Q171H
wild type
mutato
mutato
Marker line verde
Schema interpretativo
Esempio:
Codoni
136
154
171 (1)
171(2)
Normali
A
R
Q
Q
Eterozigoti
A-V
R-H
Q-R
Q-H
Esempio di interpretazione:
Risultati
136Wt - 154 Wt - 171 Wt
136Etero - 154 Wt - 171 Wt
136Wt - 154 Wt - 171 Etero(1)
→
→
→
Omozigoti (mut)
V
H
R
H
Genotipo
ARQ/ARQ
ARQ/VRQ
ARQ/ARR